高良姜提取物及其制备方法、用途
【专利摘要】本发明涉及药物领域，特别涉及高良姜提取物及其制备方法、用途。该制备方法包括：取高良姜，经乙醇浸提、去除乙醇，得到浓缩液；取浓缩液与水混合，经石油醚萃取，收集下层溶液，经乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯相，获得乙酸乙酯萃取液；取经乙酸乙酯萃取后的下层溶液再经正丁醇萃取，收集正丁醇相，获得正丁醇萃取液；取乙酸乙酯萃取液，去除乙酸乙酯，得到乙酸乙酯段浸膏；取正丁醇萃取液，去除正丁醇，得到正丁醇段浸膏。本发明提供的高良姜提取物可显著提高H2O2介导的细胞存活率、SOD活力、GSH-Px活力，可显著降低H2O2介导的乳酸脱氢酶漏出率和MDA含量，对细胞具有显著的保护作用，可作为治疗神经退行性疾病的药物。
【专利说明】高良姜提取物及其制备方法、用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及药物领域，特别涉及高良姜提取物及其制备方法、用途。
【背景技术】 [0002]神经退行性疾病(Neurodegenerative disease)是一类由于中枢神经系统被阻断，导致神经元细胞功能丧失，从而使中枢神经系统功能被抑制的疾病，具有发病率高、死亡率高的特点，主要包括:脑中风、脑外伤、脊髓性肌肉萎缩症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿舞蹈病、阿尔茨海默病以及帕金森病等。
[0003]神经退行性疾病均会引发较为严重的症状。其中，脑中风是因各种诱发因素引起脑内动脉狭窄、闭塞或破裂而造成急性脑血液循环障碍的一种疾病，临床上表现为一过性或永久性脑功能障碍的症状和体征；脊髓性肌肉萎缩症是最常见的致死性神经肌肉疾病之一，是由于脊髓前角细胞运动神经元变性，导致患者近端肌肉对称性、进行性萎缩和无力，最终导致呼吸衰竭甚至死亡的一种疾病；阿尔茨海默病是一种起病隐匿、进行性发展的神经系统退行性疾病，临床上以记忆障碍、失语、失用、失认、视空间技能损害、执行功能障碍以及人格和行为改变等全面性痴呆表现为特征；帕金森病主要临床表现为静止性震颤、运动迟缓、肌强直和姿势步态障碍。
[0004]研究表明，老龄是诱发该类疾病最主要的危险因素之一。随着老龄化社会的到来，神经系统退行性疾病的发病率呈逐年上升趋势。据估计，目前全球阿尔茨海默病患者约9200万，帕金森病患者约2300万，运动神经元病患者约46万。仅在美国，就有500万阿尔茨海默病患者，100万帕金森病患者。神经退行性疾病给人类健康和生命造成极大威胁，给患者带来极大痛苦，给家庭及社会带来沉重的负担，因此，充分认识神经退行性疾病的严重性，提高对该类疾病的治疗与预防水平是当务之急。
[0005]目前治疗此类疾病的药物虽然很多，但是除帕金森病患者通过合理用药可延长其寿命和改善其生活质量外，对其他神经退行性疾病的治疗效果均不理想。因此开发新型的治疗神经退行性疾病的药物迫在眉睫。
【发明内容】
[0006]有鉴于此，本发明提供了高良姜提取物及其制备方法、用途。该高良姜提取物可显著提高H2O2介导的细胞存活率、SOD活力、GSH-Px活力，可显著降低H2O2介导的乳酸脱氢酶漏出率和MDA含量，可显著抑制H2O2介导的神经细胞氧化损伤，对细胞具有显著的保护作用，可作为治疗神经退行性疾病的药物。
[0007]为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案:
[0008]本发明提供了一种高良姜提取物的制备方法，包括如下步骤:
[0009]取高良姜，经乙醇浸提、去除乙醇，得到浓缩液；
[0010]取浓缩液与水混合，经石油醚萃取，收集下层溶液，经乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯相，获得乙酸乙酯萃取液；取经乙酸乙酯萃取后的下层溶液再经正丁醇萃取，收集正丁醇相，获得正丁醇萃取液；
[0011]取乙酸乙酯萃取液，去除乙酸乙酯，得到乙酸乙酯段浸膏；取正丁醇萃取液，去除正丁醇，得到正丁醇段浸膏；
[0012]高良姜提取物为乙酸乙酯段浸膏、正丁醇段浸膏中的一种或两者的混合物。
