背景
t细胞介导的免疫应答通过t细胞受体(tcr)的抗原识别而起始。t细胞应答的最终幅度和质量受免疫检查点(immunecheckpoint)的调节，所述免疫检查点控制共刺激信号和共抑制信号的平衡。免疫检查点对于在针对感染的免疫应答过程中维持自我耐受性并保护组织免于损伤是重要的。然而，肿瘤的失控的免疫检查点蛋白表达提供了一种重要的免疫抗性机制。调节组织中的t细胞效应子功能的抑制性配体和受体通常在肿瘤细胞上或在肿瘤微环境中未转化的细胞上过表达。已经出现了免疫检查点配体在肿瘤细胞上表达的两种通用机制。在一些肿瘤中，组成型的致癌信号传导诱导肿瘤上的抑制剂配体表达，从而提供先天性的免疫抗性。或者，响应由主动性抗肿瘤免疫应答(适应性免疫抗性)，可能诱导抑制性配体。临床前和临床数据表明免疫检查点的抑制作用可能增强内源性抗肿瘤免疫性(例如，参见pardoll，nat.rev.cancer12:252，2012)。
在本领域中对备选的、有效的免疫检查点途径调节剂存在需求。本公开满足所述需求，并且进一步提供其他相关的优点。
附图简述
图1a-1d显示mnk-特异性抑制剂能够阻断多种免疫检查点蛋白在转化的t细胞系(jurkat)中的表达而不影响细胞存活力或活化。(a)和(b)如通过流式细胞术检测的，在与pha和pma接触的jurkat细胞上，pd-1表达被激活，而mnk-特异性抑制剂化合物107(以0.01，0.1，1，3和10μm使用)以剂量依赖性方式减少pd-1表达。(c)elisa测定检测到在与pha和pma接触的jurkatt细胞中增加水平的人il-2产生，这表明jurkatt细胞经由其tcr被激活。mnk-特异性抑制剂化合物107的存在没有可检测程度地改变il-2产生，这表明t细胞激活不受mnk-特异性抑制剂影响。(d)如通过用可固定的死细胞染色(bdbiosciences，sanjose，ca)检测的死细胞的百分数确定的，如以上(a)中用pha和pma或用pha、pma和化合物107处理的jurkat细胞的存活力不受影响。
图2a-2e显示，与dmso赋形剂对照(标记为'-'的列)相比，在mnk-特异性抑制剂化合物107(以0.01，0.1，1，3和10μm使用)的存在下，在下述各项中通过蛋白质印迹检测的pd-l1表达以剂量依赖性方式减少：(a)mda-mb-231，一种转移性人乳腺癌细胞系，(b)hbl-1，弥散型大b细胞淋巴瘤(diffuselargeb-celllymphoma，dlbcl)细胞系的一种人活化的b细胞样(abc)亚型，(c)a549，一种人肺腺癌上皮细胞系，(d)mda-mb-361，一种人乳腺癌细胞系，(e)amo-1，一种人浆细胞瘤细胞系。
图3a-3g显示mnk-特异性抑制剂能够阻断多种免疫检查点蛋白在用抗-cd3/抗-cd28珠激活的新鲜t细胞中的表达，而不影响t细胞存活力或激活。流式细胞术表明，(a)和(b)pd-1表达与(c)和(d)lag3在用抗-cd3/抗-cd28珠激活的原代t细胞上分别增加，而在mnk-特异性抑制剂化合物107(以0.01，0.1，1，3和10μm使用)的存在下，pd-1和lag3表达分别以剂量依赖性方式减少。(e)elisa测定检测到用抗-cd3/抗-cd28珠激活的t细胞中增加水平的人il-2产生。mnk-特异性抑制剂化合物107的存在没有以可检测程度改变il-2产生。(f)当通过用可固定的死细胞染色(bdbiosciences，sanjose，ca)检测的死细胞百分数确定时，用抗-cd3/抗-cd28珠激活或在化合物107的存在下用抗-cd3/抗-cd28珠激活的t细胞的存活力不受影响。(g)化合物107以剂量依赖性方式抑制原代t细胞中的il-10(一种免疫抑制性细胞因子)表达。
图4a和4b显示，单独的mnk-特异性抑制剂或与抗-pd-1抗体组合的mnk-特异性抑制剂能够(a)抑制体内小鼠ct26同种异体移植肿瘤模型中的肿瘤生长，(b)而不影响体重(这表示耐受性)。
图5显示已经响应使用单独的mnk-特异性抑制剂、单独的抗-pd-1抗体或与抗-pd-1抗体组合的mnk-特异性抑制剂的治疗的小鼠在再攻击时排斥ct26肿瘤。与首次用于实验的植入相同的ct26同种异体移植肿瘤的balb/c小鼠相比，在不存在其他药物治疗的条件下测定肿瘤生长，这表明使用mnk-特异性抑制剂的在先的治疗建立了长期的免疫记忆。
图6显示单独的mnk-特异性抑制剂或与抗-pd-1抗体组合的mnk-特异性抑制剂能够改变在治疗后四天由小鼠ct26同种异体移植肿瘤分离的肿瘤浸润性淋巴细胞(til)群体中t效应细胞与t调节细胞的体内比例。
图7显示在用mnk-特异性抑制剂处理48小时的弥散型大b细胞淋巴瘤(dlbcl)细胞系tmd8中hla-ii(hla-dqa1)蛋白水平的蛋白质印迹分析。
详述
本公开涉及用于免疫调节的组合物和方法，例如，通过减轻由诱导免疫抑制分子和减少参与适应性免疫应答的分子而调节的疾病相关的免疫抗性进行免疫调节。例如，通过使用map激酶相互作用丝氨酸/苏氨酸激酶(mknk或mnk)-特异性抑制剂，可以校正或标准化免疫检查点蛋白(如程序性细胞死亡蛋白1(pd-1)或其配体(pd-l1，pd-l2))、免疫抑制性细胞因子(例如，il-10)或调节t细胞的不合适的水平或活性。另一方面，此类mnk-特异性抑制剂可以用于恢复或增加主要组织相容性复合物(mhc，或在人中，为hla)分子的表达，所述主要组织相容性复合物分子对于抗原呈递到t细胞或免疫记忆是重要的。
背景中，人适应性免疫系统的细胞介导的免疫应答部分涉及淋巴细胞(t细胞)的激活，从而调节致病性或异常细胞和相关分子的毁灭。t细胞可以由呈递外来抗原的细胞激活，所述外来抗原来源于外部(例如，侵入的病原体)或内在地来源于细胞(例如，癌细胞)。由于异常的应答能够对宿主引起损伤，这种应答由多种免疫检查点高度调节。在正常情形下，免疫检查点系统是复杂系列的细胞信号和分子相互作用，其防止通过t细胞的过度激活或效应子活性。但是，正(共刺激)到负(抑制性)信号传导的平衡可能被不正常的状况破坏，并且导致异常的微环境，在所述异常的微环境中，免疫应答或免疫监视收到抑制。在某些致病性情形中，如癌症或感染中，可能引起此种免疫抗性。
一种示例性的t细胞激活的早期负调节剂是细胞毒性t淋巴细胞抗原4(ctla-4)。细胞毒性t细胞的激活导致ctla-4的细胞表面表达，然后其与共刺激分子cd28竞争在抗原呈递细胞(apc)上的其共享的配体b7-1(cd80)或b7-2(cd86)。这些竞争性正和负信号保持早期阶段的细胞毒性活性处在控制下，而与此同时，允许t细胞继续以自身限制性方式行使功能(例如，参见teft等人，ann.rev.immunol.24:65，2006)。
存在于t细胞表面上的一种示例性的晚期抑制性受体是pd-1，其在被其存在于apc上的一种配体(pd-l1(b7-h1，cd274)或pd-l2(b7-dc，cd73))结合时可以传递抑制性信号。在炎症过程中，pd-1限制外周组织中t细胞的效应子功能，并且帮助维持耐受性(即，使自身免疫性最小化)(参见francisco等人，immunol.rev.236:219，2010)。存在于t细胞表面上的其他示例性抑制性受体包括cd200r，lag3，btla，kir，sirpα，tim3和a2ar。
本公开描述mnk-特异性抑制剂调控或促进多种免疫抑制组分(如pd-1，pd-l1，lag3，和il-10)中的一种或多种的减少的令人吃惊的能力，以及调控调节t细胞(tregs)的量并有效减少或最少化对效应t细胞(te)功能的抑制的能力。另外，mnk-特异性抑制剂能够调控或促进主要组织相容性复合物(mhc或hla)ii类分子表达的增加，所述主要组织相容性复合物(mhc或hla)ii类分子能够促进抗原呈递。mnk-特异性抑制剂可以作为免疫抑制组分的特异性抑制剂或调节剂的可行的备选方案或与其组合使用，所述免疫抑制组分的特异性抑制剂或调节剂诸如免疫检查点分子的抑制剂或调节剂(例如，抗-pd-1，抗-pd-l1，或抗-ctla-4抗体；例如，参见pardol，naturerev.cancer12:252，2012)。
通过施用mnk-特异性抑制剂(其还可以影响其他能够减少或克服免疫抑制活性的分子(例如，增加mhc/hla表达))引起的一种或多种免疫抑制组分(例如，pd-1，pd-l1，lag3，il-10)的此类减少可以用于治疗或减少疾病的进展，例如，通过增加免疫细胞(例如，t细胞)的活性；减少免疫细胞的下调；诱导或增强免疫应答；延长免疫应答；刺激抗原特异性t细胞应答；等等。例如，可以用mnk-特异性抑制剂治疗患有与免疫抗性相关的疾病(例如，免疫抑制组分介导的疾病，如涉及pd-1、pd-l1或lag3的调节异常的疾病)的受试者(例如，人)，从而诱导或增强所述受试者中的免疫应答。示例性的与免疫抗性相关的疾病包括癌症和传染病。另外，mnk-特异性抑制剂可以与其他针对免疫抑制组分的疗法组合使用(并且甚至增强)，从而治疗其中不被抑制的(正常的，诱导或增强的)免疫应答将是有益的疾病，所述其他针对免疫抑制组分的疗法诸如特异性针对免疫检查点分子(例如，抗-pd-1，抗-pd-l1，抗-lag3，抗-ctla-4，激酶抑制剂)的抗体。
在更详细地描述本公开致歉，提供本文使用的某些数据的定义，可以帮助理解所述公开。另外的定义在整个公开中描述。
在本发明中，除非另外指明，任意浓度范围、百分比范围、比例范围或整数范围应该理解为包括在所引用的范围内的任意整数值，适当的时候，包括其分数(例如，整数的十分之一和百分之一)。此外，除非另外指明，本文引用的关于任意物理特征(如聚合物亚单位、尺寸或厚度)的任意数字范围应该理解为包括在所引用的范围内的任意整数。用于本文时，除非另外指明，术语“约”意指平均值±所示范围、值或结构的20％。术语“基本上由……组成”将权利要求的范围限制为特定的材料或步骤，或者限制为不实质上影响本发明的基本和新颖性特征的那些材料或步骤。应该理解，术语“一个”("a"和"an")用在本文中是指所列举的成分中的“一种或多种”。备选方案的使用(例如，“或”)应该理解为意指所述备选方案中的任一个、两个或它们的任意组合。用于本文时，术语“包括”("include")、“具有”("have")和“包含”("comprise")同义使用，所述术语及其变体旨在解释为非限制性的。
“氨基”是指-nh2取代基。
“氨基羰基”是指–c(o)nh2取代基。
“羧基”是指–co2h取代基。
“羰基”是指–c(o)-或–c(＝o)-基团。这两种符号在本说明书中可互换使用。
“氰基”是指–c≡n取代基。
“氰基亚烷基”是指-(亚烷基)c≡n取代基。
“乙酰基”是指–c(o)ch3取代基。
“羟基”是指-oh取代基。
“羟基亚烷基”是指-(亚烷基)oh取代基。
“氧代(oxo)”是指＝o取代基。
“硫代”或“硫醇”是指–sh取代基。
“烷基”是指完全由碳和氢原子组成的饱和的、直链或支链烃链自由基，其具有一至十二个碳原子(c1-c12烷基)，一至八个碳原子(c1-c8烷基)或一至六个碳原子(c1-c6烷基)，并且其通过单键与分子的其余部分连接。示例性的烷基基团包括甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(异丙基)、正丁基、正戊基、1,1-二甲基乙基(叔丁基)、3-甲基己基、2-甲基己基等。
“低级烷基”具有与上文定义的烷基相同的意思，但是具有一至四个碳原子(c1-c4烷基)。
“烯基”是指具有至少一个双键的不饱和的烷基基团，并且其具有二至十二个碳原子(c2-c12烯基)，二至八个碳原子(c2-c8烯基)或二至六个碳原子(c2-c6烯基)，并且其通过单键与分子的其余部分连接，例如，乙烯基，丙烯基，丁烯基，戊烯基，己烯基等。
“炔基”是指具有至少一个三键的不饱和的烷基基团，并且其具有二至十二个碳原子(c2-c12炔基)，二至十个碳原子(c2-c10炔基)，二至八个碳原子(c2-c8炔基)或二至六个碳原子(c2-c6炔基)，并且其通过单键与分子的其余部分连接，例如，乙炔基，丙炔基，丁炔基，戊炔基、己炔基等。
“亚烷基”或“亚烷基链”是指连接分子的其余部分与基团的直链或支链的二价烃(烷基)链，其分别完全由碳和氢组成。亚烷基可以具有一至十二个碳原子，例如，亚甲基，亚乙基，亚丙基，正亚丁基等。亚烷基链通过单键或双键与分子的其余部分连接。亚烷基链与分子的其余部分连接的点可以是通过该链内的一个碳或任意两个碳。“任选取代的亚烷基”是指亚烷基或取代的亚烷基。
“亚烯基”是指二价的烯烃。亚烯基的实例包括，但不限于，亚乙烯基(-ch＝ch-)以及其所有立体异构体和构象异构体形式。“取代的亚烯基”是指二价取代的烯烃。“任选取代的亚烯基”是指亚烯基或取代的亚烯基。
“亚炔基”是指二价炔烃。亚炔基的实例包括，但不限于，亚乙炔基，亚丙炔基、“取代的亚炔基”是指二价取代的炔烃。
“烷氧基”是指式为-ora的基团，其中ra是具有上文定义的所示碳原子数的烷基。烷氧基基团的实例包括，但不限于，–o-甲基(甲氧基)，-o-乙基(乙氧基)，-o-丙基(丙氧基)，-o-异丙基(异丙氧基)等。
“酰基”是指式为–c(o)ra的基团，其中ra是具有所示碳原子数的烷基。
“烷胺基”是指式-nhra或-nrara的基团，其中每个ra独立地是具有上文定义的所示碳原子数的烷基基团。
“环烷胺基”是指式-nhra的基团，其中ra是本文定义的环烷基基团。
“烷基羰基胺基”是指式–nhc(o)ra的基团，其中ra是具有本文定义的所示碳原子数的烷基基团。
“环烷基羰基胺基”是指式-nhc(o)ra的基团，其中ra是本文定义的环烷基基团。
“烷基氨基羰基”是指式-c(o)nhra或-c(o)nrara的基团，其中每个ra独立地是具有本文定义的所示碳原子数的烷基基团。
“环烷基氨基羰基”是指式-c(o)nhra的基团，其中ra是本文定义的环烷基基团。
“芳基”是指包含氢、6-18个碳原子和至少一个芳香环的烃环系统基团。示例性的芳基是包含氢和6-9个碳原子以及至少一个芳香环的烃环系统基团；包含氢和9-12个碳原子以及至少一个芳香环的烃环系统基团；包含氢和12-15个碳原子以及至少一个芳香环的烃环系统基团；或包含氢和15-18个碳原子以及至少一个芳香环的烃环系统基团。为了本发明，所述芳基基团可以是单环的、双环的、三环的或四环的环系统，其可以包括稠合的或桥接的环系统。芳基基团包括，但不限于，来源于下述的芳基基团：醋蒽烯，苊，醋菲烯(acephenanthrylene)，蒽，薁，苯，
“亚芳基”表示二价芳基，并且“取代的亚芳基”是指二价取代的芳基。
“芳烷基”或“亚芳烷基”可以互换使用，并且是指式-rb-rc的基团，其中rb是本文定义的亚芳基链，并且rc是一个或多个本文定义的芳基基团，例如，苄基、二苯基甲基等。
“环烷基”是指完全由碳和氢原子组成的稳定的非芳香族单环或多环烃基团，其可以包括稠合的或桥接的环系统，具有三至十五个碳原子，优选具有三至十个碳原子，三至九个碳原子，三至八个碳原子，三至七个碳原子，三至六个碳原子，三至五个碳原子，具有四个碳原子的环，或具有三个碳原子的环。环烷基环可以是饱和的或不饱和的，并且通过单键与分子的其余部分连接。单环基团包括，例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。多环基团包括，例如，金刚烷基(adamantyl)，降冰片基(norbornyl)，十氢萘基(decalinyl)，7,7-二甲基-二环[2.2.1]庚基等。
“环烷基亚烷基”或“环烷基烷基”可以互换使用，并且是指式-rbre的基团，其中rb是本文定义的亚烷基链，re是本文定义的环烷基基团。在某些实施方案中，rb进一步被环烷基基团取代，以使所述环烷基亚烷基包含两个环烷基部分。环丙基亚烷基和环丁基亚烷基是示例性的环烷基亚烷基基团，其分别包含至少一个环丙基或至少一个环丁基基团。
“稠合的”是指稠合到本发明的化合物中的已存在的环结构上的本文所述的任意环结构。当稠合环是杂环基环或杂芳基环时，已存在的环结构上成为稠合的杂环基或稠合的杂芳基环的一部分的任意碳原子可以用氮原子替换。
“卤代”或“卤素”是指溴代(溴)、氯代(氯)、氟代(氟)或碘代(碘)。
“卤代烷基”是指具有本文定义的所示的碳原子数的烷基基团，其中所述烷基基团的一个或多个氢原子被如上文定义的卤素(卤代基团)取代。卤素原子可以是相同的或不同的。示例性的卤代烷基是三氟甲基、二氟甲基、三氯甲基、2,2,2-三氟乙基、1,2-二氟乙基、3-溴-2-氟丙基、1,2-二溴乙基等。
“杂环基”、“杂环”或“杂环基环”是指稳定的3元至18元饱和的或不饱和的基团，其由二至十二个碳原子和一至六个杂原子组成，例如，一至五个杂原子，一至四个杂原子，一至三个杂原子，或一至两个杂原子，所述杂原子选自由氮、氧和硫组成的组。示例性的杂环包括，但不限于，稳定的3-15元饱和的或不饱和的基团，稳定的3-12元饱和的或不饱和的基团，稳定的3-9元饱和的或不饱和的基团，稳定的8元饱和的或不饱和的基团，稳定的7元饱和的或不饱和的基团，稳定的6元饱和的或不饱和的基团，或稳定的5元饱和的或不饱和的基团。
除非说明书中另外具体阐述，杂环基基团可以是单环的、双环的、三环的或四环的环系统，其可以包括稠合的或桥接的环系统；并且所述杂环基基团中的氮、碳或硫原子可以任选地被氧化；氮原子可以任选地被季铵化；并且所述杂环基基团可以是部分或完全饱和的。非芳香杂环基基团的实例包括，但不限于，氮杂环丁烷基，二氧戊环基，噻吩基[1,3]二噻烷基，十氢异喹啉基，咪唑啉基，咪唑烷基，异噻唑烷基，异
“杂环基烷基”或“杂环基亚烷基”是指式-rbrf的基团，其中rb是本文定义的亚烷基链，rf是上文定义的杂环基基团，并且通过所述杂环基是含氮的杂环基，则所述杂环基可以与氮原子上的烷基基团连接。
“杂芳基”或“杂亚芳基”是指5元至14元环系统基团，其包含氢原子，一至十三个碳原子，选自由氮、氧和硫组成的组的一至六个杂原子和至少一个芳香环。为了本发明，所述杂芳基基团可以是稳定的5-12元环，稳定的5-10元环，稳定的5-9元环，稳定的5-8元环，稳定的5-7元环，或稳定的6元环，其包含至少1个杂原子，至少2个杂原子，至少3个杂原子，至少4个杂原子，至少5个杂原子或至少6个杂原子。杂芳基可以是单环的、双环的、三环的或四环的环系统，其可以包括稠合的或桥接的环系统；并且在所述杂芳基基团中的氮、2个碳或硫原子可以任选地被氧化；氮原子可以任选地被季铵化。所述杂原子可以是芳香环或非芳香环的一元，条件是杂芳基中的至少一个环是芳香族的。实例包括，但不限于，氮杂基，吖啶基，苯并咪唑基，苯并噻唑基，苯并吲哚基，苯并二氧杂环基，苯并呋喃基，苯并
“杂芳基烷基”或“杂芳基亚烷基”是指式-rbrg的基团，其中rb是如上文定义的亚烷基链，rg是如上文定义的杂芳基基团。
“硫代烷基”是指式-sra的基团，其中ra是如上文定义的包含一至十二个碳原子、至少1-10个碳原子、至少1-8个碳原子、至少1-6个碳原子或至少1-4个碳原子的烷基基团。
“杂环基胺基”是指式–nhrf的基团，其中rf是如上文定义的杂环基基团。
“硫酮”是指连接在饱和的或不饱和的(c3-c8)环或(c1-c8)无环结构上的＝s基团。
“亚砜”是指–s(o)-基团，其中硫原子与两个碳原子共价连接。
“砜”是指–s(o)2-基团，其中六价硫通过双键与两个氧原子分别相连，并且还通过共价单键与两个碳原子相连。
术语“肟”是指–c(ra)＝n-ora基团，其中ra是如上文定义的氢、低级烷基、亚烷基或亚芳基。
本发明的化合物可以以多种异构体形式存在，以及以一种或多种互变异构体性形式存在，包括单一互变异构体和多种互变异构体的混合物。术语“异构体”意欲包括本发明化合物的所有异构体形式，包括所述化合物的互变异构体形式。
本文所述的一些化合物具有不对称中心，因此以不同的对映体和非对映体形式存在。本发明的化合物可以是光学异构体或非对映体的形式。因此，本发明包括本发明的化合物及其如本文所述的应用，所述化合物是以其化学异构体、非对映体和它们的混合物(包括消旋混合物)的形式存在。可以通过已知的技术，如对不对称合成、手性色谱法、或通过经由使用光学活性拆分剂化学分离立体异构体而得到本发明的化合物的光学异构体。
除非另外指明，“立体异构体”意指化合物的一种立体异构体，其基本上不含该化合物的其他立体异构体。因此，具有一个手性中心的立体异构体纯的化合物基本上不含所述化合物的对立的对映体。具有两个手性中心的立体异构体纯的化合物基本上不含所述化合物的其他非对映体。典型的立体异构体纯的化合物包含大于约80重量％的该化合物的一种立体异构体和少于约20重量％的该化合物的其他立体异构体，例如，大于约90重量％的该化合物的一种立体异构体和少于约10重量％的该化合物的其他立体异构体，或大于约95重量％的该化合物的一种立体异构体和少于约5重量％的该化合物的其他立体异构体，或大于约97重量％的该化合物的一种立体异构体和少于约3重量％的该化合物的其他立体异构体。
如果在所示的结构和给予所述结构的名称之间存在矛盾之处，则以所示的结构为准。另外，如果结构或结构部分的立体化学没有用例如粗线或虚线显示，则所述结构或结构部分被解释为包括其所有的立体异构体。然而，在一些情形中，当存在多于一个手性中心时，结构和名称可以表示为单一对映体，以帮助描述相对的立体化学。有机合成领域的技术人员将知晓，通过用于制备化合物的方法，所述化合物是否被制备为单一的对映体。
在本说明书中，“药用盐”是本发明的化合物的药用的、有机或无机酸或碱的盐。代表性的药用盐包括，例如，碱金属盐，碱土盐，铵盐，水溶性和水不溶性盐，诸如乙酸盐，amsonate(4,4-二氨基茋-2,2-二磺酸盐)，苯磺酸盐，苯甲酸盐(benzonate)，碳酸氢盐，硫酸氢盐，酒石酸氢盐，硼酸盐，溴化物，丁酸盐，钙，乙二胺四乙酸钙，右旋樟脑磺酸盐(camsylate)，碳酸盐，氯化物，柠檬酸盐，clavulariate，二盐酸盐，乙二胺四乙酸盐，乙二磺酸盐，丙酸酯十二烷基硫酸盐，乙磺酸盐，fiunarate，葡庚糖酸盐(gluceptate)，葡糖酸盐，谷氨酸盐，乙醇酰对氨基苯基胂酸盐(glycollylarsanilate)，六氟磷酸盐，己基间苯二酚盐(hexylresorcinate)，hydrabamine，氢溴酸盐，盐酸盐，羟基萘甲酸盐，碘化物，异硫代硫酸盐，乳酸盐，乳糖酸盐，月桂酸盐，苹果酸盐，马来酸盐，扁桃酸盐，甲磺酰盐，溴甲烷，硝酸甲酯，甲基硫酸盐，粘酸盐，萘磺酸盐，硝酸盐，n-甲基葡糖胺铵盐，3-羟基-2-萘甲酸盐，油酸盐，草酸盐，棕榈酸盐，双羟萘酸盐(1,1-亚甲基-二-2-羟基-3-萘甲酸盐，einbonate)，泛酸盐，磷酸盐/二磷酸盐，苦味酸盐，聚半乳糖醛酸盐，丙酸盐，对-甲苯磺酸盐，水杨酸盐，硬脂酸盐，碱式乙酸盐，琥珀酸盐，硫酸盐，sulfosaliculate，suramate，单宁酸盐，酒石酸盐，氯茶碱盐(teoclate)，甲苯磺酸盐，三乙基碘，和戊酸盐。药用盐在其结构中可以具有多于一个带电荷的原子。在这种情形中，所述药用盐可以具有多个平衡离子。由此，药用盐可以具有一个或多个带电荷的原子和/或一个或多个平衡离子。
另外，应该理解，由本文所述的结构和取代基的多种组合衍生的单个化合物或化合物组在本申请中如同单独描述每种化合物或化合物组那样同等程度地被公开。由此，选择特定的结构或特定的取代基是在本公开的范围内。
用于本文时，术语“衍生物”是指通过化学或生物方式使用或不使用酶对化合物的修饰，所述修饰的化合物与母本化合物结构相似并且(实际上或理论上)可衍生自所述母本化合物。通常，“衍生物”不同于“类似物”，原因在于，母本化合物可以是产生“衍生物”的起始材料，而母本化合物可能不必须用作产生“类似物”的起始材料。衍生物可能具有与母本化合物不同的化学、生物或物理特性，诸如，与母本化合物相比，更加亲水或具有改变的活性。衍生(即，修饰)可以涉及取代分子内的一个或多个部分(例如，官能团中的变化)。例如，氢可以用卤素如氟或氯取代，或羟基基团(-oh)可以用羧酸部分(-cooh)替换。其他示例性的衍生包括糖基化，烷基化，酰化，乙酰化，泛素化，酯化和酰胺化。
