异硫氰酸酯类化合物的用途的制作方法
本发明涉及药物领域，具体地，本发明提供异硫氰酸酯类化合物的用途。
背景技术：
人体的发病机制复杂，在患某种疾病的同时，常常也会伴随其他疾病的出现。
动脉粥样硬化(atherosclerosis，as)是冠心病、脑梗死、外周血管病的主要原因。脂质代谢障碍为动脉粥样硬化的病变基础，其特点是受累动脉病变从内膜开始，一般先有脂质积聚，进而纤维组织增生及钙质沉着，并有动脉中层的逐渐蜕变和钙化，导致动脉壁增厚变硬、血栓形成、血管腔狭窄。病变常累及大中肌性动脉，一旦发展到足以阻塞动脉腔，则该动脉所供应的组织或器官将缺血或坏死。由于在动脉内膜积聚的脂质外观呈黄色粥样，因此称为动脉粥样硬化。
动脉粥样硬化是多种危险心血管疾病的病理基础，是一种发病机制复杂的慢性疾病。脂质氧化、炎症和脂质代谢紊乱等因素是导致动脉粥样硬化的直接原因和独立危险因素。同时，对于动脉粥样硬化患者，脂质氧化、炎症和脂质代谢紊乱等因素也会促进动脉粥样硬化的病理进程，也是严重动脉粥样硬化突发心脑血管实践的主要触发因素。目前临床上，对于患有多种疾病的患者，往往需要同时给予多种药物进行治疗，例如，临床上对动脉粥样硬化的预防治疗，往往是通过给予治疗氧化应激、炎症和脂质代谢紊乱疾病的药物，从而对患者进行有效的预防和治疗。然而，多种药物同时给药往往会发生药物相互拮抗、药效降低、副作用增大等不利影响，且患者的顺应性差。
因此，本领域需要开发一种能够同时应对氧化应激、炎症和脂质代谢紊乱疾病治疗的药物来实现对动脉粥样硬化疾病患者的预防与治疗。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种式(i)所示的化合物或如式(ii)所示的衍生物用于预防和/或治疗动脉粥样硬化、炎症、脂质氧化和脂质代谢紊乱。
本发明的第一方面，提供一种式(i)所示的化合物或如式(ii)所示的衍生物的用途，用于制备组合物或制剂，所述组合物或制备用于选自下组的一个或多个用途：(i)预防和/或治疗动脉粥样硬化；(ii)预防和/或治疗炎症；(iii)预防和/或治疗脂质氧化；和/或(iv)预防和/或治疗脂质代谢紊乱；
a-ncs(i)
式(i)中：
ncs为异硫氰酸酯基；
a为-xr1或-cr2r3r4；其中，x为-(ch2)n-，n为0-6的整数；
r1为甲基、叔丁基、异丙基、甲硫基、甲氧基、烯丙基、甲代烯丙基、环己基、甲基亚硫酰基、萘基、甲基环己基、吗啉基、二乙基氨基、苯甲酰基、乙氧基羰基、叔辛基、氯原子、三甲基硅基、取代或未取代的c6-c20芳基、取代或未取代的5-12元杂芳基；
所述的“取代”指基团中一个或多个h(优选为1、2、3或4个)被选自下组的取代基所取代：c1-c4烷基、c3-c8环烷基、卤代c1-c4烷基、卤代c3-c8环烷基、卤素、溴甲基、甲氧基、硝基、叠氮基、二氟甲氧基、甲硫基、氰基、三氟甲氧基、三氟甲硫基、叔丁氧基羰基、乙氧基羰基；
r2、r3、r4各自独立地为h、苯基或c1-c4烷基；
式(ii)中：
a如式(i)中所定义；
r5为氢或通过硫原子与
在另一优选例中，所述氨基酸选自：甘氨酸、谷氨酸、丝氨酸、丙氨酸或蛋氨酸。
在另一优选例中，n为1、2、3、4、5或6。
在另一优选例中，r1为甲基、叔丁基、异丙基、甲硫基、甲氧基、烯丙基、甲代烯丙基、环己基、甲基亚硫酰基、萘基、甲基环己基、吗啉基、二乙基氨基、苯甲酰基、乙氧基羰基、叔辛基、氯原子、三甲基硅基、取代或未取代的c6-c12芳基、取代或未取代的5-12元杂芳基；
在另一优选例中，所述的c1-c4烷基为甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或己基。
在另一优选例中，所述的c1-c4环烷基为环甲基、环乙基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
在另一优选例中，所述的卤代c1-c4烷基为被一个或多个(优选为1、2、3或4个)卤素取代的c1-c4烷基。
在另一优选例中，所述的卤代c3-c8环烷基为被一个或多个(优选为1、2、3或4个)卤素取代的c1-c4烷基。
在另一优选例中，卤素为f、cl、br或i。
在另一优选例中，所式(i)所示的化合物或如式(ii)所示的衍生物选自下组：异硫氰酸酯、异硫氰酸酯的n-乙酰半胱氨酸加合物、或其组合；其中，所述异硫氰酸酯选自下组：苯基异硫氰酸乙酯、异硫氰酸环己基酯、4-甲氧基苄基异硫氰酸酯、异硫氰酸4-氯苄酯、苯乙基异硫氰酸酯、苯丙基异硫氰酸酯、4-苯丁基异硫氰酸酯、6-苯己基异硫氰酸酯、三苯甲基异硫氰酸酯、1-异硫氰酸-4-甲磺酰基丁烷(莱菔硫烷)、异硫氰酸α-甲基苄酯、异硫氰酸己酯、异硫氰酸甲基环己酯、1-萘异硫氰酸酯、2-氯苯基异硫氰酸酯、2-溴苯基异硫氰酸酯、3-氯苯基异硫氰酸酯、3-溴苯基异硫氰酸酯、3-硝基苯基异硫氰酸酯、4-叠氮苯异硫氰酸酯、4-氟苯基异硫氰酸酯、4-氯苯基异硫氰酸酯、4-溴苯基异硫氰酸酯、4-硝基苯基异硫氰酸酯、乙氧羰基异硫氰酸酯、叔辛基异硫氰酸酯、对甲苯异硫氰酸酯、苯甲酰基异硫氰酸酯、邻甲苯异硫氰酸酯、间甲苯异硫氰酸酯、2,3,4-三氟苯基异硫氰酸酯、2,5-二甲氧基苯基异硫氰酸酯、2-(4-吗啉)乙基异硫氰酸酯、2-(三氟甲基)苯基异硫氰酸酯、2-(二氟甲氧基)苯基异硫氰酸酯、2-(甲硫基)苯基异硫氰酸酯、2-氟-5-(三氟甲基)苯基异硫氰酸酯、3,5-双(三氟甲基)苯基异硫氰酸酯、3-(4-吗啉基)丙基异硫氰酸酯、3-(三氟甲基)苯基异硫氰酸酯、3-(二乙基氨基)丙基异硫氰酸酯、3-(甲硫基)丙基异硫氰酸酯、3-(甲硫基)苯基异硫氰酸酯、3-氰基苯基异硫氰酸酯、4-(三氟甲基)苯基异硫氰酸酯、4-(三氟甲氧基)苯基异硫氰酸酯、4-(三氟甲硫基)苯基异硫氰酸酯、4-(二氟甲氧基)苯基异硫氰酸酯、4-(甲硫基)苯基异硫氰酸酯、4-氰基苯基异硫氰酸酯、4-溴-2-氟苯基异硫氰酸酯、4-甲氧基苯基异硫氰酸酯、甲代烯丙基异硫氰酸酯、2-(4-异硫氰酸苯氧基)甲苯磺酸乙酯、异硫氰酸2-氯乙酯、异硫氰酸(2-氟苯)酯、异硫氰酸(3-氟苯)酯、异硫氰酸丁酯、异硫氰酸三甲基硅酯、异硫氰酸丙酯、异硫氰酸乙酯、异硫氰酸叔丁酯、异硫氰酸异丙酯、异硫氰酸烯丙酯、异硫氰酸甲酯、异硫氰酸苯乙酯、异硫氰酸苯甲酯、异硫氰酸苯酯、2,4,5-三氯异硫氰酸苯酯、2,4,6-三氯异硫氰酸苯酯、2,4-二氟异硫氰酸苯酯、2,5-二氟异硫氰酸苯酯、2,6-二氟异硫氰酸苯酯、2,6-二甲基异硫氰酸苯酯、2-乙基异硫氰酸苯酯、2-氯-4-硝基异硫氰酸苯酯、3-甲氧基异硫氰酸苯酯、4-(溴甲基)异硫氰酸苯酯、4-乙基异硫氰酸苯酯、5-氯-2-甲基异硫氰酸苯酯、1,4-二硫异氰酸酯丁烷、2-氯-5-(三氟甲基)异硫氰酸苯酯、2-甲氧基-4-硝基异硫氰酸苯酯、3,4,5-三甲氧基异硫氰酸苯酯、3-(三氟甲硫基)异硫氰酸苯酯、4-氯-3-(三氟甲基)异硫氰酸苯酯、4-甲基-3-(三氟甲基)异硫氰酸苯酯、2,3-二氯苯基异硫代氰酸酯、2,4-二氯苯基异硫代氰酸酯、2,5-二氯苯基异硫代氰酸酯、2,6-二氯苯基异硫代氰酸酯、2-(4-氯苯基)乙基异硫代氰酸酯、2-(乙氧基羰基)苯基异硫代氰酸酯、2-甲氧基-5-甲基苯基异硫代氰酸酯、2-甲氧基苯基硫代异氰酸酯、2-甲烷氧基乙基硫代异氰酸酯、3,4-二氯苯基异硫代氰酸酯、3,5-二氯苯基异硫代氰酸酯、4-氟-3-(三氟甲基)苯基异硫代氰酸酯、4-碘苯基异硫代氰酸酯、3-异硫氰基苯甲酸叔丁酯、4-异硫氰基苯甲酸叔丁酯、异硫氰酸二苯乙酯。
在另一优选例中，所式(i)所示的化合物或如式(ii)所示的衍生物选自下组：异硫氰酸酯、异硫氰酸酯的n-乙酰半胱氨酸加合物、或其组合；其中，所述异硫氰酸酯选自下组：苯乙基异硫氰酸酯、苯丙基异硫氰酸酯、烯丙基异硫氰酸酯、苯甲基异硫氰酸酯、苯基异硫氰酸酯、l-苯基异硫氰酸乙酯、环己基异硫氰酸脂、4-甲氧基苄基异硫氰酸酯、异硫氰酸4-氯苄酯、苯丙基异硫氰酸酯、4-苯丁基异硫氰酸酯、6-苯己基异硫氰酸酯、三苯甲基异硫氰酸酯、莱菔硫烷或其组合。
在另一优选例中，所述式(i)所示的化合物或如式(ii)所示的衍生物选自下组：苯乙基异硫氰酸酯、烯丙基异硫氰酸酯、苯甲基异硫氰酸酯、苯基异硫氰酸酯、l-苯基异硫氰酸乙酯、环己基异硫氰酸脂、4-甲氧基苄基异硫氰酸酯、异硫氰酸4-氯苄酯、苯丙基异硫氰酸酯、4-苯丁基异硫氰酸酯、6-苯己基异硫氰酸酯、三苯甲基异硫氰酸酯、苯乙基异硫氰酸酯-n-乙酰半胱氨酸加合物、莱菔硫烷或其组合。
在另一优选例中，所述式(i)所示的化合物或如式(ii)所示的衍生物来自：动植物体、化学合成或半化学合成。