[0013]高良姜(Alpiniaofficinarum Hance.)为姜科(Zingiberaceae)山姜属(AlpiniaRoxb.)的多年生草本植物，生于阴湿的密林或疏林下，主产福建、台湾、广东、广西、海南、云南等地。高良姜的干燥根茎高良姜别名膏凉姜(《本草经集注》)、良姜(《局方》)、蛮姜、佛手根(《履巉岩本草》)、小良姜(《中药志》)和海良姜(《药材学》)，性辛、温，入脾、胃经，具有温胃、祛风、散寒、行气、止痛的功效，临床用于治疗脾胃中寒、脘腹冷痛、呕吐泄泻、噎脯反胃、食滞、瘴疟、冷癖《本草汇言》。高良姜不仅是一种重要中药，而且是一种深受人们喜爱的调味品，是1998年卫生部规定的药食同源类中药之一。本发明通过高良姜提取物体外活性的研究，证明本发明提供的高良姜提取物可有效抑制H2O2介导的神经细胞氧化损伤，对细胞具有保护作用，可做为治疗神经退行性疾病的药物。对高良姜提取物进行活性成分含量的检测，结果显示本发明提供的高良姜提取物中含有丰富的槲皮素、异鼠李素、高良姜素、山奈素等。其中，槲皮素具有较好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用，还有降低血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉、增加冠脉血流量等作用，可用于治疗慢性支气管炎，对冠心病及高血压患者也有辅助治疗作用；异鼠李素可止咳祛痰，消食化滞，活血散瘀，用于咳嗽痰多、消化不良、食积腹痛、跌扑瘀肿、瘀血经闭；高良姜素具有抗病毒作用；山奈素具有平喘、祛痰止咳、降低血压、增强毛细血管抵抗力、降血脂、扩张冠状动脉、增加冠脉血流量等作用，已广泛用于临床治疗缺血性心脑血管病、内分泌疾病及各种慢性炎症。经研究证明本发明提供的高良姜提取物中活性成分具有抗氧化作用，可显著抑制H2O2介导的神经细胞氧化损伤。
[0014]神经细胞的氧化损伤表现在神经细胞的存活率降低，神经细胞内SOD和GSH-Px的活力下降，神经细胞的乳酸脱氢酶漏出率和丙二醛(MDA)含量升高。本发明通过测定细胞的存活率、乳酸脱氢酶漏出率`、超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力及丙二醛(MDA)含量进行了本发明提供的高良姜提取物的体外活性研究。结果显示本发明提供的高良姜提取物可显著提高H2O2介导的细胞存活率、SOD活力、GSH-Px活力，可显著降低H2O2介导的乳酸脱氢酶漏出率和MDA含量，表明本发明提供的高良姜提取物对细胞具有显著的保护作用，可作为治疗神经退行性疾病的药物。下面分别介绍了细胞存活率、乳酸脱氢酶漏出率、SOD活力、GSH-Px活力和MDA含量的检测原理及计算公式。
[0015]细胞的存活率采用MTT比色法检测。MTT是一种四甲基偶氮唑盐，其水溶液外观呈淡黄色，被活细胞摄入后，在细胞内形成蓝紫色结晶甲瓒。甲瓒可用DMS0，无水乙醇，或酸化异丙醇等溶解，在酶标仪上进行比色，所检测OD值的大小可反映细胞代谢活性的强弱。检测时每孔加10 μ L MTT (终浓度为0.5mg/mL)于5%C02，37°C培养3小时。小心吸去培养液，每孔中再加入100 μ L 二甲基亚砜(DMSO)溶解蓝紫色结晶物，稍振荡待结晶物充分溶解后用酶标仪测定570nm，参考波长为630nm的OD值，计算细胞的存活率，计算公式如下式所示:
[0016]细胞的存活率=(加药孔OD值-加药孔空白OD值)/ (对照孔OD值-对照孔空白OD 值)X 100%[0017]乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase, LDH)的测定使用LDH检测试剂盒。LDH的测定原理是:LDH能催化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸与2，4 二硝基苯肼反应生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中呈棕红色，通过比色可求出酶活力。通过如下公式计算细胞培养液的LDH漏出率:
[0018]LDH漏出率=(培养液OD值)/ (培养液OD值+细胞匀浆液OD值)X 100%