术语“衍生物”还指母本化合物的所有的溶剂化物，例如，水合物或加合物(例如，与醇的加合物)，活性代谢物，和盐。盐的类型取决于化合物内部分的性质。例如，酸性基团，诸如羧酸基团，可以形成碱金属盐或碱土金属盐(例如，钠盐，钾盐，镁盐，钙盐，还有具有生理可耐受的季铵离子的盐以及具有氨和生理可耐受的有机胺的酸加成盐，例如，三乙胺，乙醇胺，或三-(2-羟基乙基)胺)。碱性基团可以形成酸加成盐，例如，与无机酸，如盐酸、硫酸或磷酸形成，或与有机羧酸或磺酸，如乙酸、柠檬酸、乳酸、苯甲酸、马来酸、延胡索酸、酒石酸、甲磺酸或对-甲苯磺酸形成。同时包含碱性基团和酸性基团的化合物，例如，除了碱性氮原子之外还有羧基基团，可以作为两性离子存在。盐可以通过本领域技术人员已知的常规方法获得，例如，通过将化合物与溶剂或稀释剂中的无机或有机酸或碱组合，或通过阳离子交换或阴离子交换由其他盐得到。
术语“前体药物”是指药物前体，是当施用给患者时在变成活性药理学试剂前必须经过代谢过程的化学转化的化合物。式i化合物的示例性的前体药物是酯、乙酰胺和酰胺。
用于本文时，“免疫细胞”意指免疫系统的任意细胞，其来源于造血干细胞(例如，在骨髓中)，所述造血干细胞产生两种主要的谱系，即骨髓祖细胞(其产生骨髓细胞，如骨髓来源的抑制细胞，单核细胞，巨噬细胞，树突细胞，巨核细胞(meagakaryocytes)和粒细胞)和淋巴祖细胞(其产生淋巴细胞，诸如t细胞，b细胞和天然杀伤(nk)细胞)。示例性的免疫系统细胞包括cd4+t细胞，cd8+t细胞，cd4-cd8-双阴性t细胞，γδt细胞，调节t细胞，抗原呈递细胞(apc)，天然杀伤细胞，和树突细胞。巨噬细胞、树突细胞和疾病细胞(例如，癌细胞)可以称为“抗原呈递细胞”或“apc”，其是当与apc表面上的抗原肽复合的mhc(hla)受体与t细胞表面上的tcr相互作用时能够激活t细胞的细胞。在某些实施方案中，apc是癌细胞或肿瘤细胞。
用于本文时，术语“免疫应答”是指免疫细胞(例如，淋巴细胞、抗原呈递细胞、吞噬细胞、粒细胞)和由上述细胞或肝产生的可溶性大分子(包括抗体、细胞因子和补体)的作用，所述作用导致从人体对侵入的病原体、病原体感染的细胞或组织、癌细胞的选择性损伤、破坏或清除，或者，在自身免疫性或病理性炎症的情形中，导致对正常人细胞或组织的选择性损伤、破坏或清除。在某些实施方案中，免疫应答包括抗原特异性t细胞应答。
短语“诱导或增强免疫应答”是指引起或刺激免疫细胞(例如，t细胞)具有持久的或放大的生物学功能。例如，与干预前的应答相比，诱导或增强的t细胞应答包括cd8+t细胞增加的细胞因子产生，增加的增殖或增加的抗原响应性。在某些实施方案中，与不与mnk-特异性抑制剂接触的免疫细胞相比，与mnk-特异性抑制剂接触后增强的免疫细胞(例如，t细胞)应答的水平为至少约25％，30％，35％，40％，45％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，95％，99％，或更大。检测细胞因子水平(例如，il-2，il-10，ifnγ)以确定免疫应答是否被诱导或增强的测定是dossus等人(j.immunol.methods350:125，2009)所述的多路测定。用于检测t细胞增殖以确定免疫应答是否被诱导或增强的测定是liu等人(clin.cancerres.21:1639，2015)所述的测定。用于确定增强的抗原响应性的测定是tumeh等人(nature515:568，2014)所述的测定。
短语“延长免疫应答”是指引起或刺激免疫细胞(例如，t细胞)继续报形成持久的或放大的生物学功能。在某些实施方案中，延长的免疫应答是抗原特异性细胞毒性t细胞、随时间减少的肿瘤生长或尺寸、或停止治疗后减轻的可检测的疾病的量度。例如，与治疗开始时的肿瘤尺寸相比，肿瘤尺寸可以保持不变或缩小。在一些实施方案中，延长的免疫应答可以持续至少与治疗持续时间一样长，或比治疗持续时间长至少至少1.5倍，2.0倍，2.5倍，3.0倍，3.5倍，4.0倍，4.5倍，5.0倍或更多。
短语“减少”免疫细胞或免疫应答的“下调”是指使免疫细胞或免疫系统从抑制组分或信号解除出来或释放出来。例如，减少的下调可以包括cd8+t细胞增加的细胞因子产生(例如，ifnγ)，肿瘤中免疫细胞(例如，t细胞)数量的增加，肿瘤中t细胞克隆数量的增加，te细胞与treg细胞之比增加，或它们的任意组合。在某些实施方案中，减少的免疫细胞(例如，t细胞)或免疫应答的下调是至少约20％，25％，30％，35％，40％，45％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，95％，99％，或更多的可检测的疾病(例如，肿瘤体积、传染剂)的减少。在其他实施方案中，减少的免疫细胞(例如，t细胞)或免疫应答下调的水平是不含进展的存活的增加，该参数因被治疗的癌症而不同，并且该参数是本领域普通技术人员已知的。
“主要组织相容性复合物分子”(mhc分子)，可与人对应体“人白细胞抗原”(hla分子)互换使用，并且应该理解也是指人对应体“人白细胞抗原”(hla分子)，其是指将肽抗原递送至细胞表面的糖蛋白。mhc或hlai类分子是由跨膜α链(具有三个α结构域)和非共价连接的β2微球蛋白组成的异二聚体。mhc或hlaii类分子由两个跨膜糖蛋白α和β构成，它们二者横跨膜。每条链具有两个结构域。mhc或hlai类分子将来源于细胞溶胶的肽递送至细胞表面，在细胞表面上，肽:mhc(或在人中，肽:hla)复合物被cd8+t细胞识别。与mhci类分子复合的t细胞肽抗原(即，包含被t细胞识别的表位)称为mhci类表位。mhci类表位被t细胞受体(tcr)识别，并且通常存在于具有约8个氨基酸至约11个氨基酸范围内的长度的肽抗原上。mhcii类分子将来源于囊泡系统的肽递送至细胞表面，在此处其被cd4+t细胞受体识别。由mhcii类分子呈递的t细胞肽抗原称为mhcii类表位。mhcii类表位通常存在于具有约13至约17个氨基酸范围内的长度的肽抗原上。mhc分子可以来自于多种动物物种，包括人(hla)，小鼠，大鼠或其他哺乳动物。
"t细胞受体"(tcr)是指存在于t细胞(或t淋巴细胞)表面上的分子，其与cd3相连，通常负责识别结合在mhc(hla)分子上的抗原。tcr具有在大部分t细胞中高度可变的α和β链(还分别称为tcrα和tcrβ)的二硫化物连接的异二聚体。在t细胞子集中，tcr由可变γ和δ链(还分别称为tcrγ和tcrδ)的异二聚体组成。tcr的每条链是免疫球蛋白超家族的成员，并且具有一个n端免疫球蛋白可变结构域，一个免疫球蛋白恒定区，跨膜区和在c端末端的短细胞质尾(参见janeway等人，immunobiology:theimmunesysteminhealthanddisease，第3版，currentbiologypublications，p.4:33，1997)。
用于本文时，术语“抗原特异性t细胞应答”是指具有特异性结合与mhc(hla)i类或ii类复合的肽抗原的tcr的t细胞的应答。cd8+效应t细胞识别hlai类限制性抗原肽，并且能够直接杀死表达同源抗原的靶细胞。cd4+辅助t细胞识别hlaii类限制性抗原肽，并且产生多种调节炎性和效应子免疫应答的细胞因子。cd4+辅助t细胞还促进cd8+效应t细胞和b细胞的激活。调节t细胞(treg)是抑制免疫应答并且产生抑制性细胞因子的cd4+t细胞，所述抑制性细胞因子如tgfβ，il-10，il-4，il-1ra和il-35。在抗原特异性刺激时的t细胞应答的非限制性实例包括激活、增殖和细胞因子产生(例如，il-2，ifnγ产生)。
用于本文时，术语“免疫抑制组分”是指提供抑制性信号辅助控制或抑制免疫应答的一种或多种细胞、蛋白、分子、化合物或复合物。例如，免疫抑制组分包括部分或完全阻断免疫刺激；减少、防止或延缓免疫激活；或增加、激活或上调免疫抑制的那些分子。用于本文时，“控制或抑制免疫应答”意指减少抗原呈递、t细胞激活、t细胞增殖、t细胞效应功能、细胞因子分泌或产生、和靶细胞溶解中的任一种或多种。此种调节、控制或抑制可以促进或允许过度增生疾病或病症(例如，癌症，慢性感染)的持久性。
示例性的免疫抑制组分包括免疫检查点配体(如pd-l1，pd-l2，cd80，cd86，b7-h3，b7-h4，hvem，腺苷，gal9)，免疫检查点受体(如pd-1，ctla-4，btla，kir，lag3，tim3，a2ar)，代谢酶(如精氨酸酶，吲哚胺2,3-加双氧酶(ido))，免疫抑制细胞因子(如il-10，il-4，il-1ra，il-35)，treg细胞，或它们的任意组合。在某些实施方案中，免疫抑制组分是免疫检查点分子，其可以通过配体-受体相互作用，如通过调节(例如，抑制)抗原-特异性t细胞应答，来起始免疫抑制信号。例如，t细胞可以在其表面上表达免疫检查点受体(例如，pd-1，lag3)，并且抗原呈递细胞可以在其表面上表达免疫检查点受体配体(例如，pd-l1，mhc/hla分子)。在其他实施方案中，免疫抑制组分是代谢酶，其通过局部消耗淋巴细胞(特别是t细胞)存活和功能所需要的氨基酸而抑制免疫应答。在另一些实施方案中，免疫抑制组分可以是信号传导分子，诸如免疫抑制细胞因子(例如，il-10，il-4，il-1ra，il-35)。在另一些实施方案中，免疫抑制组分包含能够抑制免疫应答以及产生或释放免疫抑制细胞因子(例如，il-10，il-4，il-13，il-1ra)的cd4+treg细胞。
此外，免疫抑制组分(例如，il-10)可以引起主要组织相容性复合物(mhc)或人白细胞抗原(hla)分子表达或水平的减少，其又可以减少抗原呈递，并由此减少、阻碍或可检测地防止t细胞激活和相应的免疫应答。在某些实施方案中，mnk-特异性抑制剂可以引起免疫抑制组分量的减少或抑制其活性，其又可以导致mhc/hla分子(例如，ii类)表达增加。与不减少或抑制免疫抑制组分相比，此种由于由mnk-特异性抑制剂介导的免疫抑制组分的减少或抑制导致的mhc/hla水平增加可以提高抗原呈递，或者可以诱导或增强免疫应答。
术语“免疫抗性”是指细胞或生物体(例如，癌细胞、病毒感染的细胞、细菌细胞、真菌、寄生虫)抵制、最小化、逃避或避免被免疫系统识别或清除的过程。免疫抗性可以是由于(a)免疫抑制或耐受性的增加，(b)细胞或生物体改进、激活、增加、增强、促进、加强或上调免疫抑制或耐受性的能力，或(c)细胞或生物体促进免疫蒙蔽(immunologicignorance)或掩蔽由所述细胞或生物体表达的抗原或它们的任意组合的能力。在某些实施方案中，免疫抗性与疾病或病症相关，诸如与癌症、肿瘤或慢性感染相关。
用于本文时，“疾病相关的免疫抗性”意指共同选择特定的免疫检查点途径来抑制免疫系统的疾病或病症，并且因子，所述疾病或病症表现出免疫抗性表型，特别是抗特异性针对例如肿瘤或传染病抗原的t细胞。
用于本文时，术语"mnk"还称为“促分裂原激活的蛋白激酶(mapk)-相互作用性丝氨酸/苏氨酸激酶”或"mknk"，其是指响应生长因子、佛波酯和癌基因(如ras和mos)并且被压力信号传导分子和细胞因子引发的、由p42map激酶erk1和erk2以及p38-map激酶磷酸化的激酶。mnk还指由另外的map激酶磷酸化的激酶，所述另外的map激酶受白介素-1受体相关性激酶2(irak2)和irak4的影响，它们是经由toll-样受体(例如，tlr7)参与信号传导先天免疫应答的蛋白激酶(例如，参见wan等人，j.biol.chem.284:10367，2009)。mnk蛋白的磷酸化刺激其针对真核起始因子4e(eif4e)的激酶活性，其又调节帽-依赖性蛋白翻译起始，并调节其他效应子元件的结合，包括hnrnpa1和psf(ptb(多嘧啶片结合蛋白(polypyrimidinetractbindingprotein))相关性剪接因子)。例如，结合某些mrna的3′-utr的调节性富含au的元件(are)(例如，细胞因子)的蛋白被mnk磷酸化。由此，蛋白的mnk磷酸化可以改变这些蛋白结合真核mrna的5′-或3′-utr的能力。具体地，减少的mnk介导的hnrnpa1磷酸化降低其与细胞因子-are的结合(例如，参见buxadé等人，immunity23:177，2005；joshi和platanias，biomol.concepts3:127，2012)。mnk由两种不同的基因编码，即由mnk1和mnk2编码，二者进行交替剪接。mnk1a和mnk2a代表全长转录物，而mnk1b和mnk2b是缺少mapk结合结构域的剪接变体。因此，mnk可以是指mnk1或其变体(如mnk1a或mnk1b)、mnk2或其变体(如mnk2a或mnk2b)或它们的组合。在具体的实施方案中，mnk是指人mnk。
术语“调节”、“调控”等是指化合物增加或减少免疫抑制组分的功能、活性或水平的能力，所述免疫抑制组分如免疫检查点分子或相关的细胞因子(例如，pd-1，pdl-1，lag3，il-10等)。多种形式的“调节”旨在包括与免疫抑制组分(如免疫检查点分子或免疫抑制细胞因子)相关的活性的抑制、拮抗、部分拮抗、激活、激动或部分激动。例如，包括活性减少或抑制的调节可以由减少免疫抑制组分(如免疫检查点分子或免疫抑制细胞因子)的表达间接引起。化合物直接或间接调节免疫抑制组分(如免疫检查点分子或免疫抑制细胞因子)的能力可以以本领域已知的基于生化和细胞的测定证明(例如，参见实施例1-3)。
术语“抑制”或“抑制剂”是指，相对于(1)对照，内源性或参比靶标或途径，或(2)不存在靶标或途径，直接或间接地改变、干扰、减少、下调、阻断、抑制、消除或降低靶标或信号传导途径的表达、量或活性，其中所述改变、干扰、减少、下调、阻断、抑制、消除或降低是统计学、生物学或临床显著的。
例如，“mnk”抑制剂可以阻断、灭活、减少或最小化mnk活性(例如，激酶活性或翻译作用)，或者，与未处理的mnk相比，通过促进mnk降解而使活性减少约40％，45％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或更多。在某些实施方案中，mnk抑制剂阻断、灭活、减少或最小化mnk使eif4e、hnrnpa1、psf或它们的组合磷酸化的能力。在其他实施方案中，mnk抑制剂减少或最小化免疫抑制组分的表达，所述免疫抑制组分如肿瘤细胞或apc上的配体(例如，pd-l1)，t细胞上的受体(例如，pd-1，lag3)，或由所述细胞产生的免疫抑制细胞因子(例如，il-10，il-4，il-1ra，il-35)。抑制剂的非限制性实例包括小分子、反义分子、核酶、rnai分子等。
用于本文时，"mnk-特异性抑制剂"是这样的化合物，其(a)抑制mnk酶(激酶)活性，(b)具有至少约25倍更少的针对宿主细胞激酶组(kinome)其余部分(即，除mnk酶之外)的活性，和(c)不显著减少或抑制t细胞产生il-2。用于本文时，“宿主细胞激酶组”是指表a中列出的412种蛋白和脂质激酶(不包括mnk酶)，其可以来自特定的生物体或目标细胞(例如，人)。使用rodems等人(assay.drugdev.technol.1:9，2002)所述的方法，对宿主细胞激酶组进行基于fret的测定以确定特定的mnk抑制剂是否是mnk-特异性抑制剂。
在某些实施方案中，表a的宿主细胞激酶组是来自人细胞。在其他实施方案中，mnk-特异性抑制剂是小分子，并且具有至少少50倍的针对如表a中所列出的生物体或细胞的丝氨酸/苏氨酸激酶组的活性，并且不显著地减少或抑制t细胞产生il-2。在具体的实施方案中，表a的丝氨酸/苏氨酸激酶组是来自人细胞。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂针对不同于表a的丝氨酸/苏氨酸激酶组酶的表a的激酶组酶的活性低至少约25倍，30倍，35倍，40倍，45倍，50倍，55倍，60倍，65倍，70倍，75倍，80倍，85倍，90倍，95倍，100倍，200倍，250倍，300倍，400倍，500倍，750倍，1000倍，或甚至更少的，并且不显著地减少或抑制t细胞产生il-2。
表a.“宿主细胞激酶组”的蛋白和脂质激酶(排除mnk)
在前述任一个实施方案中，mnk-特异性抑制剂可以进一步阻断、灭活、减少或最小化mnk1a、mnk1b、mnk2a、mnk2b或它们的任意组合磷酸化eif4e、hnrnpa1、psf或它们的任意组合的能力。在前述任一个实施方案中的mnk-特异性抑制剂可以任选地不显著减少或抑制下述：(i)t细胞存活力，(ii)t细胞增殖，(iii)apc中mhc或hla分子的表达，或(iv)t细胞产生il-2、cd25、ifnγ或它们的任意组合。此外，任选地，在任一前述实施方案中的mnk-特异性抑制剂还可以显著地减少或抑制一种或多种免疫抑制组分(例如，免疫检查点分子，免疫抑制细胞因子)在t细胞、apc或二者中的表达。用于测量t细胞存活性的测定是mosmann所述的测定(j.immunol.meth.65:55，1983)。
关于mnk-特异性抑制剂，“不显著地减少或抑制t细胞的il-2产生”意指，与没有暴露于或没有与mnk-特异性抑制剂接触的相同的t细胞相比，对t细胞的il-2产生的减少或抑制低于约25％，20％，15％，10％，5％，2％，1％，0.5％，0.25％，0.1％或更少。
此外，关于mnk-特异性抑制剂，“不显著地减少或抑制t细胞存活性”、“不显著地减少或抑制t细胞增殖”、“不显著地减少或抑制t细胞、apc或二者中的mhc或hla分子表达”和“不显著地减少或抑制t细胞的il-2、cd25、ifnγ或它们的任意组合的产生”是指与没有暴露于或没有与mnk-特异性抑制剂接触的相同的对应细胞相比，下述的减少或抑制分别小于约25％，20％，15％，10％，5％，2％，1％，0.5％，0.25％，0.1％或更少：t细胞存活性；t细胞增殖；t细胞、apc或二者中的mhc或hla分子表达；或t细胞的il-2、cd25、ifnγ或它们的任意组合的产生。
此外，关于mnk-特异性抑制剂，“显著减少或抑制一种或多种免疫抑制组分的表达”意指，与没有暴露于或没有与mnk-特异性抑制剂接触的相同的t细胞或apc相比，t细胞、apc或二者中一种或多种免疫抑制组分表达的减少或抑制为至少约20％，25％，30％，35％，40％，45％，50％，55％，60％，65％，70％或75％。在某些实施方案中，apc是癌细胞或肿瘤细胞。
用于检测在存在或不存在抑制剂的条件下的激酶活性的其他测定在本领域中是公知的，其可以用作基于fret的宿主细胞激酶组测定的备选方案，从而证明特定的mnk抑制剂是mnk-特异性抑制剂，诸如karaman等人教导的测定(nat.biotechnol.26:127，2007)。用于检测细胞因子水平(例如，il-2，il-10，ifnγ)的测定在本领域中是已知的，诸如来自r&dsystems的
改变免疫调节活性
先天免疫性是防御侵入的病原体的第一防线，并且由常驻型免疫效应细胞组成，所述常驻型免疫效应细胞包括巨噬细胞、单核细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞和天然杀伤细胞(medzhitov和janeway，n.engl.j.med.343:338，2000；vivier等人，science331:44，2011)。但是，适应性免疫性是在高等真核生物中提供针对免疫应答的特异性的免疫性。抗原通过主要组织相容性复合物(mhc)i类(mhc-i)或ii类(mhc-ii)分子被呈递至t细胞(braciale等人，immunol.rev.98:95，1987)。mhcii类基因编码参与肽与cd4+t细胞的结合和向该细胞的呈递的细胞表面糖蛋白。这些基因编码多态性hla-dr、-dq和-dp分子，它们在细胞表面上表达为α-和β-链异二聚体。mhcii类分子对于细胞和体液免疫应答的起始是关键的。但是，为了确保当抗原被清除时，免疫系统保持被控制(incheck)，诱导调节t细胞(tregs，其为cd25+cd4+foxp3+)活性参与免疫学自我耐受性和免疫稳态的维持。肿瘤微环境可能是独特的，原因在于增加的免疫抑制分子(例如，pd-1，ctla4，lag3，il-10，tgf-β)表达可以允许该环境中的细胞避开免疫监督。并且，最近的证据表明，抑制多种肿瘤类型上的mhci类和ii类表达也可能在肿瘤免疫逃避中起作用(garrido等人，cancerimmunol.immunother.59:13，2010)。
本公开的某些mnk抑制剂化合物是mnk1和mnk2的有效的且选择性的抑制剂(例如，式i，ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va，vb，vi，viia或viib的化合物，包括化合物107)。mnk1和mnk2通过将真核起始因子4e(eif4e)和其他mrna结合蛋白磷酸化而整合来自一些致癌性和免疫信号传导途径的信号，所述其他mrna结合蛋白调节所选的对肿瘤生长和存活重要的mrna的稳定性和翻译。
本公开提供通过使用mnk-特异性抑制剂减少pd-1、pd-l1、lag3或il-10的水平或活性、改变t效应(te)细胞与t调节(treg)细胞的比例、诱导mhc或hlaii类分子的表达或它们的任意组合的方法，所述方法出乎意料地减少或下调多种免疫抑制组分(如免疫检查点蛋白，包括pd-1，pd-l1和lag3，以及相关的免疫抑制细胞因子(如il-10，il-4，il-1ra，il-35))的表达。另外，本公开的mnk-特异性抑制剂可以诱导mhc或hlaii类分子的表达。在其他实施方案中，mnk-特异性抑制剂减少细胞中pd-1、lag3或二者的水平，并且任选地阻断或减少mnk激酶磷酸化eif4e、hnrnpa1、psf或它们的任意组合的能力，并且进一步任选地阻断或减少免疫抑制细胞因子(例如，il-10，il-4，il-1ra，il-35)的产生。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂减少细胞中pd-l1的水平，并且阻断或减少mnk激酶磷酸化eif4e、hnrnpa1、psf或它们的任意组合的能力。
本公开的mnk-特异性抑制剂可以与其他激酶抑制剂(它们中的一些也可能非特异性抑制mnk活性，在本文中称为“另一种激酶抑制剂”或“非特异性mnk抑制剂”)组合使用。在某些实施方案中，另一种激酶或非特异性mnk抑制剂是这样的试剂，即，所述试剂直接或间接减少或抑制mnk激酶活性，使得其底物eif4e没有有效地或实质上被mnk磷酸化。在具体的实施方案中，另一种激酶或非特异性mnk抑制剂是降解mnk(例如，通过泛素-依赖性降解)的试剂。
可以对需要免疫调节的受试者(例如，患有癌症或感染的受试者)施用mnk-特异性抑制剂。示例性的免疫调节方法包括：提高免疫细胞的活性；减少免疫细胞的下调；诱导或增强免疫应答；延长免疫应答；刺激抗原特异性的t细胞应答；抑制免疫抑制信号传导途径；促进内源性免疫性(例如，已有的或新产生的(denovo)，如抗癌)；增强疫苗诱导的免疫应答；或抑制疾病相关的免疫抗性(例如，癌症，感染)，如本文所述。
示例性的mnk-特异性抑制剂可以抑制mnk1与mnk2二者的激酶活性。在某些实施方案中，mnk-特异性抑制剂相对于mnk2激酶活性选择性抑制mnk1激酶活性，或者相对于mnk1激酶活性选择性抑制mnk2激酶活性。在其他实施方案中，mnk-特异性抑制剂相对于mnk1b和mnk2b的激酶活性选择性抑制全长异构体mnk1a和mnk2a的激酶活性。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂选择性抑制mnk1激酶活性或mnk2激酶活性。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂选择性抑制全长异构体mnk1a、mnk1b、mnk2a或mnk2b中任一种的激酶活性，或者意指所有mnk异构体的激酶活性。
在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂可以是化合物、反义分子、核酶、rnai分子或低分子量有机分子。
在某些实施方案中，mnk-特异性抑制剂是具有下述结构(i)的化合物：
或其立体异构体、互变异构体或药用盐，其中：
w1和w2独立地为o，s或n-or’，其中r’是低级烷基；