在另一优选例中，所述的组合物选自下组：药物组合物、保健品组合物、食品组合物、膳食补充剂、或其组合。
在另一优选例中，所述的组合物为药物组合物。
在另一优选例中，所述的药物组合物含有(a)式i所示的化合物、或式ii所示的衍生物以及(b)药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述组分(a)占所述药物组合物总重量的0.01-99.99wt％,较佳地0.1-90wt％，更佳地1-80wt％。
在另一优选例中，所述药物组合物为液态、固体、或半固体。
在另一优选例中，所述药物组合物的剂型包括片剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液、丸剂、软膏剂、乳剂、喷雾剂、植入剂、栓剂、霜剂或注射剂。
在另一优选例中，所述组合物为口服制剂。
在另一优选例中，所述的组合物(如药物组合物)通过以下方式施用于哺乳动物：口服、注射、经皮给药、腔道给药、或手术注射。
在另一优选例中，所述的式(i)所示的化合物为
所述的式(ii)所示的衍生物为
在另一优选例中，所述的动脉粥样硬化选自下组：主动脉及其分枝粥样硬化、冠状动脉粥样硬化、脑动脉粥样硬化、肾动脉粥样硬化、肠系膜动脉粥样硬化、四肢动脉粥样硬化，或其组合。
在另一优选例中，所述的动脉粥样硬化的患者为高脂饮食患者。
在另一优选例中，所述的动脉粥样硬化为高脂饮食引起的动脉粥样硬化。
在另一优选例中，所述的动脉粥样硬化为炎症引起的动脉粥样硬化。
在另一优选例中，所述的动脉粥样硬化为脂质氧化引起的动脉粥样硬化。
在另一优选例中，所述的动脉粥样硬化为脂质代谢紊乱引起的动脉粥样硬化。
在另一优选例中，所述的主动脉为心脏主动脉。
在另一优选例中，所述的炎症为动脉粥样硬化部位的炎症。
在另一优选例中，所述的脂质氧化为动脉粥样硬化部位的脂质氧化。
在另一优选例中，所述的预防和/或治疗动脉粥样硬化通过选自下组一种或多种途径进行预防和/或治疗：
(i-1)降低动脉斑块水平；
(i-2)预防和/治疗炎症；
(i-3)预防和/治疗脂质氧化；和/或
(i-4)预防和/或治疗脂质代谢紊乱。
在另一优选例中，所述的斑块水平为斑块面积/血管总面积。
在另一优选例中，所述的组合物或制剂降低动脉斑块水平。
在另一优选例中，预防和/治疗炎症通过选自下组一种或多种途径进行预防和/或治疗：
(ii-1)降低炎症因子水平或含量；和/或
(ii-2)抑制nlrp3炎症小体的活化。
在另一优选例中，所述的动脉粥样硬化的患者患有炎症。
在另一优选例中，所述的脂质氧化为脂质氧化引起的脂毒性及细胞与器官损伤。
在另一优选例中，预防和/治疗脂质氧化通过选自下组一种或多种途径进行预防和/或治疗：
(iii-1)提高抗氧化剂的表达；和/或
(iii-2)降低氧化物质的水平。
在另一优选例中，所述的氧化物质选自下组：o2-、丙二醛，或其组合。
在另一优选例中，所述的抗氧化剂选自下组：ho-1、nqo1、gclc、gclm、sod，或其组合。
在另一优选例中，所述的o2-为动脉粥样硬化的硬斑块内o2-。
在另一优选例中，所述的sod为肝脏中的sod。
在另一优选例中，所述的表达选自下组：蛋白表达、rna表达(如mrna表达)，或其组合。
在另一优选例中，所述的水平选自下组：蛋白水平、rna水平(如mrna水平)，或其组合。
在另一优选例中，所述的脂质代谢紊乱选自下组：高血脂症、脂肪肝，或其组合。
在另一优选例中，所述的高血脂症选自下组：高tg、高tc、高ldl-c，或其组合。
在另一优选例中，所述的脂肪肝选自下组：高tg、高tc、高ldl-c，或其组合。
在另一优选例中，所述的预防和/或治疗脂质代谢紊乱通过选自下组一种或多种途径进行预防和/或治疗：
(iv-1)降低血脂含量；
(iv-2)抑制脂质合成；
(iv-3)加速脂质分解；和/或
(iv-4)降低脂质蓄积。
在另一优选例中，所述的脂质选自下组：tg、tc、ldl-c，或其组合。
在另一优选例中，所述的脂质选自下组：血清脂质、血浆脂质、血液脂质、肝脏脂质，或其组合。
在另一优选例中，所述的脂质蓄积为肝脏部位的脂质蓄积。
在另一优选例中，所述的炎症的患者患有动脉粥样硬化。
在另一优选例中，所述的炎症为动脉粥样硬化部位的炎症。
在另一优选例中，所述的组合物或制剂降低炎症因子水平。
在另一优选例中，所述的组合物或制剂抑制nlrp3炎症小体的活化。
在另一优选例中，所述的预防和/或治疗炎症通过选自下组一种或多种途径进行预防和/或治疗：
(ii-1)降低炎症因子水平或含量；和/或
(ii-2)抑制nlrp3炎症小体的活化。
在另一优选例中，所述的炎症因子为血清、血浆、血液和/或肝脏中的炎症因子。
在另一优选例中，所述的水平选自下组：蛋白表达水平、mrna表达水平，或其组合。
在另一优选例中，所述的炎症因子选自下组：tnf-α、il-1β、il-6、icam-1、vcam-1，或其组合。
在另一优选例中，所述的抑制nlrp3炎症小体的活化是通过选自下组一种或多种途径进行抑制：
(ii-2-1)降低肝脏中磷酸化p65水平；
(ii-2-2)降低肝脏中nlrp3水平；
(ii-2-3)降低选择下组的蛋白水平：pro-caspase-1、caspase-1、p20、pro-il-1β、il-1βp17，或其组合。
在另一优选例中，所述的抗氧化的患者患有动脉粥样硬化患者。
在另一优选例中，所述的脂质氧化为动脉粥样硬化部位的脂质氧化。
在另一优选例中，所述的氧化为氧化应激。
在另一优选例中，所述的组合物或制剂提高抗氧化剂的表达水平或活性。
在另一优选例中，所述的预防和/或治疗氧化为抗氧化。
在另一优选例中，所述的预防和/或治疗氧化通过选自下组一种或多种途径进行预防和/或治疗：
(iii-1)提高抗氧化剂的表达；和/或
(iii-2)降低氧化物质的水平。
在另一优选例中，所述的组合物或制剂降低氧化物质的水平。
在另一优选例中，所述的氧化物质选自下组：o2-、丙二醛，或其组合。
在另一优选例中，所述的抗氧化剂选自下组：ho-1、nqo1、gclc、gclm、sod，或其组合。
在另一优选例中，所述的o2-为动脉粥样硬化的硬斑块内o2-。
在另一优选例中，所述的sod为肝脏中的sod。
在另一优选例中，所述的表达选自下组：蛋白表达、rna表达(如mrna表达)，或其组合。
在另一优选例中，所述的水平选自下组：蛋白水平、rna水平(如mrna水平)，或其组合。
在另一优选例中，所述的脂质代谢紊乱的患者患有动脉粥样硬化。
在另一优选例中，所述的脂质代谢紊乱选自下组：高血脂症、脂肪肝，或其组合。
在另一优选例中，所述的高血脂症选自下组：高tg、高tc、高ldl-c，或其组合。
在另一优选例中，所述的脂肪肝选自下组：高tg、高tc、高ldl-c，或其组合。
在另一优选例中，所述的预防和/或治疗脂质代谢紊乱通过选自下组一种或多种途径进行预防和/或治疗：
(iv-1)降低血脂含量；
(iv-2)抑制脂质合成；
(iv-3)加速脂质分解；和/或
(iv-4)降低脂质蓄积。
在另一优选例中，所述的脂质选自下组：tg、tc、ldl-c，或其组合。
在另一优选例中，所述的脂质选自下组：血清脂质、血浆脂质、血液脂质、肝脏脂质，或其组合。
在另一优选例中，所述的脂质蓄积为肝脏部位的脂质蓄积。
在另一优选例中，所述的患者为高脂饮食患者。
在另一优选例中，所述的患者为动脉粥样硬化患者。
在另一优选例中，所述的患者为高脂饮食引起的动脉粥样硬化患者。
本发明的第二方面一种组合物，所述的药物组合物含有(a)如本发明第一方面所述的式i所示的化合物、或式ii所示的衍生物以及(b)药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述的药物组合物用于选自下组的一个或多个用途：(i)预防和/或治疗动脉粥样硬化；(ii)预防和/或治疗炎症；(iii)抗氧化；和/或(iv)预防和/或治疗脂质代谢紊乱。
本发明的第三方面，提供一种(i)预防和/或治疗动脉粥样硬化；(ii)预防和/或治疗炎症；(iii)预防和/或治疗脂质氧化；和/或(iv)预防和/或治疗脂质代谢紊乱的方法，所述的方法包括步骤：给予所需对象如本发明的第一方面所述的式i所示的化合物、或式ii所示的衍生物。
在另一优选例中，所述的对象为人或非人哺乳动物。
在另一优选例中，所述非人哺乳动物包括啮齿动物，如大鼠、小鼠。
在另一优选例中，施用剂量为0.01-100mg/kg/天，较佳地，0.1-50mg/kg/天，更佳地，0.5-20mg/kg/天。
在另一优选例中，施用频率为1-5次/天，较佳地1-3次/天。
在另一优选例中，施用包括一个或多个周期，各周期为2-60天，较佳地7-30天。