[0019]超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, S0D)对机体的氧化和抗氧化平衡起着至关重要的作用，SOD能清除超氧阴离子自由基(O2 ?乃保护细胞免受损伤。SOD的测定原理是:通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应产生O2.'后者氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，用可见分光光度计测其OD值。当被测样品中含有SOD时，则对O2.^有专一性的抑制作用，形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的OD值低于对照管的OD值，通过公式计算可求出被测样品中的SOD活力。计算公式为:
[0020]SOD活力(U/mg)=(对照管OD值-测定管OD值)/ (对照管OD值)+50%X (反应液总体积HiL) / (取样量mL) + (样品中蛋白含量mg/mL)
[0021]U表示每毫克蛋白在ImL反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个SOD活力单位。
[0022]谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)是机体内广泛存在的一种重要的催化H2O2分解的酶，还可以起到保护细胞膜结构和功能完整的作用。GSH-Px可以促进H2O2与还原型谷胱甘肽反应生成H2O及氧化型谷胱甘肽，GSH-Px的活力可用其酶促反应的速度来表示，测定此酶促反应中还原性谷胱甘肽的消耗，则可求出酶活力。计算公式如下:
[0023]GSH-Px活力(μ mol/mg)=(非酶管OD值-酶管OD值)/ (标准管OD值-空白管OD 值)XAXB + C + D
[0024]其中，A为标准管GSH浓度；B为样品中蛋白的稀释倍数；C为样品中蛋白含量(mg/mL) ;D为反应时间。
[0025]机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，产生的氧自由基能攻击生物膜中的多数不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物，如醛基(丙二醛)、酮基、羟基、羧基、氢过氧基以及新的自由基等。脂质过氧化作用不仅把活性氧转化成活性化学剂，即非自由基性的脂类分解物，而且通过链式或链式支链反应，放大活性氧的作用。因此，初始的一个活性氧能导致很多脂类分解产物的形成，这些分解产物中，一些是无害的，另一些则能引起细胞损伤，而且还能通过脂氢过氧化物的分解产物引起细胞损伤。因而测试丙二醛(MDA)的量常常可反映机体内脂质过氧化的程度，间接反映出细胞的损伤程度。MDA的测定常常与SOD的测定相互配合，SOD活力的高低间接反应了机体清除氧自由基的能力，而MDA的高低又间接反映了机体细胞受自由基攻击的严重程度。MDA的测定原理为:过氧化脂质降解产物中的丙二醛(MDA)可与硫代巴比妥酸(TBA)缩合，形成红色产物，在532nm处有最大吸收峰，因此可 以通过测定不同样品的吸光值对其中的MDA进行定量。MDA含量的计算公式如下:
[0026]MDA含量(nmol/mg)=(测定管OD值-测定空白管OD值)/ (标准管OD值-标准空白管OD值)X标准品浓度(10nmol/mL) +样品中的蛋白含量(mg/mL)
[0027]为了保证高良姜提取物被充分的提取出来，在本发明提供的一些实施例中，乙醇浸提之前还包括粉碎的步骤。
[0028]大多数中药材中的药物活性成分会溶解于乙醇溶液中，在提取中药活性成分时一般采用乙醇浸提。在本发明提供的一些实施例中，乙醇浸提采用的试剂为80%~95%的乙醇水溶液。
[0029]在本发明提供的一些实施例中，以g/mL计，高良姜与乙醇水溶液的质量体积比为1: (5 ~15)。
[0030]在本发明提供的一些实施例中，浓缩液与水的体积比为1: (2~4)。
[0031]本发明还提供了由该制备方法制得的闻良姜提取物；该闻良姜提取物的制备方法为:取高良姜，经乙醇浸提、去除乙醇，得到浓缩液；取浓缩液与水混合，经石油醚萃取，收集下层溶液，经乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯相，获得乙酸乙酯萃取液；取经乙酸乙酯萃取后的下层溶液再经正丁醇萃取，收集正丁醇相，获得正丁醇萃取液；取乙酸乙酯萃取液，去除乙酸乙酯，得到乙酸乙酯段浸膏；取正丁醇萃取液，去除正丁醇，得到正丁醇段浸膏；高良姜提取物为乙酸乙酯段浸膏、正丁醇段浸膏中的一种或两者的混合物；乙醇浸提之前还包括粉碎的步骤；乙醇浸提采用的试剂为80%~95%的乙醇水溶液；以g/mL计，高良姜与乙醇水溶液的质量体积比为1: (5~15);浓缩液与水的体积比为1: (2~4)。