y是–n(r5)–，-o-，-s-，-c(o)-，-s＝o，-s(o)2-，或–chr9–；
r1是氢，低级烷基，环烷基或杂环基，其中任意的低级烷基、环烷基或杂环基任选地用1、2或3个j基团取代；
n是1，2或3；
r2和r3各自独立地是氢，烷基，烯基，炔基，芳基，araalkylene，杂芳基，杂芳基亚烷基，环烷基，环烷基亚烷基，杂环基，或杂环基亚烷基，其中任意烷基、芳基、araalkylene、杂芳基、杂芳基亚烷基、环烷基、环烷基亚烷基、杂环基或杂环基亚烷基任选地用1、2或3个j基团取代；
或r2和r3与它们所连接的碳原子一起形成环烷基或杂环基，其中任意环烷基或杂环基任选地用1、2或3个j基团取代；
r4a和r4b各自独立地是氢，卤素，羟基，硫醇，羟基亚烷基，氰基，烷基，烷氧基，酰基，硫代烷基，烯基，炔基，环烷基，芳基，或杂环基；
r5是氢，氰基，或低级烷基；
或r5和r8与它们所连接的原子一起形成任选地用1、2或3个j基团取代的稠合的杂环基；
r6，r7和r8各自独立地是氢，羟基，卤素，氰基，氨基，烷基，烯基，炔基，烷氧基，环烷基，环烷基亚烷基，环烷基亚烯基，烷胺基，烷基羰基胺基，环烷基羰基胺基，环烷胺基，杂环胺基，杂芳基，或杂环基，并且其中任意氨基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、环烷基亚烷基、环烷基亚烯基、氨基、烷胺基、烷基羰基胺基、环烷基羰基胺基、环烷胺基、杂环胺基、杂芳基或杂环基任选地用1、2或3个j基团取代；
或r7和r8与它们所连接的原子一起形成任选地用1、2或3个j基团取代的稠合的杂环基或杂芳基；
j是–sh，-sr9，-s(o)r9，-s(o)2r9，-s(o)nh2，-s(o)nr9r9，-nh2，-nr9r9，-cooh，-c(o)or9，-c(o)r9，-c(o)-nh2，-c(o)-nr9r9，羟基，氰基，卤素，乙酰基，烷基，低级烷基，烯基，炔基，烷氧基，卤代烷基，硫代烷基，氰基亚烷基，烷胺基，nh2-c(o)-亚烷基，nr9r9-c(o)-亚烷基，-chr9-c(o)-低级烷基，-c(o)-低级烷基，烷基羰基胺基，环烷基，环烷基亚烷基，环烷基亚烯基，环烷基羰基胺基，环烷胺基，-chr9-c(o)-环烷基，-c(o)-环烷基，-chr9-c(o)-芳基，-chr9-芳基，-c(o)-芳基，-chr9-c(o)-杂环烷基，-c(o)-杂环烷基，杂环胺基，或杂环基；或结合在同一个碳原子或杂原子上的任意两个j基团可以一起形成氧代基；并且
r9是氢，低级烷基或-oh。
在结构(i)的一个实施方案中，本公开提供具有下述结构(ia)的化合物，及其立体异构体、互变异构体或药用盐。
对于式ia化合物，取代基r1是氢或低级烷基，并且下标n是1，2或3。式ia中的取代基r2和r3各自独立地是氢，烷基，环烷基，环烷基亚烷基，杂环基或杂环基烷基，并且任意所述的烷基、环烷基、环烷基亚烷基、杂环基或杂环基烷基可以任选地用1、2或3个j基团取代。
式ia中的取代基r2和r3当与它们所连接的碳原子一起时可以形成环烷基或杂环基，其中任意所述的环烷基或杂环基任选地用1、2或3个j基团取代。在式ia中，r4a是氢，卤素，羟基，烷基，烷氧基，硫代烷基，烯基或环烷基，并且取代基r5是氢或低级烷基。
备选地，取代基基团r5和r8与它们所连接的原子一起形成任选地用1、2或3个j基团取代的稠合的杂环基。
在一个实施方案中，取代基r6，r7和r8独立地并且在每种情形中为氢，卤素，烷基，烯基，环烷基，环烷基烷基，环烷基烯基，氨基，烷胺基，烷基羰基胺基，环烷基羰基胺基，烷胺基或环烷胺基，并且任意所述的烷基、烯基、环烷基、环烷基烷基、环烷基烯基、氨基、烷胺基、烷基羰基胺基、环烷基羰基胺基、烷胺基或环烷胺基任选地用1、2或3个j基团取代。对于式ia的一些化合物，r7和r8与它们所连接的原子一起形成稠合的杂环基，所述稠合的杂环基不用或用1、2或3个j基团取代。
式ia中的变量j是-sh，-sr9，-s(o)r9，-s(o)2r9，-s(o)nh2，-s(o)nr9r9，-nh2，-nr9r9，-cooh，-c(o)or9，-c(o)r9，-c(o)-nh2，-c(o)-nr9r9，羟基，氰基，卤素，乙酰基，烷基，低级烷基，烯基，炔基，烷氧基，卤代烷基，硫代烷基，氰基亚烷基，烷胺基，nh2-c(o)-亚烷基，nr9r9-c(o)-亚烷基，-chr9-c(o)-低级烷基，-c(o)-低级烷基，烷基羰基胺基，环烷基，环烷基亚烷基，环烷基亚烯基，环烷基羰基胺基，环烷胺基，-chr9-c(o)-环烷基，-c(o)-环烷基，-chr9-c(o)-芳基，-chr9-芳基，-c(o)-芳基，-chr9-c(o)-杂环烷基，-c(o)-杂环烷基，杂环胺基，或杂环基。对于式ia的创造性化合物中的一些，结合在同一个碳原子或杂原子上的两个j基团可以一起形成氧代基基团。
在一些实施方案中，式ia中的变量j是卤素，氨基，烷基，卤代烷基，烷胺基，环烷基或杂环基。备选地，对于特定的式ia化合物，任意两个j基团当连接在同一个碳原子或杂原子上时可以一起形成氧代基基团。
其他的mnk-特异性抑制剂是下文所示的式iia的化合物，其中变量y是–n(r5)–，并且下标"n"为1。
按照一个实施方案，式i中的变量y是-o-，-s-，-c(o)-，亚砜，砜，–chr9–或–ch2–，下标"n"是1，并且所述创造性的化合物符合式iib。当式iib中的"y"是–chr9-时，取代基r9是氢，低级烷基或羟基。
在更多的mnk-特异性抑制剂实施方案中，式i中的变量"y"是–n(r5)–，下标"n"为2或3，并且所述化合物分别符合式iiia或式iva：
备选地，在某些实施方案中，式i中的变量"y"是-o-，-s-，-c(o)-，亚砜，砜，–chr9-或–ch2-，"n"为2或3，并且所述化合物分别符合式iiib和式ivb：当式iiib或式ivb中"y"是–chr9-时，取代基r9是氢，低级烷基或羟基。
对于式iia，iib，iiia，iiib，iva和ivb的mnk-特异性抑制剂化合物，变量w1和w2都是氧代基。在式iia，iib，iiia，iiib，iva和ivb的化合物的某些实施方案中，w1是氧代基，并且w2是硫酮基团。按照一个实施方案，式iia，iib，iiia，iiib，iva和ivb的化合物在w1包含氧代基并且在w2包含＝n-or'基团。在所述mnk-特异性抑制剂的范围内还包括的是在w1具有硫酮基团和在w2具有氧代基基团的式iia，iib，iiia，iiib，iva和ivb的化合物。
对于式iia，iib，iiia，iiib，iva和ivb的化合物，取代基r2和r3中的每一个可以是相同的，在该情形中，r2和r3所连接的碳原子不是手性碳。然而，在某些实施方案中，取代基r2和r3是不同的。因此，r2和r3所连接的碳原子是手性的，并且得到的化合物将具有立体异构体。
在某些mnk-特异性抑制剂实施方案中，在式iia，iib，iiia，iiib，iva和ivb中的每个r2和r3是氢。备选地，式iia，iib，iiia，iiib，iva和ivb中的r2或r3之一是氢，并且另一个基团是任选地用1、2或3个j基团取代的烷基。对于式iia，iib，iiia，iiib，iva和ivb的某些化合物，r2和r3都是任选地用1、2或3个j基团取代的烷基。
对于式iia或式iib的一些化合物，r2是烷基，并且r3是用1、2或3个j基团取代的烷基。该类式iia和式iib化合物的实例是下述：取代基r2为烷基并且r3为卤代烷基的化合物；具有取代基r2为烷基并且r3为任选地用1、2或3个j基团取代的环烷基的取代基化合物的化合物；取代基r2为烷基并且r3为任选地用1、2或3个j基团取代的环戊基的化合物；取代基r2为烷基并且r3为任选地用1、2或3个j基团取代的芳基的化合物；取代基r2为烷基并且r3为任选地用1、2或3个j基团取代的苯基的化合物；取代基r2为烷基并且r3为任选地用1、2或3个j基团取代的环烷基亚烷基的化合物；取代基r2为烷基并且r3为任选地用1、2或3个j基团取代的亚芳烷基的化合物；取代基r2为烷基并且r3为任选地用1、2或3个j基团取代的苄基的化合物；取代基r2为烷基并且r3为任选地用1、2或3个j基团取代的杂环基的化合物；取代基r2为烷基并且r3为任选地用1、2或3个j基团取代的杂芳基的化合物；取代基r2为烷基并且r3为苯硫基、噻唑基或吡啶基的化合物；取代基r2为烷基并且r3为用1、2或3个j基团取代的杂环基亚烷基的化合物；或取代基r2为烷基并且r3为任选地用1、2或3个j基团取代的杂芳基亚烷基的化合物。
在一些实施方案中，对于式iia，iib，iiia，iiib，iva和ivb的化合物，每个r2和r3独立地是氢，烷基，环烷基，环烷基亚烷基，杂环基或杂环基亚烷基，并且任意所述的烷基、环烷基、环烷基亚烷基、杂环基或杂环基亚烷基可以任选地用1、2或3个j基团取代，所述j基团独立地选自由卤素、氨基、烷胺基和烷基组成的组。
对于某些式iiia，iiib，iva和ivb化合物，r2和r3与它们所连接的碳原子一起形成环烷基或杂环基环。
还考虑这样的式i化合物，其中y是–n(r5)-，下标"n"为1，并且r2和r3与它们所连接的碳原子一起形成环烷基或杂环基环“a”。此类化合物符合式va，并且所述环烷基或杂环基环“a”可以任选地用1、2或3个j基团取代。
备选地，在一些实施方案中，式i中的y是-o-，-s-，-c(o)-，亚砜，砜，–chr9-或–ch2-，"n"为1，并且r2和r3与它们所连接的碳原子一起形成环烷基或杂环基环a。此类化合物符合式vb，并且所述环烷基或杂环基环“a”可以任选地用1、2或3个j基团取代。当式vb中"y"为–chr9-时，取代基r9是氢，低级烷基或羟基。
对于式va和式vb化合物，w1和w2都是氧代基，并且环a是任选地用1、2或3个j基团取代的环烷基。还考虑这样的式va和式vb化合物，其中环a是任选地用1、2或3个j基团取代的稠合的环烷基；环a是任选地用1、2或3个j基团取代的环烷基；环a是任选地用1、2或3个j基团取代的环丁基、环戊基或环己基，例如，j基团选自由卤素、氨基、烷胺基和烷基组成的组。
对于一些实施方案，式va或式vb的环a是任选地用1、2或3个j基团取代的杂环基。此类杂环基基团的实例是吡咯烷基，哌啶基，四氢吡喃基，硫杂环丁基或氮杂环丁烷基。在一个实施方案中，上文示例的每个杂环基可以任选地用1、2或3个j基团取代。对于某些式va或式vb化合物，环a是用至少2个j基团取代的环烷基，其中所述至少2个j基团连接在所述环烷基的同一个碳原子上，并且连接在同一个碳上的两个j基团一起形成氧代基基团。在另一个实施方案中，式va或式vb的环a是用至少2个连接在同一个杂原子上的j基团取代的杂环基，并且其中所述2个j基团一起形成氧代基。对于一些式va或式vb化合物，所述环烷基或杂环基环a用选自由下述组成的组的j基团取代：卤素，氰基，羟基，三氟甲基，n-甲基氨基，甲基，二氟亚乙基和亚甲基腈。
本发明还提供式vi的化合物或其立体异构体、互变异构体或药用盐。式vi是式i的亚属，其中y是–n(r5)-，并且取代基r5和r8与它们所连接的原子一起形成杂环基环b，其可以任选地用1、2或3个j基团取代。
在所述mnk-特异性抑制剂的范围内还包括这样的式i化合物，其中变量"y"是–n(r5)-，并且取代基r7和r8与它们所连接的原子一起形成稠合环c。此类化合物或其立体异构体、互变异构体或药用盐符合式viia。对于式viia化合物，环c可以任选地用1、2或3个j基团取代。
按照一个实施方案，式i中的变量"y"为-o-，-s-，-c(o)-，亚砜，砜，–chr9-或–ch2-，并且取代基r7和r8与它们所连接的原子一起形成稠合环c。此类化合物及其空间异构体、互变异构体或药用盐符合式viib。对于"y"是–chr9-的式viib化合物，取代基r9可以是氢，低级烷基或羟基。
对于式viib化合物，稠合环c可以任选地用1、2或3个j基团取代。在一个mnk-特异性抑制剂实施方案中，对于式vi、式viia和式viib化合物，w1和w2都是氧代基。
本公开的mnk-特异性抑制剂还涉及式i，ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va，vb，vi，viia和viib化合物，其中r1是氢或选自甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、仲丁基或叔丁基的低级烷基基团，例如，r1为甲基的化合物。
对于某些式i，ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va，vb，vi，viia和viib化合物，r4a选自由下述组成的组：氢，卤素，烷基，烷氧基，硫代烷基，烯基，和环烷基，而取代基r4b是氢或卤素。式i，ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va，vb，vi，viia和viib中的r5是氢或低级烷基，而取代基r6，r7和r8为氢。
在本公开的某些实施方案中，式vi中的r6和r7都是氢，而对于某些式viia和式viib化合物，r6是氢。
本公开的mnk-特异性抑制剂还涉及式i，ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va，和vb化合物，其中取代基r6和r8都是氢，并且r7选自由下述组成的组：羟基，卤素，氰基，烷基，烯基，炔基，烷氧基，环烷基环烷基亚烷基，环烷基亚烯基，氨基，烷胺基，烷基羰基胺基，环烷基羰基胺基，环烷胺基，杂环胺基，杂芳基，和杂环基。对于这些化合物，任意的烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、环烷基亚烷基、环烷基亚烯基、氨基、烷胺基、烷基羰基胺基、环烷基羰基胺基、环烷胺基、杂环胺基、杂芳基或杂环基任选地用1、2或3个j基团取代。在某些实施方案中，r7选自由下述组成的组：烷基，环烷基，环烷基亚烷基，环烷基亚烯基，氨基，烷胺基，烷基羰基胺基，环烷基羰基胺基，杂环胺基，杂芳基，杂环基和环烷胺基。对于此类化合物，任意的烷基、烯基、环烷基、环烷基亚烷基、环烷基亚烯基、氨基、烷胺基、烷基羰基胺基、环烷基羰基胺基、杂环胺基、杂芳基、杂环基或环烷胺基可以任选地用1、2或3个j基团取代。由此，某些实施方案提供式i，ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va和vb化合物，其中取代基r6和r8都是氢，并且r7是氨基；取代基r6和r8都是氢，并且r7是烷胺基；取代基r6和r8都是氢，并且r7是–nhch3；取代基r6和r8都是氢，并且r7是环烷基，例如，环丙基；取代基r6和r8都是氢，并且r7是用1-3个j基团(例如，卤素)取代的环烷胺基。
在一个实施方案中，对于式i，ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va和vb的化合物，取代基r6和r8都是氢，并且r7选自由下述组成的组：–nhch(cf3)环丙基，环烷基羰基胺基，–nhc(o)环丙基，环烷基亚烯基，和-ch＝ch环丙基。
对于式i，ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va，vb，vi，viia和viib的任意化合物，j是–sh，-sr9，-s(o)r9，-s(o)2r9，-s(o)nh2，-s(o)nr9r9，-nh2，-nr9r9，-cooh，-c(o)or9，-c(o)r9，-c(o)-nh2，-c(o)-nr9r9，羟基，氰基，卤素，乙酰基，烷基，低级烷基，烯基，炔基，烷氧基，卤代烷基，硫代烷基，氰基亚烷基，烷胺基，nh2-c(o)-亚烷基，nr9r9-c(o)-亚烷基，-chr9-c(o)-低级烷基，-c(o)-低级烷基，烷基羰基胺基，环烷基，环烷基亚烷基，环烷基亚烯基，环烷基羰基胺基，环烷胺基，-chr9-c(o)-环烷基，-c(o)-环烷基，-chr9-c(o)-芳基，-chr9-芳基，-c(o)-芳基，-chr9-c(o)-杂环烷基，-c(o)-杂环烷基，杂环胺基，或杂环基，并且r9是氢，低级烷基或-oh。另外，当两个j基团结合在同一个碳原子或杂原子上时，它们可以一起形成氧代基。
对于式i，ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va，vb，vi，viia，和viib的某些化合物，j是卤素，羟基，烷基，烯基，炔基或氰基亚烷基。示例性的烷基或亚烷基链是那些具有c1-c10碳原子、c1-c8碳原子、c1-c6碳原子、c1-c4碳原子、c1-c3碳原子以及乙基和甲基基团的链。备选地，当j是烯基或炔基时，碳链分别具有至少一个双键或三键以及c2-c10碳原子、c2-c8碳原子、c2-c6碳原子、c2-c4碳原子或c2-c3碳原子。
式(i)以及式ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va，vb，vi，viia和viib的mnk-特异性抑制剂，可以通过用具有不同原子质量或质量数的原子替换一个或多个原子而进行同位素标记。可以掺加在结构(i)的化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟、氯和碘的同位素，分别如2h，3h，11c，13c，14c，13n，15n，15o，17o，18o，31p，32p，35s，18f，36cl，123i和125i。这些放射性标记的化合物可以用于帮助确定或测量化合物的效用，例如，通过表征作用位点或模式，或与药理学重要的作用位点的结合亲和力而进行确定或测量。某些同位素标记的式(i)化合物，例如，掺加了放射活性同位素的那些，可用于药物或底物组织分布研究。放射活性同位素，氚，即，3h和碳-14，即，14c，考虑到它们掺加容易和容易的检测方式，特别用于这一目的。
用较重同位素(如氘，即2h)取代可以提供某些由更大的代谢稳定性导致的治疗益处，例如，增加的体内半衰期或减少的剂量需要，并且因此在一些情形中可以是优选的。
用发射正电子的同位素(如11c，18f，15o和13n)取代可以用于正电子发射断层扫描(positronemissiontopography，pet)研究，以用于检验底物受体占据。同位素标记的式(i)以及式ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va，vb，vi，viia和viib的化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与美国专利申请号14/748,990所述的制备和实施例中记载的那些类似的方法使用适当的同位素标记的试剂替代之前使用的未标记的试剂而制备，所述美国专利申请于2015年6月24日提交，名称为“mnkinhibitorsandmethodsrelatedthereto(mnk抑制剂及与其相关的方法)”，所述化合物和合成方法完全结合在本文中。
本公开的实施方案还旨在包括式i，ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va，vb，vi，viia和viib的mnk-特异性抑制剂的体内代谢产物。例如，此类产物可以由所施用的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、酯化等产生，这主要是由于酶过程。因此，本公开包括通过包括下述的方法产生的化合物：向哺乳动物施用本公开的mnk-特异性抑制剂，持续充分的时间段，以足以产生其代谢产物。此类产物典型地通过向动物施用可检测剂量的本文所述的放射性标记的mnk-特异性抑制剂、允许充分的时间发生代谢并且从尿、血液或其他生物样品分离转化的产物而鉴定，所述动物如大鼠、小鼠、豚鼠、猴或人。
在一些实施方案中，式i，ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va，vb，vi，viia和viib的任一种化合物的mnk-特异性抑制剂以药用盐的形式存在，其包括酸和碱加成盐两种。
为此，“药用酸加成盐”是指这样的盐：其保留游离碱的生物学效用和特性，其不是生物学或另外不合需要的，并且其与无机酸和有机酸形成，所述无机酸如，但不限于，盐酸，氢溴酸，硫酸，硝酸，磷酸等，所述有机酸如乙酸，2,2-二氯乙酸，脂肪酸，海藻酸，抗坏血酸，天冬氨酸，苯磺酸，苯甲酸，4-乙酰胺基苯甲酸，樟脑酸，樟脑-10-磺酸，癸酸，己酸，辛酸，碳酸，肉桂酸，柠檬酸，环拉酸，十二烷基硫酸，乙烷-1,2-二磺酸，乙磺酸，2-羟基乙磺酸，甲酸，延胡索酸，半乳糖二酸，龙胆酸，葡萄庚糖酸，葡糖酸，葡糖醛酸，谷氨酸，戊二酸，2-氧代-戊二酸，甘油磷酸，乙醇酸，马尿酸，异丁酸，乳酸，乳糖酸，月桂酸，马来酸，苹果酸，丙二酸，苦杏仁酸，甲磺酸，粘酸，萘-1,5-二磺酸，萘-2-磺酸，1-羟基-2-萘酸，烟酸，油酸，乳清酸，草酸，棕榈酸，双羟萘酸(pamoicacid)，丙酸，焦谷氨酸，丙酮酸，水杨酸，4-氨基水杨酸，癸二酸，硬脂酸，琥珀酸，酒石酸，硫氰酸，对-甲苯磺酸，三氟乙酸，十一烯酸等。
类似地，“药用碱加成盐”是指这样的盐：其保留游离酸的生物学效用和特性，其不是生物学或另外不合需要的。这些盐通过向游离酸中添加无机碱或有机碱制备而成。来源于无机碱的盐包括钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、铁盐、锌盐、铜盐、锰盐、铝盐等。优选的无机盐是铵盐、钠盐、钾盐、钙盐和镁盐。来源于有机碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺、包含天然存在的取代的胺的取代胺、环胺和碱离子交换树脂的盐，如氨，异丙胺，三甲胺，二乙胺，三乙胺，三丙胺，二乙醇胺，乙醇胺，地阿诺(deanol)，2-二甲基氨基乙醇，2-二乙基氨基乙醇，二环己胺，赖氨酸，精氨酸，组氨酸，咖啡因，普鲁卡因，海巴明(hydrabamine)，胆碱，甜菜碱，苯乙苄胺，benzathine，乙二胺，葡糖胺，甲基葡糖胺，可可碱，三乙醇胺，氨基丁三醇，嘌呤，哌嗪，哌啶，n-乙基哌啶，聚胺树脂等。特别优选的有机碱是异丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二环己胺、胆碱和咖啡因。
通常的结晶产生本公开的mnk-特异性抑制剂化合物的溶剂化物。用于本文时，术语“溶剂化物”是指包含一个或多个本发明的化合物分子和一个或多个溶剂分子的聚集物。溶剂可以是水，在这种情形中，所述溶剂化物可以是水合物。备选地，溶剂可以是有机溶剂。因此，本公开的mnk-特异性抑制剂化合物可以作为水合物存在，包括一水合物、二水合物、半水合物、倍半水合物、三水合物、四水合物等，以及相应的溶剂化形式。本公开的mnk-特异性抑制剂化合物可以是真正的溶剂化物，而在另一些情形中，化合物可以仅保留外在的水(adventitiouswater)或是水加一些外在的溶剂的混合物。
“立体异构体”是指由通过相同的键键合的相同原子组成但是具有不可相互替换的不同三维结构的化合物。本公开包括各种立体异构体及其混合物，并且包括“对映体”，其是指它们的分子互为不重叠的镜像的两种立体异构体。
本公开的mnk-特异性抑制剂或其药用盐可以包含一个或多个不对称中心，并且由此可以产生对映体、非对映体和其他可以关于绝对立体化学定义为(r)-或(s)-或者对于氨基酸定义为(d)-或(l)-的立体异构体形式。本公开旨在包括所有这些可能的异构体，以及它们的消旋和光学纯的形式。光学活性(+)与(-)，(r)-与(s)-，或(d)-与(l)-异构体可以使用手性合成子或手性试剂制备，或使用常规技术解析，例如，色谱法和分步结晶。用于制备/分离个体对映体的常规技术包括由适当的光学纯的前体手性合成或例如使用手性高压液相色谱法(hplc)解析消旋物(或盐或衍生物的消旋物)。当本文所述的化合物包含烯族双键或其他几何不对称中心时，并且除非另外指明，旨在所述化合物包括e和z几何异构体。类似地，也旨在包括所有的互变异构体形式。
