抗基质金属蛋白酶9的抗体的制作方法

抗基质金属蛋白酶9的抗体的制作方法
【专利摘要】本发明提供涉及结合到基质金属蛋白酶-9 MMP9蛋白(MMP9又称为明胶酶-B)的结合蛋白(例如抗体和其抗原结合片段)的组合物及使用方法，例如其中所述结合蛋白包含免疫球蛋白Ig重链(或其功能片段)和Ig轻链(或其功能片段)。
【专利说明】抗基质金属蛋白酶9的抗体
[0001] 相关申请案的夺叉参考
[0002] 本申请案主张2012年2月29日申请的美国临时申请案61/605, 18U2013年1月 22日申请的美国临时申请案61/755, 444及2012年2月29日申请的PCT申请案第PCT/ US2012/027160号的优先权。这些文献的内容以全文引用的方式并入本文中。
[0003] 有关依据联邦政府咨助的研究作出的发明的权利的声明
[0004] 不适用。

【技术领域】
[0005] 本发明属于细胞外酶、细胞外基质酶、蛋白酶及免疫学领域。

【背景技术】
[0006] 基质金属蛋白酶（MMP)属于涉及到细胞外基质形成和重塑的细胞外酶家族。这些 酶含有一个保守的催化结构域，其中锌原子经三个组氨酸残基配位。已知这一家族的超过 20个成员，组织成包括胶原酶类、明胶酶类、基质溶解素类、基质溶素类、釉质溶解素类及膜 MMP类在内的多个群组。
[0007] MMP2和MMP9属于基质金属蛋白酶的明胶酶群组。除含有大多数MMP共有的信号 肽、前肽、催化结构域、锌结合结构域及血红素结合蛋白样结构域外，明胶酶还含有多个纤 连蛋白样结构域和一个〇-糖基化结构域。
[0008] MMP涉及到多种疾病。MMP抑制剂部分由于特异性和功效而并不完全令人满意。因 此，需要具有特异性并且有效的MMP抑制剂。癌症以及炎症性疾病和自体免疫性疾病，例如 结肠直肠癌、IBD(包括克罗恩氏病（Crohn's diseaSe，CD)、溃疡性结肠炎（UC)及未定型结 肠炎）、类风湿性关节炎（RA)等的治疗并不完全令人满意。因此，需要有效用于这些疾病， 特别是用于可用治疗剂无效的个体的治疗。


【发明内容】

[0009] 本发明提供涉及结合到基质金属蛋白酶_9(MMP9)蛋白（又称为明胶酶-B)的结 合蛋白（例如抗体和其抗原结合片段）的组合物和使用方法。所述结合蛋白通常为抗体或 其片段（例如，抗原结合片段）并且通常含有免疫球蛋白（Ig)重链（或其功能片段）和Ig 轻链（或其功能片段）。重链通常为IgG，例如IgGl或IgG4,或其经修饰型式。轻链通常为 κ链。
[0010] MMP9结合蛋白（例如抗体）为特异性结合到MMP9并且不结合其它相关基质金属 蛋白酶的结合蛋白。这些MMP9结合蛋白可用于需要或希望获得对MMP9的特异性调节（例 如，抑制），例如而不直接地影响其它基质金属蛋白酶的活性的应用中。因此，在本发明的某 些实施例中，抗MMP9抗体或其片段是MMP9活性的特异性抑制剂。在一些方面中，本文所揭 示的MMP9结合蛋白将可用于抑制MMP9,同时允许其它相关基质金属蛋白酶的正常功能。
[0011] 所述抗体和片段可参照其氨基酸序列或其部分，和/或各种功能（例如与MMP9或 其特定表位的结合特异性，或与特定抗体竞争结合的能力）和/或活性（例如抑制MMP9的 能力，例如非竞争性抑制）进行描述。
[0012] 所述抗体和片段可作为一种医药组合物的一部分，其中结合到基质金属蛋白酶9 的抗体和其片段包含具有氨基酸序列为SEQ ID NO: 15的重链互补决定区（CDR)的重链可 变（VH)区，及医药学上可接受的赋形剂。所述VH区可另外包含氨基酸序列为SEQ ID N0:13 和/或14的CDR。VH区也可包含如SEQ ID N0:3、5、6、7或8中所陈述的氨基酸序列。VH 区也可包含与如SEQ ID N0:3、5、6、7或8中所陈述的氨基酸序列具有95%序列一致性的氨 基酸序列。
[0013] 在另一个实施例中，包含结合到基质金属蛋白酶9的抗体和其抗原结合片段的所 揭示的医药组合物包含具有氨基酸序列为SEQ ID NO: 18的轻链互补决定区（⑶R)的轻链 可变（VL)区，及医药学上可接受的赋形剂。所述VL区可另外包含氨基酸序列为SEQ ID N0:16和/或17的CDR。VL区也可包含如SEQIDN0:4、9、10、11或12中所陈述的氨基酸 序列。VL区也可包含与如SEQ ID勵:4、9、10、11或12中所陈述的氨基酸序列具有95%序 列一致性的氨基酸序列。在一个实施例中，VH区具有SEQ ID N0:7中所陈述的氨基酸序列 并且VL区具有SEQ ID NO: 12中所陈述的氨基酸序列。
[0014] 在另一个实施例中，MMP9结合蛋白包含VH区，其包含具有选自由SEQ ID NO: 13、 14、15、34、35、36及47组成的群组的氨基酸序列的CDR ;及VL区，其具有含选自由SEQ ID NO: 16、17、18、37、38、39、42、43、44及48组成的群组的氨基酸序列的CDR。另外，MMP9结合 蛋白可包含VH区，其具有选自由SEQ ID勵：1、3、5、6、7、8、34、35、36及46组成的群组的氨 基酸序列；及 VL 区，其具有选自由 SEQ ID 勵:2、4、9、10、11、12、37、38、39、42、43、44及45 组成的群组的氨基酸序列。此外，MMP9结合蛋白可包含与选自由SEQ ID N0:30、32、46及 47组成的群组的氨基酸序列具有95%序列一致性的VH区；及与选自由SEQ ID NO:31、33、 41、45及48组成的群组的氨基酸序列具有95%序列一致性的VL区。此外，MMP9结合蛋白 可包含具有选自由SEQ ID NO: 30、32、46及47组成的群组的氨基酸序列的VH区；及具有选 自由SEQ ID NO:31、33、41、45及48组成的群组的氨基酸序列的VL区。
[0015] 本发明的另一实施例涉及一种医药组合物，其包含特异性结合到MMP9的表位的 分离的抗体或其片段，其中所述表位包含在MMP9的区域内的氨基酸残基，所述区域由SEQ ID NO:27的残基104-119、残基159-166或残基191-202组成；及医药学上可接受的赋形 齐[J。在一个方面中，所述表位包含SEQ ID N0:27的E111、D113、R162或1198。