[0032]本发明还提供了一种高良姜提取物的制备方法，包括如下步骤:
[0033]取高良姜，经乙醇浸提、去除乙醇，得到浓缩液；
[0034]取浓缩液与水混合，经石油醚萃取，收集下层溶液，经乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯相，获得乙酸乙酯萃取液；取经乙酸乙酯萃取后的下层溶液再经正丁醇萃取，收集正丁醇相，获得正丁醇萃取液；
[0035]取乙酸乙酯萃取液`，去除乙酸乙酯，得到乙酸乙酯段浸膏；取正丁醇萃取液，去除正丁醇，得到正丁醇段浸膏；
[0036]高良姜提取物为乙酸乙酯段浸膏，或者乙酸乙酯段浸膏和正丁醇段浸膏的混合物。
[0037]为了保证高良姜提取物被充分的提取出来，在本发明提供的一些实施例中，乙醇浸提之前还包括粉碎的步骤。
[0038]大多数中药材中的药物活性成分会溶解于乙醇溶液中，在提取中药活性成分时一般采用乙醇浸提。在本发明提供的一些实施例中，乙醇浸提采用的试剂为80%~95%的乙醇水溶液。
[0039]在本发明提供的一些实施例中，以g/mL计，高良姜与乙醇水溶液的质量体积比为1: (5 ~15)。
[0040]在本发明提供的一些实施例中，浓缩液与水的体积比为1: (2~4)。
[0041]本发明还提供了由该制备方法制得的闻良姜提取物；该闻良姜提取物的制备方法为:取高良姜，经乙醇浸提、去除乙醇，得到浓缩液；取浓缩液与水混合，经石油醚萃取，收集下层溶液，经乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯相，获得乙酸乙酯萃取液；取经乙酸乙酯萃取后的下层溶液再经正丁醇萃取，收集正丁醇相，获得正丁醇萃取液；取乙酸乙酯萃取液，去除乙酸乙酯，得到乙酸乙酯段浸膏；取正丁醇萃取液，去除正丁醇，得到正丁醇段浸膏；高良姜提取物为乙酸乙酯段浸膏，或者乙酸乙酯段浸膏和正丁醇段浸膏的混合物；乙醇浸提之前还包括粉碎的步骤；乙醇浸提采用的试剂为80%~95%的乙醇水溶液；以g/mL计，高良姜与乙醇水溶液的质量体积比为1: (5~15);浓缩液与水的体积比为1: (2~4)。
[0042]本发明还提供了一种高良姜提取物的制备方法，包括如下步骤:
[0043]取高良姜，经乙醇浸提、去除乙醇，得到浓缩液；
[0044]取浓缩液与水混合，经石油醚萃取，收集下层溶液，经乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯相，获得乙酸乙酯萃取液；取经乙酸乙酯萃取后的下层溶液再经正丁醇萃取，收集正丁醇相，获得正丁醇萃取液；
[0045]取乙酸乙酯萃取液，去除乙酸乙酯，得到乙酸乙酯段浸膏；取正丁醇萃取液，去除正丁醇，得到正丁醇段浸膏；
[0046]高良姜提取物为正丁醇段浸膏，或者乙酸乙酯段浸膏和正丁醇段浸膏的混合物。
[0047]为了保证高良姜提取物被充分的提取出来，在本发明提供的一些实施例中，乙醇浸提之前还包括粉碎的步骤。
[0048]大多数中药材中的药物活性成分会溶解于乙醇溶液中，在提取中药活性成分时一般采用乙醇浸提。在本发明提供的一些实施例中，乙醇浸提采用的试剂为80%~95%的乙醇水溶液。
[0049]在本发明提供的一些实施例中，以g/mL计，高良姜与乙醇水溶液的质量体积比为1: (5 ~15)。
[0050]在本发明提供的一些实施例中，浓缩液与水的体积比为1: (2~4)。
[0051]本发明还提供了由该制备方法制得的闻良姜提取物；该闻良姜提取物的制备方法为:取高良姜，经乙醇浸提、去除乙醇，得到浓缩液；取浓缩液与水混合，经石油醚萃取，收集下层溶液，经乙酸乙酯萃取，收`集乙酸乙酯相，获得乙酸乙酯萃取液；取经乙酸乙酯萃取后的下层溶液再经正丁醇萃取，收集正丁醇相，获得正丁醇萃取液；取乙酸乙酯萃取液，去除乙酸乙酯，得到乙酸乙酯段浸膏；取正丁醇萃取液，去除正丁醇，得到正丁醇段浸膏；高良姜提取物为正丁醇段浸膏，或者乙酸乙酯段浸膏和正丁醇段浸膏的混合物；乙醇浸提之前还包括粉碎的步骤；乙醇浸提采用的试剂为80%~95%的乙醇水溶液；以g/mL计，高良姜与乙醇水溶液的质量体积比为1: (5~15);浓缩液与水的体积比为1: (2~4)。
