本发明属于中药技术领域，尤其涉及一种防治失眠的药物组合物及其制备方法。
背景技术：
睡眠是生理行为,也是保障身心健康的重要条件。长时间失眠会给患者带来巨大的身心损害,严重影响人们的生活和工作。由于各种因素的影响,睡眠障碍和睡眠不足的现象越来越普遍。目前治疗睡眠障碍最常用的方法是用化学合成类镇静催眠药,久服会产生依赖性或成瘾。临床经验证明,中药及其复方在改善睡眠方面具有独特疗效,且不良反应较少。近年国内研究人员对中草药的镇静催眠作用开展研究,发现其中许多活性成分具有催眠作用。
近年对中药提取物的研究发现,中药提取物也具有与西药相类似作用于谷氨酸、DA、5-HT、NE 及 GABA 等神经递质而促进睡眠的作用,如灵芝提取物对褪黑素分泌的影响,柏子仁提取物对 5-HT 水平的提高,酸枣仁提取物同时作用于 GABA 及谷氨酸的表达,均与现代治疗失眠的西药机制相似,且中药治疗效果更有效、不良反应更小,对中药提取物的研究给临床治疗失眠带来了新的指导思路。但从整体来看,目前对中药提取物的实验研究方法未能统一,实验条件无统一标准,这使实验结果差异较大；另外,大多数中药提取物治疗失眠的实验研究都是动物实验,对人体研究较少；而因为对失眠原因的不明确性,目前的失眠动物模型的可信度仍有待考察；动物实验虽一方面表明中药提取物的有效性,但仍需相关临床的研究才可明确其安全性；由于失眠的因素与环境、精神、情绪等均有较为密切的联系,而在临床观察研究中,少有对此方面的控制,缺乏确切的标准和完善的方案,因而使研究结果缺乏说服力。笔者认为,未来的研究不仅需要对动物模型、研究标准等进行更详尽的完善,更多细致的临床观察和对失眠机制的探索也会带来更加新颖的思路与方向。
蒙自水芹：本品为伞形科水芹属植物蒙自水芹Oenanthe riuularis Dunn的全草。夏季采收，洗净，晒干。【性味】味辛；微甘；性平。【归经】归胃；脾；膀胱经。【功能主治】健胃消积；清热利尿；消肿解毒。主慢性胃炎；食积胃痛；白浊；淋痛；跌打肿痛；血虚风毒。【性状】本品多皱缩成团。茎细长，少分枝，叶片皱缩，易碎，完整的叶片羽状分裂，裂片窄，线形或卵状披针形，叶有长柄。质轻脆，气香，味微辛、苦。【原植物形态】 多年生草本，高30-70cm。全株光滑无毛。茎直立，下部匍匐，单一或有少数分枝。叶柄长4-6cm，叶片轮廓广三角形或三角形，长4.5-6cm，宽3.5-6cm，一回羽状深裂，稀二回羽状分裂；茎下部叶裂片卵形，末回裂片长1-1.5cm，宽0.5cm，边缘有缺刻状锯齿；茎上部叶末回裂片线形，全缘。复伞形花序顶生，花序梗长2-5cm；无总苞片；伞辐6-7，直立或开展；小总苞片线形，多数；小伞形花序有花20余朵；萼齿披针形；花瓣自色，倒卵形；花柱基圆锥形，花柱直立或叉以。双悬果椭圆形，长2mm，宽1mm，侧棱较中棱和背棱隆起，背棱线形；每棱槽内有油管1，合生面有油管2。花期5-7月，果期7-8月。收载于中药大辞典。
锦香草：本品为野牡丹科锦香草属植物锦香草Phyllagathis caualeriei(Levl.et van.)Guill.[Allomorphia caualerieiLevl. Et van.]的全草或根。春、夏季采收全草，根全年均可采，均洗净，切碎晒干。【性味】味苦；辛；性寒。【功能主治】清热凉血；利湿。主热毒血痢；湿热带下；月经不调；血热崩漏；肠热痔血；小儿阴囊肿大。【原植物形态】草本，高10-15cm。茎直立或匍匐，逐节生很，近肉质，密被长粗毛，四棱形，通常不分枝。叶对生；叶柄长1.5-9cm，密被长粗毛；叶片纸质，广卵形、广椭圆形或圆形，先端广急尖至近圆形，基部心形，长6-16cm，宽4.5-14cm，两面绿色或有时背面紫红色，表面被疏糙伏毛状长粗毛，背面仅基出脉及侧脉被平展的长粗毛；基出脉7-9，表面脉平整，背面脉隆起。伞形花序，顶生，总花梗长4-17cm，被长粗毛，稀几无毛；苞片倒卵形或近侧披针形，被粗毛，通常仅有4枚，长约1cm，或更长；花梗与花萼均被糠秕；花萼漏斗状四棱形，裂片广卵形；花瓣粉红色至紫色，上部略偏斜，先端急尖；雄蕊4，近等长，花药基部具小瘤或不明显，药隔下延呈短距；子房杯形，先端具冠。蒴果，先端冠4裂，伸出宿存萼，宿存萼具8纵肋，果梗伸长，被糠秕。花期6-8月，果期7-9月。收载于中药大辞典。