术语“互变异构体”是指从分子的一个原子到该分子的另一个原子的质子移动。例如，当w1是氧代基并且r1是h时，本公开提供如下所示的式i化合物的互变异构体：
对于式i，ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va，vb，vi，viia和viib化合物，存在类似的互变异构体。所述化合物使用常规合成方法合成，并且更具体地使用美国专利申请序号14/748,990(2015年6月24日提交，名称为“mnkinhibitorsandmethodsrelatedthereto(mnk抑制剂及与其相关的方法)”)中的通用方法和实施例的具体合成流程合成，所述化合物和合成方法完全结合在本文中。
本公开的代表性的mnk-特异性抑制剂化合物在表1和美国专利申请公布号us2015/0376181中列出，所述化合物通过引用完全结合在本文中。类似地，通过引用完全结合在本文中的是美国临时专利申请号62/247,953(名称为“isoindoline，azaisoindoline，dihydroindenoneanddihydroazaindenoneinhibitorsofmnk1andmnk2(mnk1和mnk2的异二氢吲哚、氮杂异二氢吲哚、二氢茚酮和二氢氮杂茚酮抑制剂)”)和62/247,966(名称为“pyrrolo-，pyrazolo-，imidazo-pyrimidineandpyridinecompoundsthatinhibitmnk1andmnk2(抑制mnk1和mnk2的吡咯并-、吡唑并、咪唑并-嘧啶和吡啶化合物)”)的化合物和制备其的方法。提供所述化合物是用于举例说明的目的，并不是限制。
表1.示例性的mnk-特异性抑制剂
可以与本公开的mnk-特异性抑制剂组合并且按照本文所述的任一种方法使用的其他mnk抑制剂的实例包括尾孢酰胺(cercosporamide)；sel201；cgp57380(参见，knauf等人，mol.cell.biol.21:5500-5511，2001)；cgp52088(参见tschopp等人，mol.cell.biol.res.commun.3:205-211，2000)；yyc-37(schmid，“targetingcap-dependenttranslationforcancertherapy:identificationofnovelmnkkinaseinhibitorswithenzymaticassays(用于癌症治疗的靶向帽-依赖性翻译：使用酶测定鉴定新型mnk激酶抑制剂)”,www.fhnw.ch/lifesciences/master/master-thesis/ms_mt_schmid_raffaela_2014.pdf，2014)；维甲酰胺视黄酸(retinamideretinonicacid)代谢阻断剂(还称为ramba)(例如，vnlg-152)(参见，pct公布号wo2010/036404；ramalingam等人，oncotarget5:530-543，2014；mbatia等人，j.med.chem.58:1900-1914，2015)；磺基肟(sulfoximine)取代的喹唑啉衍生物，如在美国专利号8,901,138中公开的；吡咯并嘧啶(pyrrolopyrimidine)化合物，如在美国专利号8,697,713，pct公布号wo2013/174743或pct公布号wo2014/044691中公开的；噻吩并嘧啶(thienopyrimidine)化合物，如在美国专利号8,486,953，美国专利公布号us2010/0143341，pct公布号wo2013/174744；或pct公布号wo2014/118229中公开的；哌嗪系化合物(例如，etc036或etc037)，如在pct公布号wo2014/088519中公开的；双环杂环衍生物(例如，化合物20，359或416)，如在pct公布号wo2013/147711中公开的；吡唑并嘧啶(pyrazolopyrimidine)化合物，如在美国专利号8,071,607中公开的；取代的噻唑并嘧啶(thiazolopyrimidine)化合物，如在pct公布号wo2014/135480中公开的；取代的咪唑并哒嗪(imidazopyridazine)化合物，如在美国专利公布号us2014/0296231；us2014/0288069；us2014/0228370；us2014/0194430；pct公布号wo2013/149909；wo2013/144189，wo2013/087581，wo2014/128093，wo2014/076162，或wo2014/118135中公开的；取代的吡唑并嘧啶基氨基-吲唑化合物，如在pct公布号wo2014/118226中公开的；取代的吲唑-吡咯并嘧啶化合物，如在pct公布号wo2014/048894或wo2014/048869中公开的；取代的苯并噻吩并嘧啶化合物，如在pct公布号wo2013/174735中公开的；磺基肟取代的喹唑啉化合物，如在pct公布号wo2014206922中公开的；或杂环基氨基咪唑并哒嗪化合物，如在pct公布号wo2012/175591中公开的(这些参考文献中的每一种化合物都通过引用完全结合在本文中)。
在某些实施方案中，mnk-特异性抑制剂是式i，ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va，vb，vi，viia和viib中任一项的化合物，或是表1或表2a的化合物，其以当将药物组合物施用给哺乳动物(例如，人)时有效治疗具体的目的疾病或病况(例如，癌症、慢性感染)的量配制成药物组合物。在具体的实施方案中，药物组合物包含本文所述的mnk-特异性抑制剂和药用载体、稀释剂或赋形剂。
在这一点上，“药用载体、稀释剂或赋形剂”包括任意的辅料、载体、赋形剂、助流剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、增香剂、表面活性剂、湿润剂、分散剂、混悬剂、稳定剂、等渗剂、溶剂、或乳化剂，它们已经被美国食品药物管理局(unitedstatesfoodanddrugadministration)核准可用于人或家畜。
此外，“哺乳动物”包括灵长动物，如人，猴和猿，以及非灵长动物，如家畜，包括实验室动物和家养宠物(例如，猫，狗，猪，牛，绵羊，山羊，马，兔)，以及非家畜，如野生动物等。
本公开的药物组合物可以通过将本文所述的mnk-特异性抑制剂与适当的药用载体、稀释剂或赋形剂组合或配制而制备，并且可以配制成固体、半固体、液体或气体形式的制剂，如片剂，胶囊，粉剂，颗粒剂，药膏，溶液剂，栓剂，注射剂，吸入剂，凝胶剂，微球体和气雾剂。示例性的施用所述药物组合物的途径包括口服、局部、经皮、吸入、肠胃外、舌下、含服、直肠、阴道和鼻内。术语肠胃外用于本文时包括皮下注射、静脉内、肌肉内、动脉内注射或输注技术。配制本公开的药物组合物，以允许其中包含的活性成分在施用给患者时是生物可用的。施用给受试者或患者的组合物采用一个或多个剂量单位的形式，其中，例如，片剂可以是单剂量单位，并且本文所述的气雾剂形式的mnk-特异性抑制剂的容器可以容纳多个剂量单位。制备此类剂型的实际方法是本领域技术人员已知的或是他们应该知晓的；例如，参见remington:thescienceandpracticeofpharmacy，第20版(philadelphiacollegeofpharmacyandscience，2000)。在任意情形中，被施用的组合物包含治疗有效量的本公开的mnk-特异性抑制剂或其药用盐，用于调节免疫应答，从而辅助本文教导的目的疾病或病况的治疗。
本文所述的mnk-特异性抑制剂的药物组合物可以是固体或液体的形式。在一方面，一种或多种载体是颗粒，使得所述组合物采用例如片剂或粉剂的形式。一种或多种载体可以是液体，例如，组合物是口服糖浆、注射液或气雾剂，所述气雾剂可用于例如吸入施用。当目的用于口服施用时，本公开的mnk-特异性抑制剂的药物组合物优选以固体或液体形式存在，而半固体、半液体、混悬液和凝胶形式包括在本文认为是固体或液体的形式之内。
作为用于口服施用的固体组合物，本文所述的mnk-特异性抑制剂药物组合物可以配制成粉剂、颗粒剂、压缩的片剂、药丸、胶囊、口香糖、糯米纸囊剂或类似形式。这样的固体组合物典型地包含一种或多种惰性稀释剂或可食用的载体。另外，可以存在下述中的一种或多种：粘合剂，如羧甲基纤维素，乙基纤维素，微晶纤维素，黄蓍胶或明胶；赋形剂，如淀粉，乳糖或糊精，崩解剂，如海藻酸，海藻酸钠，primogel，玉米淀粉等；润滑剂，如硬脂酸镁或sterotex；助流剂，如胶体二氧化硅；甜味剂，如蔗糖或糖精；调味剂，如薄荷，水杨酸甲酯或橙味调味剂；和着色剂。
当药物组合物以胶囊形式(例如，凝胶胶囊)存在时，除了上述类型的物质之外，其可以包含液体载体，如聚乙二醇或油。
药物组合物可以以液体形式存在，例如，酏剂，糖浆，溶液剂，乳剂或混悬剂。作为两个实例，液体可以用于口服施用或用于通过注射递送。当目的用于口服施用时，除了mnk-特异性抑制剂之外，优选的组合物包含甜味剂、防腐剂、染料/着色剂和增香剂中的一种或多种。在旨在通过注射施用的组合物中，可以包含表面活性剂、防腐剂、甜味剂、分散剂、混悬剂、缓冲剂、稳定剂和等渗剂中的一种或多种。
mnk-特异性抑制剂的液体药物组合物，不管其是溶液、混悬液或其他类似的形式，可以包含下述辅料中的一种或多种：无菌稀释剂，如注射用水，盐水溶液，优选生理盐水，林格溶液，等渗氯化钠，不挥发性油，如何处的单甘油酯或二甘油酯，其可以作为溶剂或混悬介质，聚乙二醇，甘油，丙二醇或其他溶剂；抗菌剂，如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，如乙二胺四乙酸；缓冲剂，如乙酸盐，柠檬酸盐或磷酸盐，和用于调节张力的试剂，如氯化钠或右旋糖。肠胃外制剂可以包装在由玻璃或塑料制成的安瓿瓶、一次性注射器或多剂量小瓶中。生理盐水是优选的辅料。可注射的药物组合物优选是无菌的。
目的用于肠胃外或口服施用的mnk-特异性抑制剂的液体药物组合物应该包含一定量的本公开的mnk-特异性抑制剂，以致将包含适当的剂量。
mnk-特异性抑制剂的药物组合物可以用于局部应用，在该情形中，载体可以适当地包括溶液、乳液、药膏或凝胶基质。例如，所述基质可以包含下述中的一种或多种：矿脂，羊毛脂，聚乙二醇，蜂蜡，矿物油，稀释剂，如水和醇，和乳化剂和稳定剂。增稠剂可以存在于用于局部施用的药物组合物中。如果目的用于经皮施用，则本公开的mnk-特异性抑制剂组合物可以包含在经皮贴片或离子电渗疗法装置中。
mnk-特异性抑制剂组合物可以用于直肠施用，例如，以栓剂的形式，其将在直肠中熔融并且释放药物。用于直肠施用的组合物可以包含油性基质作为适当的非刺激性赋形剂。此类基质包括，例如，羊毛脂、可可脂或聚乙二醇。
mnk-特异性抑制剂的药物组合物可以包含改变固体或液体剂量单位的物理形式的多种物质。例如，组合物可以包含在活性成分周围形成包衣壳的物质。形成包衣壳的物质通常是惰性的，并且可以选自，例如，糖，虫胶，和其他肠溶包衣剂。备选地，活性成分可以被包裹在凝胶胶囊中。
本公开的固体或液体形式的药物组合物可以包含与本文所述的mnk-特异性抑制剂结合的试剂，由此辅助所述化合物的递送。可以以这种能力作用的适当的试剂包括单克隆或多克隆抗体、蛋白或脂质体。
mnk-特异性抑制剂的药物组合物可以由可以作为气雾剂施用的剂量单位组成。术语气雾剂用于表示多种系统，范围从胶体性质的那些到由加压包装组成的系统。递送可以通过液化气体或压缩气体或通过适当的分散活性成分的泵系统。mnk-特异性抑制剂的气雾剂可以以单相、二相、或三相系统递送，从而递送一种或多种活性成分。气雾剂的递送包括需要的容器、活化剂、阀门、子容器等，它们一起可以形成试剂盒。本领域技术人员无需过度实验可以确定优选的气雾剂制剂和递送模式。
本公开的药物组合物可以通过制药领域公知的方法制备。例如，要通过注射施用的药物组合物可以通过将本文所述的mnk-特异性抑制剂与无菌溶剂组合形成溶液而制备。可以加入表面活性剂以促进均相溶液或混悬液的形成。表面活性剂是与本公开的化合物非共价相互作用从而促进所述化合物在水性递送系统中的溶解或均相混悬的化合物。
用于本文时，“组合”是指包括mnk-特异性抑制剂和免疫抑制组分的抑制剂的组合，它们每一个可以逐一(顺序地)、同时或一起施用，如本文所述。例如，式i，ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va，vb，vi，viia或viib的任一种mnk-特异性抑制剂可以与下述组合：(a)特异性针对pd-1的抗体，如pidilizumab，纳武单抗(nivolumab)或派姆单抗(pembrolizumab)；(b)特异性针对pd-l1的抗体，如mdx-1105，bms-936559，medi4736，mpdl3280a或msb0010718c；(c)特异性针对ctla4的抗体，如替西木单抗(tremelimumab)或伊匹单抗(ipilimumab)；(d)化疗剂，如维罗非尼(vemurafenib)，达拉非尼(dabrafenib)，曲美替尼(trametinib)，考比替尼(cobimetinib)，舒尼替尼(sunitinib)，埃罗替尼(erlotinib)，紫杉醇(paclitaxel)或多西他赛(docetaxel)；(e)抗-cd137(4-1bb)抗体，如urelumab；(f)抗-cd134(ox-40)抗体，如mdi6469(ox-40激动剂)；(g)来那度胺(lenalidomide)或泊马度胺(pomalidomide)；或(h)它们的任意组合。
在某些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与免疫抑制组分的抑制剂的组合还包含化疗剂，它们每一个可以逐一(顺序地)、同时或一起施用，如本文所述。例如，式i，ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va，vb，vi，viia或viib的任一种mnk-特异性抑制剂可以与下述组合：(a)特异性针对pd-1的抗体，如pidilizumab，纳武单抗或派姆单抗；(b)特异性针对pd-l1的抗体，如mdx-1105，bms-936559，medi4736，mpdl3280a或msb0010718c；(c)特异性针对ctla4的抗体，如替西木单抗或伊匹单抗；(d)抗-cd134(ox-40)抗体，如mdi6469(ox-40激动剂)；(e)来那度胺或泊马度胺；或(f)抗-cd137(4-1bb)抗体，如urelumab；和化疗剂，如维罗非尼，达拉非尼，曲美替尼，考比替尼，舒尼替尼，埃罗替尼，紫杉醇或多西他赛。
改变免疫调节活性的方法
本文所述的mnk-特异性抑制剂可以出乎意料地减少参与免疫抑制性途径(也称为免疫抑制途径)的免疫抑制组分(例如，免疫检查点分子，免疫抑制细胞因子)的水平。在某些方面中，本公开提供通过向有此需要的受试者施用有效量的mnk-特异性抑制剂进行免疫调节的方法。免疫调节的示例性的形式包括增加免疫细胞的活性；减少免疫细胞的下调；诱导或增强免疫应答；延长免疫应答；刺激抗原特异性t细胞应答；抑制免疫抑制信号传导途径；促进内源性免疫性(已有的或新产生的)；抑制疾病相关的免疫抗性(例如，癌症)；增强疫苗诱导的免疫应答；或它们的任意组合。在其他实施方案中，需要免疫调节的受试者具有过度增生病症(例如，癌症)、感染或传染病(例如，病毒、细菌、原生动物感染)。在具体的实施方案中，需要免疫调节的受试者具有与免疫抗性相关的过度增生病症(例如，癌症)或与免疫抗性相关的传染病(例如，慢性感染)。在任一前述实施方案中，被治疗的受试者是人。
示例性的免疫抑制性或抑制途径(由本公开的mnk-特异性抑制剂调节)由程序性细胞死亡蛋白1(也称为pd-1或cd279)调节，所述程序性细胞死亡蛋白1是属于免疫球蛋白超家族的细胞表面受体，并且表达在t细胞(cd8+效应t细胞，cd4+辅助t细胞，tregs或它们的任意组合)，天然杀伤(nk)细胞，巨噬细胞，树突细胞和b细胞上。pd-1结合两个配体，即pd-l1(也称为b7-h1或cd274)和pd-l2(也称为bc-dc或cd273)。本公开的mnk-特异性抑制剂还减少pd-l1的水平。
通过背景，pd-1与其配体主要通过外周组织中识别抗原的t细胞起作用调节组织中的炎性反应。在激活的t细胞上pd-1表达被诱导，并且组装中的炎性信号诱导pd-1配体在例如抗原呈递细胞上的表达。当配体结合时，pd-1通过shp2磷酸酶抑制参与t细胞激活的激酶，导致对cd8+效应t细胞的tcr-介导的激活、扩增、细胞因子产生和效应功能获得的抑制。pd-1介导的免疫应答的减弱保护外周组织免于损伤并帮助保持自我耐受性。ifnγ分泌是pd-l1诱导的信号，其主要由t辅助1(th1)细胞进行。pd-1受体信号传导的活性可以通过用本领域已知的方法检查t细胞增殖和细胞因子产生(例如，ifnγ，il-2)而检测。
pd-1还在treg细胞上高度表达，并且treg细胞中pd-1介导的信号传导可以通过促进treg发育和功能导致对效应免疫应答的进一步抑制(francisco等人，immunol.rev.236:219，2010)。pd-1信号传导还可以通过其对nk细胞和b细胞的作用而减弱nk细胞激活和细胞毒性以及抗体产生(benson等人，blood116:2286，2010；thibult等人，int.immunol.25:129，2013)。
高水平的持久pd-1表达，可以由于长期抗原暴露(例如，癌症，慢性感染)而发生，可以诱导同源抗原特异性t细胞之间的消耗和无反应性状态(barber等人，nature438:682，2006)。
通过pd-1信号传导的免疫应答(例如，t细胞反应)的下调可以促进癌症或感染的持久性。在多种肿瘤的癌细胞或肿瘤浸润的淋巴细胞(til)的表面上，pd-1配体通常被上调，这限制局部抗肿瘤t细胞反应。pd-l1表达的上调已在黑素瘤、卵巢癌、肺癌、肾癌、乳腺癌和多种其他其中中发现，并且已经与差的预后相关(在pardoll中综述，同前所述)。在某些b细胞淋巴瘤上的pd-l2上调也已经被报道(同前)。
某些免疫抑制组分，如免疫检查点蛋白，如pd-1或lag3，也可以在慢性感染的持久性中起作用。已经表明，在hiv感染的患者的t细胞上pd-1被上调，其与病毒负荷和t细胞消耗相关，导致减少的细胞增殖、细胞毒性功能和细胞因子分泌(综述在eichbaum，curr.med.chem.18:3971，2011和hofmeyer等人，j.biomed.biotech.2011:451694，2011中)。pd-1介导的t细胞消耗对于其他慢性感染的持久性也是重要的，如乙型肝炎病毒(hepatitisbvirus)，丙型肝炎病毒(hepatitiscvirus)和lcmv，并且参与细胞感染(例如，幽门螺杆菌(helicobacterpylori)，分枝杆菌(mycobacterium))、锥虫感染(例如，杜氏利什曼原虫(leishmaniadonovani))、寄生性原生动物感染(例如，鼠弓形虫(toxoplasmagondii))、蠕虫感染(例如，曼森氏裂体吸虫(schistosomamansoni))和单纯疱疹病毒1感染，(例如，hsv1)(hofmeyer等人，同前所述)的持久性或再激活。
另一种示例性的免疫抑制组分是淋巴细胞激活基因3(lag3，也称为cd223)，其在treg细胞上高度表达，并且在增强treg细胞的免疫抑制活性发明具有作用(goldberg和drake，curr.top.microbiol.immunol.344:269，2011)。lag3还直接抑制cd8+效应t细胞，不依赖经由treg细胞的作用(grosso等人，j.clin.invest.117:3383，2007)。lag3还在激活的cd4+和cd8+t淋巴细胞上表达，在此处，其与细胞表面的cd3–tcr复合物连接并且负调节信号转导(hannier等人，j.immunol.161:4058，1998；darlington等人，j.exp.med.195:1337，2002)。lag3在下调t细胞反应方面的作用被充分确定(matsuzaki等人，proc.nat'l.acad.sci.usa107:7875，2010)，并且对于其参与癌症(如霍奇金淋巴瘤(hodgkin’slymphomas)(gandhi等人，blood108:2280，2006)和前列腺癌(sfanos等人，clin.cancerres.14:3254，2008))中肿瘤浸润的t细胞的调节功能存在日益增多的证据。lag3的配体，即mhc/hlaii类分子，在一些上皮癌(例如，黑素瘤)和肿瘤浸润的巨噬细胞和树突细胞上被上调。正在开发一些lag3抑制剂，并且甚至不阻断lag3-mhcii类结合的lag3抗体仍然能够增强t细胞增殖和效应功能(综述在pardoll中，同前所述)。
本公开提供通过减少免疫细胞的下调治疗疾病的方法，所述方法包括向有此需要的受试者(例如，人)施用有效量的mnk-特异性抑制剂。在某些实施方案中，本公开提供减少或阻断pd-1、pd-l1或lag3信号传导的方法，用于增强免疫应答或减少免疫细胞针对过度增生病症(例如癌症)或感染或传染病的免疫细胞的下调。在某些方面，本公开提供减少pd-1、pd-l1、lag3或它们的组合的水平或活性并且任选地阻断或减少免疫抑制细胞因子(例如，il-10)的产生的方法，其通过向需要诱导或增强的免疫应答或免疫细胞下调或抑制的减少的受试者施用有效量的mnk-特异性抑制剂。在某些实施方案中，mnk-特异性抑制剂用于诱导或增强免疫应答，或减少具有癌症或慢性感染的受试者中免疫细胞的下调或抑制。在其他实施方案中，mnk-特异性抑制剂是表1或表2a的任一种化合物，或是具有式i，ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va，vb，vi，viia或viib的结构的任意化合物。在另一些实施方案中，所述诱导或增强的免疫应答包括抗原特异性t细胞应答，或所述减少的下调或抑制是抗原特异性t细胞的下调或抑制。
在具体的实施方案中，所述方法还包括施用免疫抑制组分的抑制剂，如抗体或其结合片段，融合蛋白(例如，fc融合体)，sirna等等，其可以是pd-1、pd-l1、lag3或它们的组合的抑制剂，针对其他免疫抑制组分(如免疫抑制细胞因子，如il-10，il-4，il-1ra，il-35)，或调节其他免疫抑制组分，如treg细胞(例如，相对于te细胞减少treg细胞)。在其他实施方案中，mnk-特异性抑制剂任选地调节mhc或hla分子的水平的增加，从而促进或增强抗原呈递，如本文所述。
在另一些实施方案中，本公开提供治疗与pd-1介导的、pd-l1介导的或lag3介导的免疫抗性相关的疾病的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用有效量的mnk-特异性抑制剂。
在任一前述实施方案中，mnk-特异性抑制剂是表1或表2a中任一种化合物或具有式i，ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va，vb，vi，viia或viib的结构的任意化合物。在另一些实施方案中，所述诱导或增强的免疫应答是抗原特异性t细胞应答。在具体的实施方案中，所述方法还包括施用免疫抑制组分的抑制剂，如抗体或其结合片段，融合蛋白，sirna等。
在另一些实施方案中，本公开提供抑制与失调的免疫检查点蛋白(如pd-1，pd-l1，lag3或它们的组合)相关的免疫抑制信号传导途径的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的mnk-特异性抑制剂，任选地抑制免疫抑制细胞因子(例如，il-10)的产生。在某些实施方案中，mnk-特异性抑制剂是表1或表2a中任一种化合物或具有式i，ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va，vb，vi，viia或viib的结构的任意化合物。在另一些实施方案中，诱导或增强的免疫应答是抗原特异性t细胞应答。在具体的实施方案中，所述方法还包括施用免疫抑制信号的抑制剂，如抗体或其结合片段，融合蛋白，sirna等。