本发明第四方面，提供一种筛选(i)预防和/或治疗动脉粥样硬化；(ii)预防和/或治疗炎症；(iii)抗脂质氧化；和/或(iv)预防和/或治疗脂质代谢紊乱的候选药物的方法，包括步骤：
(a)提供一待测化合物以及阳性对照化合物，所述的阳性对照化合物为式i所示的化合物、或式ii所示的衍生物；
(b)在测试组中，检测所述待测化合物对非人动物模型的动脉粥样硬化、炎症、氧化和/或脂质代谢紊乱的影响，并与阳性对照组化合物中相应的实验结果进行比较，其中，在阳性对照组中，检测阳性对照化合物对动脉粥样硬化、炎症、氧化和/或脂质代谢紊乱的影响；
其中，如果所述待测化合物对非人动物模型的动脉粥样硬化、炎症、氧化和/或脂质代谢紊乱降低程度显著高于阴性对照组化合物，则提示所述待测化合物是治疗动脉粥样硬化、炎症、脂质氧化和/或脂质代谢紊乱的候选药物。
在另一优选例中，在步骤(b)中，将测试组与阳性对照组相比，并比较v1与v2的比值，其中v1为所述待测化合物对非人动物模型的动脉粥样硬化、炎症、脂质氧化和/或脂质代谢紊乱的降低程度v1，而v2为阳性对照化合物对非人动物模型的甘油三酯的降低程度，如果v1/v2≥80％，则提示所述待测化合物是治疗动脉粥样硬化、炎症、氧化和/或脂质代谢紊乱的候选药物。
在另一优选例中，所述的方法还包括步骤(c)：对步骤(b)中筛选出的待测化合物，进一步测定其对动脉粥样硬化、炎症、氧化和/或脂质代谢紊乱降的治疗效果。
在另一优选例中，所述的“显著高于”指v1/v2≥1.5，更佳地v1/v2≥2，更佳地≥3，更佳地≥4，
其中，v1为所述待测化合物对非人动物模型的动脉粥样硬化、炎症、脂质氧化和/或脂质代谢紊乱的降低程度；而v0为阳性对照化合物中非人动物模型的动脉粥样硬化、炎症、脂质氧化和/或脂质代谢紊乱降低程度。
在另一优选例中，所述的方法是非诊断和非治疗性的。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1显示jc-5411对动脉粥样硬化的治疗效果。其中，图1a-1b为每组的主动脉血管(斑块面积/血管总面积)染色(图1a)及其定量数据(图1b)，图1c为每组的主动脉流出道冰冻横截面切片染色图像，图1d为每组的主动脉流出道横截面的斑块面积，bonferroni测试的单向方差分析：与对照组相比，###p<0.001；与模型组相比，**p<0.01，***p<0.001，每组n＝6-8。图1e-1f为通过蛋白质印迹法测定的小鼠肝脏中nrf2和ho-1的蛋白(图1e)及其定量水平(图1f)；图1g为使用rt-qpcr测定mrna水平；student’st检验，*p<0.05，**p<0.01，与模型组相比，每组n＝4。
图2显示jc-5411的抗炎效果。其中，图2a为通过酶联免疫吸附实验测定的对照组、模型组和jc-5411组的apoe-/-小鼠的血清il-1β、il-6、icam-1和vcam-1和tnf-α的水平，student’st检验：#p<0.05，##p<0.01与对照组相比，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组相比，每组n＝8。图2b为提取来自对照组、模型组和jc-5411组的apoe-/-小鼠的总肝脏rna并反转成cdna，并通过rt-qpcr测定apoe-/-小鼠肝脏中tnfα，il-1β和il-6的mrna水平，t检验：与对照组相比，#p<0.05，##p<0.01；与模型组相比，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001；每组n＝8。图2c为心脏主动脉流出道免疫荧光图。图2d-2e为使用特异性针对p-p65，p65，nlrp3，caspase-1，caspase-1p20，pro-il-1β和il-1β-p17的抗体进行蛋白质印迹(图2d)及其定量结果(图2e)，所有蛋白条带均通过β-actin标准化，并表示为对照的倍数，student’st检验：相对于对照组，##p<0.01，###p<0.001；相对于模型组，**p<0.01，***p<0.001，每组n＝4。
图3显示jc-5411的抗氧化作用。图3a-3b为对照组、模型组和jc-5411组的apoe-/-小鼠的的主动脉粥样硬化斑块中的dhe荧光图像(图3a)和定量结果(图3b)，比例尺：100μm，student’st检验：与对照组相比，###p<0.001；与模型组相比，**p<0.01；每组n＝6。图3c为对照组、模型组和jc-5411组的apoe-/-小鼠肝脏中sod的活性，酶活性通过总蛋白量标准化。student’st检验：与对照组相比，###p<0.001；与模型组相比，*p<0.05；每组n＝8。图3d为对照组、模型组和jc-5411组的apoe-/-小鼠的肝脏中mda的水平，通过总蛋白质量将mda水平标准化，student’st检验：与对照组比较，###p<0.001；与模型组相比，*p<0.05；每组n＝8。图3e为通过rt-qpcr测量对照组、模型组和jc-5411组的apoe-/-小鼠肝脏中nqo1，gclc和gclm的mrna水平，student’st检验：相对于对照组，#p<0.05，###p<0.001；与模型组相比，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001；每组n＝8。
图4显示jc-5411对apoe-/-小鼠脂质代谢的改善。图4a为对照组、模型组、jc-5411及瑞舒伐他汀组中apoe-/-小鼠的血清tc，tg，ldl-c和hdl-c水平，bonferroni检验的单向方差分析：与对照组相比，###p<0.001；与模型组相比，***p＜0.001；每组n＝6-8。图4b为对照组、模型组、jc-5411及瑞舒伐他汀组apoe-/-小鼠肝脏中的tc，tg的水平，bonferroni检验单因素方差分析：与对照组相比，#p<0.05，##p<0.01；与模型组相比*p<0.05；每组n＝6-8。图4c为每组的oro染色的apoe-/-小鼠肝脏切片的图像，比例尺：100μm。图4d为通过每组的h&e染色的apoe-/-小鼠肝脏切片的图像，比例尺：100μm。图4e-4f为通过蛋白质印迹检测abca1、p-acc、acc、ldl-r、cpt1a和scd1的蛋白质(图4e)及其定量(图4f)结果，所有蛋白条带均通过β-actin标准化，并表示为对照的倍数。student’st检验：与对照组相比，#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001；与模型组相比，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001；每组n＝4。
图5为jc-5411对金黄地鼠脂质代谢紊乱的改善，其中，图5a-5b分别为每组的金黄地鼠肝脏切片的(图5a)h&e和(图5b)oro染色图像，比例尺：200μm，每组n＝6。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究，首次意外发现，本发明的异硫氰酸酯类化合物或其衍生物(式i所示的化合物、式ii所示的衍生物)在对动脉粥样硬化具有优异治疗的同时，对炎症、氧化应激和脂质代谢紊乱等疾病也具有优异的治疗作用，因此，本发明的异硫氰酸酯类化合物或其衍生物(式i所示的化合物、式ii所示的衍生物)可同时对动脉粥样硬化及氧化应激、炎症和脂质代谢紊乱进行改善，起到预防和延缓动脉粥样硬化的进程和降低心梗和中风等心血管事件的发生，实现对动脉粥样硬化引起的冠心病和脑中风等预防与治疗。在此基础上，发明人完成了本发明。
术语
除非另有定义，否则本文中所用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属领域普通技术人员普遍理解的含义相同。
如本文所用，术语“包含”、“包括”、“含有”可互换使用，不仅包括封闭式定义，还包括半封闭、和开放式的定义。换言之，所述术语包括了“由……构成”、“基本上由……构成”。
应当理解，本领域的普通技术人员可以选择本发明的化合物上的取代基和取代型式以产生化学上稳定的化合物，所述化合物可以通过本领域己知的技术以及下文所阐述的方法合成。如果被超过一个取代基团取代，应当理解，这多个基团可以是在同一个碳上或在不同碳上，只要产生稳定的结构即可。
如本文所用，术语“取代”或“取代的”是基团上的氢原子被非氢原子基团，但需要满足其化合价要求并且由取代生成化学稳定的化合物，即不会自发进行诸如环化、消除等转变的化合物。