[0016] 在另一个实施例中，所揭示的医药组合物另外包含一或多种选自由以下组成的群 组的治疗剂：消炎剂、免疫治疗剂、化学治疗剂、抗癌剂、抗纤维化药剂或其组合。治疗剂的 实例包括（但不限于）白蛋白结合型紫杉醇（nab-paclitaxel)、mF0LF0X6、F0LFIRI、卡钼 (carboplatin)、紫杉醇（paclitaxel)、培美曲塞（pemetrexed)、贝伐单抗（bevacizumab)、 抗赖氨酰氧化酶样蛋白2 (L0XL2)抗体、抗盘状结构域受体I(DDRl)抗体或其组合。
[0017] 还提供了例如使用非竞争性抑制MMP9的药剂抑制个体中的MMP9活性和/或治疗 个体的疾病或病况的方法，及用于这些方法中的药剂（例如上述抗MMP9抗体和其它MMP9 结合蛋白中的任一种）。所述方法一般是通过向个体投予例如有效量的MMP9结合蛋白， 例如，如本文所提供的MMP9结合抗体或其片段，例如上述结合蛋白或片段中的任一种来进 行。所述抗体或片段一般特异性结合到并且非竞争性抑制MMP9,通常由此使个体中的MMP9 活性得到抑制。在一些情形中，所述抗体或片段为结合在催化结构域外部的MMP9,例如结合 于上述表位之一中的抗体或片段。在一些情形中，所述抗体或片段实质上不结合到除MMP9 外的MMP蛋白和/或实质上不结合到MMP2。另外提供了检测或监测MMP9活性的方法，所述 方法包含使样品与MMP9结合蛋白接触，及评估MMP9结合蛋白-MMP9复合物的存在或不存 在；其中不存在所述MMP9结合蛋白-MMP9复合物指示所述样品不具有所述MMP9活性，并且 存在所述MMP9结合蛋白-MMP9复合物指示所述样品具有所述MMP9活性。MMP9活性可通过 使用本文所揭示的MMP9结合蛋白中的任一种来检测。
[0018] 还提供了此处所揭示的医药组合物的方法和用途，其中向患有MMP-9相关性疾病 或病况的有需要的个体投予有效抑制所述个体中的MMP9活性的有效量的所揭示的抗体或 其片段，或包含所揭示的抗体或其片段的医药组合物。MMP9相关性疾病或病况的实例包 括（但不限于）癌症、自体免疫性、炎症性或纤维化疾病或病况。MMP9相关性癌症的实例 包括（但不限于）胰脏癌、食管胃腺癌、非小细胞肺癌、肺鳞状细胞癌、肺腺癌、胃腺癌、结 肠直肠癌瘤、胰脏腺癌、头颈鳞状细胞癌、肝细胞癌瘤、结肠直肠癌、结肠直肠腺癌或肝细胞 癌瘤。MMP9相关性自体免疫性或炎症性疾病或病况的实例为类风湿性关节炎、炎症性肠病 (IBD)、败血病、多发性硬化、肌营养不良、狼疮、过敏症或哮喘。IBD的实例包括（但不限于） 溃疡性结肠炎（UC)、克罗恩氏病（CD)或未定型结肠炎。
[0019] 在一些实例中，所述抗体或其医药组合物是以约lmg/kg到约28mg/kg的剂量投 予。在一些实例中，所述抗体或其医药组合物是以介于l〇〇mg/kg体重或约100mg/kg与 1800mg/kg或约1800mg/kg之间的剂量投予。
[0020] 在一些实例中，所述抗体或其医药组合物是以100、300、400、500、600、700、800、 900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700 或 1800mg/kg 体重或约 100、300、400、 500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700 或 1800mg/kg 的剂量 投予。在一些实例中，所述抗体是以一周、两周或三周的间隔，或每一周、两周或三周一次投 予。在一些实例中，所述抗体或其片段是静脉内或皮下投予的。
[0021] 在一些实施例中，所述抗体或其医药组合物是作为单药疗法单独投予。在其它实 施例中，所述抗体或其医药组合物是作为与一或多种其它治疗剂的组合疗法的一部分投予 的。所述治疗剂包括（但不限于）消炎剂、免疫治疗剂、化学治疗剂、抗癌剂、抗纤维化药剂 或其组合。所述一或多种其它治疗剂可与所述抗体或其片段同时或依序投予。

【专利附图】

【附图说明】
[0022] 图1示出了小鼠单克隆抗MMP9抗体（AB0041)的重链可变区的氨基酸序列，以及 重链的人类化变体（VH1-VH4)的氨基酸序列，其经比对以显示由人类化引起的构架氨基酸 序列的差异。CDR是以斜体显示，并且人类化变体中与亲本小鼠单克隆抗体不同的氨基酸加 下划线。
[0023] 图2示出了小鼠单克隆抗MMP9抗体（AB0041)的轻链可变区的氨基酸序列，以及 这一轻链的人类化变体（VH1-VH4)的氨基酸序列，其经比对以显示由人类化引起的构架氨 基酸序列的差异。CDR是以斜体显示，并且人类化变体中与亲本小鼠单克隆抗体不同的氨基 酸加下划线。
[0024] 图3示出了 MMP9蛋白的示意图。
[0025] 图4示出了指定为AB0041、M4及M12的抗体的重链和轻链的氨基酸序列之间的比 较。
[0026] 图5示出了如实例4中所述，对来自媒剂治疗的小鼠（A)和AB0046治疗的小鼠 (B)的结肠的冷冻连续切片进行的免疫组织化学（IHC)分析的结果，突出显示了在DSS诱发 的结肠炎中所观察到的炎症和组织破坏。在浸润中性粒细胞（由MPO信号指示）和巨噬细 胞中观察到MMP9的表达并且其与基底膜胶原蛋白IV(在图中标为"ColIV"）和MMP9底物 共定位。患病的结肠（A)展现粘膜上皮细胞和粘膜下隐窝的破坏及稳固的炎性细胞浸润。 在患病组织（A)中观察到极少MMP2表达的迹象。
[0027] 图6示出了如实例4中所述，对福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE)的从结肠取得的 切片进行的MMP9免疫组织化学（IHC)分析的代表性图像。如所示，上皮细胞MMP9表达（箭 头）在正常结肠（-DSS)中极少且在投予DSS之后得到高度诱导（+DSS)。
[0028] 图7示出了在实例4中所述研究中，在研究第10天和第14天（终止日）对所有 动物组进行的内窥镜检查评价的结果。图A示出了在第6-14天的平均内窥镜检查评分 (+/-SEM)，其中箭头指示投予AB0046 (或其它治疗）的天数。图B示出了在第14天每个组的 平均内窥镜检查评分（+/-SEM)，其中星号指示疾病的显著减轻（这在第14天对于AB0046 和ENBRELS治疗组观察到）。内窥镜检查评分反映了所观察到的每只动物的最严重病变。
[0029] 图8示出了对于在实例4中所述的研究终止时所切除的结肠进行的组织病理学 分析的结果。对炎症、浮肿及坏死的程度进行评估并且通过加上每只动物的每个所评估参 数的平均结肠评分来计算总评分。抗MMP9(AB0046)治疗使组织病理学疾病显著减轻到与 ENBRELti类似的程度。