黑腺珍珠菜：本品为报春花科珍珠菜属植物黑腺珍珠菜Lysimachia heterogenea Klatt.[L.paludicola Hemsl.]的全草。夏、秋季采收，晒干。【性味】苦；辛；性平。【功能主治】活血；解蛇毒。主闭经；毒蛇咬伤。【原植物形态】 多年生草本。茎直立，高40-80cm，全株无毛。四棱形，棱边有狭翅和黑色腺点，中部以上多分枝，枝极开展。基生叶片匙形，长1-6cm，宽0.6-3.8cm，先端圆钝，基部下延成翼柄，花时常不存在；茎生叶对生，无柄；叶片披针形或线状披针形，极少长圆状披针形，长4-13cm，宽1-3cm，先端稍锐尖或钝，基部钝或耳状半抱茎，两面密生黑色粒状腺点。总状花序生于茎端和枝端，长8-13cm；苞片叶状，披针形，向上渐变小，长于或近等长于花梗；花梗长3-5mm；花萼长4-5mm，5分裂近达基部，裂片线状披针形，先端渐尖并向背部卷曲：花冠白色，长约7mm，基部合生部分长约2.5mm，5分裂，裂片卵状长圆形；椎蕊5，与花冠近等长，花丝贴生至花冠的中部，分离部分长约3mm，花药腺形，长约1.5mm，药隔先端具胼胝状尖头；子房无毛，上位，1室，花柱长约6mm，柱头膨大。蒴果球形，直径约3mm。种子黑紫色。花期5-7月，果期8-10月。收载于中药大辞典。
光甘草宁（Glabranin）：CAS号41983-91-9，分子式C20H20O4，分子量324.38。【药理作用】有雌激素活性，未成熟大鼠口服能增加子宫重量, 但对卵巢重量影响小。【用途】性激素，作用于子宫。【成分来源】伞形科植物裸禾蕨 Platytaenia absinthifolia 根，豆科植物光甘草 Glycyrrhiza glabra L.。
葫芦素L（ Cucurbitacin L）：CAS号1110-02-7，分子式C30H44O7，分子量516.67。【生物活性】抗肿瘤 (动物Ehrlich 腹水癌 in vivo，生命延长率38％～42％），细胞毒（KB in vitro，ED50=0.01～0.1ug/ml，HeLa in vitro,ED50=0.1ug/ml）。【成分来源】白泻根 Bryonia alba，喷瓜 Ecballium elaterium，无卷须西瓜 Citrullus ecirrhosus，药西瓜 Citrullus colocynthis。
2个原料药化学结构：
葫芦素L（ Cucurbitacin L） 光甘草宁（Glabranin）。
技术实现要素：
本发明的目的是克服背景技术的不足，提供一种有效防治失眠的药物组合物及其制备方法。
本发明是采用如下技术方案实现的：
制成该防治失眠的药物组合物的原料药的组成和重量份为：
蒙自水芹262-268重量份 锦香草234-238重量份 光甘草宁13-16重量份 葫芦素L5-8重量份 黑腺珍珠菜195-200重量份。
优选的用于防治失眠的药物组合物，是由如下重量份的原料药组成：
蒙自水芹265重量份 锦香草236重量份 光甘草宁15重量份 葫芦素L6重量份 黑腺珍珠菜198重量份。
一种防治失眠的药物组合物，其特征在于药物组合物可以采用制剂学的常规方法制备成片剂或胶囊剂或滴丸。
一种防治失眠的药物组合物，其特征在于药物组合物与化学药或中药组成的防治失眠药物。
一种防治失眠的药物组合物的制备方法，其特征在于按如下步骤制备：
原料药的组成和重量份为：蒙自水芹262-268重量份 锦香草234-238重量份 光甘草宁13-16重量份 葫芦素L5-8重量份 黑腺珍珠菜195-200重量份；
制备方法：
（1）按原料药配比取蒙自水芹、锦香草、光甘草宁、葫芦素L、黑腺珍珠菜，混匀，用重量百分比浓度33%乙醇作为溶剂，39℃温浸提取，提取次数为18次，每次提取时间为1.5小时，每次溶剂用量为原料药总重量的12.5倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇，浓缩至相对密度1.09，滤过，药液通过LKS08大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度53%乙醇溶液洗脱LKS08大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度53%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物A；
