生物改性半夏蛋白的制备方法及其在制备抗肺癌药品中的应用_2

文档序号:8420655阅读:来源:国知局
物改性半夏虫体干燥品装入常温膨化装置(200520108339. X)中,对 膨化装置内充入二氧化碳气体并加压至〇. l~5MPa,时间10~60min,然后迅速释放压力至常 压,生物改性半夏虫体被膨化成粉体; (2) 膨化粉碎后的生物改性半夏粉体加入到膨胀溶剂体系提取装置(201210179076. 6) 中,加入5Kg液态二氧化碳、300mL甲醇及200gNH3 ? H2O,加压至5MPa,形成膨胀溶剂体系, 保持温度15°C,时间20min,生物改性半夏粉体中的蛋白质溶解,然后降压至常压,生成生 物改性半夏蛋白粗品与甲醇-NH 3 ? H2O的混合液; (3) 收集含有生物改性半夏蛋白粗品的溶液,用孔径30Mm的微孔过滤器过滤去处固体 杂质; (4) 溶液用孔径IOOnm的超滤机超滤处理,压力0. 5MPa,温度为常温,收集含有相应分 子量的生物改性半夏蛋白超滤溶液; (5) 超滤溶液用20%乙腈溶解,C18固相萃取柱用80%乙腈活化预处理,加0. 05%三氟乙 酸-水平衡,用10%乙腈溶液溶解的超滤溶液上柱,常温下用1〇~80%的乙腈梯度脱洗,流速 5mL/min,收集相关梯度的洗脱成分; (6) 将洗脱成分溶解在4. 5%聚乙二醇-7%葡聚糖T500 (重量比)溶剂体系中,用超声驻 波液相制备色谱(200920274485. 8)分离纯化,超声波功率1.0 KW,频率500KHz,流速200mL/ min,紫外检测器波长260nm ; (7) 纯化后的生物改性半夏蛋白用真空冷冻干燥机在温度-30~40°C、时间20h干燥制 备成冻干蛋白粉。
[0036] 实施例3: (1) 将1000 g生物改性半夏虫体干燥品装入常温膨化装置(200520108339. X)中,对 膨化装置内充入二氧化碳气体并加压至〇. l~5MPa,时间10~60min,然后迅速释放压力至常 压,生物改性半夏虫体被膨化成粉体; (2) 膨化粉碎后的生物改性半夏粉体加入到膨胀溶剂体系提取装置(201210179076. 6) 中,加入l~10Kg液态二氧化碳、100~500mL乙醇及100~300g氯化铵,加压至2~10MPa,形成 膨胀溶剂体系,保持温度l〇~20°C,时间10~30min,生物改性半夏粉体中的蛋白质溶解,然 后降压至常压,生成生物改性半夏蛋白粗品与乙醇-氯化铵的混合液; (3) 收集含有生物改性半夏蛋白粗品的溶液,用孔径0. 5~50Mm的微孔过滤器过滤去处 固体杂质; (4) 溶液用孔径50~100nm的超滤机超滤处理,压力0. 3~0. 8MPa,温度为常温,收集含有 相应分子量的生物改性半夏蛋白超滤溶液; (5) 超滤溶液用20%乙腈溶解,C18固相萃取柱用50~100%乙腈活化预处理,加 0. 02~0. 1%三氟乙酸-水平衡,用10%乙腈溶液溶解的超滤溶液上柱,常温下用10~80%的 乙腈梯度脱洗,流速l~l〇mL/min,收集相关梯度的洗脱成分; (6) 将洗脱成分溶解在正丁醇-乙酸乙酯-水(体积比1. 25:3. 75:5)溶剂体系中, 用超声驻波液相制备色谱(200920274485. 8 )分离纯化,超声波功率0. 2~3. 0KW,频率 500~1000KHz,流速 50~500mL/min,紫外检测器波长 260~280nm; (7) 纯化后的生物改性半夏蛋白用真空冷冻干燥机在温度-30~50°C、时间18~26h干燥 制备成冻干蛋白粉。
[0037] 实施例4: (1) 将1000 g生物改性半夏虫体干燥品装入常温膨化装置(200520108339. X)中,对膨 化装置内充入二氧化碳气体并加压至2MPa,时间40min,然后迅速释放压力至常压,生物改 性半夏虫体被膨化成粉体; (2) 膨化粉碎后的生物改性半夏粉体加入到膨胀溶剂体系提取装置(201210179076. 6) 中,加入6Kg液态二氧化碳、200mL乙醇及150g氯化铵,加压至6MPa,形成膨胀溶剂体系,保 持温度20°C,时间lOmin,生物改性半夏粉体中的蛋白质溶解,然后降压至常压,生成生物 改性半夏蛋白粗品与乙醇-氯化铵的混合液; (3) 收集含有生物改性半夏蛋白粗品的溶液,用孔径50Mm的微孔过滤器过滤去处固体 杂质; (4) 溶液用孔径IOOnm的超滤机超滤处理,压力0. 