[0052]本发明还提供了本发明提供的高良姜提取物作为H2O2介导的神经细胞氧化损伤抑制剂的应用。
[0053]在本发明提供的一些实施例中，用于研究的神经细胞为PC12细胞。
[0054]在本发明提供的一些实施例中，本发明提供的高良姜提取物可显著提高H2O2介导的PC12细胞的存活率。
[0055]在本发明提供的一些实施例中，本发明提供的高良姜提取物可显著提高H2O2介导的PC12细胞内SOD活力。
[0056]在本发明提供的一些实施例中，本发明提供的高良姜提取物可显著提高H2O2介导的PC12细胞内GSH-Px活力。
[0057]在本发明提供的一些实施例中，本发明提供的高良姜提取物可显著降低H2O2介导的PC12细胞内乳酸脱氢酶漏出率。
[0058]在本发明提供的一些实施例中，本发明提供的高良姜提取物可显著降低H2O2介导的PC12细胞内MDA含量。
[0059]本发明还提供了本发明提供的高良姜提取物在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用。
[0060]在本发明提供的一些实施例中，神经退行性疾病为脑中风、脑外伤、脊髓性肌肉萎缩症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿舞蹈病、阿尔茨海默病或帕金森病。
[0061]本发明还提供了一种药物制剂，包括本发明提供的高良姜提取物和药学上可接受的辅料。
[0062]在本发明提供的一些实施例中，药物制剂的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、口服液、注射液或冻干粉针剂。
[0063]本领域技术人员认可的药学上可接受的辅料均在本发明的保护范围之内，本发明在此不做限定。
[0064]本发明提供了高良姜提取物及其制备方法、用途。该高良姜提取物的制备方法包括:取高良姜，经乙醇浸提、去除乙醇，得到浓缩液；取浓缩液与水混合，经石油醚萃取，收集下层溶液，经乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯相，获得乙酸乙酯萃取液；取经乙酸乙酯萃取后的下层溶液再经正丁醇萃取，收集正丁醇相，获得正丁醇萃取液；取乙酸乙酯萃取液，去除乙酸乙酯，得到乙酸乙酯段浸膏；取正丁醇萃取液，去除正丁醇，得到正丁醇段浸膏；高良姜提取物为乙酸乙酯段浸膏、正丁醇段浸膏中的一种或两者的混合物。通过对高良姜提取物中活性成分含量的测定，结果显示本发明提供的高良姜提取物中含有丰富的槲皮素、异鼠李素、高良姜素、山奈素；通过对细胞存活率、SOD活力、GSH-Px活力的测定，结果显示相对于H2O2对照组，试验组的细胞存活率、SOD活力、GSH-Px活力显著提高，且差异具有统计学意义，表明本发明提供的高良姜提取物可显著提高H2O2介导的细胞存活率、SOD活力、GSH-Px活力；通过对乳酸脱氢酶漏出率和MDA含量的测定，结果显示相对于H2O2对照组，试验组的乳酸脱氢酶漏出率和MDA含量显著降低，且差异具有统计学意义，表明本发明提供的高良姜提取物可显著降低H2O2介导的乳酸脱氢酶漏出率和MDA含量；细胞存活率、SOD活力、GSH-Px活力、乳酸脱氢酶漏出率和MDA含量的测定结果表明本发明提供的高良姜提取物对细胞具有显著的保护作用，可作为治疗神经退行性疾病的药物。由此可见，本发明提供的高良姜提取物可显著提高H2O2介导的细胞存活率、SOD活力、GSH-Px活力，可显著降低H2O2介导的乳酸脱氢酶漏出率和MDA含量，可显著抑制H2O2介导的神经细胞氧化损伤，对细胞具有显著的保护作用，可作为治疗神经退行性疾病的药物。
【具体实施方式】
[0065]本发明公开了高良姜提取物及其制备方法、用途，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0066]本发明提供的高良姜提取物及其制备方法、用途中所用试剂、原料药或辅料均可由市场购得。
[0067]下面结合实施例，进一步阐述本发明:
[0068]实施例1闻良姜提取物的制备