在更多的实施方案中，本公开提供抑制失调的pd-1、pd-l1和/或lag3免疫抑制信号传导途径的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的mnk-特异性抑制剂，任选地抑制免疫抑制细胞因子(例如，il-10)的产生。在某些实施方案中，mnk-特异性抑制剂是表1或表2a中任一种化合物或具有式i，ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va，vb，vi，viia或viib的结构的任意化合物。在更多的实施方案中，所述方法抑制免疫抑制组分，如免疫信号传导途径的pd-1、pd-l1和/或lag3，从而校正失调的或不适当的免疫抑制并促进内源性免疫性(例如，已有的或新产生的)。在某些实施方案中，本公开提供抑制免疫抑制组分以促进内源性免疫性的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的mnk-特异性抑制剂和免疫抑制抑制剂，其中，(a)在免疫抑制抑制剂的存在下，所述mnk-特异性抑制剂引发抗原特异性t细胞针对抗原的应答，或(b)所述mnk-特异性抑制剂增强或延长免疫抑制抑制剂促进内源性免疫性的作用。在另一些实施方案中，所述诱导或增强的免疫应答是抗原特异性t细胞应答。在具体的实施方案中，所述方法还包括施用免疫抑制组分的抑制剂，如抗体或其结合片段，融合蛋白，sirna等。
使用本文所述的mnk-特异性抑制剂的方法可以任选地与靶向免疫抑制组分或免疫抑制组分的生产的抑制剂组合使用。示例性的免疫抑制组分靶标包括pd-1，pd-l1，pd-l2，ctla4，cd80，cd86，b7-h3，b7-h4，hvem，btla，kir，lag3，gal9，tim3，2b4，腺苷，a2ar，tgfβ，il-10，il-35，精氨酸酶，ido或免疫抑制细胞因子(例如，il-10)。免疫抑制组分抑制剂可以是化合物、抗体、抗体片段或融合多肽(例如，fc融合体，如ctla4-fc或lag3-fc)，反义分子，核酶或rnai分子，或低分子量有机分子。
在某些实施方案中，免疫抑制组分的抑制剂是特异性针对下述的抗体或其结合片段，融合蛋白或sirna：pd-1，pd-l1，pd-l2，ctla4，cd80，cd86，b7-h3，b7-h4，hvem，btla，kir，lag3，gal9，tim3，2b4，腺苷，a2ar，tgfβ，il-10，il-35，精氨酸酶，ido，或它们的任意组合。
在某些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与pd-1特异性抗体或其结合片段组合使用，如pidilizumab，纳武单抗，派姆单抗，medi0680(之前的amp-514)，mk-3475，amp-224，bms-936558或它们的任意组合。在其他实施方案中，mnk-特异性抑制剂与pd-l1特异性抗体或其结合片段组合使用，如bms-936559，durvalumab(medi4736)，阿特珠单抗(atezolizumab)(mpdl3280a)，msb0010718c，rg7446，或它们的任意组合。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与lag3特异性抗体或其结合片段组合使用，如lag525，imp321，imp701，9h12，bms-986016，或它们的任意组合。在更多的实施方案中，mnk-特异性抑制剂与pd-1抑制剂和ctla4抑制剂组合使用。在其他实施方案中，mnk-特异性抑制剂与pd-l1抑制剂和ctla4抑制剂组合使用。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与pd-1抑制剂和lag3抑制剂组合使用，或与pd-l1抑制剂和lag3抑制剂组合使用。
细胞毒性t淋巴细胞相关性蛋白4(ctla4)，也称为cd152，是由仅t细胞表达的受体，并且作用为t细胞激活的负调节剂。ctla4主要抵消t细胞共刺激受体cd28的活性。ctla4和cd28共有相同的配体cd80(也称为b7.1)和cd86(也称为b7.2)，它们在抗原呈递细胞表面上表达。仅当t细胞受体已经结合其同源性抗原时，cd80或cd86结合cd28激活t细胞增殖和il-2产生。通过tcr和cd28的t细胞激活诱导ctla4表达。ctla4具有比cd28高的针对其两种配体的亲和力。不希望收到理论束缚，提议ctla4通过在配体结合方面击败cd28并将抑制性信号递送至t细胞而减弱t细胞激活(综述在pardoll中，同前所述)。ctla4在脱脂t细胞子集上表达，并且信号传导可能下调cd8+效应t细胞、cd4+辅助t细胞的活性并且增强treg活性。
在某些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与ctla4的抑制剂组合使用。在具体的实施方案中，mnk-特异性抑制剂与ctla4特异性抗体或其结合片段组合使用，如伊匹单抗(ipilimumab)，替西木单抗(tremelimumab)，ctla4-ig融合蛋白(例如，阿巴西普(abatacept)，贝拉西普(belatacept))，或它们的任意组合。
其他b7家族抑制性配体，如b7-h3(也称为cd276)和b7-h4(也称为b7-s1，b7x和vctn1)，可能具有免疫抑制作用(yi等人，immunol.rev.229:145，2009)。b7-h3和b7-h4的受体尚未鉴定出来。但是，b7-h3和b7-h4在肿瘤细胞和肿瘤浸润的细胞上被上调(he等人，clin.dev.immunol.2011:695834，2011)。
在更多的实施方案中，mnk-特异性抑制剂与b7-h3特异性抗体或其结合片段组合使用，如mga271，376.96或二者。b7-h4抗体结合片段可以是scfv或其融合蛋白，如，例如，在dangaj等人，cancerres.73:4820，2013中所述。
cd244，也称为天然杀伤细胞受体2b4，是在天然杀伤细胞、γδt细胞和记忆cd8+(αβ)t细胞上表达的细胞表面受体。cd244的配体是cd48，其在造血细胞上表达。认为cd244信号传导以激活和抑制两种方式调节nk细胞的细胞溶解活性，这取决于cd244的表达水平和交联程度(chlewicki等人，j.immunol.180:8159，2008)。
b和t淋巴细胞弱化剂(blta，也称为cd272)是在t细胞激活过程中诱导表达的抑制剂受体。其配体是疱疹病毒进入调节剂(hvem，也称为tnfrsf14)。hvem在多种组织/细胞类型中广泛表达。hvem也在某些肿瘤类型上上调，例如，包括黑素瘤，淋巴瘤，前列腺癌，结肠直肠癌，泌尿道上皮癌，和肿瘤浸润的淋巴细胞。btla-hvem反式-相互作用导致对t细胞的抑制剂作用(由shui等人，j.leukoc.biol.89:517，2011综述)。t细胞上hvem-btla的顺式结合也可能具有抑制功能，其通过可溶的light(也称为tnfsf14或cd258)稳定(shui等人，同前所述)。
t细胞膜蛋白3(tim3，也称为havcr2)是cd4+t辅助1(th1)特异性细胞表面蛋白，其是t细胞和th1与th17细胞因子分泌的负调节剂(hastings等人，eur.j.immunol.39:2492，2009)。其配体是半乳凝素9(gal9)。以ifnγ产生为特征的th1细胞对于抗癌和抗病毒免疫应答是重要的。以il-17和il-22产生为特征的th17细胞对于针对粘膜细菌和真菌病原体的免疫应答是重要的。
腺苷a2a受体(a2ar)通过诱导t细胞无反应性和通过促进cd4+t细胞中的foxp3表达并且发育成treg细胞而抑制t细胞应答(zarek等人，blood111:251，2008)。a2ar的配体是腺苷。腺苷在细胞死亡过程中(例如，肿瘤，病毒感染)释放。
杀伤细胞免疫球蛋白样受体(kir，也称为cd158)是在天然杀伤细胞和t细胞子集中发现的细胞表面蛋白。kir与mhci类分子相互作用，其抑制nk细胞的细胞毒性活性。个体kir识别不同子集的mhci类同种异型。在某些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与kir的抑制剂如lirilumab(bms-986015)组合使用。
抑制性细胞因子，包括tgfβ，il-10和il-35，可以通过抑制th1型应答、促进treg细胞发育而抑制免疫应答(bettini和vignali，curr.opin.immunol.21:612，2009)。
吲哚胺2,3-二加氧酶(ido)是催化色氨酸分解为n-甲酰基-犬尿氨酸的酶。ido由ifnγ诱导并且通过从细胞微环境中局部消耗色氨酸而抑制t细胞应答(mellor，biochem.biophys.res.comm.338:20-4，2005)。不希望收到理论束缚，认为t细胞丧失色氨酸和从色氨酸降解途径产生毒性的分解代谢物诱导t细胞停滞和凋亡，并使t细胞失活(soliman等人，cancerj.16:354-9，2010)。ido由浸润的骨髓细胞(例如，树突细胞)表达(mellor和munn，nat.rev.immunol.4:762-74，2004)。ido也由广泛肿瘤类型的癌细胞表达，并且可以抑制针对肿瘤的免疫应答(munn，updatecancerther.1:175-185，2006)。
在某些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与ido抑制剂组合使用，如左旋-1-甲基色氨酸，epacadostat(incb024360；liu等人，2010，blood115:3520-30)，依布硒(ebselen)(terentis等人，2010，biochem.49:591-600)，indoximod，nlg919(mautino等人，americanassociationforcancerresearch104thannualmeeting2013；4月6-10日，2013)，1-甲基-色氨酸(1-mt)-替拉扎明(tira-pazamine)，或它们的任意组合。
精氨酸或鸟氨酸和尿素的代谢由精氨酸酶i和精氨酸酶ii催化，它们由位于细胞质和线粒体的两种不同的酶编码。鸟氨酸是产生细胞周期进展需要的聚胺的主要底物。精氨酸还可以通过可诱导的一氧化氮合酶代谢，以产生瓜氨酸和一氧化氮，其在细胞毒性机制中起重要作用。精氨酸酶还可以通过减少cd3ζ链表达而引起t细胞无反应性(rodriguez等人，cancerres.64:5839，2004)。精氨酸酶由骨髓来源的抑制细胞产生，并且已经在一些肿瘤细胞系中观察到表达(rodriguez和ochoa，immunol.rev.222:180-191，2008)。
在某些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与精氨酸酶抑制剂组合使用，如n(omega)-硝基-l-精氨酸甲基酯(l-name)，n-omega-羟基-正-l-精氨酸(正-noha)，l-noha，2(s)-氨基-6-硼己酸(abh)，s-(2-硼乙基)-l-半胱氨酸(bec)，或它们的任意组合。
在某些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与靶向其他免疫刺激分子的试剂组合使用。例如，mnk-特异性抑制剂可以与下述组合使用：抗-cd137(4-1bb)抗体(如urelumab)、抗-cd134(ox-40)抗体(如mdi6469(ox-40激动剂))、来那度胺、泊马度胺或它们的组合。
用于本文时，“过度增生病症”或“过度增生疾病”是指与正常细胞或未患病的细胞相比过量的生长或增殖。示例性的过度增生病症包括发育异常(dysplasia)，瘤形成(neoplasia)，非接触抑制的或致癌转化的细胞，肿瘤，癌症，癌，肉瘤，恶性细胞，恶化前细胞，以及非瘤形成或非恶性的过度增生病症(例如，腺瘤(adenoma)，纤维瘤(fibroma)，脂肪瘤(lipoma)，平滑肌瘤(leiomyoma)，血管瘤(hemangioma)，纤维化(fibrosis)，再狭窄(restenosis)，等等)。在某些实施方案中，通过本公开的组合物和方法进行的免疫调节治疗的癌症包括癌(上皮)，肉瘤(结缔组织)，淋巴瘤或白血病(造血细胞)，生殖细胞肿瘤(多能细胞)，母细胞瘤(blastoma)(不成熟的“前体”细胞或胚胎组织)，或它们的任意组合。这些多种形式的过度增生疾病在本领域中是已知的，并且诊断和分类具有确定的标准(例如，hanahan和weinberg，cell144:646，2011；hanahan和weinbergcell100:57，2000；cavallo等人，canc.immunol.immunother.60:319，2011；kyrigideis等人，j.carcinog.9:3，2010)。
宽泛种类的过度增生病症，包括实体瘤和白血病，易受本文公开的免疫调节组合物和方法的影响。可以通过本公开的免疫调节治疗的示例性的癌症包括乳房、前列腺和结肠的腺癌；所有形式的肺支气管癌(bronchogeniccarcinoma)；骨髓瘤(myeloid)；黑素瘤(melanoma)；肝细胞瘤(hepatoma)；神经细胞瘤(neuroblastoma)；乳头状瘤(papilloma)；apud瘤(apudoma)；迷离瘤(choristoma)；鳃原瘤(branchioma)；恶性类癌综合征(malignantcarcinoidsyndrome)；类癌心脏病(carcinoidheartdisease)；和癌(carcinoma)(例如，沃克癌(walker)，基底细胞癌，基底鳞状细胞癌，布朗皮尔斯癌症(brown-pearce)，导管癌(ductal)，埃利希瘤(ehrlichtumor)，krebs2，merkel细胞癌，粘液样癌(mucinous)，非小细胞肺癌(non-smallcelllung)，燕麦形细胞癌(oatcell)，乳头状癌(papillary)，硬癌(scirrhous)，细支气管癌(bronchiolar)，支气管原癌(bronchogenic)，鳞状上皮细胞癌(squamouscell)，和移行细胞癌(transitionalcell))。可以治疗的另外的代表性癌症包括组织细胞病症(histiocyticdisorders)；恶性组织细胞增多症(histiocytosismalignant)；免疫增生性小肠病(immunoproliferativesmallintestinaldisease)；浆细胞瘤(plasmacytoma)；网状内皮组织增殖(reticuloendotheliosis)；黑素瘤(melanoma)；软骨母细胞瘤(chondroblastoma)；软骨瘤(chondroma)；软骨肉瘤(chondrosarcoma)；纤维瘤(fibroma)；纤维肉瘤(fibrosarcoma)；巨细胞瘤(giantcelltumors)；组织细胞瘤(histiocytoma)；脂肪瘤(lipoma)；脂肪肉瘤(liposarcoma)；间皮瘤(mesothelioma)；粘液瘤(myxoma)；粘液肉瘤(myxosarcoma)；骨瘤(osteoma)；骨肉瘤(osteosarcoma)；脊索瘤(chordoma)；颅咽管瘤(craniopharyngioma)；无性细胞瘤(dysgerminoma)；错构瘤(hamartoma)；间叶瘤(mesenchymoma)；中肾瘤(mesonephroma)；肌肉瘤(myosarcoma)；成釉细胞瘤(ameloblastoma)；牙骨质瘤(cementoma)；牙瘤(odontoma)；畸胎瘤(teratoma)；胸腺瘤(thymoma)；和滋养细胞瘤(trophoblastictumor)。
示例性的恶性血液病包括急性成淋巴细胞性白血病(acutelymphoblasticleukemia，all)，急性髓性白血病(acutemyeloidleukemia，aml)，慢性髓性白血病(chronicmyelogenousleukemia，cml)，慢性嗜酸性白血病(chroniceosinophilicleukemia，cel)，骨髓增生异常综合征(myelodysplasticsyndrome，mds)，霍奇金淋巴瘤(hodgkin'slymphoma)，非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkin'slymphoma，nhl)(例如，滤泡型淋巴瘤(follicularlymphoma)，弥散型大b细胞淋巴瘤(diffuselargeb-celllymphoma)，或慢性淋巴细胞白血病(chroniclymphocyticleukemia))，或多发性骨髓瘤(multiplemyeloma，mm)。
其他示例性的过度增生病症包括腺瘤；胆管瘤(cholangioma)；胆脂瘤(cholesteatoma)；圆柱瘤(cyclindroma)；囊腺癌(cystadenocarcinoma)；囊腺瘤(cystadenoma)；粒层细胞瘤(granulosacelltumor)；两性胚细胞瘤(gynandroblastoma)；肝细胞瘤；汗腺腺瘤(hidradenoma)；胰岛细胞瘤(isletcelltumor)；睾丸间质细胞瘤(leydigcelltumor)；睾丸支持细胞瘤(sertolicelltumor)；泡膜细胞瘤(thecoma)；平滑肌瘤(leimyoma)；平滑肌肉瘤(leiomyosarcoma)；成肌细胞瘤(myoblastoma)；myomma；肌肉瘤(myosarcoma)；横纹肌瘤(rhabdomyoma)；横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma)；室管膜瘤(ependymoma)；神经节瘤(ganglioneuroma)；胶质瘤(glioma)；髓母细胞瘤(medulloblastoma)；脑膜瘤(meningioma)；神经鞘瘤(neurilemmoma)；神经细胞瘤(neuroblastoma)；神经上皮瘤(neuroepithelioma)；神经纤维瘤(neurofibroma)；神经瘤(neuroma)；副神经节瘤(paraganglioma)；非嗜铬性副神经节瘤(paragangliomanonchromaffin)；血管角质瘤(angiokeratoma)；具有嗜酸性细胞增多症的血管淋巴样增生(angiolymphoidhyperplasiawitheosinophilia)；血管瘤硬化(angiomasclerosing)；血管瘤病(angiomatosis)；血管球瘤(glomangioma)；血管内皮瘤(hemangioendothelioma)；血管瘤(hemangioma)；血管外皮细胞瘤(hemangiopericytoma)；血管肉瘤(hemangiosarcoma)；淋巴管瘤(lymphangioma)；淋巴管肌瘤(lymphangiomyoma)；淋巴管肉瘤(lymphangiosarcoma)；松果体瘤(pinealoma)；癌肉瘤(carcinosarcoma)；软骨肉瘤(chondrosarcoma)；叶状囊性肉瘤(cystosarcomaphyllodes)；纤维肉瘤(fibrosarcoma)；血管肉瘤(hemangiosarcoma)；平滑肌肉瘤(leiomyosarcoma)；白血病性肉瘤(leukosarcoma)；脂肪肉瘤(liposarcoma)；淋巴管肉瘤(lymphangiosarcoma)；肌肉瘤(myosarcoma)；粘液肉瘤(myxosarcoma)；卵巢癌；横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma)；肉瘤；肿瘤；多发性神经纤维瘤(nerofibromatosis)；和宫颈发育不良(cervicaldysplasia)。
在具体的方面中，本公开提供通过向具有下述的受试者施用有效量的mnk-特异性抑制剂而增加免疫细胞的活性的方法：实体瘤，黑素瘤，非小细胞肺癌，肾细胞癌，肾癌，血液癌，前列腺癌，去势抵抗性前列腺癌(castration-resistantprostatecancer)，结肠癌，直肠癌，胃癌，食管癌(esophagealcancer)，膀胱癌(bladdercancer)，头颈癌(headandneckcancer)，甲状腺癌(thyroidcancer)，乳腺癌，三阴性乳腺癌(triple-negativebreastcancer)，卵巢癌，宫颈癌(cervicalcancer)，肺癌，泌尿道上皮癌(urothelialcancer)，胰腺癌(pancreaticcancer)，胶质母细胞瘤(glioblastoma)，肝细胞癌(hepatocellularcancer)，骨髓瘤(myeloma)，多发性骨髓瘤(multiplemyeloma)，白血病，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，骨髓增生异常综合征(myelodysplasticsyndrome)，脑癌，cns癌症，恶性神经胶质瘤(malignantglioma)，或它们的任意组合。
在其他方面中，本公开提供通过向具有下述的受试者施用有效量的mnk-特异性抑制剂而减少免疫细胞的下调的方法：实体瘤，黑素瘤，非小细胞肺癌，肾细胞癌，肾癌，血液癌，前列腺癌，去势抵抗性前列腺癌，结肠癌，直肠癌，胃癌，食管癌，膀胱癌，头颈癌，甲状腺癌，乳腺癌，三阴性乳腺癌，卵巢癌，宫颈癌，肺癌，泌尿道上皮癌，胰腺癌，胶质母细胞瘤，肝细胞癌，骨髓瘤，多发性骨髓瘤，白血病，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，骨髓增生异常综合征，脑癌，cns癌症，恶性神经胶质瘤，或它们的任意组合。
在另一些方面中，本公开提供通过向患有下述的受试者施用有效量的mnk-特异性抑制剂而诱导、增强、或延长免疫应答的方法：实体瘤，黑素瘤，非小细胞肺癌，肾细胞癌，肾癌，血液癌，前列腺癌，去势抵抗性前列腺癌，结肠癌，直肠癌，胃癌，食管癌，膀胱癌，头颈癌，甲状腺癌，乳腺癌，三阴性乳腺癌，卵巢癌，宫颈癌，肺癌，泌尿道上皮癌，胰腺癌，胶质母细胞瘤，肝细胞癌，骨髓瘤，多发性骨髓瘤，白血病，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，骨髓增生异常综合征，脑癌，cns癌症，恶性神经胶质瘤，或它们的任意组合。
在另一些方面中，本公开提供通过向患有下述的受试者施用有效量的mnk-特异性抑制剂而刺激抗原特异性t细胞应答的方法：实体瘤，黑素瘤，非小细胞肺癌，肾细胞癌，肾癌，血液癌，前列腺癌，去势抵抗性前列腺癌，结肠癌，直肠癌，胃癌，食管癌，膀胱癌，头颈癌，甲状腺癌，乳腺癌，三阴性乳腺癌，卵巢癌，宫颈癌，肺癌，泌尿道上皮癌，胰腺癌，胶质母细胞瘤，肝细胞癌，骨髓瘤，多发性骨髓瘤，白血病，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，骨髓增生异常综合征，脑癌，cns癌症，恶性神经胶质瘤，或它们的任意组合。在某些实施方案中，刺激的抗原特异性t细胞应答特异性针对肿瘤相关抗原(taa)。
