【具体实施方式】
[0050] 本发明，在其一些实施方案中，涉及预防肿瘤转移、癌症治疗和预后及鉴定为推定 转移抑制剂的试剂的方法。
[0051] 详细解释本发明的至少一个实施方案之前，应理解本发明在其应用上不一定限于 以下描述中提出或实施例中举例说明的详情。本发明能够有其它实施方案或能够以各种方 式实践或实施。
[0052] 生长因子驱使细胞迀移和转移，但根本机制未完全了解。
[0053] 本发明现已鉴定突触囊泡磷酸酶-2 (SYNJ2)为调节体外侵袭伪足和板状伪足和 体内癌转移中的主要模块。
[0054] 如下文和之后的实施例部分所述，本发明人在动物和患者样本中证实了其在体 外的发现。具体地，采用经EGF刺激的乳腺细胞，本发明人将脂质磷酸酶突触囊泡磷酸酶 2 (SYNJ2)与侵袭性表现型联系起来，并且将高SYNJ2于癌症患者的短期存活率关联起来。 SYNJ2的敲减稳健地削弱了动物模型中乳腺肿瘤细胞的转移。在体外，SYNJ2缺乏型细胞表 现出EGFR和整联蛋白脱轨运输，导致粘着斑变形、板状伪足受阻和侵袭伪足消失。不受理 论约束，表明活性EGFR的再循环局部促进SYNJ2介导的特定磷酸肌醇脂质脱磷酸，从而促 使侵袭伪足和板状伪足形成并促进肿瘤进展（见图15)。
[0055] 因此，根据本发明的一方面，提供了一种预防肿瘤转移的方法，条件是所述肿瘤 不是神经胶质瘤，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的突触囊泡磷酸酶 2(SYNJ2)抑制剂，从而预防肿瘤转移。
[0056] 如本文所使用，术语"肿瘤转移"指从其首发位置扩散到身体其它部位的恶性肿 瘤，例如转移到肺部的乳腺癌。
[0057] 如本文所使用，术语"癌症"和"肿瘤"可交换使用。该术语指异常且不受控制的 细胞分裂引起的恶性生长或肿瘤。
[0058] 如本文所使用，术语"预防"指阻止、中断、抑制转移过程或进展和后续转移。
[0059] 根据另一方面，提供了一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施 用治疗有效量的突触囊泡磷酸酶2 (SYNJ2)抑制剂和与癌症发作或进展相关的细胞表面受 体的抑制剂，从而治疗癌症。
[0060] 如本文所使用，术语"治疗"包括消除、大体上抑制、减缓或逆转病状的进展，大体 上改善病状的临床或审美症状，或大体上预防病状的临床或审美症状出现。
[0061] 可根据本发明的一些实施方案治疗（或预后）的癌症的非限制性实例包括任何实 体或非实体癌和/或癌转移，包括但不限于胃肠道肿瘤（结肠癌、直肠癌、结直肠癌瘤、结 直肠癌、结直肠腺瘤、1型遗传性非息肉病、2型遗传性非息肉病、3型遗传性非息肉病、6型 遗传性非息肉病、结直肠癌、7型遗传性非息肉病、小肠和/或大肠癌瘤、食道癌、伴有食道 癌的胼胝症、胃癌、胰腺癌、胰腺内分泌肿瘤）、子宫内膜癌、隆凸性皮肤纤维肉瘤、胆囊癌、 胆道肿瘤、前列腺癌、前列腺腺癌、肾癌（例如，2型或1型维尔姆斯氏瘤（Wilms' tumor))、 肝癌（例如，肝胚细胞瘤、肝细胞癌瘤、肝细胞癌）、膀胱癌、胚胎性横纹肌肉瘤、胚细胞瘤、 滋养细胞瘤、睾丸生殖细胞瘤、卵巢未成熟畸胎瘤、子宫、卵巢上皮性、骶尾瘤、绒毛膜癌、胎 盘部位滋养细胞瘤、成人上皮细胞瘤、卵巢癌、浆液性卵巢癌、卵巢性索肿瘤、宫颈癌、子宫 颈癌、小细胞和非小细胞肺癌、鼻咽、乳腺癌（例如，乳腺导管癌、乳腺浸润性导管癌、散发 性乳腺癌、乳腺癌敏感性、4型乳腺癌、乳腺癌-1、乳腺癌-3、乳腺-卵巢癌）、鳞状细胞癌 (例如，在头颈部）、神经源性肿瘤、星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、成神经细胞瘤、淋巴 瘤（例如，霍奇金病（Hodgkin's disease)、非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin's lymphoma)、 B细胞瘤、伯基特淋巴瘤（Burkitt)、皮肤T细胞瘤、组织细胞瘤、淋巴细胞瘤、T细胞瘤、胸 腺肿瘤）、神经胶质瘤、腺癌、肾上腺瘤、遗传性肾上腺皮质癌、脑部恶性（肿瘤）、各种其它 癌（例如，支气管原大细胞癌、导管癌、EhrIich-Lettre腹水、表皮样癌、大细胞癌、Lewis肺 癌、髓样癌、粘膜表皮样瘤、燕麦细胞癌、小细胞癌、梭形细胞癌、棘细胞癌、移行细胞癌、未 分化癌、癌肉瘤、绒毛膜癌、囊腺癌）、室管膜母细胞瘤、上皮瘤、红白血病（例如，弗兰德红 白血病（Friend)、淋巴母细胞红白血病）、纤维肉瘤、巨细胞瘤、胶质瘤、成胶质细胞瘤（例 如，多形性、星形细胞瘤）、神经胶质瘤、肝细胞瘤、异种杂交瘤、杂交骨髓瘤、组织细胞瘤、杂 交瘤（例如，B细胞）、肾上腺样瘤、胰岛瘤、岛细胞瘤、角质瘤、成平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、白 血病（例如，急性淋巴细胞白血病、急性淋巴母细胞白血病、急性淋巴母细胞性前B细胞白 血病、急性淋巴母细胞性T细胞白血病、急性成巨核细胞白血病、单核细胞白血病、急性髓 细胞白血病、急性髓性白血病、伴有嗜酸粒细胞增多的急性髓性白血病、B细胞性白血病、 嗜碱细胞性白血病、慢性髓性白血病、慢性白血病、B细胞性白血病、嗜酸细胞性白血病、弗 兰德白血病（Friend)、粒细胞或髓细胞性白血病、毛细胞白血病、淋巴细胞性白血病、巨核 细胞白血病、单核细胞白血病、单核-巨噬细胞白血病、成髓细胞性白血病、骨髓性白血病、 慢性骨髓单核细胞性白血病、浆细胞白血病、前B细胞白血病、前髓细胞性白血病、亚急性、 T细胞、淋巴肿瘤、髓系恶性肿瘤素因、急性非淋巴细胞性白血病）、淋巴肉瘤、黑素瘤、乳腺 肿瘤、肥大细胞瘤、成神经管细胞瘤、间皮瘤、转移瘤、单核细胞瘤、多发性骨髓瘤、骨髓发育 异常综合征、骨髓瘤、肾母细胞瘤、神经组织胶质瘤、神经组织神经元肿瘤、神经鞘瘤、成神 经细胞瘤、少突神经胶质瘤、骨软骨瘤、骨骨髓瘤、骨肉瘤（例如，尤文氏肉瘤（Ewing's))、 乳头状瘤、移行细胞瘤、嗜铬细胞瘤、垂体瘤（侵袭型）、浆细胞瘤、成视网膜细胞瘤、横纹 肌肉瘤、肉瘤（例如，尤文氏肉瘤、组织细胞肉瘤、延森氏肉瘤（Jense)、骨原性肉瘤、网状 细胞肉瘤）、神经鞘瘤、皮下瘤、畸胎癌（例如，多能畸胎癌）、畸胎瘤、睾丸瘤、胸腺瘤和 毛发上皮瘤、胃癌、纤维肉瘤、多形性成胶质细胞瘤；多发性血管球瘤、李-佛美尼综合征 (Li-Fraumeni syndrome)、脂肪肉瘤、Lynch癌家族综合征II、男性生殖细胞肿瘤、肥大细 胞白血病、甲状腺髓样癌、多发性脑膜瘤、内分泌瘤病粘液肉瘤、副神经节瘤、家族性非嗜铬 瘤、毛母质瘤、乳头瘤、家族性和分散性、横纹肌样瘤易感综合征、家族性、横纹肌样瘤、软组 织肉瘤和伴有成胶质细胞瘤的Turcot综合征。
[0062] 根据一特定实施方案，所述癌症为乳腺癌。
[0063] 根据一特定实施方案，所述癌症（或癌转移）为受EGF调节。
[0064] 根据另一优选实施方案，所述癌症的特征在于ErbB受体分子例如EGFR或HER2过 表达或上调。
