一种含自体子宫内膜间充质干细胞的腔内注射制剂的制作方法

本发明涉及自体子宫内膜间充质干细胞制剂，尤其涉及一种含自体子宫内膜间充质干细胞的腔内注射制剂。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymalstemcells,msc)间充质细胞属于多能干细胞，具有多向分化、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控等多种功能，主要存在于子宫内膜、脂肪和骨髓中。

间充质干细胞是一种免疫源性极低的，具有多向分化潜能的“种子细胞”。存在于子宫内膜中的子宫内膜间充质干细胞处于间充质干细胞中一个较为特殊的地位。

间充质干细胞修复子宫内膜损伤的机制可能是:(1)mscs向子宫内膜损伤部位归巢，通过免疫调节功能抑制局部炎症损害。mscs向损伤部位迁移后，可产生大量的抗炎性细胞因子和生长因子。在动物疾病模型发现一个现象，mscs可上调抗炎细胞因子，如白细胞介素(il)-2、il-4和il-10，下调促炎性细胞因子，如肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α，tnf-α)和il-17。(2)mscs可诱导子宫内膜损伤部位的血管生成。移植的mscs进入损伤部位后可通过自分泌和旁分泌作用产生细胞因子，如血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，vegf)、基质衍生因子-1(stromalcellderivedfactor-1，sdf-1)和成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfactor，fgf)。vegf-a和sdf-1可激活基质金属蛋白酶9(matrixmetalloproteinase9，mmp-9)，从而介导造血干细胞、内皮祖细胞、间充质干细胞的联合动员。这些细胞之间的相互作用可能有助于血管再生过程。bfgf含有胶原蛋白结合结构域(cbd)，有学者构建了一种有胶原蛋白结合域的vegf。

目前从子宫内膜细胞中获得干细胞最为方便和无创，且子宫内膜的得到符合医学废弃物管理标准，且用自体干细胞更加安全可靠,因此如何能够制得含有自体子宫内膜间充质干细胞的腔内注射用制剂成为了本领域技术人员亟待解决的问题。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是，提供一种含自体子宫内膜间充质干细胞的腔内注射制剂，该制剂活性稳定，利用干细胞分泌的多种细胞因子为治疗子宫内膜损伤等疾病提供了安全、有效、使用方便的治疗药物。

本发明是通过以下技术方案予以实现：一种含自体子宫内膜间充质干细胞的腔内注射制剂，按照体积份数，包括以下成分：5％自体子宫内膜间充质干细胞以及95％基质溶液，基质溶液的ph的范围是6.0-8.0，按照体积份数比，基质溶液包括90-95份复方电解质注射液、3-5份间充质干细胞以及1-5份注射用人血白蛋白，自体子宫内膜间充质干细胞为提取自人子宫内膜的间充质干细胞，按照正常培养的方法进行培养。

根据上述技术方案，优选地，正常培养的培养时间为48-72小时。

根据上述技术方案，优选地，注射用人血白蛋白为奥地利百特公司所生产。

根据上述技术方案，优选地，复方电解质注射液为中国大冢制药有限公司生产的复方电解质葡萄糖mg3注射液。

该制剂用于治疗子宫内膜损伤。

一种含自体子宫内膜间充质干细胞的腔内注射制剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)自体子宫内膜间充质干细胞培养：从细胞库中选取细胞进行复苏，用无酚红dmem/df12和体积比浓度为10％胎牛血清做完全培养基，t75细胞培养瓶在37℃，5％co2环境下进行培养，待细胞生长程度达到90％-95％后，收取细胞培养上清，弃之，胰酶消化回收全部细胞后待用；

(2)基质溶液制备：按配比，将注射用人血白蛋白，按照1％-5％的浓度溶于复方电解质注射液中，配制均一的基质溶液待用；

(3)制备腔内注射用制剂：按体积比，选取基质溶液：自体子宫内膜间充质干细胞＝95:5的比例进行混合，直到混合均匀后，分装到无菌保存管中，放到4℃冰箱中冷藏待用。

本发明的有益效果是：将自体子宫内膜间充质干细胞混合到基质溶液中，使得细胞的活性及功能得到了保存和利用，而且存活的时间可以更长，可达到长时间促进表皮细胞增长，消除炎症，快速修复内膜损伤重建，实现子宫内膜结构和功能的恢复，使得本发明实现了工业制备含有自体子宫内膜间充质干细胞的腔内注射用制剂。