[0030] 图9示出了对来自实例4中所述研究的FFPE结肠切片进行的MMP9IHC的代表性 图像。MMP9表达在正常结肠（无DSS)中极少并且在投予DSS之后得到高度诱导（媒剂）。 AB0046和「NBRFI.S治疗组中MMP9的表达减少与总体疾病的减轻相关。
[0031] 图10示出了实例4中所述研究的体重和腹泻结果。有关体重变化和腹泻发生率 的曲线下面积（AUC)是通过梯形规则法计算。用抗MMP9抗体（AB0046)进行的治疗防止 由DSS诱发的结肠炎引起的体重减轻并且与ENBREL?治疗的作用相当。腹泻发生率与 AB0046和ENBRELS.治疗类似地降低。
[0032] 图IlA示出了如实例4中所述，在用抗MMP9抗体（AB0046)和其它治疗进行治疗 之后，对DSS结肠炎模型中终末血清样品进行的多分析物ELISA分析的结果。这些结果披 露，用AB0046治疗使疾病诱导的炎性细胞因子和生长因子广泛全身下调。图IlB示出了从 同一研究获得的另外的血清标记物数据。
[0033] 图12A示出了在实例4中所述的研究中，在DSS结肠炎模型中通过抗MMP9抗体 (AB0047)治疗使内窥镜检查疾病减轻。图12B示出了在实例4中所述的研究中，在DSS结 肠炎模型中通过抗MMP9抗体（AB0047)治疗使组织学疾病减轻。
[0034] 图13示出了在实例5中所述的预防性治疗研究中，在指定日对所有动物组进行的 内窥镜检查评价的结果。图A示出了在第6-14天的平均内窥镜检查评分（+/-SEM)，其中箭 头指示投予AB0046(或其它治疗）的天数。图B示出了在第10天每个组的平均内窥镜检 查评分（+/-SEM),其中星号指示疾病的显著减轻（这在第14天对于AB0046和ENBREL? 治疗组观察到）。内窥镜检查评分反映了所观察到的每只动物的最严重病变。
[0035] 图14示出了对于在实例5中所述的研究终止时所切除的结肠进行的组织病理学 分析的结果。对炎症、浮肿及坏死的程度进行评估并且通过加上每只动物的每个所评估参 数的平均结肠评分来计算总评分。
[0036] 图15示出了实例5中所述研究的体重和腹泻结果。有关体重变化和腹泻发生率 的曲线下面积（AUC)是通过梯形规则法计算。用抗MMP9抗体（AB0046)进行的预防性治疗 防止腹泻的发生。
[0037] 图16示出了在实例6中所述的研究中，在确立的结肠直肠肿瘤发生模型（HCTl 16) 中原发肿瘤生长的减少。左图示出了肿瘤体积的较小变化；右图示出了在起始治疗之后第 32天时最终肿瘤重量减小（其中p值由曼-惠特尼测试（Mann-Whitney test)得出并且柱 形表示组平均值土 SEM)。
[0038] 图17A示出了由实例7中所述的研究得到的临床评分和腿评分结果，显示了在小 鼠和大鼠CIA类风湿性关节炎模型中鼠类代用抗MMP9抗体（AB0046)和抗人类MMP9抗体 (AB0041)的功效。图17B示出了由同一研究得到的抗MMP9抗体的滴度。MTX =甲氨蝶呤； Non Dis.=无疾病。
[0039] 图18A示出了在实例7中所述的大鼠CIA研究中炎性细胞因子的研究结束时血清 水平；图18B示出了在实例7中所述的小鼠CIA研究中血清炎性细胞因子的研究结束时水 平。MTX=甲氨蝶呤；Non Dis.=无疾病。
[0040] 图19A示出了在实例7中所述的大鼠CIA研究中的另外的血清标记物；图19B示 出了在实例7中所述的小鼠CIA研究中的另外的血清标记物。MTX =甲氨蝶呤；Non Dis. =无疾病。
[0041] 图20示出了在如实例8中所述的LPS败血病大鼠模型中，在投予抗MMP9之后防 止死亡和体温降低。每个图的下部线表示AC-I治疗组并且两条上部线表示未接受LPS的 组（左图中的菱形；右图中的圆形）及抗MMP9治疗组（左图中的正方形及右图中的三角 形）。
[0042] 图21示出了 AB0041治疗的大鼠、马立马司他（Marimastat)治疗的大鼠及对照物 治疗的大鼠的平均日肌肉骨骼综合症（MSS)评分土标准偏差。
[0043] 图22示出了在第1、7、10、14、17、21、24及28天时在480041治疗的大鼠中如通过 ELISA测量的AB0041血清水平（血清滴度）。数据表示为平均值土标准偏差。
[0044] 图23示出了在指定治疗之后小鼠结肠直肠癌异种移植模型中肿瘤体积（图23A、 23C、23E)和体重（图 23B、23D、23F)的变化。
[0045] 图24示出了在指定治疗之后小鼠结肠直肠癌异种移植模型中肿瘤体积（图24A) 和体重（图24B)的变化。
[0046] 图25示出了在对照物和抗MMP9治疗之后小鼠结肠直肠癌异种移植模型中的血清 蛋白质水平。
[0047] 图26示出了在指定治疗之后，在大鼠CIA类风湿性关节炎模型中爪厚度、踝直径 及体重的变化。
[0048] 图27示出了在大鼠CIA类风湿性关节炎模型中进行指定治疗之后如通过免疫组 织化学分析所测量的TNF- α和⑶68评分。
[0049] 图28示出了在大鼠CIA研究中炎性细胞因子的研究结束时血清水平。
[0050] 图29示出了在指定治疗之后，在小鼠CIA类风湿性关节炎模型中爪厚度、踝直径 及体重的变化。
[0051] 图30示出了由肿瘤上皮细胞相关性MMP9蛋白的IHC分析得到的结果。
[0052] 图31示出了由肿瘤上皮细胞相关性MMP9mRNA的CISH分析得到的结果。

【具体实施方式】