[0069]取高良姜100g，经粉碎后，加入500mL90%的乙醇水溶液浸提，将浸提液减压回收乙醇，得到浓缩液40mL ；向浓缩液中加入SOmL /K，混合均匀后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液；将乙酸乙酯萃取液减压回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯段浸膏(YSYZ);将正丁醇萃取液减压回收正丁醇，得到正丁醇段浸膏(ZDC)。将乙酸乙酯段浸膏和正丁醇段浸膏混合，即得。
[0070]实施例2闻良姜提取物的制备
[0071]取高良姜100g，经粉碎后，加入1000mL80%的乙醇水溶液浸提，将浸提液减压回收乙醇，得到浓缩液45mL ;向浓缩液中加入135mL /K，混合均匀后，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，得到乙酸乙酯萃取液；将乙酸乙酯萃取液减压回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯段浸膏(YSYZ)，即得高良姜提取物。
[0072]实施例3闻良姜提取物的制备
[0073]取高良姜100g，经粉碎后，加入1500mL95%的乙醇水溶液浸提，将浸提液减压回收乙醇，得到浓缩液50mL ；向浓缩液中加入200mL水，混合均匀后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液；将正丁醇萃取液减压回收正丁醇，得到正丁醇段浸膏(ZDC)，即得高良姜提取物。
[0074]实施例4高良姜提取物中活性成分的检测
[0075]取实施例1至3提供的高良姜提取物，利用HPLC方法对槲皮素、异鼠李素、高良姜素、山奈素进行含量的测定。含量测定结果如表1所示。
[0076]表1闻良姜提取物中有效成分含量的检测
[0077]
【权利要求】
1.一种高良姜提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: 取高良姜，经乙醇浸提、去除乙醇，得到浓缩液； 取所述浓缩液与水混合，经石油醚萃取，收集下层溶液，经乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯相，获得乙酸乙酯萃取液；取经乙酸乙酯萃取后的下层溶液再经正丁醇萃取，收集正丁醇相，获得正丁醇萃取液； 取所述乙酸乙酯萃取液，去除乙酸乙酯，得到乙酸乙酯段浸膏；取所述正丁醇萃取液，去除正丁醇，得到正丁醇段浸膏； 所述高良姜提取物为所述乙酸乙酯段浸膏、所述正丁醇段浸膏中的一种或两者的混合物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述乙醇浸提采用的试剂为80%~95%的乙醇水溶液。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，以g/mL计，所述高良姜与乙醇水溶液的质量体积比为1: (5~15)。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，浓缩液与水的体积比为1:(2~4)。
5.如权利要求1至4中任一项所述的制备方法制得的高良姜提取物。
6.如权利要求5所述的高良姜提取物作为H2O2介导的神经细胞氧化损伤抑制剂的应用。
7.如权利要求5所述的`高良姜提取物在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述神经退行性疾病为脑中风、脑外伤、脊髓性肌肉萎缩症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿舞蹈病、阿尔茨海默病或帕金森病。
9.一种药物制剂，其特征在于，包括如权利要求5所述的高良姜提取物和药学上可接受的辅料。
10.根据权利要求9所述的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、口服液、注射液或冻干粉针剂。
【文档编号】A61P25/28GK103550657SQ201310574021
【公开日】2014年2月5日 申请日期:2013年11月13日 优先权日:2013年11月13日
【发明者】戴好富, 梅文莉, 王辉, 翟红莉 申请人:中国热带农业科学院热带生物技术研究所