5MPa,温度为常温,收集含有相应分 子量的生物改性半夏蛋白超滤溶液; (5) 超滤溶液用20%乙腈溶解,C18固相萃取柱用60%乙腈活化预处理,加0. 08%三氟乙 酸-水平衡,用10%乙腈溶液溶解的超滤溶液上柱,常温下用1〇~80%的乙腈梯度脱洗,流速 8mL/min,收集相关梯度的洗脱成分; (6) 将洗脱成分溶解在正丁醇-乙酸乙酯-水(体积比1. 25:3. 75:5)溶剂体系中,用超 声驻波液相制备色谱(200920274485. 8)分离纯化,超声波功率2. 0KW,频率lOOOKHz,流速 300mL/min,紫外检测器波长280nm ; (7) 纯化后的生物改性半夏蛋白用真空冷冻干燥机在温度-30~50°C、时间18h干燥制 备成冻干蛋白粉。
[0038] 实施例5: 取生物改性半夏冻干蛋白粉100~150g、卵磷脂l~15g、液体石蜡200~350g,将三者搅拌 均匀,用研磨机以30~60r/min研匀成糊状,另取乌桕脂100~200g在水浴上加热40~60°C熔 化后,冷却至25~38°C,倒入研匀的生物改性半夏蛋白-卵磷脂-液体石蜡混合物中迅速搅 拌均匀,趁热浇注于栓剂模具中,冷凝到10~20°C,从栓剂模具中取出即为成型的生物改性 半夏蛋白栓剂,整理光滑后包装成品。
[0039] 实施例6: 取生物改性半夏冻干蛋白粉120g、卵磷脂10g、液体石蜡250g,将三者搅拌均匀,用研 磨机以60r/min研匀成糊状,另取乌桕脂150g在水浴上加热60°C熔化后,冷却至30°C,倒 入研匀的生物改性半夏蛋白-卵磷脂-液体石蜡混合物中迅速搅拌均匀,趁热浇注于栓剂 模具中,冷凝到15°C,从栓剂模具中取出即为成型的生物改性半夏蛋白栓剂,整理光滑后包 装成品。
[0040] 实施例7: 脂质体注射剂制备: (I)Imol磷脂酰丝氨酸用玻璃平面成型法制成薄膜后,加入1000~3000L生理盐水水合 处理,再用超声波在频率500~2000KHz、功率0. 01~5KW处理l~5min。
[0041] (2)取上述溶液 l~100mL 加入到含量 0? 001~0. 01mol/L 的 0? l~1000mLCaCl2溶液 中,在转速30~75r/min条件下搅拌10~30min,然后在25~50°C条件下静置30~120min。
[0042] (3)将生成物放置离心机中,在转速1500~3000r/min离心分离5~30min,将离 心物从离心机中取出后加入2~50g生物改性半夏蛋白混合均匀,在10~25 °C条件下静置 10~120min。
[0043] (4)上述物体加入含有0. 01~10mol/L的乙二胺四乙酸的生理盐水溶液0. 1~10L 中,混合均匀静置30~180min,得到单层脂质体。
[0044] (5)取l~10mg单层脂质体与10~200mL生理盐水溶液混合,制备成为注射剂。
[0045] 实施例8: 脂质体注射剂制备: (I)Imol磷脂酰丝氨酸用玻璃平面成型法制成薄膜后,加入2000L生理盐水水合处理, 再用超声波在频率1000 KHz、功率2KW处理5min。
[0046] (2)取上述溶液50mL加入到含量0? 005mol/L的1000 mLCaCl2溶液中,在转速45r/ min条件下搅拌30min,然后在30°C条件下静置60min。
[0047] (3)将生成物放置离心机中,在转速2000r/min离心分离20min,将离心物从离心 机中取出后加入20g生物改性半夏蛋白混合均勾,在15°C条件下静置60min。
[0048] (4)上述物体加入含有lmol/L的乙二胺四乙酸的生理盐水溶液5L中,混合均匀静 置80min,得到单层脂质体。
[0049] (5)取5mg单层脂质体与IOOmL生理盐水溶液混合,制备成为注射剂。
[0050] 实施例9: 肠溶胶囊的制备: 取10~100g生物改性半夏蛋白、500~2000g预凝胶淀粉及5-50g乳糖充分混合,填充入 羟丙基甲基纤维素肠溶胶囊中制备成为生物改性半夏蛋白肠溶胶囊。
[0051] 实施例10: 肠溶胶囊的制备: 取50
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