如本文所用，术语“烷基”指只含碳原子的直链(即，无支链)或支链饱和烃基，或直链和支链组合的基团。当烷基前具有碳原子数限定(如c1-c10烷基)指所述的烷基含有1-10个碳原子，例如，c1-c4烷基指含有1-4个碳原子的烷基，代表性实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、或类似基团。
在本发明中，术语“卤素”指f、cl、br或i。
在本发明中，术语“卤代”是指被卤素取代。
如本文所用，术语“卤代烷基”是指烷基的一个或多个(优选为1、2、3或4个)氢被卤素取代，所述的烷基和卤素如上所定义，当烷基前具有碳原子数限定(如卤代c1-c10烷基)指所述的烷基含有1-10个碳原子，例如，卤代c1-c4烷基指含有1-4个碳原子的卤代烷基，代表性实例包括但不限于-cf3、-chf2、单氟代异丙基、双氟代丁基、或类似基团。
如本文所用，术语“环烷基”指具有饱和的或部分饱和的单元环，二环或多环(稠环、桥环或螺环)环系基团。当某个环烷基前具有碳原子数限定(如c3-c12)时，指所述的环烷基具有3-12个环碳原子。在一些优选实施例中，术语“c3-c8环烷基”指具有3-8个环碳原子的饱和或部分饱和的单环或二环烷基，包括环丙基、环丁基、环戊基、环庚基、或类似基团。“螺环烷基”指单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的二环或多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。“稠环烷基”指系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳二环或多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。“桥环烷基”指任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。如下是环烷基的代表性实例，包括但不限于：
如本文所用，术语“卤代环烷基”是指环烷基的一个或多个(优选为1、2、3或4个)氢被卤素取代，所述的环烷基和卤素如上所定义，当环烷基前具有碳原子数限定(如卤代c1-c10环烷基)指所述的环烷基含有1-10个碳原子，例如，卤代c1-c4环烷基指含有1-4个环碳原子的卤代环烷基，代表性实例包括但不限于单氟代环异丙基、单氟代环丁基、双氟代环丁基、或类似基团。
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，是一种芳香环状烃类化合物基团，当芳基前面具有碳原子数限定，如c6-c12芳基，则指所述的芳基具有6-12个环碳原子，例如苯基和萘基。所述芳基环可以稠合于其它环状基团(包括饱和或不饱和环)，但不能含有杂原子如氮、氧、或硫，同时连接母体的点必须在具有共轭的π电子体系的环上的碳原子上。如下是芳基代表性实例，包括但不限于：
术语“杂芳基”指具有一个到多个(优选为1、2、3或4个)杂原子的芳族杂环系基团，其可以是单环(单环的)或者稠合在一起或共价地连接的多环(二环的、三环的或多环的)，每个含有杂原子的杂环上可以带有一个多个(如1、2、3、4个)各自独立选自下组的杂原子：氧、硫和氮。当杂芳基前有元数限定时，指的是杂芳基的环原子个数，例如5-12元杂芳基指的是具有5-12个环原子的杂芳基，代表性的例子包括但不限于：吡咯基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、呋喃基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三氮嗪基、三氮唑基及四氮唑基等。
如本文所用，“a-ncs”与“a-n＝c＝s”可相互替换使用，其中，ncs为异硫氰酸酯基。
如本文所用，缩写代表的含义如表a所示：
表a术语
活性成分
本发明所述的活性成分即为异硫氰酸酯类化合物或其衍生物，所述的活性成分为式(i)所示的化合物或其式(ii)所示的衍生物，或它们的组合：
a-ncs(i)
式(i)中：
ncs为异硫氰酸酯基；
a为-xr1或-cr2r3r4；其中，x为-(ch2)n-，n为0-6的整数；
r1为甲基、叔丁基、异丙基、甲硫基、甲氧基、烯丙基、甲代烯丙基、环己基、甲基亚硫酰基、萘基、甲基环己基、吗啉基、二乙基氨基、苯甲酰基、乙氧基羰基、叔辛基、氯原子、三甲基硅基、取代或未取代的c6-c20芳基、取代或未取代的5-12元杂芳基；
所述的“取代”指基团中一个或多个h(优选为1、2、3或4个)被选自下组的取代基所取代：c1-c4烷基、c3-c8环烷基、卤代c1-c4烷基、卤代c3-c8环烷基、卤素、溴甲基、甲氧基、硝基、叠氮基、二氟甲氧基、甲硫基、氰基、三氟甲氧基、三氟甲硫基、叔丁氧基羰基、乙氧基羰基；
r2、r3、r4各自独立地为h、苯基或c1-c4烷基；
式(ii)中：
a如式(i)中所定义；
r5为氢或通过硫原子与
在另一优选例中，所述氨基酸选自：甘氨酸、谷氨酸、丝氨酸、丙氨酸或蛋氨酸。
在另一优选例中，n为1、2、3、4、5或6。
在另一优选例中，r1为甲基、叔丁基、异丙基、甲硫基、甲氧基、烯丙基、甲代烯丙基、环己基、甲基亚硫酰基、萘基、甲基环己基、吗啉基、二乙基氨基、苯甲酰基、乙氧基羰基、叔辛基、氯原子、三甲基硅基、取代或未取代的c6-c12芳基、取代或未取代的5-12元杂芳基；
在另一优选例中，所述的c1-c4烷基为甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或己基。
在另一优选例中，所述的c1-c4环烷基为环甲基、环乙基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
在另一优选例中，所述的卤代c1-c4烷基为被一个或多个(优选为1、2、3或4个)卤素取代的c1-c4烷基。
在另一优选例中，所述的卤代c3-c8环烷基为被一个或多个(优选为1、2、3或4个)卤素取代的c1-c4烷基。
在另一优选例中，卤素为f、cl、br或i。
在另一优选例中，所式(i)所示的化合物或如式(ii)所示的衍生物选自下组：异硫氰酸酯、异硫氰酸酯的n-乙酰半胱氨酸加合物、或其组合；其中，所述异硫氰酸酯选自下组：苯基异硫氰酸乙酯、异硫氰酸环己基酯、4-甲氧基苄基异硫氰酸酯、异硫氰酸4-氯苄酯、苯乙基异硫氰酸酯、苯丙基异硫氰酸酯、4-苯丁基异硫氰酸酯、6-苯己基异硫氰酸酯、三苯甲基异硫氰酸酯、1-异硫氰酸-4-甲磺酰基丁烷(莱菔硫烷)、异硫氰酸α-甲基苄酯、异硫氰酸己酯、异硫氰酸甲基环己酯、1-萘异硫氰酸酯、2-氯苯基异硫氰酸酯、2-溴苯基异硫氰酸酯、3-氯苯基异硫氰酸酯、3-溴苯基异硫氰酸酯、3-硝基苯基异硫氰酸酯、4-叠氮苯异硫氰酸酯、4-氟苯基异硫氰酸酯、4-氯苯基异硫氰酸酯、4-溴苯基异硫氰酸酯、4-硝基苯基异硫氰酸酯、乙氧羰基异硫氰酸酯、叔辛基异硫氰酸酯、对甲苯异硫氰酸酯、苯甲酰基异硫氰酸酯、邻甲苯异硫氰酸酯、间甲苯异硫氰酸酯、2,3,4-三氟苯基异硫氰酸酯、2,5-二甲氧基苯基异硫氰酸酯、2-(4-吗啉)乙基异硫氰酸酯、2-(三氟甲基)苯基异硫氰酸酯、2-(二氟甲氧基)苯基异硫氰酸酯、2-(甲硫基)苯基异硫氰酸酯、2-氟-5-(三氟甲基)苯基异硫氰酸酯、3,5-双(三氟甲基)苯基异硫氰酸酯、3-(4-吗啉基)丙基异硫氰酸酯、3-(三氟甲基)苯基异硫氰酸酯、3-(二乙基氨基)丙基异硫氰酸酯、3-(甲硫基)丙基异硫氰酸酯、3-(甲硫基)苯基异硫氰酸酯、3-氰基苯基异硫氰酸酯、4-(三氟甲基)苯基异硫氰酸酯、4-(三氟甲氧基)苯基异硫氰酸酯、4-(三氟甲硫基)苯基异硫氰酸酯、4-(二氟甲氧基)苯基异硫氰酸酯、4-(甲硫基)苯基异硫氰酸酯、4-氰基苯基异硫氰酸酯、4-溴-2-氟苯基异硫氰酸酯、4-甲氧基苯基异硫氰酸酯、甲代烯丙基异硫氰酸酯、2-(4-异硫氰酸苯氧基)甲苯磺酸乙酯、异硫氰酸2-氯乙酯、异硫氰酸(2-氟苯)酯、异硫氰酸(3-氟苯)酯、异硫氰酸丁酯、异硫氰酸三甲基硅酯、异硫氰酸丙酯、异硫氰酸乙酯、异硫氰酸叔丁酯、异硫氰酸异丙酯、异硫氰酸烯丙酯、异硫氰酸甲酯、异硫氰酸苯乙酯、异硫氰酸苯甲酯、异硫氰酸苯酯、2,4,5-三氯异硫氰酸苯酯、2,4,6-三氯异硫氰酸苯酯、2,4-二氟异硫氰酸苯酯、2,5-二氟异硫氰酸苯酯、2,6-二氟异硫氰酸苯酯、2,6-二甲基异硫氰酸苯酯、2-乙基异硫氰酸苯酯、2-氯-4-硝基异硫氰酸苯酯、3-甲氧基异硫氰酸苯酯、4-(溴甲基)异硫氰酸苯酯、4-乙基异硫氰酸苯酯、5-氯-2-甲基异硫氰酸苯酯、1,4-二硫异氰酸酯丁烷、2-氯-5-(三氟甲基)异硫氰酸苯酯、2-甲氧基-4-硝基异硫氰酸苯酯、3,4,5-三甲氧基异硫氰酸苯酯、3-(三氟甲硫基)异硫氰酸苯酯、4-氯-3-(三氟甲基)异硫氰酸苯酯、4-甲基-3-(三氟甲基)异硫氰酸苯酯、2,3-二氯苯基异硫代氰酸酯、2,4-二氯苯基异硫代氰酸酯、2,5-二氯苯基异硫代氰酸酯、2,6-二氯苯基异硫代氰酸酯、2-(4-氯苯基)乙基异硫代氰酸酯、2-(乙氧基羰基)苯基异硫代氰酸酯、2-甲氧基-5-甲基苯基异硫代氰酸酯、2-甲氧基苯基硫代异氰酸酯、2-甲烷氧基乙基硫代异氰酸酯、3,4-二氯苯基异硫代氰酸酯、3,5-二氯苯基异硫代氰酸酯、4-氟-3-(三氟甲基)苯基异硫代氰酸酯、4-碘苯基异硫代氰酸酯、3-异硫氰基苯甲酸叔丁酯、4-异硫氰基苯甲酸叔丁酯、异硫氰酸二苯乙酯。