[0053] 除非另作指示，否则本发明的实践采用了细胞生物学、毒理学、分子生物学、 生物化学、细胞培养、免疫学、肿瘤学、重组DNA领域及相关领域中的标准方法和常规 技术，其在所属领域的技术范围内。这些技术描述于文献中并由此是所属领域技术人 员可用的。参见例如，艾伯特B. (Alberts, B.)等人，"细胞分子生物学（Molecular Biology of the Cell),"第5版，加兰德科技出版社（Garland Science),纽约州纽 约（New York, NY)，2008;沃特D. (Voet，D.)等人，"基础生物化学：在分子水平上的生 命(Fundamentals of Biochemistry:Life at the Molecular Level),，' 第 3 版，约 翰威立出版公司（John Wiley&Sons),新泽西州霍博肯（Hoboken，NJ)，2008;萨姆布鲁 克 J. (Sambrook, J.)等人，"分子克隆实验指南（Molecular Cloning: A Laboratory Manual), "第 3版，冷泉港实验室出版社（Cold Spring Harbor Laboratory Press), 2001 ; 奥苏贝尔F.(Ausubel，F.)等人，"现代分子生物学实验技术（Current Protocols in Molecular Biology)," 约翰威立出版公司（John Wiley&Sons),纽约（New York), 1987 及 定期更新；弗雷谢尼R. I. (Freshney，R. I.)，"动物细胞培养：基本技术指南（Culture of Animal Cells:A Manual of Basic Technique), "第4版，约翰威立出版公司，新泽西州 桑莫塞县（Somerset, NJ) ,2000;及丛书"酶学方法（Methods in Enzymology)，"学术出版 社（Academic Press),加利福尼亚州圣地亚哥（San Diego, CA)。还参见例如，"现代免疫 学实验技术（Current Protocols in Immunology), "（R.凯克（R. Coico),丛书编辑），威 立公司（Wiley)，2010年8月最新更新。
[0054] 某些MMP的异常活性在肿瘤生长、转移、炎症、自体免疫性及血管疾病中起 到作用。参见例如，胡（Hu)等人（2007)自然评述：药物发现（Nature Reviews:Drug Discovery)6:480-498。MMP9的一个值得注意的来源是肿瘤相关性巨噬细胞（TAM)，其经由 与原发肿瘤细胞的旁分泌相互作用来支持复杂共活化环中的转移和侵入。这种生理屏障蛋 白水解分解导致细胞侵入加上使生长和血管生成活化的因子的释放的组合为肿瘤扩增开 辟了道路，并且伴随着支持肿瘤长出的新血管形成的发生。
[0055] ΜΜΡ9是例如RAS/RAF、PI3K/AKT/NFkB、及WNT/β-连锁蛋白等致癌信号传导路径 的一个目标，并且经由调节整合素和受体酪氨酸激酶功能而起到这些路径的上游调控剂的 作用。ΜΜΡ9在多种肿瘤类型中增多，并且ΜΜΡ9水平与包括胃癌、肺癌及结肠直肠癌在内的 许多癌症的预后不良相关。ΜΜΡ9还牵涉到化学抗性并且在若干肿瘤抑制蛋白缺失时上调。 ΜΜΡ9在许多不同肿瘤类型中上调并且可以促进癌细胞的原发生长和远端侵袭。
[0056] 在某些治疗环境中可能需要抑制一或多种MMP的活性。然而，某些其它MMP (例如 ΜΜΡ2)的活性通常是正常功能所需的和/或防止疾病。由于大多数MMP抑制剂靶向保守性 催化结构域，并因此抑制多种不同的ΜΜΡ，故使用可用的MMP抑制剂因抑制必需的非致病相 关性MMP而引起副作用。
[0057] 与开发对一种特定MMP或多种所选MMP具特异性的抑制剂相关的挑战涉及以下事 实：酶活性的抑制一般需要使所述抑制剂靶向催化结构域。MMP催化结构域的同源性可使 抑制剂与超过一种MMP反应。所提供的实施例为特异性抑制单一 MMP或多种所选MMP (例 如MMP9)的催化活性并且不与某些其它MMP或任何其它MMP反应或者抑制某些其它MMP或 任何其它MMP的药剂，包括治疗剂，例如抗体和其抗原结合片段。所提供的实施例还有其用 于治疗包括癌症以及自体免疫性疾病和炎症性疾病在内的各种疾病的方法及用途。
[0058] MMP9结合蛋白
[0059] MMP9使基底膜胶原蛋白和其它细胞外基质（ECM)组分降解。凯森波 克K(Kessenbrock K)等人，"基质金属蛋白酶：肿瘤微环境的调节剂（Matrix metalloproteinases:regulators of the tumor microenvironment) ·，'细胞（Cell) 2010 ; 141 (I) :52-67。基质降解有助于包括关节炎、癌症及溃疡性结肠炎在内的多种疾病的发 病。罗伊R(Roy R)等人，"作为人类癌症中的新颖标记物和潜在治疗目标的基质金属蛋 白酶（Matrix metal loproteinases as novel biomarkers and potential therapeutic targets in human cancer)·"临床肿瘤学杂志（J Clin 0ncol)2009;27(31):5287_97。 广谱基质金属蛋白酶抑制剂（例如马立马司他）在动物炎症和癌症模型中有效（沃特森 SA(Watson SA)等人，"在人类胃癌异种移植模型中通过马立马司他抑制肿瘤生长：与循环 CEA 7jC平的关系（Inhibition of tumour growth by marimastat in a human xenograft model of gastric cancer:relationship with levels of circulating CEA) ·，'英国癌症 杂志（Br J Cancer) 1999 ;81(1) :19-23 ;赛克AP(Sykes AP)等人，"基质金属蛋白酶抑制剂 对三硝基苯磺酸大鼠炎症性肠病模型中结肠炎症的影响（The effect of an inhibitor of matrix metalloproteinases on colonic inflammation in a trinitrobenzenesulphonic acid rat model of inflammatory bowel disease) ·，'营养药理学与治疗学（Aliment Pharmacol Ther) 1999 ;13 (11): 1535-42)。然而，这些泛抑制剂在人类中通常可在马立马 司他的有效剂量水平或接近其有效剂量水平下引起肌肉骨骼副作用，包括关节僵硬、炎症， 及手、臂和肩疼痛，统称为肌肉骨骼综合症（MSS)。皮特森JT(Peter S〇n JT.) "在基质金 属蛋白酶抑制剂的开发中估计治疗指数的重要性（The importance of estimating the therapeutic index in the development of matrix metalloproteinase inhibitors.)