在一些方面中，本公开提供通过向患有下述的受试者施用有效量的mnk-特异性抑制剂而抑制免疫抑制信号传导途径的方法：实体瘤，黑素瘤，非小细胞肺癌，肾细胞癌，肾癌，血液癌，前列腺癌，去势抵抗性前列腺癌，结肠癌，直肠癌，胃癌，食管癌，膀胱癌，头颈癌，甲状腺癌，乳腺癌，三阴性乳腺癌，卵巢癌，宫颈癌，肺癌，泌尿道上皮癌，胰腺癌，胶质母细胞瘤，肝细胞癌，骨髓瘤，多发性骨髓瘤，白血病，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，骨髓增生异常综合征，脑癌，cns癌症，恶性神经胶质瘤，或它们的任意组合。在某些实施方案中，免疫抑制信号涉及pd-1，pd-l1，pd-l2，ctla4，cd80，cd86，b7-h3，b7-h4，hvem，btla，kir，lag3，gal9，tim3，2b4，腺苷，a2ar，tgfβ，il-10，il-35，或它们的任意组合。在某些实施方案中，免疫抑制信号涉及一种或多种在具有疾病相关的免疫抗性的受试者中产生的失调的免疫检查点蛋白，其中所述受试者需要使用mnk-特异性抑制剂的治疗，以调节不适当的免疫抑制信号传导途径，从而诱导或增强针对所述疾病(例如，癌症)的免疫应答。在具体的实施方案中，与免疫抗性相关的免疫抑制组分是pd-1，pd-l1，lag3，il-10，treg细胞，或它们的组合。在某些实施方案中，被抑制的免疫抑制信号传导途径是pd-1途径或lag3途径。例如，mnk-特异性抑制剂可以下调pd-1、pd-l1、lag3或所有三种的表达或间接地抑制它们，由此抑制这些免疫抑制途径。
在其他实施方案中，免疫抑制信号包括过量的调节t细胞(tregs)，其中mnk-特异性抑制剂改变t效应(te)细胞与treg细胞的比例。在某些实施方案中，与不存在抑制剂相比，在存在mnk-特异性抑制剂的条件下，te细胞与treg细胞之比增大。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂抵消下调或减少mhc/hla分子(例如，mhc/hlaii类)的表达而使抗原呈递最小化的免疫抑制信号，其中所述mnk-特异性抑制剂通过调节(即，增加)mhc/hla分子(如mhc/hlaii类分子)的水平而促进或增强抗原呈递。
在另一些方面中，本公开提供通过向患有下述的受试者施用有效量的mnk-特异性抑制剂而促进内源性抗癌免疫性的方法：实体瘤，黑素瘤，非小细胞肺癌，肾细胞癌，肾癌，血液癌，前列腺癌，去势抵抗性前列腺癌，结肠癌，直肠癌，胃癌，食管癌，膀胱癌，头颈癌，甲状腺癌，乳腺癌，三阴性乳腺癌，卵巢癌，宫颈癌，肺癌，泌尿道上皮癌，胰腺癌，胶质母细胞瘤，肝细胞癌，骨髓瘤，多发性骨髓瘤，白血病，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，骨髓增生异常综合征，脑癌，cns癌症，恶性神经胶质瘤，或它们的任意组合.术语“内源性”是指在受试者中存在的抗癌免疫应答，与外源获得性的相反，例如，通过免疫球蛋白治疗、适应性t细胞治疗，遗传修饰的t细胞治疗(例如，嵌合抗原受体，重组t细胞受体)。在某些实施方案中，所述被促进的内源性抗癌症免疫性包括抗原特异性t细胞应答。
在另一些方面中，本公开提供通过向患有下述的受试者施用有效量的mnk-特异性抑制剂而抑制疾病相关的免疫抗性的方法：实体瘤，黑素瘤，非小细胞肺癌，肾细胞癌，肾癌，血液癌，前列腺癌，去势抵抗性前列腺癌，结肠癌，直肠癌，胃癌，食管癌，膀胱癌，头颈癌，甲状腺癌，乳腺癌，三阴性乳腺癌，卵巢癌，宫颈癌，肺癌，泌尿道上皮癌，胰腺癌，胶质母细胞瘤，肝细胞癌，骨髓瘤，多发性骨髓瘤，白血病，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，骨髓增生异常综合征，脑癌，cns癌症，恶性神经胶质瘤，或它们的任意组合。在某些实施方案中，所述疾病相关的免疫抗性由pd-1、pd-l1或lag3免疫抑制信号传导途径调节。在具体的实施方案中，免疫抗性的抑制包括下调、减少表达或间接抑制pd-1、pd-l1、lag3或它们的组合。在某些其他实施方案中，免疫抗性的抑制包括下调或间接抑制pd-l2，ctla4，cd80，cd86，b7-h3，b7-h4，hvem，btla，kir，lag3，gal9，tim3，2b4，腺苷，a2ar，tgfβ，il-10，il-35，精氨酸酶，ido，或它们的任意组合。
本文所述的用于免疫调节的组合物和方法还可以用在感染或传染病的情形中(例如，病毒、细菌、真菌、寄生虫、原生动物、蠕虫)。在某些方面中，本公开提供用于下述的方法：(1)增加免疫细胞的活性；(2)减少免疫细胞的下调；(3)诱导、增强或延长免疫应答；(4)刺激抗原特异性t细胞应答；(5)抑制免疫抑制信号传导途径；(6)促进内源性抗传染剂的免疫性；(7)增强疫苗诱导的免疫应答；或(8)抑制疾病相关的免疫抗性；所述方法通过向具有感染(诸如慢性感染)的受试者(例如，人)施用有效量的mnk-特异性抑制剂而进行。
传染病包括与传染剂相关的那些，并且包括多种细菌(例如，致病性大肠杆菌(e.coli)，鼠伤寒沙门氏菌(s.typhimurium)，铜绿假单胞菌(p.aeruginosa)，炭疽芽孢杆菌(b.anthracis)，肉毒梭菌(c.botulinum)，艰难梭菌(c.difficile)，产气荚膜梭菌(c.perfringens)，幽门螺杆菌(h.pylori)，霍乱弧菌(v.cholerae)，利斯特氏菌种(listeriaspp.)，立克次体菌种(rickettsiaspp.)，衣原体菌种(chlamydiaspp.)，葡萄球菌(staphylococci)，链球菌(streptococci)，肺炎球菌(pneumonococci)，脑膜炎球菌(meningococci)等)、分枝杆菌(mycobacteria)和寄生虫(包括原生动物(protozoa)、锥虫(trypanosome)、疟原虫(malaria)、贾第虫(giardia)、弓形体(toxoplasma)的任意已知的寄生虫成员)中的任一种。感染病毒包括真核病毒，如腺病毒(adenovirus)，布尼亚病毒(bunyavirus)，巨细胞病毒(cytomegalovirus)，肠病毒(enterovirus)，埃巴病毒(epstein-barrvirus)，黄病毒(flavivirus)(例如，丙型肝炎病毒(hepatitiscvirus，hcv)，乙型肝炎病毒(hepatitisbvirus，hbv)，甲型肝炎病毒(hepatitisavirus)，戊型肝炎病毒(hepatitisevirus)，日本脑炎病毒(japaneseencephalitisvirus))，疱疹病毒(herpesvirus)，乳多泡病毒(papovavirus)，乳头瘤病毒(papillomavirus)(例如，hpv)，副粘病毒(paramyxovirus)(例如，麻疹病毒(measlesvirus)，腮腺炎病毒(mumpsvirus))，微小核糖核酸病毒(picornavirus)(例如，鼻病毒(rhinovirus))，脊髓灰质炎病毒(poliovirus)，风疹病毒(rubellavirus)，弹状病毒(rhabdovirus)(例如，狂犬病病毒(rabies))，正粘病毒(orthomyxovirus)(例如，流感病毒(influenza))，痘病毒(poxvirus)(例如，牛痘(vaccinia))，呼肠病毒(reovirus)，反转录病毒(retrovirus)，慢病毒(lentivirus)(例如，人免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiencyvirus，hiv))，人t白血病病毒(htlv1，htlv2)，水痘带状疱疹病毒(varicella-zostervirus)，动物传染病病毒(zoonoticviruses)(例如，严重急性呼吸器官综合征(severeacuterespiratorysyndrome，sars)，埃博拉病毒(ebolavirus)，和西尼罗病毒(westnilevirus))等等。传染性真菌包括，例如，念珠菌(candida)，隐球菌(cryptococcus)和曲霉菌(aspergillus)。在某些实施方案中，用于增加免疫细胞的活性或减少免疫细胞的下调的方法包括向感染了细胞溶质病原体的受试者施用有效量的本公开的mnk-特异性抑制剂，所述细胞溶质病原体的抗原被加工并且由mhc或hlai类分子展示。
在任一前述实施方案中，免疫细胞是淋巴细胞，诸如t细胞(例如，cd8+效应t细胞，cd4+辅助t细胞，或调节t细胞)，天然杀伤细胞，树突细胞，骨髓细胞(如单核细胞，巨噬细胞，嗜酸性粒细胞，肥大细胞，嗜碱性粒细胞，或粒细胞)，或它们的任意组合。在具体的实施方案中，免疫细胞是t细胞，如cd8+效应t细胞(也称为细胞毒性t淋巴细胞或ctl)。
在任一前述实施方案中，免疫应答由t细胞、天然杀伤细胞、树突细胞、骨髓细胞或它们的任意组合调节。在某些实施方案中，免疫应答由t细胞调节，诸如由cd8+效应t细胞调节。
在任一前述实施方案中，免疫抗性是针对t细胞、天然杀伤细胞、树突细胞、骨髓细胞或它们的任意组合的抗性。在某些实施方案中，免疫抗性针对t细胞，如cd8+效应t细胞调节。
在本文所述的组合物和方法的任一方面，免疫细胞或免疫应答的活性增加或诱导、增强、延长或刺激，或免疫抑制信号传导途径或免疫抗性的抑制，可以使用本领域已知的方法测量，例如，通过测量免疫细胞增殖，免疫细胞活性/效应子功能，免疫细胞持久性，抗体产生，或细胞因子产生。例如，增加的t细胞活性可以通过下述证实：在存在和不存在mnk-特异性抑制剂的条件下，增加的t细胞增殖(3h-胸苷结合测定，cfse稀释测定)，增强的t细胞共刺激，t细胞激活细胞表面标记的表达(流式细胞术)，细胞溶解活性(51铬释放测定)，增加的ifnγ或il-2分泌(elisa，流式细胞术)。
在其他方面中，本公开提供用于促进增强的抗原特异性免疫应答的方法，其中所述方法包括向有此需要的受试者施用有效量的mnk-特异性抑制剂和抗原(例如，疫苗)，其中与mnk-特异性抑制剂组合的抗原特异性的免疫应答比不存在使用mnk-特异性抑制剂的治疗更有效。抗原特异性免疫应答的功效可以使用本领域已知的方法通过下述确定：例如，通过免疫细胞激活，免疫细胞效应子功能，免疫细胞增殖，免疫细胞存活，免疫细胞，免疫细胞细胞因子产生。在某些实施方案中，抗原特异性免疫应答是t细胞应答。用于本文时，术语“疫苗”是指诱导抗原特异性免疫应答的生物制剂。疫苗包含抗原，其可以是肽、多肽或蛋白，或其免疫原性片段；糖蛋白或其免疫原性片段；编码肽、多肽、蛋白或糖蛋白的核酸或其免疫原性片段；糖脂；碳水化合物或包含碳水化合物的分子；脂质分子；或细胞或细胞制剂。在某些实施方案中，疫苗包含编码抗原的多核苷酸；包含所述多核苷酸的重组表达载体；其中已经引入抗原或编码所述抗原的多核苷酸的免疫细胞或其他细胞，细胞(活的，减毒的或杀死的)，细胞膜制剂，细胞器官制剂，或细胞的外核体。疫苗可以是预防性的或治疗性的。疫苗可以针对传染剂或内源性细胞(例如，癌细胞)。在某些实施方案中，疫苗特异性针对癌细胞抗原或肿瘤相关的抗原。在某些实施方案中，疫苗抗原包括mhc(hla)i类表位，mhc(hla)ii类表位，或它们的组合。
“治疗("treatment,""treating")”或“改善”是指受试者(即，患者)的疾病、病症或病况的医学管理，其可以是治疗性的、预防性的/预防治疗或它们的组合治疗。治疗可以改善或降低疾病的至少一种症状的严重性，延缓疾病的恶化或进展，或延缓或防止另外相关的疾病的发作。“降低发展疾病的风险”是指防止或延缓疾病的发作或所述疾病(例如，癌症)的一种或多种症状的复发。在某些实施方案中，本公开的mnk-特异性抑制剂提供的免疫调节辅助或加强治疗方案或辅助或加强宿主生物体的免疫系统。
“患者”或“受试者”包括动物，如人，母牛，马，绵羊，小羊，猪，鸡，火鸡，鹌鹑，猫，狗，小鼠，大鼠，兔或豚鼠。动物可以是哺乳动物，如非灵长动物和灵长动物(例如，猴和人)。在一个实施方案中，患者是人，诸如人婴儿、儿童、青少年或成年人。
本公开的mnk-特异性抑制剂或其药用盐，还可以与一种或多种另外的治疗剂或分案的施用同时施用，在其施用之前施用或在其施用之后施用。所述组合疗法包括施用包含本公开的mnk-特异性抑制剂和一种或多种另外的活性剂(例如，免疫抑制组分的抑制剂)的单一药物剂量制剂，以及以其自身的分开的药物剂量制剂施用本公开的mnk-特异性抑制剂和每种活性剂。例如，本公开的mnk-特异性抑制剂和另一种活性剂可以在单一口服剂量组合物(如片剂或胶囊或液体)中一起施用给患者，或每种药剂可以以分开的口服剂量制剂施用，或每种药剂可以通过不同的施用途径(例如，口服和肠胃外)施用。另外的活性剂可以是本领域接受作为特定疾病状态或病症(如在癌症或感染中(例如，疫苗，化疗剂))的标准治疗或新出现的治疗(例如，针对一种或多种免疫抑制组分的抗体)的活性剂。当使用分开的剂量制剂时，本公开的mnk-特异性抑制剂和一种或多种另外的活性剂可以基本上同一时间施用，即，同时施用，或在分开的错开的时间施用，即，顺序施用；理解组合疗法包括所有这些方案。本公开的mnk-特异性抑制剂的施用可以作为单一剂量，或施用可以发生多次，其中给予有此需要的受试者多个剂量。
在某些实施方案中，包含mnk-特异性抑制剂和免疫抑制组分的抑制剂的组合(每一种可以逐一(顺序地)、同时或一起施用)用于治疗受试者(例如，人)中的疾病(如癌症或感染)。例如，可用于治疗癌症或传染病的组合可以包含式i，ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va，vb，vi，viia或viib的任一种mnk-特异性抑制剂，其与下述组合：(a)特异性针对pd-1的抗体，如pidilizumab，纳武单抗，或派姆单抗；(b)特异性针对pd-l1的抗体，如mdx-1105，bms-936559，medi4736，mpdl3280a，或msb0010718c；(c)特异性针对ctla4的抗体，如替西木单抗或伊匹单抗；(d)化疗剂，如维罗非尼，达拉非尼，曲美替尼，考比替尼，舒尼替尼，埃罗替尼，紫杉醇，或多西他赛；(e)抗-cd137(4-1bb)抗体，如urelumab；(f)抗-cd134(ox-40)抗体，如mdi6469(ox-40激动剂)；(g)来那度胺或泊马度胺；或(h)它们的任意组合。
在任一前述实施方案中，治疗或免疫调节的方法包括使用进一步包含化疗剂的组合，其中所述组合的每种组分可以逐一(顺序地)、同时或一起施用，如本文所述。例如，式i，ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va，vb，vi，viia或viib的任一种mnk-特异性抑制剂可以与免疫抑制组分的抑制剂组合，诸如(a)特异性针对pd-1的抗体，如pidilizumab，纳武单抗，或派姆单抗；(b)特异性针对pd-l1的抗体，如mdx-1105，bms-936559，medi4736，mpdl3280a，或msb0010718c；(c)特异性针对ctla4的抗体，如替西木单抗或伊匹单抗；(d)抗-cd134(ox-40)抗体，如mdi6469(ox-40激动剂)；(e)来那度胺或泊马度胺；或(f)抗-cd137(4-1bb)抗体，如urelumab；和化疗剂，如维罗非尼，达拉非尼，曲美替尼，考比替尼，舒尼替尼，埃罗替尼，紫杉醇，多西他赛等等。
在任一前述实施方案中，治疗或免疫调节的方法包括使用进一步包含含有特异性针对癌症抗原(例如，肿瘤相关抗原(taa))或表达在感染的细胞上的抗原或二者的car的t细胞的组合，其中所述组合的每种组分可以逐一(顺序地)、同时或一起施用，如本文所述。例如，式i，ia，iia，iib，iiia，iiib，iva，ivb，va，vb，vi，viia或viib的任一种mnk-特异性抑制剂可以与免疫抑制组分的抑制剂组合，诸如(a)特异性针对pd-1的抗体，如pidilizumab，纳武单抗，或派姆单抗；(b)特异性针对pd-l1的抗体，如mdx-1105，bms-936559，medi4736，mpdl3280a，或msb0010718c；(c)特异性针对ctla4的抗体，如替西木单抗或伊匹单抗；(d)抗-cd134(ox-40)抗体，如mdi6469(ox-40激动剂)；(e)来那度胺或泊马度胺；或(f)抗-cd137(4-1bb)抗体，如urelumab；和包含特异性针对癌症抗原(例如，肿瘤相关抗原(taa))的car的t细胞，所car诸如cd3，ceacam6，c-met，egfr，egfrviii，erbb2，erbb3，erbb4，epha2，igf1r，gd2，o-乙酰基gd2，o-乙酰基gd3，ghrhr，ghr，flt1，kdr，flt4，cd44v6，cd151，ca125，cea，ctla-4，gitr，btla，tgfbr2，tgfbr1，il6r，gp130，lewisa，lewisy，tnfr1，tnfr2，pd1，pd-l1，pd-l2，hvem，mage-a，间皮蛋白(mesothelin)，ny-eso-1，psma，rank，ror1，tnfrsf4，cd40，cd137，tweak-r，ltβr，lifrβ，lrp5，muc1，osmrβ，tcrα，tcrβ，cd19，cd20，cd22，cd25，cd28，cd30，cd33，cd52，cd56，cd80，cd81，cd86，cd123，cd171，cd276，b7h4，tlr7，tlr9，ptch1，ptch1，robo1，α-甲胎蛋白(afp)，frizzled，ox40(还称为cd134)或cd79b；或包含特异性针对表达在感染的细胞上的抗原的car的t细胞，所述表达在感染的细胞上的抗原诸如来自下述的分子：腺病毒，布尼亚病毒，疱疹病毒(例如，埃巴病毒，巨细胞病毒)，乳多泡病毒，乳头瘤病毒(例如，人乳头瘤病毒，hpv)，副粘病毒属，微小核糖核酸病毒，弹状病毒(例如，狂犬病病毒)，正粘病毒(例如，流感病毒)，痘病毒(例如，牛痘)，呼肠病毒，反转录病毒，慢病毒属(例如，人免疫缺陷病毒，hiv)，黄病毒(flavivirus)(例如，丙型肝炎病毒(hepatitiscvirus)，hcv；乙型肝炎病毒(hepatitisbvirus)，hbv)。
在其他实施方案中，一个或多个剂量的mnk-特异性抑制剂与一个或多个剂量的免疫抑制组分的抑制剂以及任选地一个或多个剂量的化疗剂或包含特异性针对taa或表达在感染的细胞上的抗原的car的t细胞逐一(顺序地)、同时或一起施用。在另一些实施方案中，多个剂量的mnk-特异性抑制剂与多个剂量的免疫抑制组分的抑制剂以及多个剂量的化疗剂逐一(顺序地)、同时或一起施用。在另一些实施方案中，多个剂量的mnk-特异性抑制剂与一至约四个剂量的免疫抑制组分的抑制剂和一至约四个剂量的化疗剂逐一(顺序地)、同时或一起施用。在所有上述实施方案中，mnk-特异性抑制剂可以最先施用，或者免疫抑制组分的抑制剂可以最先施用，或化疗剂可以最先施用。
所述组合可以以组合试剂盒存在。短语“组合试剂盒”或“部件的试剂盒”，用在本文中意指用于施用本公开所述的mnk-特异性抑制剂、免疫抑制组分的抑制剂和任选地化疗剂的一种或多种药物组合物。当mnk-特异性抑制剂和免疫抑制组分的抑制剂一起施用时，组合试剂盒可以包含处在单一药物组合物中或处在分开的药物组合物(诸如片剂、小瓶或二者)中的mnk-特异性抑制剂和免疫抑制组分的抑制剂，和处在小瓶中的化疗剂。当mnk-特异性抑制剂与化疗剂一起施用时，组合试剂盒可以包含处在单一药物组合物中或处在分开的药物组合物(诸如片剂、小瓶或二者)中的mnk-特异性抑制剂和化疗剂，以及处在小瓶中的免疫抑制组分的抑制剂。当mnk-特异性抑制剂与免疫抑制组分的抑制剂和/或任选地化疗剂一起施用时，组合试剂盒将包含处在分开的药物组合物中的mnk-特异性抑制剂、免疫抑制组分的抑制剂和任选地化疗剂，其中mnk-特异性抑制剂、免疫抑制组分的抑制剂和任选地化疗剂处在单一包装中，或处在独立包装的分开的药物组合物中。
在一个方面中，提供部件的试剂盒，其包括下述组分：(a)在药用载体、稀释剂或赋形剂中的mnk-特异性抑制剂；(b)在药用载体、稀释剂或赋形剂中的免疫抑制组分的抑制剂；和任选地，(c)在药用载体、稀释剂或赋形剂中的化疗剂。
在某些实施方案中，部件的试剂盒包括下述组分：(a)在药用载体、稀释剂或赋形剂中的mnk-特异性抑制剂；(b)在药用载体、稀释剂或赋形剂中的免疫抑制组分的抑制剂；和任选地，(c)在药用载体、稀释剂或赋形剂中的化疗剂，其中所述组分以适于顺序地、分开地和/或同时施用的形式提供。
在某些实施方案中，部件的试剂盒包括：(1)第一容器，其包含在药用载体、稀释剂或赋形剂中的mnk-特异性抑制剂；和(2)第二容器，其包含在药用载体、稀释剂或赋形剂中的免疫抑制组分的抑制剂；和任选地，(3)第三容器，其包含在药用载体、稀释剂或赋形剂中的化疗剂。组合试剂盒还可以提供使用说明，诸如剂量和施用的使用说明。所述剂量和施用的使用说明可以是提供给医师的那种，例如，由药品标签提供，或者它们可以是由医师提供的那种，诸如给患者的使用说明。
术语“负荷剂量”用在本文中应该理解为意指mnk-特异性抑制剂或免疫抑制组分的抑制剂或化疗剂的单次剂量或短持续时间方案，其具有高于施用给受试者的维持剂量的剂量，例如，以快速增加所述药物的血液浓度水平。在某些实施方案中，用于本文所述的应用的短持续时间方案为一至约14天；一至约七天；一至约三天；约三天；约两天，或一天。在一些实施方案中，“负荷剂量”可以使化合物(例如，本公开的mnk-特异性抑制剂)的血液浓度增加至治疗有效水平。在一些实施方案中，“负荷剂量”可以与化合物的维持剂量协同地使所述化合物(例如，本公开的mnk-特异性抑制剂)的血液浓度增加至治疗有效水平。“负荷剂量”可以每天施用一次，或每天施用多于一次(例如，每天多至四次)。在某些实施方案中，“负荷剂量”每天施用一次。在一些实施方案中，负荷剂量的量是维持剂量的二至约100倍；约二至约十倍；约二至约五倍；或约二倍至约三倍；约四倍；或约五倍。在另一些实施方案中，负荷剂量在第一天至大约第七天施用；第一天至大约第五天施用；第一天至大约第三天施用；施用一天；施用约两天；施用约三天，之后是维持剂量给药方案。
术语“维持剂量”用于本文时应该理解为意指连续施用的(即，至少两次)剂量，其旨在缓慢升高化合物(例如，本公开的mnk-特异性抑制剂)的血液浓度水平至治疗有效水平，或维持所述治疗有效水平需要的时间段(例如，数小时、数天、数周、数月、数年)。在某些实施方案中，维持剂量每天施用一次或两次，并且每天的维持剂量低于总的每天负荷剂量。
用于本文时，术语“rna干扰剂”(rnai试剂)是指能够降低或抑制靶基因表达的短的单链或双链rna多核苷酸，典型地通过切割靶标mrna分子实现。rnai试剂的非限制性实例包括短干扰rna(sirna)，短发夹rna(shrna)，microrna(mirna)，和piwi-相互作用rna(pirna)。
在任一前述提及的实施方案中，所述方法包括施用mnk-特异性抑制剂和任选地诱导或增强抗癌反应的化合物。在某些实施方案中，诱导或增强的抗癌反应是抗肿瘤反应。在其他实施方案中，诱导或增强抗癌反应的治疗是疫苗，免疫抑制信号的抑制剂，酪氨酸激酶抑制剂，细胞毒性药剂，化疗剂或它们的任意组合。在某些实施方案中，诱导或增强抗癌反应的治疗是化疗剂，诸如b-raf抑制剂，mek抑制剂，vegf抑制剂，或vegfr抑制剂。
用于本文时，术语"b-raf抑制剂"是指减少或抑制b-raf活性的任意药剂，也称为b-raf原癌基因。b-raf是丝氨酸/苏氨酸激酶，其在调节map激酶/erk信号传导途径方面起作用，所述map激酶/erk信号传导途径影响细胞分裂、分化和分泌。b-raf抑制剂的非限制性实例包括索拉非尼(sorafenib)，维罗非尼和达拉非尼。在某些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与b-raf抑制剂(如索拉非尼，维罗非尼，达拉非尼，或它们的任意组合)组合使用。在其他实施方案中，mnk-特异性抑制剂与b-raf抑制剂和pd-1特异性抗体或其结合片段组合使用。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与b-raf抑制剂和pd-l1特异性抗体或其结合片段组合使用。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与b-raf抑制剂和ctla4特异性抗体或其结合片段、或融合蛋白组合使用。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与b-raf抑制剂和lag3特异性抗体或其结合片段、或融合蛋白组合使用。