在另一优选例中，所式(i)所示的化合物或如式(ii)所示的衍生物选自下组：异硫氰酸酯、异硫氰酸酯的n-乙酰半胱氨酸加合物、或其组合；其中，所述异硫氰酸酯选自下组：苯乙基异硫氰酸酯、苯丙基异硫氰酸酯、烯丙基异硫氰酸酯、苯甲基异硫氰酸酯、苯基异硫氰酸酯、l-苯基异硫氰酸乙酯、环己基异硫氰酸脂、4-甲氧基苄基异硫氰酸酯、异硫氰酸4-氯苄酯、苯丙基异硫氰酸酯、4-苯丁基异硫氰酸酯、6-苯己基异硫氰酸酯、三苯甲基异硫氰酸酯、莱菔硫烷或其组合。
在另一优选例中，所述式(i)所示的化合物或如式(ii)所示的衍生物选自下组：苯乙基异硫氰酸酯、烯丙基异硫氰酸酯、苯甲基异硫氰酸酯、苯基异硫氰酸酯、l-苯基异硫氰酸乙酯、环己基异硫氰酸脂、4-甲氧基苄基异硫氰酸酯、异硫氰酸4-氯苄酯、苯丙基异硫氰酸酯、4-苯丁基异硫氰酸酯、6-苯己基异硫氰酸酯、三苯甲基异硫氰酸酯、苯乙基异硫氰酸酯-n-乙酰半胱氨酸加合物、莱菔硫烷或其组合。
代表性对，所述的式(i)所示的化合物为
代表性地，所述的式(ii)所示的衍生物为：
peitc-nac化合物为上述jc-5411在体内的代谢产物。
如本文所用，“本发明化合物”、“本发明的式(i)所示的化合物或如式(ii)所示的衍生物”、或“式(i)所示的化合物或如式(ii)所示的衍生物”可互换使用，指具有式i结构或如式ii结构的化合物，或其药学上可接受的盐。应理解，该术语还包括上述组分的混合物。
上述异硫氰酸酯类化合物或其衍生物可以单独使用或者以两种或更多种方式组合使用，当组合使用时，在达到治疗目的的前提下，各个化合物的质量比无特别限制。
在本发明中，对于获得异硫氰酸酯类化合物的方法没有特别的限制，比如其可以从天然植物(例如芥菜或萝卜)中提取、采用化学合成或半化学合成的方法制备等。本发明中所使用的异硫氰酸酯类化合物可通过市售途径获得，例如可购自sigma-aldrich公司。
用途
本发明的异硫氰酸酯类化合物或其衍生物(式i所示的化合物、式ii所示的衍生物)以及含有本发明化合物为主要活性成分的组合物或制剂可用于选自下组的一个或多个用途：(i)预防和/或治疗动脉粥样硬化；(ii)预防和/或治疗炎症；(iii)抗脂质氧化；和/或(iv)预防和/或治疗脂质代谢紊乱。
本发明还提供一种(i)预防和/或治疗动脉粥样硬化；(ii)预防和/或治疗炎症；(iii)预防和/或治疗氧化；和/或(iv)预防和/或治疗脂质代谢紊乱的方法，给予所需对象如本发明所述的式i所示的化合物、或式ii所示的衍生物，或如本发明所述的组合物。
在另一优选例中，所述的对象为人或非人哺乳动物。
在另一优选例中，所述非人哺乳动物包括啮齿动物，如大鼠、小鼠。
在另一优选例中，施用剂量为0.01-100mg/kg/天，较佳地，0.1-50mg/kg/天，更佳地，0.5-20mg/kg/天。
在另一优选例中，施用频率为1-5次/天，较佳地1-3次/天。
在另一优选例中，施用包括一个或多个周期，各周期为2-60天，较佳地7-30天。
如本文所用，术语“预防”指在疾病之前施用治疗有效量本发明的异硫氰酸酯类化合物或其衍生物(式i所示的化合物、式ii所示的衍生物)，从而使得所述疾病被预防，发生时间延迟、或仍然发生，但是比不施用本发明的异硫氰酸酯类化合物或其衍生物(式i所示的化合物、式ii所示的衍生物)的程度减轻。
如本文所用，术语“治疗”、指施用治疗有效量的本发明的异硫氰酸酯类化合物或其衍生物(式i所示的化合物、式ii所示的衍生物)，从而减少、减轻或减缓疾病、障碍或病症的进展或发展。在另一实施方式中，“治疗”指减轻、减缓动脉粥样硬化、炎症、脂质氧化和/或脂质代谢紊乱的一种或多种体征或症状。
本发明所述的“预防”和“治疗”包括延缓和终止疾病的进展，或消除疾病，并不需要100％抑制、消灭和逆转。在一些实施方案中，与不存在本发明所述异硫氰酸酯类化合物或其衍生物(式i所示的化合物、式ii所示的衍生物)观察到的水平相比，本发明所述异硫氰酸酯类化合物或其衍生物(式i所示的化合物、式ii所示的衍生物)将动脉粥样硬化、炎症、脂质氧化和/或脂质代谢紊乱)减轻、预防、抑制和/或逆转了例如至少约1％、至少约10％、至少约30％、至少约50％、或至少约80％。
预防和/或治疗动脉粥样硬化
动脉粥样硬化是由多种因素如脂质代谢紊乱、炎症和氧化应激造成的脂毒性等因素引起的一种动脉血管内膜由于大量泡沫细胞(如巨噬细胞和血管平滑肌细胞摄取大量氧化变性脂质发展而成)、胆固醇结晶、胆固醇脂及炎症因子形成的病理表型。由于冠状血管及脑血管是最丰富的、并且比较细。粥样硬化的动脉血管及脑血管最容易受到突发事件如炎症、高血压、高血糖导致纤维帽的破裂而造成血栓，堵塞血管，引起心梗(冠心病)和脑梗(中风)。
本发明的化合物可通过抑制脂质氧化，抑制炎症因子的表达来等调节脂质代谢紊乱，从而预防动脉粥样硬化的发生与发展，以及心脑血管事件的发生。
本发明的异硫氰酸酯类化合物或其衍生物(式i所示的化合物、式ii所示的衍生物)可用于预防和/或治疗动脉粥样硬化。
在本发明的一个优选例中，所述的动脉粥样硬化选自下组：主动脉及其分枝粥样硬化、冠状动脉粥样硬化、脑动脉粥样硬化、肾动脉粥样硬化、肠系膜动脉粥样硬化、四肢动脉粥样硬化，或其组合。
在另一优选例中，所述的动脉粥样硬化为选自下组的一种或多种病因引起的动脉粥样硬化：高脂饮食、炎症、脂质氧化、脂质代谢紊乱，或其组合。
在另一优选例中，所述的炎症为动脉粥样硬化部位的炎症。
在另一优选例中，所述的氧化为动脉粥样硬化部位的氧化。
在另一优选例中，所述的预防和/或治疗动脉粥样硬化通过选自下组一种或多种途径进行预防和/或治疗：
(i-1)降低动脉斑块水平；
(i-2)预防和/治疗炎症；
(i-3)预防和/治疗氧化；和/或
(i-4)预防和/或治疗脂质代谢紊乱；
如本文所用，“动脉斑块”与“动脉粥样硬化斑块”可互换使用。
在另一优选例中，所述的斑块水平为斑块面积/血管总面积。
在另一优选例中，预防和/治疗炎症通过选自下组一种或多种途径进行预防和/或治疗：
(ii-1)降低炎症因子水平或含量；和/或
(ii-2)抑制nlrp3炎症小体的活化。
在另一优选例中，所述的炎症因子为血清、血浆、血液和/或肝脏中的炎症因子。
在另一优选例中，所述的水平选自下组：蛋白表达水平、mrna表达水平，或其组合。
在另一优选例中，所述的炎症因子选自下组：tnf-α、il-1β、il-6、icam-1、vcam-1，或其组合。
在另一优选例中，所述的抑制nlrp3炎症小体的活化是通过选自下组一种或多种途径进行抑制：
(ii-2-1)降低肝脏中磷酸化p65水平；
(ii-2-2)降低肝脏中nlrp3水平；
(ii-2-3)降低选择下组的蛋白水平：pro-caspase-1、caspase-1、p20、pro-il-1β、il-1βp17，或其组合。
在另一优选例中，预防和/治疗氧化通过选自下组一种或多种途径进行预防和/或治疗：
(iii-1)提高抗氧化剂的表达；和/或
(iii-2)降低氧化物质的水平。
在另一优选例中，所述的氧化物质选自下组：o2-、丙二醛，或其组合。
在另一优选例中，所述的抗氧化剂选自下组：ho-1、nqo1、gclc、gclm、sod，或其组合。
在另一优选例中，所述的o2-为动脉粥样硬化的硬斑块内o2-。
在另一优选例中，所述的sod为肝脏中的sod。
在另一优选例中，所述的表达选自下组：蛋白表达、rna表达(如mrna表达)，或其组合。
在另一优选例中，所述的脂质代谢紊乱选自下组：高血脂症、脂肪肝，或其组合。
在另一优选例中，所述的高血脂症选自下组：高tg、高tc、高ldl-c，或其组合。
在另一优选例中，所述的脂肪肝选自下组：高tg、高tc、高ldl-c，或其组合。
在另一优选例中，所述的预防和/或治疗脂质代谢紊乱通过选自下组一种或多种途径进行预防和/或治疗：
(iv-1)降低血脂含量；
(iv-2)抑制脂质合成；
(iv-3)加速脂质分解；和/或
(iv-4)降低脂质蓄积。