，' 心血管研究（Cardiovasc Res) 2006 ;69 (3) :677-87 ;蒂尔尼 GM (Tierney GM)等人，"有关基 质金属蛋白酶抑制剂马立马司他在胃癌中的安全性和作用的初步研究（A pilot study of the safety and effects of the matrix metalloproteinase inhibitor marimastat in gastric cancer)·" 欧洲癌症杂志（Eur J Cancer) 1999 ;35 (4) :563-8;沃托维兹-普拉嘉 S(Wojtowicz_Praga S)等人，"经口投予晚期肺癌患者一种新颖基质金属蛋白酶抑制剂马 立马司他的 I 期试验（Phase I trial of Marimastat, a novel matrix metalloproteinase inhibitor, administered orally to patients with advanced lung cancer) ·，' 临床 肿瘤学杂志（J Clin 0ncol) 1998;16(6):2150-6。这些症状是剂量和时间依赖性的，并 且在停止用泛MMP抑制剂进行治疗之后不久即复发。沃托维兹-普拉嘉S，1998 ;尼姆提 斯J(Nemunaitis J)等人，"有关基质金属蛋白酶抑制剂马立马司他对晚期癌症中血清 肿瘤标记物的影响的研究的组合分析：用于长期研究的生物活性并且可耐受剂量的选择 (Combined analysis of studies of the effects of the matrix metalloproteinase inhibitor marimastat on serum tumor markers in advanced cancer:selection of a biologically active and tolerable dose for longer-term studies) ·，'临床癌症石开究 (Clin Cancer Res) 1998;4(5):1101_9;哈钦森 JW(Hutchinson JW)等人，"通过用基质 金属蛋白酶抑制剂治疗诱发的迪皮特朗氏病和冻肩症（Dupuytren's disease and frozen shoulder induced by treatment with a matrix metalloproteinase inhibitor)·，' 骨与关节外科杂志（The Journal of bone and joint surgery).英国卷（British volume) 1998 ;80 (5) :907-8。马立马司他和相同类别的其它泛MMP抑制剂是锌螯合剂。皮 特森JT，2006。纯合MMP9基因敲除小鼠未展示MSS样症状或MSS样组织改变。吴TH(Vu TH)等人，"MMP-9/明胶酶B为生长板血管生成和肥大软骨细胞凋亡的关键调控剂（MMP-9/ gelatinase B is a key regulator of growth plate angiogenesis and apoptosis of hypertrophic chondrocytes). " 细胞，1998 ;93 (3) :411-22。
[0060] 本发明提供了结合到基质金属蛋白酶-9(MMP9)蛋白（MMP9又称为明胶酶-B)，例 如人类MMP9,例如具有SEQ ID NO: 27或SEQ ID NO: 28中所陈述的氨基酸序列的人类MMP9 的结合蛋白，例如抗体和其片段（例如抗原结合片段）。本发明的结合蛋白一般包含免疫球 蛋白（Ig)重链（或其功能片段）和Ig轻链（或其功能片段）。
[0061] 本发明还提供了特异性结合到MMP9并且不结合例如MMP1、MMP2、MMP3、MMP7、 MMP9、MMP10、MMP12及MMP13等其它基质金属蛋白酶的MMP9结合蛋白。因此，此类特异性 MMP9结合蛋白一般不与非MMP9基质金属蛋白酶显著地或可检测地交叉反应。特异性结合 MMP9的MMP9结合蛋白可用于需要或希望获得对MMP9的特异性调节（例如，抑制），例如而 不直接地影响其它基质金属蛋白酶的活性的应用中。
[0062] 在本发明的某些实施例中，抗MMP9抗体为MMP9活性的一种抑制剂并且可为特异 性MMP9抑制剂。确切地说，本文所揭示的MMP9结合蛋白将可用于抑制MMP9,同时允许其它 相关基质金属蛋白酶的正常功能。"MMP抑制剂"或"MMP9活性的抑制剂"可为直接或间接 抑制MMP9活性，包括（但不限于）酶加工、抑制MMP9对其底物的作用（例如，通过抑制底 物结合、底物裂解等）等的抗体或其抗原结合片段。
[0063] 在一些实施例中，如本文的实例中所证实的，用泛MMP抑制剂（例如小分子泛抑制 齐U，例如马立马司他）进行治疗引起肌肉骨骼疾病的症状，例如肌肉骨骼综合症（MSS)，包 括对步态、姿势及移动意愿的显著影响，而特异性抑制MMP9,例如本申请案中的抗体或其抗 原结合片段，不会引起这些症状并且不会诱发MSS。
[0064] 本发明还提供了特异性结合到非小鼠MMP9(例如人类MMP9、食蟹猴MMP9及大鼠 MMP9)的MMP9结合蛋白。
[0065] 本发明还提供了充当非竞争性抑制剂的MMP9结合蛋白（例如抗MMP9抗体和其功 能片段）。"非竞争性抑制剂"是指结合于远离酶的底物结合位点的位点，并因此可结合所 述酶并且影响抑制活性，而不管所述酶是否结合到其底物的一种抑制剂。此类非竞争性抑 制剂可例如提供一定水平的抑制作用，所述抑制作用可与底物浓度实质上无关。
[0066] 本发明的MMP9结合蛋白（例如抗体和其功能片段）包括结合MMP9,特别是人类 MMP9,并且具有与本文所揭示的重链多肽具有至少约80%、85%、90%、95%或更高氨基酸 序列一致性的重链多肽（或其功能片段）的结合蛋白。在一些实例中，本发明的MMP9结合 蛋白（例如抗体和其功能片段）包括结合MMP9,特别是人类MMP9,并且具有与本文所揭示 的重链多肽具有至少约90%、95%、97%、98%、99%或更高氨基酸序列一致性的重链多肽 (或其功能片段）的结合蛋白。
[0067] 本发明的MMP9结合蛋白（例如抗体和其功能片段）包括结合MMP9,特别是人类 MMP9,并且具有与本文所揭示的重链多肽具有至少约80%、85%、90%、95%或更高氨基酸 序列一致性的轻链多肽（或其功能片段）的结合蛋白。