用于本文时，术语"mek抑制剂"是指减少或抑制有丝分裂原激活蛋白激酶激酶酶mek1和/或mek2的活性的任何试剂。mek抑制剂的非限制性实例包括曲美替尼，司美替尼(selumetinib)，binimetinib，pd-325901，考比替尼，ci-1040，和pd035901。在某些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与mek抑制剂(如曲美替尼，司美替尼，binimetinib，pd-325901，考比替尼，ci-1040，pd035901，或它们的任意组合)组合使用。在其他实施方案中，mnk-特异性抑制剂与mek抑制剂和pd-1特异性抗体或其结合片段组合使用。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与mek抑制剂和pd-l1特异性抗体或其结合片段组合使用。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与mek抑制剂和ctla4特异性抗体或其结合片段、或融合蛋白组合使用。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与mek抑制剂和lag3特异性抗体或其结合片段、或融合蛋白组合使用。
用于本文时，术语“血管内皮生长因子抑制剂”或“vegf抑制剂”是指减少或抑制vegf活性的任意试剂。vegf是促血管生成因子，其促进血管发生、血管生成并增加血管渗透性。vegf可以指vegf-a，vegf-b，vegf-c，vegf-d，vegf-e，或它们的任意组合。vegf抑制剂的非限制性实例包括贝伐珠单抗(bevacizumab)，雷珠单抗(ranibizumab)，azd2171，大麻酚(cannbidiol)，thc，或它们的任意组合。在其他实施方案中，mnk-特异性抑制剂与vegf抑制剂和pd-1特异性抗体或其结合片段组合使用。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与vegf抑制剂和pd-l1特异性抗体或其结合片段组合使用。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与vegf抑制剂和ctla4特异性抗体或其结合片段、或融合蛋白组合使用。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与vegf抑制剂和lag3特异性抗体或其结合片段、或融合蛋白组合使用。
用于本文时，术语“血管内皮生长因子受体抑制剂”或“vegfr抑制剂”是指抑制vegf-特异性酪氨酸激酶受体vegfr1、vegfr2、vegfr3、或它们的任意组合的活性的任意试剂。vegfr抑制剂的非限制性实例包括阿昔替尼(axitinib)，舒尼替尼，伐他拉尼(vatalanib)，索拉非尼，gw-786034，cp-547632，ag-013736，乐伐替尼(lenvatinib)，莫特沙尼(motesanib)，帕唑帕尼，瑞戈非尼(regorafenib)，雷莫芦单抗(ramucirumab)，cdp-791，或它们的任意组合。在其他实施方案中，mnk-特异性抑制剂与vegfr抑制剂和pd-1特异性抗体或其结合片段组合使用。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与vegfr抑制剂和pd-l1特异性抗体或其结合片段组合使用。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与vegfr抑制剂和ctla4特异性抗体或其结合片段、或融合蛋白组合使用。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与vegfr抑制剂和lag3特异性抗体或其结合片段、或融合蛋白组合使用。
用于本文时，术语“酪氨酸激酶抑制剂”是指抑制酪氨酸激酶的任意试剂。酪氨酸激酶抑制剂包括在酪氨酸激酶的催化结合位点提供竞争性atp抑制的抑制剂和别构抑制剂。酪氨酸激酶抑制剂的非限制性实例包括阿昔替尼，伊马替尼(imatinib)，吉非替尼(gefitinib)，埃罗替尼，拉帕替尼(lapatinib)，索拉非尼，舒尼替尼，帕唑帕尼，凡德他尼(vandetanib)，和达沙替尼(dasatinib)。在某些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与酪氨酸激酶抑制剂(如伊马替尼，吉非替尼，埃罗替尼，拉帕替尼，索拉非尼，舒尼替尼，帕唑帕尼，凡德他尼，达沙替尼，或它们的任意组合)组合使用。在其他实施方案中，mnk-特异性抑制剂与酪氨酸激酶抑制剂和pd-1特异性抗体或其结合片段组合使用。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与酪氨酸激酶抑制剂和pd-l1特异性抗体或其结合片段组合使用。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与酪氨酸激酶抑制剂和ctla4特异性抗体或其结合片段、或融合蛋白组合施用。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与酪氨酸激酶抑制剂和lag3特异性抗体或其结合片段、或融合蛋白组合施用。
用于本文时，术语“细胞毒性剂”是指抑制细胞生长、抑制细胞增殖、导致细胞死亡等的任意药剂。在某些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与细胞毒性剂(如放线菌素(actinomycin)，博来霉素(belomycin)，普卡霉素(plicamycin)，丝裂霉素(mitomycin)，多柔比星(doxorubicin)，柔红霉素(daunorubicin)，表柔比星(epirubicin)，伊达比星(idarubicin)，吡柔比星(pirarubucin)，阿柔比星(aclarubicin)，米托蒽醌(mitoxantrone)或它们的组合)组合使用。抗有丝分裂剂或抗微管剂可以是紫杉醇，多西他赛，长春碱(vinblastine)，长春新碱(vincristine)，长春地辛(vindesine)，长春瑞滨(vinorelbine)，或它们的组合。在其他实施方案中，mnk-特异性抑制剂与细胞毒性剂和pd-1特异性抗体或其结合片段组合使用。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与细胞毒性剂和pd-l1特异性抗体或其结合片段组合使用。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与细胞毒性剂和ctla4特异性抗体或其结合片段、或融合蛋白组合使用。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与细胞毒性剂和lag3特异性抗体或其结合片段、或融合蛋白组合使用。
在某些实施方案中，mnk-特异性抑制剂的免疫调节与至少一种抗癌剂一起使用。抗癌剂包括化疗药。化疗剂包括，例如，染色质功能的抑制剂，拓扑异构酶抑制剂，微管抑制药，dna损坏药，抗代谢药(如叶酸拮抗剂，嘧啶类似物，嘌呤类似物，和糖修饰的类似物)，dna合成抑制剂，dna相互作用剂(如嵌入试剂)，或dna修复抑制剂。在其他实施方案中，mnk-特异性抑制剂与化疗剂和pd-1特异性抗体或其结合片段组合使用。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与化疗剂和pd-l1特异性抗体或其结合片段组合使用。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与化疗剂和ctla4特异性抗体或其结合片段、或融合蛋白组合使用。在另一些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与化疗剂和lag3特异性抗体或其结合片段、或融合蛋白组合使用。
化疗剂包括，例如，下述各组：抗代谢药/抗癌剂，如嘧啶类似物(5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)，氟尿苷(floxuridine)，卡培他滨(capecitabine)，吉西他滨(gemcitabine)和阿糖胞苷(cytarabine))和嘌呤类似物，叶酸拮抗剂和相关的抑制剂(甲氨喋呤(methotrexate)，培美曲塞(pemetrexed)，巯嘌呤(mercaptopurine)，硫鸟嘌呤(thioguanine)，喷司他丁(pentostatin)和2-氯脱氧腺苷(克拉屈滨(cladribine)))；抗增生/抗有丝分裂剂，包括天然前体药物，如长春生物碱(vincaalkaloids)(长春碱，长春新碱，和长春瑞滨)，微管破坏剂，如紫杉烷(taxane)(紫杉醇，多西他赛)，长春新碱(vincristin)，长春碱(vinblastin)，诺考达唑(nocodazole)，埃坡霉素(epothilones)，艾日布林(eribulin)和诺维本(navelbine)；表鬼臼毒素(epidipodophyllotoxins)(依托泊苷(etoposide)，替尼泊苷(teniposide))；dna损坏剂(放线菌素(actinomycin)，安吖啶(amsacrine)，蒽环霉素(anthracyclines)，博来霉素(bleomycin)，白消安(busulfan)，喜树碱(camptothecin)，卡铂(carboplatin)，苯丁酸氮芥(chlorambucil)，顺铂(cisplatin)，环磷酰胺(cyclophosphamide)，环磷酰胺(cytoxan)，更生霉素(dactinomycin)，柔红霉素(daunorubicin)，多柔比星(doxorubicin)，表柔比星(epirubicin)，六甲基蜜胺奥沙利铂(hexamethylmelamineoxaliplatin)，异环磷酰胺(iphosphamide)，美法仑(melphalan)，merchlorehtamine，丝裂霉素(mitomycin)，米托蒽醌(mitoxantrone)，亚硝基脲(nitrosourea)，普卡霉素(plicamycin)，丙卡巴肼(procarbazine)，紫杉醇(taxol)，泰索帝(taxotere)，替莫唑胺(temozolamide)，替尼泊苷(teniposide)，三亚乙基硫代磷酰胺(triethylenethiophosphoramide)和依托泊苷(etoposide)(vp16))；dna甲基转移酶抑制剂(氮胞苷(azacytidine))；抗生素，如更生霉素(放线菌素d)，柔红霉素，多柔比星(阿霉素(adriamycin))，伊达比星(idarubicin)，蒽环霉素，米托蒽醌，博来霉素，普卡霉素(光辉霉素(mithramycin))和丝裂霉素；酶(l-天冬酰胺酶，其系统性代谢l-天冬酰胺，并且剥夺不具有合成其自身的天冬酰胺的能力的细胞)；抗血小板剂；抗增生/抗有丝分裂烷化剂，如氮芥(nitrogenmustards)(氮芥(mechlorethamine)，环磷酰胺和类似物，美法仑，苯丁酸氮芥)，氮丙啶类(ethylenimines)和甲基蜜胺(methylmelamines)(六甲基蜜胺(hexamethylmelamine)和塞替哌(thiotepa))，烷基磺酸盐(白消安)，亚硝基脲(卡莫司汀(carmustine)(bcnu)和类似物，链佐星(streptozocin))，三氮烯(triazenes)(达卡巴嗪(dacarbazine)(dtic))；抗增生药/抗有丝分裂抗代谢药，如叶酸类似物(甲氨喋呤)；铂配位络合物(顺铂，卡铂)，丙卡巴肼，羟基脲(hydroxyurea)，米托坦(mitotane)，氨鲁米特(aminoglutethimide)；激素类，激素类似物(雌激素，他莫昔芬(tamoxifen)，戈舍瑞林(goserelin)，比卡鲁胺(bicalutamide)，尼鲁米特(nilutamide))和芳香酶抑制剂(来曲唑(letrozole)，阿那曲唑(anastrozole))；抗凝血剂(anticoagulants)(肝素，合成的肝素盐和凝血酶的其他抑制剂)；纤维蛋白溶解剂(如组织型纤溶酶原激活物，链激酶(streptokinase)和尿激酶(urokinase))，阿司匹林(aspirin)，双嘧达莫(dipyridamole)，噻氯匹定(ticlopidine)，氯吡格雷(clopidogrel)，阿昔单抗(abciximab)；抗迁移剂(antimigratoryagents)；抗分泌剂(breveldin)；免疫抑制药(环胞菌素(cyclosporine)，他罗利姆(tacrolimus)(fk-506)，西罗莫司(sirolimus)(雷帕霉素(rapamycin))，硫唑嘌呤(azathioprine)，麦考酚酸酯(mycophenolatemofetil))；抗-血管生成化合物(tnp470，染料木素(genistein)，泊马度胺)和生长因子抑制剂(血管内皮生长因子(vegf)抑制剂，如ziv-aflibercept；成纤维细胞生长因子(fgf)抑制剂)；凋亡蛋白抑制剂(iap)拮抗剂(birinapant)；组蛋白脱乙酰基酶(hdac)抑制剂(伏立诺他(vorinostat)，罗米地辛(romidepsin)，西达本胺(chidamide)，帕比司他(panobinostat)，mocetinostat，abexinostat，贝利司他(belinostat)，恩替诺特(entinostat)，resminostat，givinostat，quisinostat，sb939)；蛋白酶体抑制剂(艾沙佐米(ixazomib))；血管紧张素受体阻断剂(angiotensinreceptorblocker)；一氧化氮供体；反义寡核苷酸；抗体(曲妥单抗(trastuzumab)，帕尼单抗(panitumumab)，帕妥珠单抗(pertuzumab)，西妥昔单抗(cetuximab)，阿达木单抗(adalimumab)，戈利木单抗(golimumab)，英利昔单抗(infliximab)，利妥昔单抗(rituximab)，奥瑞珠单抗(ocrelizumab)，奥法木单抗(ofatumumab)，obinutuzumab，阿仑单抗(alemtuzumab)，阿昔单抗(abciximab)，atlizumab，达利珠单抗(daclizumab)，地舒单抗(denosumab)，依法珠单抗(efalizumab)，埃罗妥珠单抗(elotuzumab)，罗维珠单抗(rovelizumab)，卢利珠单抗(ruplizumab)，乌司奴单抗(ustekinumab)，维西珠单抗(visilizumab)，吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumabozogamicin)，brentuximbvedotin)；嵌合抗原受体；细胞周期抑制剂(黄酮吡多(flavopiridol)，roscovitine，苔藓抑素-1(bryostatin-1))和分化诱导剂(维甲酸(tretinoin))；mtor抑制剂，拓扑异构酶抑制剂(多柔比星(阿霉素)，安吖啶，喜树碱，柔红霉素，更生霉素，eniposide，表柔比星，依托泊苷，伊达比星，伊立替康(irinotecan)(cpt-11)和米托蒽醌，托泊替康(topotecan)，伊立替康)，皮质类固醇(可的松(cortisone)，地塞米松(dexamethasone)，羟化可的松(hydrocortisone)，甲泼尼龙(methylpednisolone)，泼尼松(prednisone)，和泼尼松龙(prenisolone))；parp抑制剂(niraparib，奥拉帕利(olaparib))；粘着斑激酶(fak)抑制剂(defactinib(vs-6063)，vs-4718，vs-6062，gsk2256098)；生长因子信号转导激酶抑制剂(西地尼布(cediranib)，galunisertib，rociletinib，凡德他尼，阿法替尼(afatinib)，egf816，azd4547)；c-met抑制剂(capmatinib，inc280)；alk抑制剂(塞立替尼(ceritinib)，克里唑替尼(crizotinib))；线粒体功能障碍诱导剂，毒素，如霍乱毒素(choleratoxin)，蓖麻毒蛋白(ricin)，假单胞菌外毒素(pseudomonasexotoxin)，百日咳博德特菌腺苷酸环化酶毒素(bordetellapertussisadenylatecyclasetoxin)，或白喉毒素(diphtheriatoxin)，和胱天蛋白酶激活剂(caspaseactivator)；和染色质破坏剂。
在某些实施方案中，化疗药是b-raf抑制剂，mek抑制剂，vegf抑制剂，vegfr抑制剂，酪氨酸激酶抑制剂，和抗有丝分裂剂，或它们的任意组合。在一个具体的实施方案中，化疗药是维罗非尼，达拉非尼，曲美替尼，考比替尼，舒尼替尼，埃罗替尼，紫杉醇，多西他赛，或它们的任意组合。
在某些实施方案中，诱导或增强抗癌反应的治疗，例如，疫苗，免疫抑制信号的抑制剂，b-raf抑制剂，mek抑制剂，vegf抑制剂，vegfr抑制剂，酪氨酸激酶抑制剂，细胞毒性剂，化疗药，或它们的任意组合，与mnk-特异性抑制剂组合用于本文所述的免疫调节方法中，其中所述诱导或增强抗癌反应的治疗不拮抗、减少、减弱或降低mnk-特异性抑制剂对一种或多种抑制性免疫检查点分子的抑制活性。与mnk-特异性抑制剂的拮抗组合可以通过测量使用或不使用诱导或增强抗癌反应的治疗时t细胞激活的水平(例如，如本文实施例2所述)而确定，t细胞激活的水平作为mnk-特异性抑制剂对一种或多种抑制性免疫检查点分子的抑制活性的读出值。在某些实施方案中，mnk-特异性抑制剂与诱导或增强抗癌反应的治疗的组合不拮抗所述mnk-特异性抑制剂针对一种或多种抑制性免疫检查点分子的抑制性活性，或仅使所述mnk-特异性抑制剂针对一种或多种抑制性免疫检查点分子的抑制活性减少小于约25％，20％，15％，10％，5％，2％，1％，0.5％，0.25％，或0.1％。
在感染或传染病的情形中，mnk-特异性抑制剂的免疫调节与抗病毒剂(例如，抗-hiv剂)、抗生素药剂、抗微生物剂、抗寄生虫剂或抗真菌剂组合使用。抗-hiv药的实例包括，例如，反转录酶抑制剂(例如，azt，ddl，3tc，和d4t)，蛋白酶抑制剂(例如，甲磺酸沙奎那韦(saquinavirmesylate)，利托那韦(ritonavir)，甲磺酸奈芬那韦(nelfinavirmesylate)，氨普那韦(amprenavir)，甲磺酸地拉韦定(delavirdinemesylate)，沙奎那韦(saquinavir)，和洛匹那韦(lopinavir)/利托那韦)或ccr5受体拮抗剂。抗病毒剂包括，例如，抗疱疹病毒剂，抗流感病毒即，干扰素-α和β，或多种免疫球蛋白。
mnk-特异性抑制剂的免疫调节可以与抗病毒疫苗、抗细菌疫苗、抗真菌疫苗、抗寄生虫疫苗一起使用，或者与此类疫苗一起制成制剂。用于传染病的疫苗包括，例如，脊髓灰质炎菌苗，麻疹疫苗，日本脑炎疫苗(japaneseencephalitisvaccine)，bcg疫苗，三联疫苗，腮腺炎病毒疫苗，水痘病毒疫苗，流感疫苗，甲型肝炎疫苗(hepatitisavaccine)，乙型肝炎疫苗(hepatitisbvaccine)，hiv疫苗，疟疾疫苗，和霍乱疫苗。
“有此需要的受试者”是指有风险、或患有易于用本文提供的化合物或其组合物治疗或改善的疾病、病症或病况(例如，过度增生病症，如癌症，慢性感染)的受试者。需要施用本文所述的治疗剂的受试者包括怀疑患有癌症的受试者，表现出已有癌症的受试者，接受癌症疫苗的受试者，怀疑感染了传染剂的受试者，表现出感染或传染病的受试者，或接受针对传染剂的疫苗的受试者。受试者可以是能够发展癌症或被感染的任意生物体，如人，宠物，牲畜，表演动物(showanimals)，动物园样本，或其他动物。例如，受试者可以是人，非人灵长动物，狗，猫，兔，马等。在某些实施方案中，有需要的受试者是人。在具体的实施方案中，有需要的受试者患有与免疫抗性相关的疾病，诸如癌症或慢性感染。
在任一前述实施方案中，向受试者施用有效量的包含mnk-特异性抑制剂(例如，作为结构(i)的化合物)的药物组合物，所述量足以抑制mnk-特异性的活性并减少免疫抑制，并且优选地对所述受试者具有可接受的毒性。本领域技术人员能够容易地确定适当的浓度和剂量。
mnk-特异性抑制剂或其药用盐异治疗有效量施用，其将取决于多种因素而变化，包括所用的具体化合物的活性；化合物的带隙稳定性和作用时长；患者的年龄、体重、一般健康、性别和饮食；施用的模式和时间；排泄率；药物组合；特定的病症或病况的严重性；和受试者正进行的治疗。
“有效量”或“治疗有效量”是指本文所述的mnk-特异性抑制剂在施用给哺乳动物(例如，人)时足以实现本文定义的免疫抑制的缓解从而辅助治疗所述哺乳动物(如人)中的疾病的量。组成“治疗有效量”的mnk-特异性抑制剂的量将随所述化合物、病况及其严重性、施用方式和被治疗的哺乳动物的年龄而变化，但是可以由本领域普通技术人员依据其自身的知识和依据本公开而常规确定。当提及单独施用的个体活性成分时，治疗有效剂量是指该单独的成分的记录。当提及组合时，治疗有效剂量是指导致治疗作用的多种活性成分的组合量，而不管是逐一、同时还是一起施用的。
向患有或有风险发展癌症、感染或传染病的受试者以治疗有效量或剂量施用治疗性mnk-特异性抑制剂和其药物组合物，它们增加免疫细胞的活性；诱导、增强或延长免疫应答；刺激抗原特异性t细胞应答；抑制免疫抑制信号传导途径；促进内源性抗癌或抗传染剂免疫性；或抑制本文提供的癌细胞或传染剂/感染的细胞的免疫抗性。所述剂量可以依据多种因素确定或调节，所述因素包括具体的治疗剂或药物组合物，施用途径，受试者状况，即，疾病阶段，病毒/细菌/真菌/寄生虫负荷，由疾病引起的症状的严重性，一般健康状况，以及年龄，性别和体重，和本领域技术人员明显可知的其他因素。类似地，用于治疗疾病或病症的治疗剂的记录可以按照医学领域技术人员理解的参数确定。
单一治疗作为抗癌治疗是充分的一个实例是在患者具有强的、内源性(已有的)抗癌免疫应答的情形中。例如，肿瘤可能具有大量的抗原特异性肿瘤浸润淋巴细胞(til)。但是，在肿瘤微环境内的活性抗癌免疫应答可以诱导肿瘤细胞和肿瘤相关的巨噬细胞表达下调抗癌免疫应答的免疫抑制性信号(例如，pd-l1)。加入免疫抑制信号的抑制剂，如mnk-特异性抑制剂，可以抑制肿瘤的适应性免疫抗性机制，并且通过内源性抗癌免疫应答(例如，til)允许肿瘤消退。在某些实施方案中，促进抗癌反应的单一治疗可以是mnk-特异性抑制剂，疫苗，b-raf抑制剂，mek抑制剂，vegf抑制剂，vegfr抑制剂，酪氨酸激酶抑制剂，细胞毒性剂，化疗药，或它们的任意组合。在某些实施方案中，免疫抑制信号组分的抑制剂是下述的抑制剂：mnk，pd-1，pd-l1，pd-l2，ctla4，cd80，cd86，b7-h3，b7-h4，hvem，btla，kir，lag3，gal9，tim3，2b4，腺苷，a2ar，tgfβ，il-10，il-35，精氨酸酶，ido，或它们的任意组合