如本文所用，“血脂”与“血中的脂质”可互换使用。
在另一优选例中，所述的脂质选自下组：tg、tc、ldl-c，或其组合。
在另一优选例中，所述的脂质选自下组：血清脂质、血浆脂质、血液脂质、肝脏脂质，或其组合。
在另一优选例中，所述的脂质蓄积为肝脏部位的脂质蓄积。
预防和/或治疗炎症
本发明的异硫氰酸酯类化合物或其衍生物(式i所示的化合物、式ii所示的衍生物)可用于预防和/或治疗炎症。
在本发明的一个优选例中，所述的炎症的患者患有动脉粥样硬化。
在另一优选例中，所述的患者为高脂饮食患者。
在另一优选例中，所述的炎症为动脉粥样硬化部位的炎症。
在另一优选例中，所述的预防和/或治疗炎症通过选自下组一种或多种途径进行预防和/或治疗：
(ii-1)降低炎症因子水平或含量；和/或
(ii-2)抑制nlrp3炎症小体的活化。
在另一优选例中，所述的炎症因子为血清、血浆、血液和/或肝脏中的炎症因子。
在另一优选例中，所述的水平选自下组：蛋白表达水平、mrna表达水平，或其组合。
在另一优选例中，所述的炎症因子选自下组：tnf-α、il-1β、il-6、icam-1、vcam-1，或其组合。
在另一优选例中，所述的抑制nlrp3炎症小体的活化是通过选自下组一种或多种途径进行抑制：
(ii-2-1)降低肝脏中磷酸化p65水平；
(ii-2-2)降低肝脏中nlrp3水平；
(ii-2-3)降低选择下组的蛋白水平：pro-caspase-1、caspase-1、p20、pro-il-1β、il-1βp17，或其组合。
预防和/或治疗氧化
本发明的异硫氰酸酯类化合物或其衍生物(式i所示的化合物、式ii所示的衍生物)可用于预防和/或治疗氧化。
在本发明的一个优选例中，所述的炎症的患者患有动脉粥样硬化。
在另一优选例中，所述的患者为高脂饮食患者。
在另一优选例中，所述的氧化为氧化应激。
在另一优选例中，所述的组合物或制剂提高抗氧化剂的表达水平或活性。
在另一优选例中所述的预防和/或治疗氧化通过选自下组一种或多种途径进行预防和/或治疗：
(iii-1)提高抗氧化剂的表达；和/或
(iii-2)降低氧化物质的水平。
在另一优选例中，所述的氧化物质选自下组：o2-、丙二醛，或其组合。
在另一优选例中，所述的抗氧化剂选自下组：ho-1、nqo1、gclc、gclm、sod，或其组合。
在另一优选例中，所述的o2-为动脉粥样硬化的硬斑块内o2-。
在另一优选例中，所述的sod为肝脏中的sod。
在另一优选例中，所述的表达选自下组：蛋白表达、rna表达(如mrna表达)，或其组合。
在另一优选例中，所述的水平选自下组：蛋白水平、rna水平(如mrna水平)，或其组合
预防和/或治疗脂质代谢紊乱
本发明的异硫氰酸酯类化合物或其衍生物(式i所示的化合物、式ii所示的衍生物)可用于预防和/或治疗脂质代谢紊乱。
在另一优选例中，所述的脂质代谢紊乱的患者患有动脉粥样硬化。
在另一优选例中，所述的脂质代谢紊乱的患者为高脂饮食患者。
在另一优选例中，所述的脂质代谢紊乱选自下组：高血脂症、脂肪肝，或其组合。
在另一优选例中，所述的高血脂症选自下组：高tg、高tc、高ldl-c，或其组合。
在另一优选例中，所述的脂肪肝选自下组：高tg、高tc、高ldl-c，或其组合。
在另一优选例中，所述的预防和/或治疗脂质代谢紊乱通过选自下组一种或多种途径进行预防和/或治疗：
(iv-1)降低血脂含量；
(iv-2)抑制脂质合成；
(iv-3)加速脂质分解；和/或
(iv-4)降低脂质蓄积。
在另一优选例中，所述的脂质选自下组：tg、tc、ldl-c，或其组合。
在另一优选例中，所述的脂质选自下组：血清脂质、血浆脂质、血液脂质、肝脏脂质，或其组合。
在另一优选例中，所述的脂质蓄积为肝脏部位的脂质蓄积。
在另一优选例中，所述的患者为高脂饮食患者。
本发明还提供一种(i)预防和/或治疗动脉粥样硬化；(ii)预防和/或治疗炎症；(iii)预防和/或治疗氧化；和/或(iv)预防和/或治疗脂质代谢紊乱的方法，给予所需对象如本发明所述的式i所示的化合物、或式ii所示的衍生物，或如本发明所述的组合物。
在另一优选例中，所述的对象为人或非人哺乳动物。
在另一优选例中，所述非人哺乳动物包括啮齿动物，如大鼠、小鼠。
在另一优选例中，施用剂量为0.01-100mg/kg/天，较佳地，0.1-50mg/kg/天，更佳地，0.5-20mg/kg/天。
在另一优选例中，施用频率为1-5次/天，较佳地1-3次/天。
在另一优选例中，施用包括一个或多个周期，各周期为2-60天，较佳地7-30天。
组合物和施用
本发明所述的组合物包括(但并不限于)：药物组合物、食品组合物、保健组合物、膳食补充剂等。
本发明的异硫氰酸酯类化合物或其衍生物(式i所示的化合物、式ii所示的衍生物)以及含有本发明化合物为主要活性成分的组合物可用于选自下组的一个或多个用途：(i)预防和/或治疗动脉粥样硬化；(ii)预防和/或治疗炎症；(iii)抗脂质氧化；和/或(iv)预防和/或治疗脂质代谢紊乱；
本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的异硫氰酸酯类化合物或其衍生物(式i所示的化合物、式ii所示的衍生物)及药学上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有0.1-1000mg异硫氰酸酯类化合物或其衍生物/剂，更佳地，含有1-500mg异硫氰酸酯类化合物或其衍生物/剂，最佳地含有2-300mg异硫氰酸酯类化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。
“药学上可以接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如
本发明化合物或药物组合物或制剂的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药，优选的给药方式为口服给药。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。
除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、娇味剂和香料。
除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。
本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药(如其他预防和/或治疗动脉粥样硬化、炎症、氧化和/或脂质代谢紊乱的药物)。
使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为0.1～1000mg，优选1～600mg，更优选为2-300mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
药物筛选方法
本发还提供一种筛选(i)预防和/或治疗动脉粥样硬化；(ii)预防和/或治疗炎症；(iii)抗氧化；和/或(iv)预防和/或治疗脂质代谢紊乱的候选药物的方法，包括步骤：
(a)提供一待测化合物以及阳性对照化合物，所述的阳性对照化合物为式i所示的化合物、或式ii所示的衍生物；
(b)在测试组中，检测所述待测化合物对非人动物模型的动脉粥样硬化、炎症、氧化和/或脂质代谢紊乱的影响，并与阳性对照组化合物中相应的实验结果进行比较，其中，在阳性对照组中，检测阳性对照化合物对动脉粥样硬化、炎症、氧化和/或脂质代谢紊乱的影响；
其中，如果所述待测化合物对非人动物模型的动脉粥样硬化、炎症、氧化和/或脂质代谢紊乱降低程度显著高于阴性对照组，则提示所述待测化合物是治疗动脉粥样硬化、炎症、氧化和/或脂质代谢紊乱的候选药物。
在另一优选例中，在步骤(b)中，将测试组与阳性对照组相比，并比较v1与v2的比值，其中v1为所述待测化合物对非人动物模型的动脉粥样硬化、炎症、氧化和/或脂质代谢紊乱的降低程度v1，而v2为阳性对照对非人动物模型的甘油三酯的降低程度，如果v1/v2≥80％，则提示所述待测化合物是治疗动脉粥样硬化、炎症、氧化和/或脂质代谢紊乱的候选药物。
在另一优选例中，所述的方法还包括步骤(c)：对步骤(b)中筛选出的待测化合物，进一步测定其对动脉粥样硬化、炎症、氧化和/或脂质代谢紊乱降的治疗效果。
在另一优选例中，所述的“显著高于”指v1/v2≥1.5，更佳地v1/v2≥2，更佳地≥3，更佳地≥4，
其中，v1为所述待测化合物对非人动物模型的动脉粥样硬化、炎症、氧化和/或脂质代谢紊乱的降低程度；而v0为阳性对照化合物中非人动物模型的动脉粥样硬化、炎症、氧化和/或脂质代谢紊乱降低程度。