（2）取步骤（1）药渣A，用重量百分比浓度46%乙醇作为溶剂，加热回流提取12次，每次提取时间为0.3小时，每次溶剂用量为药渣A重量的14倍，滤过，得药渣B和提取液B，提取液B回收乙醇，浓缩至相对密度1.12，滤过，药液通过SP70大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度77%乙醇溶液洗脱SP70大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度77%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B；
（3）将提取物A和提取物B混匀，即得药物组合物。
优选的一种防治失眠的药物组合物的制备方法，其特征在于按如下步骤制备：
原料药的组成和重量份为：蒙自水芹265重量份 锦香草236重量份 光甘草宁15重量份 葫芦素L6重量份 黑腺珍珠菜198重量份；
制备方法：
（1）按原料药配比取蒙自水芹、锦香草、光甘草宁、葫芦素L、黑腺珍珠菜，混匀，用重量百分比浓度33%乙醇作为溶剂，39℃温浸提取，提取次数为18次，每次提取时间为1.5小时，每次溶剂用量为原料药总重量的12.5倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇，浓缩至相对密度1.09，滤过，药液通过LKS08大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度53%乙醇溶液洗脱LKS08大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度53%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物A；
（2）取步骤（1）药渣A，用重量百分比浓度46%乙醇作为溶剂，加热回流提取12次，每次提取时间为0.3小时，每次溶剂用量为药渣A重量的14倍，滤过，得药渣B和提取液B，提取液B回收乙醇，浓缩至相对密度1.12，滤过，药液通过SP70大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度77%乙醇溶液洗脱SP70大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度77%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B；
（3）将提取物A和提取物B混匀，即得药物组合物。
一种防治失眠的药物组合物的制备方法，其特征在于药物组合物可以采用制剂学的常规方法制备成片剂或胶囊剂或滴丸。
一种防治失眠的药物组合物的制备方法，其特征在于药物组合物与化学药或中药组成防治失眠药物。
药物组合物防治失眠疗效显著。
具体实施方式
实施例1：防治失眠的药物组合物及其制备方法
防治失眠的药物组合物的原料药的组成和重量份为：蒙自水芹265g 锦香草236g 光甘草宁15g 葫芦素L6g 黑腺珍珠菜198g；
制备方法：
（1）按原料药配比取蒙自水芹、锦香草、光甘草宁、葫芦素L、黑腺珍珠菜，混匀，用重量百分比浓度33%乙醇作为溶剂，39℃温浸提取，提取次数为18次，每次提取时间为1.5小时，每次溶剂用量为原料药总重量的12.5倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇，浓缩至相对密度1.09，滤过，药液通过LKS08大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度53%乙醇溶液洗脱LKS08大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度53%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物A；
（2）取步骤（1）药渣A，用重量百分比浓度46%乙醇作为溶剂，加热回流提取12次，每次提取时间为0.3小时，每次溶剂用量为药渣A重量的14倍，滤过，得药渣B和提取液B，提取液B回收乙醇，浓缩至相对密度1.12，滤过，药液通过SP70大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度77%乙醇溶液洗脱SP70大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度77%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B；