[0065] 已经将导致EGFR过表达（称为上调）或过度活性的突变与许多癌症，包括肺癌、 肛门癌和多形性成胶质细胞瘤相联系起来。在后一种情况下，常常观察到EGFR或多或少的 特异性突变，称为EGFRvIII。在所有上皮癌的约30%中牵涉到EGFR或家族成员的突变、扩 增或误调节。
[0066] 牵涉EGFR的突变可导致其不断活化，这样可导致细胞分裂不受控制-癌症素因。 相反，已经在几个类型的癌症中鉴定出EGFR的突变，并且是一类不断扩大的抗癌疗法的目 标[Zhang 2007 J. Clin. Invest. 117(8) :2051 - 8] 〇
[0067] 在约30%的乳腺癌中出现ERBB2基因扩增或过表达。与疾病复发增加和预后较差 有极大关联。还了解到在卵巢癌、胃癌和侵蚀形式的子宫癌，例如浆液性子宫内膜癌中出现 过表达。
[0068] 下面是癌症列表，其中涉及了受体酪氨酸激酶ErbB家族的成员。
[0069] ErbB-I-肾上腺皮质癌、胆管癌、宫颈癌、结直肠癌、食道癌、胆囊癌、胃癌、成胶质 细胞瘤、头颈癌、肺癌（非小细胞、鳞状细胞癌、腺癌和大细胞肺癌）、胰腺癌、唾液腺癌、腹 泻、良性赘生物、浸润性癌、皮肤病、导管原位癌、甲沟炎。
[0070] ErbB-2-胆管癌、膀胱癌、乳腺癌、胆管细胞癌、食道癌、胆囊癌、胃癌、成胶质细胞 瘤、卵巢癌、胰腺癌、唾液腺癌。根据一特定实施方案，所述癌症为乳腺癌或胃癌。
[0071] ErbB_3_乳腺癌、肺癌和病毒性白血病。
[0072] ErbB-4-乳腺癌、病毒性白血病、髓母细胞瘤、肺癌和乳腺肿瘤。
[0073] 如本文所使用，术语"受试者"指已经诊断患有癌症的哺乳动物（例如，人）。
[0074] 如本文所使用，突触囊泡磷酸酶-2或SYNJ2指突触肌醇-1，4, 5-三磷酸5-磷酸 酶2, EC 3. 1.3. 36。突触囊泡磷酸酶-2为泛表达磷酸肌醇5-磷酸酶（SEQ ID N0:1和2分 别指多聚核苷酸和编码的多肽）。
[0075] 如本文所使用，短语"突触囊泡磷酸酶2 (SYNJ2)抑制剂"指降低或下调SYNJ2的 表达或活性的分子。
[0076] 下调可超过 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或完全抑制（通 过给定测定法，例如下文所述测定法测定活性或表达100%损失）。
[0077] 下调SYNJ2的表达可如下文所述在DNA、RNA或蛋白质水平上实现。SYNJ2活性指 其催化活性[作为磷酸酶，将PI (3, 4, 5)P3转化为PI (3, 4)P 2]、其信号活性（与发动蛋白、 皮动蛋白相互作用，见图5E-H)或细胞定位。在后一种情况下，SYNJ2抑制剂将改变蛋白质 的细胞定位。
[0078] 因此，可在基因组和/或转录产物水平上使用敲入所述基因或干扰其转录和/或 翻译的各种分子[例如，核酸沉默剂例如核酸（RNA)沉默剂（例如反义、siRNA、shRNA、微 RNA、核酶和DNA酶）]，或在蛋白质水平上使用例如拮抗剂、裂解多肽的酶等实现SYNJ2的下 调。
[0079] 以下是一系列能够下调SYNJ2的表达水平和/或活性的试剂。
[0080] 能够下调SYNJ2的试剂的一个实例为能够特异性结合SYNJ2的抗体或抗体片段。 优选地，所述抗体特异性结合SYNJ2的至少一个表位。当SYNJ2为细胞蛋白时，采取措施将 抗体引入细胞内。如本文所使用，术语"表位"指抗体结合部位在抗原上结合的任何抗原决 定簇。
[0081] 表位决定簇通常由分子化学活性表面分组，例如氨基酸或碳水化合物侧链组成并 且通常具有特定三维结构特征以及特定电荷特征。