[0068] 本发明的MMP9结合蛋白（例如抗体和其功能片段）包括结合MMP9,特别是人类 MMP9,并且具有如本文所揭示的重链多肽的互补决定区（"CDR"）的重链多肽（或其功能片 段）以及轻链多肽（或其功能片段）的CDR的结合蛋白。
[0069] 如本文所使用，"同源性"或"一致性"或"相似性"在核酸和多肽的情形中是指分 别基于氨基酸序列或核酸序列比对，两个多肽或两个核酸分子之间的关系。同源性和一致 性可各自通过比较出于比较的目的对准的每个序列的位置来测定。当所比较的序列中的相 同位置被相同碱基或氨基酸占据时，则这些分子在所述位置相同；当相同位点被相同或相 似的氨基酸残基（例如空间性和/或电子性质类似）占据时，则这些分子可称为在所述位 置同源（相似）。以同源性/相似性或一致性百分比表示是指在多个位置处所比较的序列 共有的一致或相似氨基酸的数量的函数。在比较两个序列时，残基（氨基酸或核酸）的不 存在或额外残基的存在也会降低一致性和同源性/相似性。
[0070] 如本文所使用，"一致性"意谓当将两个或两个以上序列对准以使序列匹配达到最 大（即，考虑空位和插入）时，在这些序列中相应位置处一致核苷酸或氨基酸残基的百分 t匕。序列一般在指定区域内，例如至少约20、25、30、35、40、45、50、55、60、65或更多个氨基 酸或核苷酸长的区域内对准以达到最大对应，并且可长达参考氨基酸或核苷酸的全长。为 进行序列比较，通常一个序列充当参考序列，以与测试序列相比较。当使用序列比较算法 时，将测试序列和参考序列输入计算机程序中，必要时，指定子序列座标，并且指定序列算 法的程序参数。随后序列比较算法基于指定的程序参数计算测试序列相对于参考序列的序 列一致性百分比。
[0071] 适用于测定序列一致性百分比的算法的实例为BLAST和BLAST 2. 0算法，其分别 描述于奥兹楚尔（Altschul)等人（1990)分子生物学杂志（J. Mol. Biol. )215:403-410及 奥兹楚尔等人（1977)核酸研究（Nucleic Acids Res. )25:3389-3402中。执行BLAST分析的 软件可经由国家生物技术资讯中心（National Center for Biotechnology Information; www.ncbi.nlm.nih.gov)公开获得。其它示例性算法包括ClustalW(海金思D. (Higgins D.)等人（1994)核酸研究（Nucleic Acids Res) 22:4673-4680)，在 www. ebi. ac. uk/Tools/ clustalw/index. html 上可得。
[0072] 不一致的残基位置可因保守氨基酸取代而不同。保守氨基酸取代是指具有类似侧 链的残基的可互换性。举例来说，一组具有脂肪族侧链的氨基酸为甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、 亮氨酸和异亮氨酸；一组具有脂肪族羟基侧链的氨基酸为丝氨酸和苏氨酸；一组具有含酰 胺的侧链的氨基酸为天冬酰胺和谷氨酰胺；一组具有芳香族侧链的氨基酸为苯丙氨酸、酪 氨酸及色氨酸；一组具有碱性侧链的氨基酸为赖氨酸、精氨酸和组氨酸；并且一组具有含 硫侧链的氨基酸为半胱氨酸和甲硫氨酸。
[0073] 两个核酸之间的序列一致性也可以关于两个分子彼此在严格条件下的杂交来描 述。杂交条件是遵循所属领域中的标准方法选择（参见例如，萨姆布鲁克（Sambrook)等 人，分子克隆实验指南，第二版，（1989)纽约冷泉港（ColdSpringHarbor,N.Y.))。严 格杂交条件的一个实例是在50°C或更高温度及0.lXSSC(15mM氯化钠/I. 5mM柠檬酸 钠）下杂交。严格杂交条件的另一个实例为在42°C下于以下溶液中过夜培育：50%甲 酰胺、5XSSC(150mMNaCl、15mM柠檬酸三钠）、50mM磷酸钠（pH7. 6)、5X丹哈特氏溶液 (Denhardt'ssolution)、10%硫酸葡聚糖及20mg/ml变性剪切的鲑鱼精DNA;随后在约 65°C下于0.IXSSC中洗涤过滤器。严格杂交条件是至少与上述代表性条件同样严格的杂 交条件，其中如果这些条件与上述特定严格条件至少约80%同样严格，通常至少90%同样 严格，就认为其为至少同样严格的。
[0074] 因此，本发明提供了例如这样一些抗体或其抗原结合片段，其包含与本文所述的 重链可变区的氨基酸序列（例如SEQIDN0:1或5-8)具有至少80%、85%、90%、95%、 96%、97%、98%、99%或更高氨基酸序列一致性的重链可变区多肽，及与如本文所陈述的 轻链多肽的氨基酸序列（例如SEQIDN0:2或9-12)具有至少80%、85%、90%、95%、96%、 97%、98%、99%或更高氨基酸序列一致性的可变轻链多肽。
[0075] 本发明的抗MMP9抗体的实例将于以下更详细地描述。
[0076] 抗体
[0077] MMP9结合蛋白包括抗体和其功能片段，例如特异性结合到MMP9的那些。如本文所 使用，术语"抗体"意谓包含特异性结合抗原表位的肽序列（例如可变区序列）的分离的或 重组多肽结合剂。所述术语是以其最广泛意义使用并且特别涵盖单克隆抗体（包括全长单 克隆抗体）、多克隆抗体、人类抗体、人类化抗体、嵌合抗体、纳米抗体、双功能抗体、多特异 性抗体（例如双特异性抗体），及抗体片段，包括（但不限于）Fv、scFv、Fab、Fab'、F(ab'）2 及Fab2，只要其展现所需的生物活性即可。术语"人类抗体"是指除可能的非人类CDR区 夕卜，含有人类来源的序列的抗体，并且并非暗指存在免疫球蛋白分子的完整结构，只是指所 述抗体在人体中具有极少免疫原性作用（即，不会诱导产生针对其自身的抗体）。
[0078] "抗体片段"包含全长抗体的一部分，例如全长抗体的抗原结合区或可变区。此类 抗体片段也可以在本文中称为"功能片段"或"抗原结合片段"。抗体片段的实例包括Fab、 Fab'、F(ab'）2及Fv片段；双功能抗体；线性抗体（扎帕塔（Zapata)等人（1995)蛋白质 工程（ProteinEng. )8(10):1057-1062);单链抗体分子；及由抗体片段形成的多特异性抗 体。木瓜蛋白酶消化抗体产生两个相同的抗原结合片段，称为"Fab"片段，其各自具有单个 抗原结合位点；及一个残留的"Fc"片段，其名称反映了易于结晶的能力。胃蛋白酶处理得 到F(ab'）2片段，其具有两个抗原组合位点并且仍能够交联抗原。