（3）将提取物A和提取物B混匀，即得药物组合物。
实施例2：防治失眠的药物组合物及其制备方法
防治失眠的药物组合物的原料药的组成和重量份为：蒙自水芹262g 锦香草238g 光甘草宁13g 葫芦素L8g 黑腺珍珠菜195g；
制备方法：
（1）按原料药配比取蒙自水芹、锦香草、光甘草宁、葫芦素L、黑腺珍珠菜，混匀，用重量百分比浓度33%乙醇作为溶剂，39℃温浸提取，提取次数为18次，每次提取时间为1.5小时，每次溶剂用量为原料药总重量的12.5倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇，浓缩至相对密度1.09，滤过，药液通过LKS08大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度53%乙醇溶液洗脱LKS08大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度53%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物A；
（2）取步骤（1）药渣A，用重量百分比浓度46%乙醇作为溶剂，加热回流提取12次，每次提取时间为0.3小时，每次溶剂用量为药渣A重量的14倍，滤过，得药渣B和提取液B，提取液B回收乙醇，浓缩至相对密度1.12，滤过，药液通过SP70大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度77%乙醇溶液洗脱SP70大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度77%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B；
（3）将提取物A和提取物B混匀，即得药物组合物。
实施例3：防治失眠的药物组合物及其制备方法
防治失眠的药物组合物的原料药的组成和重量份为：蒙自水芹268g 锦香草234g光甘草宁16g 葫芦素L5g 黑腺珍珠菜200g；
制备方法：
（1）按原料药配比取蒙自水芹、锦香草、光甘草宁、葫芦素L、黑腺珍珠菜，混匀，用重量百分比浓度33%乙醇作为溶剂，39℃温浸提取，提取次数为18次，每次提取时间为1.5小时，每次溶剂用量为原料药总重量的12.5倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇，浓缩至相对密度1.09，滤过，药液通过LKS08大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度53%乙醇溶液洗脱LKS08大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度53%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物A；
（2）取步骤（1）药渣A，用重量百分比浓度46%乙醇作为溶剂，加热回流提取12次，每次提取时间为0.3小时，每次溶剂用量为药渣A重量的14倍，滤过，得药渣B和提取液B，提取液B回收乙醇，浓缩至相对密度1.12，滤过，药液通过SP70大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度77%乙醇溶液洗脱SP70大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度77%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B；
（3）将提取物A和提取物B混匀，即得药物组合物。
实施例4：片剂的制备
取实施例1药物组合物155g，加入淀粉203g，混匀，制粒，干燥，加微晶纤维素165g，硬脂酸镁5g，混匀，压制成1300片， 即得药物组合物片剂。
实施例5：胶囊的制备
取实施例2药物组合物140g，加入淀粉350g，混匀，制粒，干燥，整粒，加入适量硬脂酸镁，混匀，装胶囊800粒，即得药物组合物胶囊。
实施例6：滴丸的制备
称取聚乙二醇 6000 300g水浴(80℃)加热煮熔，加入实施例3药物组合物18g，充分搅拌均匀，以液体石蜡为冷却剂，置玻璃管（4*80cm）中，冷却温度为5℃，滴口内外径为7.0/2.0(mm/mm)，滴口距液面为2.3cm，滴速以每分56滴为最佳条件，用棉布吸干滴丸表面的冷凝剂，即得药物组合物滴丸。