在另一优选例中，所述的方法是非诊断和非治疗性的。
本发明的主要优点包括：
本发明首次发现异硫氰酸酯类化合物或其衍生物(式i所示的化合物、式ii所示的衍生物)具有预防和/或治疗动脉粥样硬化的作用，并且在对动脉粥样硬化治疗的同时，对炎症、氧化应激和脂质代谢紊乱等疾病也具有优异的治疗作用，因此，本发明的异硫氰酸酯类化合物或其衍生物(式i所示的化合物、式ii所示的衍生物)可同时对脉粥样硬化、氧化应激、炎症和脂质代谢紊乱进行改善，避免动脉粥样硬化治疗的同时给予其它治疗氧化应激、炎症和脂质代谢紊乱的药物，从而避免多种药物同时给药导致的药物相互拮抗、药效降低、副作用增大等不良影响，提高患者的顺应性。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
实施例
jc-5411化合物的结构式如下所示：
实施例1
细胞培养
使用内皮细胞培养基培养人脐静脉内皮细胞(huvec)。人单核巨噬细胞(thp-1)则使用含有10％胎牛血清的rpmi1640培养基培养。人肝癌细胞hepg2细胞使用10％胎牛血清的dmem培养基培养。所有细胞均在co2浓度为5％，温度为恒定37℃的孵箱进行培养。
转染及荧光素酶表达活性测定
在96孔板中，使用转染试剂lip2000将pgl4.73(luc2p-are-hygro,promage,madison,wi)与pgl4.75(hrluc/cmv,promage,madison,wi)以1:100的比例共转染于hepg2细胞中。放入孵箱孵育6小时后，加入用含有5％胎牛血清dmem稀释好的一定浓度peitc(25μm,2.5μm,5μmand10μm)继续培养24小时。随后使用荧光素酶检测系统测定荧光素酶表达活性。
使用上述同样的方法将pnlf1-nrf2和pkeap1质粒以1:100的比例共转染于hepg2细胞中。在不同浓度peitc作用24小时后使用nano-
蛋白表达检测
使用含有1mmol/lpmsf的ripa裂解液对新鲜匀浆组织和细胞中的总蛋白进行提取。提取蛋白浓度用bca蛋白检测试剂盒进行检测并制成蛋白浓度相同的蛋白电泳样品。随后利用sds-page电泳技术对蛋白样品进行分离，样品中蛋白的表达量则借助westernblot技术测定。本研究所使用的抗体包括nrf2,ho-1,abca1,ldlr,cpt1a,scd1,acc,p-acc,nlrp3,pro-caspase-1,il-1β,p65,p-p65,icam-1,vcam-1,以及相应的抗兔或抗小鼠二抗。所有目的蛋白的相对表达量均以β-actin为内参，蛋白条带则用nihimagej软件进行分析。
rna分析
使用qiagenrna提取试剂盒对新鲜匀浆组织rna进行提取，并使用全式金cdna合成试剂盒对提取的rna进行反转录得到cdna样品。随后利用rt-qpcr，以gapdh为内参，使用△△ct法分析并计算目的基因表达的相对含量。使用的引物包括：
mousenrf2(forward:5′-ctccgtggagtcttccatttac-3′,reverse:5′-gcactatctagctcctccatttc-3′)；mouseho-1(forward:5′-gtacacatccaagccgagaa-3′,reverse:5′-tggtacaaggaagccatcac-3′)；mousenqo1(forward:5′-gagaagagccctgattgtactg-3′,reverse:5′-acctcccatcctctcttctt-3′)；mousegclc(forward:5′-catcgacctgaccatcgataag-3′,reverse:5′-agggtgagtgggtctctaataa-3′)；mousegclm(forward:5′-cagccttactgggaggaattag-3′,reverse:5′-gctccaactgtgtcttgtct-3′)；mouseil-6(forward:5′-cagccttactgggaggaattag-3′,reverse:5′-gctccaactgtgtcttgtct-3′)；mouseil-1β(forward:5′-ccacctcaatggacagaatatca-3′,reverse:5′-cccaaggccacaggtattt-3′)；mousetnfα(forward:5′-cttccatccagttgccttct-3′,reverse:5′-ctccgacttgtgaagtggtatag-3′)。
单核细胞黏附实验
将内皮细胞接种于6孔板中，并分别加入dmso(0.1％)和peitc(1μm、5μm)作用18小时。随后加入终浓度为10ng/ml的人肿瘤坏死因子(tnfα)刺激细胞6小时。之后加入约为7×106的thp-1细胞与刺激过的huvec共培养30分钟，用培养基小心洗去未黏附的单核细胞，并用zeissaxiovert40c显微镜观察黏附情况并拍照。
sirna干扰
使用lipornaimax试剂将阴性对照sirna与nrf2sirna分别转入huvec中，6小时后用正常内皮细胞生长培养基替换含有转染试剂的培养基继续培养24小时，再加入不同浓度的peitc孵育18小时。随后加入终浓度为10ng/ml的tnfα刺激6小时，用于细胞黏附实验或蛋白样品制备。
1、实验方法
apoe-/-小鼠及其处理
apoe-/-小鼠一种动脉粥样硬化动物模型。
apoe-/-小鼠(雄性，8周龄)购自北京维通利华实验动物技术有限公司。apoe-/-小鼠随机分成对照组(control)、模型组(model)、jc-5411组(jc-5411化合物)和阳性药组(rosuvastatin)，对照组的apoe-/-小鼠给予小鼠标准正常饮食(正常普通饲料)，以及模型组、jc-5411组和阳性药组小鼠在给予高脂饮食(hfd，tp26300,南通特洛菲饲料科技有限公司)同时，对照组和模型组的apoe-/-小鼠给予0.5％cmc-na混悬水溶液，jc-5411组的apoe-/-小鼠给予jc-5411化合物(给药剂量为60mg/kg,溶解于0.5％羟甲基纤维素钠(cmc-na)，阳性药组的apoe-/-小鼠给予rosuvastatin化合物(给药剂量为5mg/kg,溶解于0.5％cmc-na)。采用一天给药两次的频率连续给药10周，每周检测小鼠体重。在给药结束后，小鼠禁食进行眼眶取血后施行安乐死处理，并解剖取材备用。使用全自动生化仪对小鼠血清总胆固醇(tc)、甘油三酯(tg)、低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)、高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)等水平进行测定。血清tnfα,il-1β,icam1和vcam1等水平则分别使用相应的elisa试剂盒进行测定。
分离apoe-/-小鼠自主动脉至髂骨总分支的全长动脉置于4％多聚甲醛中固定过夜，然后置于20％蔗糖中保存。将全长动脉至于油红o染液(oro)中染色30分钟后拍照。将固定好的心脏以主动脉根朝上的方向摆放好并包埋于最佳切割温度化合物(oct)中，随后使用冰冻切片机将心脏流出道制成7μm厚的冰冻切片并于oro中染色30分钟后置于显微镜下观察并拍照。动脉以及心脏流出道斑块均使用nihimagej软件进行分析。
取下小鼠肝脏后迅速放入液氮中速冻，并至于-80℃保存备用。肝脏tc以及tg等水平则分别利用相应试剂盒进行抽提及测定。
使用dhe荧光探针检测心脏流出道斑块内超氧阴离子(o2-)水平。将心脏流出道切片置于dhe溶液中染色30分钟后用pbs轻轻漂洗3次，用高内涵分析系统对切片进行荧光拍照并分析。
免疫组织化学染色：apoe-/-小鼠肝脏组织均在4％多聚甲醛中固定过夜后置于20％蔗糖溶液中保存。分别制作石蜡切片用于苏木素&伊红(h&e)染色，冰冻切片用于油红染色。随后随机挑选有代表性的视野于显微镜下拍照。
所有动物实验均经中国医学科学院医药生物技术研究所动物保护与使用委员会批准，并按规定进行。
实验结果
对动脉粥样硬化斑块水平进行定量分析，利用wb以及rt-qpcr技术分别检测nrf2及其下游基因ho-1蛋白和基因表达情况，对小鼠血清中的tnfα、il-1β、il-6,vcam-1和icam-1等促炎因子，肝脏中tnfα,il-1β和il-6mrna等水平进行分析，对心脏主动脉流出道切片免疫荧光检测，检测apoe-/-小鼠肝脏中磷酸化p65蛋白表达水平和nlrp3炎性小体相关蛋白等水平的表达，检测jc-5411对apoe-/-小鼠抗氧化能力的影响和检测jc-5411对apoe-/-小鼠体内的脂质代谢影响，具体检测结果如图1-4所示。