[0079] "Fv"是含有完整抗原识别和结合位点的最小抗体片段。这一区域是由紧密非共价 缔合的一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域构成的二聚物组成。在这种构型中，每 个可变结构域的三个互补决定区（CDR)相互作用以在Vh-'二聚物的表面上界定抗原结合 位点。六个CDR共同地赋予抗体抗原结合特异性。然而，每个单一可变结构域（或仅包含 对于抗原具特异性的六个CDR中的三个的分离的Vh或 '区）能够识别并结合抗原，不过亲 和力一般低于完整Fv片段。
[0080] "Fab"片段除重链和轻链可变区外，还含有轻链恒定结构域和重链的第一恒定结构 域（CH1)。Fab片段最初是在木瓜蛋白酶消化抗体之后观察到。Fab'片段与Fab片段的不 同之处在于，F(ab'）片段在重链CH1结构域的羧基末端处含有若干其它残基，包括抗体铰链 区中的一或多个半胱氨酸。F(ab'）2片段含有在铰链区附近通过二硫键接合的两个Fab片 段，并且最初是在胃蛋白酶消化抗体之后观察到。Fab'-SH在本文中指定为Fab'片段，其中 恒定结构域的半胱氨酸残基带有游离硫醇基。抗体片段的其它化学偶合也是已知的。
[0081] 来自任何脊椎动物物种的抗体（免疫球蛋白）的"轻链"基于其恒定结构域的氨 基酸序列可以被分配到两种明显相异的类型之一中，称为κ和λ。取决于重链恒定结构域 的氨基酸序列，可将免疫球蛋白分为五个主要类别：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，并且这些类 别中的若干类别可进一步细分成子类（同型），例如1861、1862、1863、1864、18八1及18八2。
[0082] "单链Fv"或"sFv"或"scFv"抗体片段包含抗体的Vh和八结构域，其中这些 结构域存在于单一多肽链中。在一些实施例中，Fv多肽进一步包含在Vh与'结构域之 间的多肽连接子，所述连接子使sFv能够形成抗原结合所需的结构。关于sFv的评述， 参见普鲁可敦（Pluckthun),单克隆抗体药理学（ThePharmacologyofMonoclonal Antibodies),第113卷（罗森博格（Rosenburg)和摩尔（Moore)编）斯普林格-维拉格出 版社（Springer-Verlag),纽约（NewYork),第 269-315 页（1994)。
[0083] 术语"双功能抗体"是指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，这些片段包含连 接到同一多肽链（Vh-VJ中的轻链可变结构域（VJ的重链可变结构域（Vh)。通过使用太 短而无法使同一链中的两个结构域之间配对的连接子，迫使这些结构域与另一条链的互 补结构域配对，由此产生两个抗原结合位点。双功能抗体另外描述于例如EP404,097; W093/11161 ;及霍林格（Hollinger)等人（1993)美国国家科学院院刊（Proc.Natl.Acad. Sci.USA) 90:6444-6448 中。
[0084] "分离的"抗体为从自然环境的组分鉴别并且分离和/或回收的抗体。其自然环境 的组分可包括酶、激素及其它蛋白质或非蛋白质溶质。在一些实施例中，分离的抗体被纯化 (1)达到如通过劳里法（Lowrymethod)所测定的超过95重量％ ,例如超过99重量％的抗 体；（2)达到例如通过使用旋杯式顺序分析仪足以获得N末端或内部氨基酸序列的至少15 个残基的程度；或（3)达到通过在还原或非还原条件下进行凝胶电泳（例如SDS-PAGE)并 且通过考马斯蓝（Coomassieblue)或银染色检测的均质性。术语"分离的抗体"包括一种 在重组细胞内原位的抗体，因为所述抗体的自然环境的至少一种组分将不存在。在某些实 施例中，分离的抗体是通过至少一个纯化步骤制备。
[0085] 如本文所使用，"免疫反应性"是指对氨基酸残基的序列（"结合位点"或"表位"） 具有特异性，但又与其它肽/蛋白质交叉反应，在将其调配用于投予人类使用的水平下无 毒的抗体或其片段。"表位"是指抗原中能够与抗体或其抗原结合片段形成结合相互作用的 部分。表位可为线性肽序列（即，"连续的"）或可由非邻接的氨基酸序列（即，"构象"或 "不连续"）构成。术语"优先结合"意谓结合剂结合到结合位点的亲和力高于其结合不相 关氨基酸序列的亲和力。
[0086] 抗MMP9抗体可关于重链和轻链的⑶R进行描述。如本文所使用，术语"⑶R" 或"互补决定区"打算意谓在重链多肽与轻链多肽的可变区内发现的非邻接抗原 组合位点。这些特定区域已描述于卡贝特（Kabat)等人，生物化学杂志（J.Biol. Chem.) 252:6609-6616 (1977);卡贝特等人，美国卫生和公众服务部（U.S.D印t.of HealthandHumanServices), "免疫相关蛋白质的序列（Sequencesofproteins ofimmunologicalinterest) "（1991);查赛（Chothia)等人，分子生物学杂志 (J.Mol.Biol.) 196:901-917 (1987);及麦克卡伦（MacCallum)等人，分子生物学杂 志，262:732-745 (1996)中，其中当彼此相比较时，这些定义包括氨基酸残基的重叠或亚 组。尽管如此，用以指抗体或移植抗体或其变体的CDR的任一定义的应用打算在如本文所 定义和使用的术语的范围内。涵盖如以上引用的每一参考文献所定义的CDR的氨基酸残基 陈述于下表IA中供比较。
[0087]表IA:CDR定义

【权利要求】
1. 一种医药组合物，其包含： 结合到基质金属蛋白酶9MMP9的分离的抗体或其片段，其包含：具有氨基酸序列为SEQ ID NO: 15的互补决定区⑶R的重链可变VH区；和 医药学上可接受的赋形剂。
2. 根据权利要求1所述的医药组合物，其中所述VH区另外包含氨基酸序列为SEQ ID N0:13 和 / 或 14 的 CDR。
3. -种医药组合物，其包含： 结合到基质金属蛋白酶9的分离的抗体或其片段，其包含：具有氨基酸序列为SEQ ID NO: 18的互补决定区⑶R的轻链可变VL区；和 医药学上可接受的赋形剂。
4. 根据权利要求1到3中任一权利要求所述的医药组合物，其中所述VL区另外包含氨 基酸序列为SEQ ID NO: 16和/或17的CDR。