[0082] 如本发明中所使用，术语"抗体"包括完整分子及其能够与巨噬细胞结合的功能片 段，例如Fab、F(ab'）2和Fv。这些功能性抗体片段定义如下：（l)Fab，可通过用木瓜蛋白酶 消化全抗体得到完整轻链和一条重链的一部分生成的含抗体分子的单价抗原结合片段的 片段；（2) Fab'，可通过用胃蛋白酶处理全抗体，接着还原得到完整轻链和重链的一部分获 得的抗体分子片段；每个抗体分子获得两个Fab'片段；（3) (Fab'）2,可通过用胃蛋白酶处 理全抗体，无需后续还原得到的抗体片段；F (ab'）2是通过两个二硫键结合在一起的两个 Fab'片段的二聚体；（4)Fv，定义为含表示成两条链的轻链可变区和重链可变区的基因工 程化片段；和（5)单链抗体（"SCA")，含有轻链可变区和重链可变区，通过适合多肽接头连 接成基因融合单链分子的基因工程化分子。
[0083] 生产多克隆和单克隆抗体及其片段的方法在本领域众所周知（见例如，Harlow 和 Lane，Antibodies:A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 1988,其以引用的方式并入本文）。
[0084] 根据本发明一些实施方案所述的抗体片段可通过抗体的蛋白水解或通过在大肠 杆菌或哺乳动物细胞（例如中国仓鼠卵巢细胞培养物或其它蛋白表达系统）中表达编码 所述片段的DNA制备。可用传统方法通过胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化全抗体获得抗体片 段。例如，可通过用胃蛋白酶酶促裂解抗体生成抗体片段以提供5S片段表示的F(ab'）2。 可使用硫醇还原剂，和任选地由二硫键裂解产生的巯基的封端基团进一步裂解该片段，以 生成3.5S Fab'单价片段。可选地，使用胃蛋白酶酶促裂解直接生成两个单价Fab'片段 和一个Fc片段。例如，Goldenberg，美国专利第4, 036, 945号和第4, 331，647号及其中所 含参考文献中描述了这些方法，所述专利特此以引用的方式整体并入。同样见Porter，R. R. [Biochem. J. 73:119-126(1959)]。也可使用其它裂解抗体的方法，例如分离重链形成单 价轻链-重链片段，进一步裂解片段或其它酶促、化学或基因技术，只要所述片段与完整抗 体所识别的抗原结合。
[0085] Fv片段包含VH和VL链的缔合。这种缔合可为非共价，如Inbar等[Proc. Nat' 1 Acad. Sci. USA 69:2659-62(19720]所述。可选地，可变链可通过分子间二硫键连接或通过 化学物质例如戊二醛交联。优选地，Fv片段包含通过肽接头连接的VH和VL链。通过构建 包含通过寡聚核苷酸连接的编码VH和VL结构域的DNA序列的结构基因制备这些单链抗 原结合蛋白（sFv)。将结构基因插入表达载体中，随后将表达载体引入宿主细胞例如大肠 杆菌。重组宿主细胞合成带有桥接两个V结构域的接头肽的多肽链。例如，[Whitlow和 Filpula，Methods 2:97-105(1991) ;Bird 等，Science 242:423-426(1988) ;Pack 等，Bio/ Technology 11:1271-77(1993);和美国专利第4, 946, 778号描述了生成sFv的方法，其特 此以引用的方式整体并入。
[0086] 抗体的另一种形式是编码单个互补决定区（⑶R)的肽。可通过构建编码 目标抗体的CDR的基因获得CDR肽（"最小识别单位"）。例如，通过使用聚合酶链 式反应制备