从图1a和图1b可以看出，与apoe-/-动脉粥样硬化模型组相比，jc-5411显著降低了apoe-/-小鼠动脉斑块水平(斑块面积/血管总面积)，其中，图1b的数据如表1b所示：
表1b每组的主动脉血管的oro(斑块面积/血管总面积)定量数据(n＝6-10)
备注：###p<0.001vs对照组，***p<0.001vs模型组。
从图1c和图1d显示jc-5411也能显著降低主动脉流出道的斑块面积。其中，图1d的数据如表1d所示：
表1d每组的主动脉流出道冰冻横截面的斑块面积(n＝6)
备注：###p<0.001vs对照组，**p<0.01vs模型组，***p<0.001vs模型组。
从图1e、图1f和图1g可以看出，jc-5411能够显著提高小鼠肝脏内nrf2及ho-1的表达，其中，图1f的数据如表1f所示：
表1f蛋白质印迹法测定的小鼠肝脏中nrf2和ho-1的mrna和蛋白水平(n＝4)
备注：*p<0.05vs模型组，**p<0.01vs模型组。
从图1中够可以得出，jc-5411具有优异的治疗动脉粥样硬化作用。
从图2a-2b中可以看出，与模型组相比，jc-5411能够显著降低apoe-/-小鼠血清中il-1β、il-6、icam-1、vcam-1和tnfα水平(图2a)，同时jc-5411也能降低apoe-/-小鼠肝脏中tnf-α,il-1β和il-6mrna水平(图2b)，其中，图2a的数据如表2a所示：
表2a血清tnfα，il-1β，il-6，icam-1和vcam-1的水平(ng/l，x±sd,n＝6)
备注：#p<0.05vs对照，##p<0.01vs对照，*p<0.05vs模型，**p<0.01vs模型，***p<0.001vs模型
此外，从图2c的心脏主动脉流出道切片免疫荧光结果显示，jc-5411能降低主动脉根部icam-1和vcam-1蛋白表达水平(图2c)。
从2d和2e中可以看出，jc-5411能够降低apoe-/-小鼠肝脏中磷酸化p65蛋白表达水平和肝脏中nlrp3蛋白表达，同时降低其下游蛋白包括pro-caspase-1,caspase-1p20,pro-il-1β,il-1βp17的表达，表明在apoe-/-小鼠体内，jc-5411能显著抑制nlrp3炎症小体的活化。图2e的数据如表2e所示：
表2e小鼠肝脏炎症相关蛋白水平(fold，x±sd,n＝4)
备注：##p<0.01vs对照组，###p<0.001vs对照组，**p<0.01vs模型组，***p<0.001vs模型组。
从图2中够可以得出，jc-5411具有优异的抗炎作用。
从图3a和图3b中可以看出，通过超氧化物阴离子荧光探针(dhe,dihydroethidium)染色发现jc-5411能显著降低动脉粥样硬斑块内o2-水平(荧光区域面积/斑块总面积)，其中，图3b的数据如表3b所示：
表3b小鼠的主动脉粥样硬化斑块中的dhe荧光图像的阳性比例(％)定量结果(x±sd,n＝6)
备注。###p<0.001vs对照，**p<0.01vs模型。
从图3c和图3d中可以看出，jc-5411增加了apoe-/-小鼠肝脏中sod的活性，并减低了脂质过氧化产物丙二醛(mda)的水平，同时，从图3e中可以看出，jc-5411增加apoe-/-小鼠肝脏中抗氧化相关基因包括nqo1、gclc、gclm的mrna水平(图3e)。其中，图3c-3d的数据如表3c-3d所示：
表3c-3dapoe-/-动脉粥样硬化模型小鼠肝脏sod和mda水平(χ±sd)(n＝6)
备注：###p<0.001vs对照，*p<0.05vs模型。
从图3中可以得出，jc-5411具有优异的抗氧化作用。
从图4a中可以看出，与模型组相比，jc-5411显著降低了apoe-/-小鼠血清中tg、tc、ldl-c的水平，但hdl-c的水平没有显著的影响。其中，图4a的数据如表4a所示：
表4a为每组apoe-/-小鼠的血清tc，tg，ldl-c和hdl-c水平(mmol/l，χ±sd)(n＝6)
备注，###p<0.001vs对照，***p<0.001vs模型。
从图4b中可以看出，jc-5411也显著降低了apoe-/-小鼠肝脏中tg、tc的水平(p＝0.08)，其中，图4b的数据如表4b所示：
表4bapoe-/-动脉粥样硬化模型小鼠肝脏脂质水平(μmol/克蛋白，χ±sd)(n＝6)
备注：#p<0.05vs对照，##p<0.01vs对照，*p<0.05vs模型。
从图4c所示的肝脏h&e染色结果表面，jc-5411改善了肝脏细胞脂肪化的状态，从染色结果可以看出jc-5411给药组染色切片区相对于模型组降低。从图4d所示的肝脏oro染色结果表明，jc-5411组小鼠肝脏切片染色阳性区域较模型组显著降低，即jc-5411显著降低了apoe-/-小鼠肝脏中的脂质蓄积。
从图4e中可以看出，jc-5411显著增加了apoe-/-小鼠肝脏中abca1的蛋白表达，同时肝脏中低密度脂蛋白受体(ldl-r)蛋白水平增加。
从图4f中可以看出，脂肪合成相关蛋白sdc1的水平在给予jc-5411后显著降低，且脂肪分解相关蛋白磷酸化acc、cptia水平显著上升。其中，4f的数据如表4f所示：
表4fapoe-/-动脉粥样硬化模型小鼠肝脏脂质合成相关蛋白水平(fold，χ±sd)(n＝4)
备注：#p<0.05vs对照，##p<0.01vs对照，###p<0.001vs对照，*p<0.05vs模型，**p<0.01vs模型，***p<0.001vs模型。
从图4中可以看出，jc-5411能够通过抑制脂肪合成加速脂肪分解来改善小鼠体内脂质代谢紊乱情况。
实施例2
利用金黄地鼠脂质代谢紊乱模型对jc-5411的体内改善脂质代谢紊乱活性进行评价。
实验方法
正常健康金黄地鼠(雄性，8周龄)购自北京维通利华实验动物技术有限公司。金黄地鼠随机分成模型组(model)、三个jc-5411组和阳性药组(fenofibrate)、模型组、三个jc-5411组、阳性药组地鼠分别给予高脂饮食(hfd)以构建脂质代谢紊乱模型，给予高脂饮食一周后模型建立成功，此外，选择正常健康金黄地鼠为对照组(control)，对照组地鼠给予标准正常饮食。金黄地鼠脂质代谢紊乱模型构建成功后，模型组的地鼠给予0.5％cmc-na混悬水溶液，三个jc-5411组的地鼠分别给予不同给药量的jc-5411化合物(20mg/kg,40mg/kg,60mg/kg,溶解于0.5％cmc-na)，阳性药组的地鼠分别给予fenofibrate化合物(150mg/kg,溶解于0.5％cmc-na)，给药方式为灌胃给药，每天两次，共给药3周。给药结束后，收集每组金黄地鼠血液以及肝脏组织样品备用。血清中tc、tg、ldl-c以及hdl-c水平由生化分析仪测定，地鼠肝脏中tc和tg水平测定所使用的方法与上述apoe-/-小鼠相同)
免疫组织化学染色
金黄地鼠肝脏组织均在4％多聚甲醛中固定过夜后置于20％蔗糖溶液中保存。分别制作石蜡切片用于苏木素&伊红(h&e)染色，冰冻切片用于油红染色。随后随机挑选有代表性的视野于显微镜下拍照。
实验结果
每组金色地鼠的血清中tc，tg，ldl-c，hdl-c的水平如表5.1所示：表5.1为金色地鼠的血清中tc，tg，ldl-c，hdl-c的水平(mmol/l，x±sd)(n＝6)
备注：采用bonferroni测试单向anova分析：与对照组相比，###p<0.001；与模型组相比，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。
从表5.1中可以看出，与模型组相比，给予jc-5411后，金黄地鼠血清中tc、tg以及ldl-c水平显著降低。
每组金色地鼠的肝脏中tc和tg的水平如表5.2所示：
表5.2金黄地鼠肝脏中的脂质水平(μmol/克蛋白，χ±sd)每组(n＝6)
备注：采用bonferroni单因素方差分析检验：与对照组相比，#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001；与模型组相比，*p<0.05，***p<0.001。
从表5.2中可以看出，与模型组相比，给予jc-5411后，金黄地鼠肝脏中的tc、tg水平显著降低。
从图5a和图5b的肝脏h&e与oro染色结果可以看出，jc-5411改善了金黄地鼠肝脏细胞脂肪化状态，降低了肝脏脂肪蓄积水平。这些结果都为jc-5411具有良好的体内抗脂质代谢紊乱活性提供了有力的证据。
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