在其他实例中，组合治疗可以用在具有弱的内源性抗癌免疫应答的患者的情形中。例如，由于肿瘤的免疫原性可能较低，肿瘤环境可能具有更低数量的til。从头诱导或增强抗癌反应的治疗可以促进或增加内源性抗癌免疫应答。但是，如使用单一治疗一样，这种抗癌免疫应答的功效可能收到免疫抑制信号组分(例如，pd-l1)上调的限制。例如，组合诱导或增强抗癌反应的治疗(“致敏”)与免疫抑制信号的抑制剂(“加强”)可以诱导、促进或提高肿瘤消退的可能性。备选地，组合治疗可以包括免疫抑制信号组分的抑制剂(“致敏”)和诱导或增强抗癌反应的药剂(“加强”)，所述组合治疗可以诱导或促进或提高肿瘤消退的可能性。组合诱导或增强抗癌反应的治疗(“致敏”)和免疫抑制信号组分的抑制剂或下调剂(“加强”)可以通过允许内源性抗肿瘤免疫应答按原样起作用而诱导肿瘤消退。在某些实施方案中，诱导或增强或促进抗癌反应的组合治疗可以是与下述中的一种或多种一起使用的mnk-特异性抑制剂：疫苗，b-raf抑制剂，mek抑制剂，vegf抑制剂，vegfr抑制剂，酪氨酸激酶抑制剂，细胞毒性剂，化疗药，或它们的任意组合。在某些实施方案中，米娜一抑制信号组分的抑制剂是下述的抑制剂：mnk，pd-1，pd-l1，pd-l2，ctla4，cd80，cd86，b7-h3，b7-h4，hvem，btla，kir，lag3，gal9，tim3，2b4，腺苷，a2ar，tgfβ，il-10，il-35，精氨酸酶，或ido。在某些实施方案中，组合治疗包括“致敏”和“加强”治疗，其中每个治疗一起或同时施用给受试者。在另一些实施方案中，在“致敏”治疗之后继续施用“加强”治疗。
通常，治疗剂以治疗有效量或剂量施用。治疗有效量或剂量将依据多种因素而不同，包括所选的施用途径，组合物的配制，患者反应，病况严重性，受试者体重，和开处方医师的判断。按个体患者需要，剂量可以随时间增加或减少。在某些情形中，患者开始被给予低剂量，然后该剂量增加至所述患者可耐受的有效剂量。另外，患者可以在确定的时间段内以特定的时间增量(如每天、每周、每两周、每月、每季度、每半年、每年等)被给予多个剂量。有效量或剂量给药方案的确定充分在本林谷技术人员的能力内。
当提及组合时，治疗有效剂量是指导致治疗作用的各活性成分的组合量，而不管是连续还是同时(在同一制剂中或在分开的制剂中同时)施用的。最有效的剂量通常可以使用实验模型和/或临床试验确定。关于本文所述的治疗剂(包括当用于预防益处施用时)的临床前和临床研究的设计和进行充分在相关领域技术人员的能力内。
治疗剂的施用途径可以是口服、腹膜内、经皮、皮下、通过静脉内或肌肉内注射、通过吸入、局部、损伤内、输注；脂质体介导的递送；局部、鞘内、龈袋、直肠、支气管内、鼻、经粘膜、肠道、眼部或耳部递送、或本领域已知的任意其他方法。
实施例
实施例1
mnk-特异性抑制减少免疫检查点受体和配体的表达
当激活t细胞受体(tcr)信号传导时，t细胞增殖，产生细胞因子(例如，il-2)，并且诱导免疫检查点受体的表达。程序性死亡1(pd-1)是在激活的t细胞表面上以及在骨髓细胞上表达的抑制性检查点受体。pd-1的配体，即程序性死亡配体-1(pd-l1，b7-h1/cd274)不是由t细胞和正常的上皮细胞表达的，而是由抗原呈递细胞表达的，并且在一些癌症中过表达。pd-1与pd-l1的相互作用导致对t细胞的抗增殖作用，并且最终t细胞用尽和凋亡。为了研究mnk在激活的t细胞和肿瘤细胞中的作用，检验了mnk-特异性抑制剂对免疫检查点控制的分子的影响。
pd-1(cd279)表达
为了检验mnk-特异性抑制剂对pd-1表达的影响，使用当通过t细胞受体(tcr)信号传导激活时表达pd-1的jurkat细胞(克隆e6.1，atcc，转化的t细胞)。简言之，将jurkat细胞在具有1xpen/strep和10％fbs的1xrpmi中生长，然后在存在1μg/mlpha(sigma)和50ng/mlpma(sigma)的条件下激活大约3x106个jurkat细胞。测试细胞同时用不同浓度的mnk-特异性抑制剂化合物107(0，0.01，0.1，1，3和10μm)处理。48小时后，收集培养物上清，并且使用人il-2elisa
如在图1a和1c中所示，与未诱导的细胞(unstim)相比，用pha和pma激活jurkatt细胞诱导约25-30％刺激的jurkat细胞在细胞表面上表达pd-1，并且分别诱导1,000倍的il-2细胞因子产生增加。与对照相比，用mnk-特异性抑制剂化合物107处理pha/pma激活的jurkatt细胞导致免疫抑制受体pd-1表达浓度依赖性减少，在最高浓度减少多至50％(见图1b)。另外，图1c显示pd-1的这种减少不是由于jurkatt细胞激活本身的阻断，原因在于，如通过il-2水平测量的，化合物107的mnk-特异性抑制作用不改变细胞因子产生(见图1c)。最后，化合物107的mnk-特异性抑制作用对细胞存活力没有影响(图1d)。
事实上，在jurkatt细胞测定中的多种不同的mnk-抑制剂表现出下调免疫检查点抑制剂而不影响细胞存活力的能力。此类化合物总结在表2a中。
表2a.各种mnk-特异性抑制剂对免疫检查点表达和jurkatt细胞存活力的影响
*-＝0-10%；+＝10-25%；++＝25-50%；+++＝50-75%；++++＝75-100%
表2b.非特异性mnk抑制剂对免疫检查点表达和jurkatt细胞存活力的影响
*-＝0-10％；+＝10-25％；++＝25-50％；+++＝50-75％；++++＝75-100％
a参见wo2013/034570；b参见yan等人，invest.newdrugs31:833，2013
尽管一些特异性的mnk抑制剂化合物具有很少的抗-pd-1活性，并且一些对细胞存活力有影响，但是所检测的大部分化合物能够在翻译水平上下调免疫检查点抑制剂，而且没有可检测的毒性，而非特异性mnk抑制剂要么有毒，要么对免疫检查点表达(pd-1)没有影响。
pd-l1(b7-h1，cd274)表达
已经表明，pd-l1，即pd-1的配体，在多种肿瘤类型中被上调(mahoney等人，nat.rev.drugdiscov.14:561，2015)。为了检验mnk的特异性抑制是否对pd-l1表达有影响，包括组成型表达pd-l1的几种肿瘤细胞系，并将细胞用所示浓度的eft508或赋型剂(vehicle)(dmso)处理48小时。将细胞在补充了蛋白酶和磷酸酶抑制剂(biotool，houstontx)的1xripa裂解缓冲液(millipore，billericama)中裂解。通过bca蛋白测定(thermofisher，walthamma)定量细胞裂解物中的蛋白浓度，并且通过sds-page解析等量总蛋白，用抗-pd-l1和gapdh抗体(santacruzbiotechnology，dallastx)免疫印迹，并且通过li-corodyssey成像仪(li-cor，lincolnne)显现。检测了a549(人肺腺癌上皮细胞系)、hbl-1(弥散型大b细胞淋巴瘤(dlbcl)细胞系的人激活的b细胞样(abc)亚型)、amo-1(人浆细胞瘤细胞系)、mda-mb-361(人乳腺癌细胞系)和mda-mb-231(转移的人乳腺癌细胞系)。hbl-1和amo-1细胞分别在具有1xpen/strep和10％胎牛血清fbs的1xrpmi中生长，然后使在新鲜培养基中的2-4x106个hbl-1或amo-1细胞分别与下述接触48小时：仅有赋型剂(dmso)，或不同浓度(0.01，0.1，1，3或10μm)的mnk-特异性抑制剂化合物107。a549细胞、mda-mb-361细胞和mda-mb-231细胞分别在具有1xpen/strep和10％fbs的1xdmem中生长，然后使在新鲜培养基中的2-4x106个a549、mda-mb-361或mda-mb-231细胞分别与下述接触48小时：仅有赋型剂(dmso)，或不同浓度(0.01，0.1，1，3或10μm)的mnk-特异性抑制剂化合物107。使用补充了1x蛋白酶和磷酸酶抑制剂(biotool，houston，tx)的1x放射性免疫沉淀测定(ripa)缓冲液(millipore，billerica，ma)制备全细胞裂解物。使用bca蛋白测定试剂(thermofisher，waltham，ma)估测蛋白浓度，在4-12％bis-trissds-page凝胶(invitrogen)上解析约25μg总蛋白，并且使用下述抗体通过蛋白质印迹探测：(a)抗-pd-l1(emdmilipore，billerica，ma)，以检测pd-l1，(b)抗-磷酸eif4e(santacruzbiotechnology，dallas，tx)，以检测磷酸化的eif4e，和(c)抗-gapdh抗体(santacruzbiotechnology，dallas，tx)，以检测gapdh(作为内部对照)。使用imagestudiotmlite软件(li-cor，lincoln，ne)定量通过蛋白质印迹检测到的蛋白水平。
图2a至2e显示，所有测试的细胞系都表现出高度糖基化形式的pd-l1(上部条带，55kda)和较低糖基化形式的pd-l1(33kda)的表达。在所有测试的癌细胞类型中，mnk-特异性抑制导致高度糖基化的pd-l1蛋白(上部条带)减少约30-40％，所测试的癌细胞类型为：(a)乳腺癌mda-mb-231细胞；(b)b细胞淋巴瘤hbl-1细胞；(c)肺腺癌a549细胞；(d)乳腺癌mda-mb-361细胞；和(e)多发性骨髓瘤amo-1细胞。作为阳性对照，通过检测eif4e磷酸化的消除来证实mnk的抑制，原因在于eif4e是mnk酶活性的直接靶标(数据仅显示在图2a和2b中)，其可以通过帽依赖性翻译影响基因表达的调节。
结论
这些数据表明，mnk影响效应细胞(例如，t细胞中的pd-1)和靶细胞(例如，抗原呈递细胞中的pd-l1)二者中的免疫检查点系统分子的表达。数据还表明，mnk功能的特异性抑制将去除抑制性免疫检查点信号传导，而不减弱t细胞功能，原因在于mnk-特异性抑制剂的存在对细胞因子(例如，il-2)产生和对细胞存活力具有最小影响至没有影响。
实施例2
mnk-特异性抑制对原代t细胞上免疫检查点受体表达的影响
为了检验mnk的特异性抑制是否对患者t细胞中的pd-1和lag3表达具有影响，测试购自allcells(alameda，ca)的来自健康捐献者的新鲜的人pan-t细胞(对于cd3+标记是99％纯的)，使用间接免疫磁性pan-t标记系统将其与单核细胞负分离。按照供应商的流程(
pd-1(cd279)表达
与在jurkatt细胞中的观察一致，用抗-cd3/抗-cd28珠激活的t细胞在大约50％的激活的t细胞上具有增加的细胞表面pd-1表达(图3a)，这表明t细胞是通过其t细胞受体(tcr)活化。通过检验细胞因子应答的诱导而进一步证实新鲜的原代t细胞的激活。具体地，图3e显示，当暴露于抗-cd3/抗-cd28珠后，il-2被诱导超过1,000倍，这进一步表明经由tcr的活化。用mnk-特异性抑制剂化合物107处理激活的t细胞导致免疫抑制性受体pd-1表达剂量依赖性的减少，在10μm观察到76％的最大抑制(见图3b)。另外，化合物107的mnk-特异性抑制没有以可检测到的水平改变细胞因子产生的激活，如通过il-2水平测量的(见图3e)，这表明t细胞激活不受mnk-特异性抑制剂的影响。最后，化合物107的mnk-特异性抑制对t细胞存活力没有影响(图3f)。
lag3(cd223)表达
也与在jurkatt细胞中的观察一致，通过抗-cd3/抗-cd28交联经由t细胞受体(tcr)刺激原代t细胞诱导lag3表达，这导致大约20％的t细胞对在其细胞表面上的lag3染色为阳性(图3c)，以及il-2产生的增加(图3e)。lag3存在于cd8+t细胞和treg细胞上，其作用是抑制先天性免疫应答。用mnk-特异性抑制剂化合物107处理cd3/cd28抗体珠激活的t细胞导致免疫抑制性受体lag3表达浓度依赖性的减少，在10μm观察到62％的减少(图3d)。
il-10产生
il-10是由多种细胞类型(例如，treg，th1，th2，细胞毒性t细胞，树突细胞，巨噬细胞，骨髓来源的抑制细胞)分泌的免疫抑制细胞因子，在肿瘤微环境的情形中，其可以抑制免疫应答(参见，例如，rabinovich等人，annu.rev.immunol.25:267，2007；rowlett等人，am.j.physiol.gastrointest.liverphysiol.294:g452，2008；以及ruffell和coussens，cancercell27:4622015)。有趣的是，化合物107以剂量依赖性方式抑制il-10的产生，在10μm具有96％的最大抑制(图3g)，一些其他的mnk-特异性抑制剂化合物也是如此(表3)。
表3.各种mnk-特异性抑制剂对il-10表达的影响
*-＝0-10％；+＝10-25％；++＝25-50％；+++＝50-75％；++++＝75-100％
结论
与实施例1的结果综合来看，这些数据表明，mnk直接地或在蛋白翻译水平上控制多种免疫检查点受体(例如，t细胞中的pd-1和lag3)和配体(例如，抗原呈递细胞中的pd-l1)的表达。另外，mnk的特异性抑制导致免疫抑制细胞因子il-10产生减少。最后，正常的t细胞功能似乎没有被化合物107减少，如通过由于tcr刺激或t细胞存活力引起的il-2表达测定的，同样表明化合物107对细胞信号传导途径的选择性作用。
实施例3
mnk-特异性抑制剂对抗原呈递和免疫识别的影响
在弥散型大b细胞淋巴瘤(dlbcl)细胞系tmd8中评价mnk-特异性抑制剂化合物调节hlaii类蛋白水平的能力。简言之，将人dlbcl细胞系tmd8(atcc)在补充了青霉素g(100u/ml)、链霉素(100μg/ml)和10％fbs的rpmi培养基中在保持在37℃的5％co2湿润气氛中培养。在药物处理前24小时，将约2-4x106个tmd8细胞接种在10cm平板中。次日，将细胞用赋形剂对照(dmso)或所示浓度的化合物107处理(图7)。处理后48小时收集细胞。
收集处理的细胞，用pbs洗涤，在4℃在1xripa缓冲液(thermofisher)中裂解15分钟。通过以14,000xrpm离心15分钟使裂解物澄清，并且收集上清液。使用bca蛋白测定(thermoscientific)确定可溶级分中的蛋白浓度。将蛋白在4-20％bis-tris梯度聚丙烯酰胺凝胶(invitrogen)上解析，并转移到硝基纤维素膜上。将得到的印迹在室温用odyssey封闭溶液(li-cor)封闭1小时，然后用抗-hla-dqa1(abcamab128959；1:5000稀释)、抗-磷酸-eif4e(millipore)和抗-eif4e(santacruz)在4℃温育过夜。次日，将印迹在tbst中洗涤10分钟，洗涤三次，并且用山羊抗-兔荧光缀合的二抗(irdye800cw，1:20,000；li-cor)在室温温育1小时。将印迹洗涤、扫描，并使用li-corodyssey红外成像仪检测特定的蛋白。上样对照是β-肌动蛋白(cellsignalingtechnology，1:3000)。
结果
通过蛋白质印迹分析对hlaii类蛋白hla-dqa1的表达和eif4e的磷酸化进行分析。化合物107有力地抑制eif4e的磷酸化，而不影响总eif4e蛋白水平。在淋巴瘤tmd8细胞系中，hla-dqa1蛋白的基底水平低。然而，在以300nm或10μm用化合物107处理48小时后，观察到hla-dqa1蛋白水平剂量依赖性的增加(估测ec50为约300nm)，而β-肌动蛋白(对照)水平不变(图7)。
结论
dlbcl中hlaii类基因和蛋白表达的可检测的减少已经与减少的肿瘤免疫监督和差的患者存活相关。用化合物107处理dlbcl细胞系tmd8导致hla-iihla-dqa1蛋白表达剂量依赖性增加，这些结果表明，特异性的mnk-特异性抑制剂通过调节hla/mhcii蛋白水平可以在抗原呈递方面起重要作用，这对于引发免疫应答可能是重要的。
实施例4
mnk-特异性抑制剂或与免疫检查点抑制剂组合的mnk-特异性抑制剂的体内作用
为了评价mnk-特异性抑制剂在癌症中的功效，使用体内同种异体移植肿瘤模型。简言之，将在补充了10％fbs的dmem中生长的ct26(小鼠结肠癌)细胞在指数生长过程中收集并计数，用于在有免疫能力的balb/c小鼠中进行肿瘤接种。每只小鼠在右侧胁腹区接种体积为0.2ml的0.3x106个ct26肿瘤细胞，其中包含1:1比例(体积比体积)的在生长培养基(0.1ml)中的细胞和
在研究中，每周两次用卡尺以长和宽测量肿瘤尺寸(对于皮下移植物)。按照nci标准，通过式lxwxw/2计算肿瘤体积。肿瘤生长抑制(tgi％)是抗肿瘤效用的指示，其表示如下：tgi(％)＝100x(1-(δt/δc))。δt和δc是治疗组和对照组相对于治疗开始时的平均肿瘤体积的平均肿瘤体积变化。所有实验持续到组平均肿瘤体积达到约2000至2,500mm3的尺寸。将具有大于约2000mm3至2,500的平均肿瘤尺寸的组处死，以确保用于药物验证的肿瘤治疗。此外，至少在研究开始之前立即采集每只小鼠的体重，在研究中每周采集两次。体重变化是耐受性的指示，因此按下述计算体重变化百分数：体重变化(％)＝100x(体重结束时–体重开始时)/体重开始时。还每天观察小鼠的死亡率、运动、弓起的姿势、立毛或剂量给药时的其他痛苦迹象。如果小鼠由于毒性或由于毒性和肿瘤负担的组合体重减轻大于20％，将其处死。如果存在明显的毒性，则对对小鼠停止治疗，并且每天进行临床观察和体重测量。
结果
在balb/c小鼠同种异体移植ct26结肠癌肿瘤模型中，在体内以单一药剂和与抗-pd-1单克隆抗体的组合评价化合物107。测量的肿瘤生长抑制(tgi)和体重变化总结在表3中。
表3.在小鼠结肠癌同种异体移植肿瘤模型中，单独的mnk-特异性抑制剂和与抗-pd-1抗体组合的活性
a抗-pd-1抗体每4天(q4d)腹膜内给药一次
b在研究最后一天(第22天)计算的组平均％体重变化
c在开始剂量给药后第15天和第22天计算tgi和平均肿瘤体积
d相对于赋形剂(第22天)，使用双向anova计算p-值，不匹配，使用dunnettt-检验(2向，假设等价变量)校正多次比较
在15天的治疗期间，用化合物107以1mg/kg每天口服治疗一次(qd)产生约34％的中等肿瘤生长抑制(图4a)，尽管重要的是，注意到一些化合物107治疗的动物在停止剂量给药后肿瘤继续消退(在第22天为大约55％)。用抗-pd-1抗体以0.5mg/小鼠的剂量每四天一次腹膜内治疗具有ct26同种异体移植肿瘤的小鼠也导致约23％的略微小的肿瘤生长抑制。与化合物107组相似，多只抗-pd-1治疗的动物在停止治疗后肿瘤继续消退(在第22天为大约33％)。体重没有收到明显影响(图4b)，这意味着所述治疗是充分耐受的。令人惊讶地，化合物107与抗-pd-1抗体的组合在第15天产生约99％的显著的协同性肿瘤生长抑制(图4a)，在研究结束时(第22天)，大部分动物变为没有肿瘤。
肿瘤再攻击
通过再次植入新的ct26肿瘤，并且与首次用于实验的balb/c小鼠比较测定肿瘤生长，而检测之前治疗的来自每个治疗组的响应治疗或没有肿瘤(治疗后8天)的同种异体移植小鼠是否发展了长期的免疫记忆。简言之，如之前一样，治疗的小鼠在左侧胁腹区再次植入肿瘤细胞，首次用于实验的小鼠在左侧胁腹区首次植入肿瘤细胞，所述肿瘤细胞在0.1ml生长培养基和等体积比例的0.1ml
表4.完全响应者的ct26肿瘤再攻击
a在肿瘤植入后8天计算平均肿瘤体积。
b相对于首次用于实验的对照，使用单向anova计算p-值，没有匹配，使用dunnettt-检验校正多次比较。
所有再攻击的小鼠都抵抗ct26肿瘤形成，其中4只之前暴露于化合物107的动物中有0只，4只之前暴露于抗-pd-1的动物中有0只，和7只之前暴露于化合物107与抗-pd-1的组合的动物中有0只，表现出任意可检测的肿瘤(图5)。相反，所有首次用于实验的balb/c对照小鼠(10/10)都有可检测的ct26肿瘤形成。出乎意料地，这一结果表明，表现出之前针对化合物107单一治疗或化合物107加抗-pd-1的组合的响应的小鼠具有针对在ct26肿瘤中表达的肿瘤抗原的长期免疫记忆。
实施例5
mnk-特异性抑制剂对treg细胞的体内作用
肿瘤诱导的免疫抑制涉及多种机制，包括肿瘤微环境(t调节(treg)细胞)中免疫抑制浸润物的积聚。存在日益增多的证据表明treg细胞可能在癌症的免疫逃避机制中起作用，并且肿瘤可能通过treg细胞有力地消除抗肿瘤免疫性(schabowsky等人，curr.opin.investig.drugs8:1002，2007；liu等人，j.immunol.182:6160，2009)。为了检验改变免疫检查点机制是否对ct26同种异体移植模型中的treg细胞具有影响，检验从治疗的小鼠分离的肿瘤中肿瘤浸润的淋巴细胞(til)在t效应(cd8+)和t调节(foxp3+)细胞群体中是否有变化。
如实施例4所述，将具有建立的ct26肿瘤(100-200mm3)的小鼠用化合物107、抗-pd1抗体或化合物107与抗-pd1抗体的组合治疗。在治疗4天后，将小鼠处死，并且切下肿瘤。通过用刀片将切下的肿瘤切成小块，用在rpmi中的胶原酶、透明质酸酶和dna酶i(worthingtonbiochemical，lakewoodnj)温育，在1x胰蛋白酶-edta中温育，并最终通过70微米细胞粗过滤器(bdbiosciences，sanjoseca)，而产生单细胞混悬液。为了分析肿瘤中存在的t效应(te，cd3+/cd8+)和t调节(treg，cd4+/foxp3+)细胞的数量，按照供应商的流程，将细胞用可固定的死细胞染料(1:20,000；bdbiosciences，sanjose，ca)在4℃温育15分钟，用流动染色缓冲液(1xpbs，4％fbs和1mmedta)洗涤两次，用人fcr封闭剂(miltenyibiotech，sandiegoca)温育，并用特异性针对cd45(cd45percp-cy5.5，bdbiosciences，sanjoseca)、cd3(cd3-apc，ebiosciences，sandiegoca)和cd8(cd8-pe，bdbiosciences，sanjoseca)的抗体混合物或针对cd45(cd45percp-cy5.5，bdbiosciences)和cd4(cd4-apc，bdbiosciences)的抗体混合物染色。对于评估cd45/cd3/cd8的样品，将细胞用流动缓冲液洗涤两次，并且用固定缓冲液在4℃温育10分钟。固定后，将细胞用流动缓冲液洗涤两次，并且重悬在流动缓冲液中用于流式细胞术分析。进一步处理评估cd45/cd4的样品，用于按照供应商的流程，使用抗-foxp3抗体(foxp3-pe，bdbiosciences)和foxp3/转录因子染色缓冲液组(ebiosciences，sandiegoca)进行细胞内foxp3染色。将细胞用1x透化缓冲液洗涤两次，并且重悬在透化缓冲液中，用于流式细胞术分析。收集数据，并且用bdaccuric6流式细胞仪(bdbiosciences，sanjoseca)分析。通过确定在cd45+淋巴细胞群体中存在的cd3+/cd8+细胞百分数并除以相同群体中存在的cd4+/foxp3+百分数而计算te与treg细胞之比。
结果
在赋形剂对照中，平均te:treg比为3.4(图6)。用化合物107治疗的小鼠表现出的平均te:treg比增加至9.7。使用抗-pd-1抗体观察到相似的结果，其中治疗使平均te:treg比增加至8.8，这与之前关于该化合物的报道相一致(duraiswamy等人，cancerres.73:3591，2013)。最后，化合物107与抗-pd-1抗体的组合使平均te:treg比增加至8.4。
结论
这些结果证明，mnk-特异性抑制剂可以在体内调节肿瘤内的til群体，从而减少treg细胞数量并且允许te细胞更有效地清除病原性细胞。
本文所述的多个实施方案可以组合，从而提供更进一步的实施方案。本说明书中引用的和/或申请数据表中列出的所有专利、专利申请公布、专利申请和非专利公布都通过引用完全结合在本文中。如果需要，可以修改所述实施方案的各个方面，从而使用不同专利、申请和公布的概念，以提供更进一步的实施方案。
通常，在下述权利要求书中，所用的术语不应该解释为将权利要求限制为本说明书和权利要求书中公开的具体实施方案，而是应该解释为包括在所述权利要求书所赋予的等价物的完整范围内的所有可能的实施方案。因此，权利要求书不受本公开的限制。