附图说明

图1示出了根据本发明的实施例的培养的子宫内膜间充质干细胞图；

图2示出了根据本发明的实施例的不同实验组子宫内膜三种细胞因子的基因表达差异图；

图3示出了根据本发明的实施例的动物实验伤口愈合统计表。

具体实施方式

为了使本技术领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合最佳实施例对本发明作进一步的详细说明。

本发明提供了一种含自体子宫内膜间充质干细胞的腔内注射制剂，按照体积份数，包括以下成分：5％自体子宫内膜间充质干细胞以及95％基质溶液，基质溶液的ph的范围是6.0-8.0，按照体积份数比，基质溶液包括90-95份复方电解质注射液、3-5份间充质干细胞以及1-5份注射用人血白蛋白，自体子宫内膜间充质干细胞为提取自人子宫内膜的间充质干细胞，按照正常培养的方法进行培养，将自体子宫内膜间充质干细胞混合到基质溶液中，使得细胞的活性及功能得到了保存和利用，而且存活的时间可以更长，可达到长时间促进表皮细胞增长，消除炎症，快速修复内膜损伤重建，实现子宫内膜结构和功能的恢复，从而使得本发明实现了工业制备含有自体子宫内膜间充质干细胞的腔内注射用制剂。

根据上述实施例，优选地，正常培养的培养时间为48-72小时。

根据上述实施例，优选地，注射用人血白蛋白为奥地利百特公司所生产。

根据上述实施例，优选地，复方电解质注射液为中国大冢制药有限公司生产的复方电解质葡萄糖mg3注射液。

该制剂用于治疗子宫内膜损伤。

一种含自体子宫内膜间充质干细胞的腔内注射制剂的制备方法：

实施例1：

(1)自体子宫内膜间充质干细胞培养：从细胞库中选取细胞进行复苏，用无酚红dmem/df12和体积比浓度为10％胎牛血清做完全培养基，t75细胞培养瓶在37℃，5％co2环境下进行培养，待细胞生长程度达到90％后，收取细胞培养上清，弃之，胰酶消化回收全部细胞后待用；

(2)基质溶液制备：按配比，将注射用人血白蛋白，按照1％的浓度溶于复方电解质注射液中，配制均一的基质溶液待用；

(3)制备腔内注射用制剂：按体积比，选取基质溶液：自体子宫内膜间充质干细胞＝95:5的比例进行混合，直到混合均匀后，分装到无菌保存管中，放到4℃冰箱中冷藏待用。

实施例2：

(1)自体子宫内膜间充质干细胞培养：从细胞库中选取细胞进行复苏，用无酚红dmem/df12和体积比浓度为10％胎牛血清做完全培养基，t75细胞培养瓶在37℃，5％co2环境下进行培养，待细胞生长程度达到95％后，收取细胞培养上清，弃之，胰酶消化回收全部细胞后待用；

(2)基质溶液制备：按配比，将注射用人血白蛋白，按照3％的浓度溶于复方电解质注射液中，配制均一的基质溶液待用；

(3)制备腔内注射用制剂：按体积比，选取基质溶液：自体子宫内膜间充质干细胞＝95:5的比例进行混合，直到混合均匀后，分装到无菌保存管中，放到4℃冰箱中冷藏待用。

实施例3：

(1)自体子宫内膜间充质干细胞培养：从细胞库中选取细胞进行复苏，用无酚红dmem/df12和体积比浓度为10％胎牛血清做完全培养基，t75细胞培养瓶在37℃，5％co2环境下进行培养，待细胞生长程度达到90％后，收取细胞培养上清，弃之，胰酶消化回收全部细胞后待用；

(2)基质溶液制备：按配比，将注射用人血白蛋白，按照5％的浓度溶于复方电解质注射液中，配制均一的基质溶液待用；

(3)制备腔内注射用制剂：按体积比，选取基质溶液：自体子宫内膜间充质干细胞＝95:5的比例进行混合，直到混合均匀后，分装到无菌保存管中，放到4℃冰箱中冷藏待用。

试验过程以及结果，如图所示：

(1)选取7周龄的sd大鼠12只，平均分为3组，①空白组；②阴性对照组；③实验组制备大鼠子宫内膜损伤模型；

(2)造模成功后，按照①空白组在子宫内膜腔内注射生理盐水；②阴性对照组在子宫内膜腔内注射基质溶液；③实验组在子宫内膜腔内注射间充质干细胞制剂溶液进行治疗，分别在给药后的第1、3、5、7、9、天进行数据测量，并统计；

(3)数据分析，分析各实验组伤口愈合的时间差异；

本发明的有益效果是：将自体子宫内膜间充质干细胞混合到基质溶液中，使得细胞的活性及功能得到了保存和利用，而且存活的时间可以更长，可达到长时间促进表皮细胞增长，消除炎症，快速修复内膜损伤重建，从而实现子宫内膜结构和功能的恢复，从而使得本发明实现了工业制备含有自体子宫内膜间充质干细胞的腔内注射用制剂。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。