实施例7：防治失眠的药物组合物
防治失眠的药物组合物的原料药的组成和重量份为：
锦香草250重量份 葫芦素L5重量份 黑腺珍珠菜260重量份。
实施例8：防治失眠的药物组合物
防治失眠的药物组合物的原料药的组成和重量份为：
光甘草宁15重量份 葫芦素L10重量份 黑腺珍珠菜250重量份。
实施例9：防治失眠的药物组合物
防治失眠的药物组合物的原料药的组成和重量份为：
光甘草宁10重量份 葫芦素L5重量份 黑腺珍珠菜150重量份。
实验例1：防治失眠的试验研究
1 材料与方法
1.1 受试物
药物组合物（实施例1药物组合物 批号20110824）, 人日推荐量为3.0 g,相当于0.05 g/kg BW (成人体重以60 kg计)。称取适量药物组合物,配置成每1 ml相当药物组合物0.075g)作为高剂量组药物组合物。
1.2 动物
清洁级ICR健康雄性小鼠,体重18-22 g。将动物分为4组(1组进行直接睡眠实验、2组延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、3组戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验、4组巴比妥钠睡眠潜伏期实验),每个实验组48只小鼠,按体重随机分成对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组12只。
1.3 剂量选择
按推荐量的5、10、30倍设3个剂量组:每公斤体重0.25、0.50和1.50g,蒸馏水对照组。动物每日称重,并按2.0 ml/100 g BW经口灌胃,连续30 d。
1.4 统计方法 数据以x±s表示,用SPSS 10.0软件包统计分析。
1.5 实验方法
1.5.1 直接睡眠实验
各剂量组动物每天分别给予相应的受试物,对照组给予等体积蒸馏水,连续30d后,观察是否出现睡眠现象:当小鼠置于背卧位时,能立即翻正身位,如超过30-60 s不能翻正者,即认为翻正反射消失,进入睡眠；翻正反射恢复即为动物觉醒,翻正反射消失至恢复的时间段为动物睡眠时间,记录各组入睡动物数及睡眠时间。
1.5.2 延长戊巴比妥钠睡眠时间实验
于末次灌胃15 min后,给各组动物腹腔注射50 mg/kg BW戊巴比妥钠,注射量0.1 ml/10g BW,以翻正反射消失为入睡判断标准,观察受试物是否延长戊巴比妥钠睡眠时间。
1.5.3 戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验
于末次灌胃15 min后,给各组动物腹腔注射35 mg/kg BW戊巴比妥钠(最大阈下催眠剂量),注射量0.1 ml/10g BW,以翻正反射消失达1min以上为入睡判断标准,记录30 min内入睡动物数。
1.5.4 巴比妥钠睡眠潜伏期实验
于末次灌胃15 min后,给各组动物腹腔注射280 mg/kg BW巴比妥钠,注射量0.1ml/10 g BW,以翻正反射消失达1 min以上为入睡判断标准,观察受试物对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响。
2 结果
2.1 对小鼠体重的影响
组间小鼠的初始体重类似(P>0.05)；实验结束时组间末体重也类似(P>0.05),即该药物组合物对小鼠体重增长无不良影响。
2.2 对小鼠直接睡眠作用观察结果
各剂量组入睡动物数及睡眠时间均为0,与对照组类似(P>0.05)。表明该药物组合物对小鼠无明显的直接睡眠作用。
2.3 对戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间的影响
中、高剂量组睡眠时间长于对照组(P<0.05)。表明该药物组合物能延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间。
2.4 对戊巴比妥钠阈下剂量催眠作用的影响
各剂量组动物入睡率与对照组类似(P>0.05)。表明该药物组合物未能增加阈下剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠发生率。
2.5 对巴比妥钠诱导小鼠睡眠潜伏期的影响
随剂量增高,动物入睡潜伏期有缩短之势,其中高剂量组短于对照组(P<0.05),表明该药物组合物能缩短巴比妥钠诱导的小鼠睡眠潜伏期。