5. 根据权利要求1、2及4中任一权利要求所述的医药组合物，其中所述VH区具有SEQ ID N0:3、5、6、7或8中所陈述的氨基酸序列。
6. 根据权利要求1到5中任一权利要求所述的医药组合物，其中所述VL区具有SEQ ID N0:4、9、10、ll或12中所陈述的氨基酸序列。
7. 根据权利要求6所述的医药组合物，其中所述VH区具有SEQ ID N0:7中所陈述的氨 基酸序列并且所述VL区具有SEQ ID NO: 12中所陈述的氨基酸序列。
8. -种医药组合物，其包含： 特异性结合到MMP9的表位的分离的抗体或其片段，其中所述表位包含在MMP9的区域 内的氨基酸残基，所述区域由SEQ ID NO: 27的残基104-119、残基159-166或残基191-202 组成；及医药学上可接受的赋形剂。
9. 根据权利要求8所述的医药组合物，其中所述表位包含SEQ ID N0:27的E11UD113、 R162 或 1198。
10. 根据权利要求1到9中任一权利要求所述的医药组合物，其中所述抗体或片段抑制 MMP9的酶活性。
11. 根据权利要求10所述的医药组合物，其中所述酶活性的所述抑制是非竞争性的。
12. 根据权利要求1到11中任一权利要求所述的医药组合物，其另外包含一或多种选 自由以下组成的群组的治疗剂：消炎剂、免疫治疗剂、化学治疗剂、抗癌剂、抗纤维化药剂或 其组合。
13. 根据权利要求12所述的医药组合物，其中所述一或多种治疗剂选自由以下组成的 群组：白蛋白结合型紫杉醇、mF0LF0X6、F0LFIRI、卡钼、紫杉醇、培美曲塞、贝伐单抗、抗赖氨 酰氧化酶样蛋白2L0XL2抗体、抗盘状结构域受体1DDR1抗体或其组合。
14. 一种抑制个体中的MMP9活性的方法，其包含以有效抑制罹患MMP9相关性疾病或病 况的所述个体中的MMP9活性的量向所述个体投予根据权利要求1到13中任一权利要求所 述的医药组合物。
15. 根据权利要求14所述的方法，其中所述MMP9相关性疾病或病况是癌症、自体免疫 性、炎症性或纤维化疾病或病况。
16. 根据权利要求15所述的方法，其中所述MMP9相关性癌症为胰脏癌、食管胃腺癌、非 小细胞肺癌、肺鳞状细胞癌瘤、肺腺癌、胃腺癌、结肠直肠癌瘤、胰脏腺癌、头颈鳞状细胞癌 瘤、肝细胞癌瘤、结肠直肠癌、结肠直肠腺癌或肝细胞癌瘤。
17. 根据权利要求16所述的方法，其中所述MMP9相关性自体免疫性或炎症性疾病或病 况为类风湿性关节炎、炎症性肠病IBD、败血病、多发性硬化、肌营养不良、狼疮、过敏症或哮 喘。
18. 根据权利要求17所述的方法，其中所述IBD为溃疡性结肠炎UC、克罗恩氏病CD或 未定型结肠炎。
19. 根据权利要求15到18中任一权利要求所述的方法，其中所述抗体或片段是以约 lmg/kg到约28mg/kg的剂量投予。
20. 根据权利要求15到18中任一权利要求所述的方法，其中所述抗体或片段是以介于 100mg/kg体重或约100mg/kg与1800mg/kg或约1800mg/kg之间的剂量投予。
21. 根据权利要求20所述的方法，其中所述剂量为100、200、300、400、500、600、700、 800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700 或 1800mg/kg 体重或约 100、200、 300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700 或 1800mg/ kg。
22. 根据权利要求15到21中任一权利要求所述的方法，其中所述抗体或片段是每周一 次、每两周一次或每三周一次投予。
23. 根据权利要求15到22中任一权利要求所述的方法，其中所述抗体或片段是静脉 内、真皮内或皮下投予。
24. 根据权利要求12到23中任一权利要求所述的方法，其中所述抗体或片段是与所述 一或多种治疗剂同时或依序投予。
25. -种检测或监测MMP9活性的方法，其包含： 使样品与MMP9结合蛋白接触， 评估MMP9结合蛋白-MMP9复合物的存在或不存在； 其中所述MMP9结合蛋白包含VH区，所述VH区包含具有选自由SEQ ID N0:13、14、15、 34、35、36及47组成的群组的氨基酸序列的CDR ;及VL区，所述VL区具有含选自由SEQ ID NO: 16、17、18、37、38、39、42、43、44及48组成的群组的氨基酸序列的CDR ; 由此不存在所述MMP9结合蛋白-MMP9复合物指示所述样品不具有所述MMP9活性，由 此存在所述MMP9结合蛋白-MMP9复合物指示所述样品具有所述MMP9活性。
26. 根据权利要求25所述的方法，其中所述MMP9结合蛋白包含VH区，所述VH区具有 选自由SEQ ID勵：1、3、5、6、7、8、34、35、36及46组成的群组的氨基酸序列；及￥1^区，所述 VL区具有选自由SEQ ID勵:2、4、9、10、11、12、37、38、39、42、43、44及45组成的群组的氨基 酸序列。
27. -种MMP9结合蛋白，其包含VH区，所述VH区包含具有SEQ ID N0:34、35、36及47 的氨基酸序列的CDR;及VL区，所述VL区具有含选自由SEQ ID N0:37、38、39、42、43、44及 48组成的群组的氨基酸序列的CDR。
28. 根据权利要求27所述的MMP9结合蛋白，其中所述VH区与所述选自由SEQ ID NO: 30、32、46及47组成的群组的氨基酸序列具有95%序列一致性；并且所述VL区与所述 选自由SEQ ID勵:31、33、41、45及48组成的群组的氨基酸序列具有95%序列一致性。
29. 根据权利要求27到28中任一权利要求所述的MMP9结合蛋白，其中所述VH区具 有选自由SEQ ID N0:30、32、46及47组成的群组的氨基酸序列；并且所述VL区具有选自由 SEQ ID勵:31、33、41、45及48组成的群组的氨基酸序列。
30. -种抑制MMP9活性的方法，其包含：使样品与根据权利要求27到29中任一权利 要求所述的MMP9结合蛋白接触。
【文档编号】A61K38/17GK104271156SQ201380022489
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2013年2月28日 优先权日:2012年2月29日
【发明者】乔安妮·I·亚当肯维克兹, 维多莉亚·史密斯, 宗·蔡, 迈克尔·J·霍金斯 申请人:吉联亚生物科技有限公司