绿原酸及其衍生物的脂质修饰物及其制备和纯化方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种绿原酸及其衍生物的脂质修饰物及其制备和纯化方法，属于医药
技术领域。
【背景技术】
[0002] 绿原酸（chlorogenic acid，ChA)，又名咖啡親酸，是由咖啡酸（caffeic acid，CA) 与奎尼酸（鸡钠酸，quinic acid，QA)缩合而成的醋，属多酷类化合物，具有广泛的生物学 活性。其来源主要为忍冬科植物金银花、忍冬、红腺忍冬、山银花或毛花柱忍冬的干燥花蕾 或带初开的花，杜仲科植物杜仲的叶，蔷薇科植物山楂的果实，千屈菜科植物千屈菜花，无 患子科植物坡柳，水龙骨科植物欧亚水龙骨根茎，马鞭草科植物假败酱根，十字花科植物卷 心菜茎叶，寥科植物扁蓄全草以及茜草科植物蓬子菜全草等。
[0003] 绿原酸是一种重要的生物活性物质，具有抗菌、抗病毒、抗诱变、抗过敏，增高白血 球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、抗氧化作用，清除自由基和维持机体细胞正常的结 构和功能、防止和延缓肿瘤突变和衰老等现象的发生、兴奋中枢神经系统和对心血管的保 护作用等。鉴于以上多方面的作用，普遍把绿原酸含量的高低作为衡量金银花质量的指标。 现代科学对绿原酸生物活性的研宄也已深入到食品、保健、医药和日用化工等多个领域。
[0004] 绿原酸在化学结构上属于极性有机酸，极性大，水溶性强，其与钠、钾、钙等金属离 子形成的盐也具有较大的极性和较好的水溶性，也就使得绿原酸及其盐的膜透过性差，导 致给药时生物利用度低，加之其在胃肠道中易被各种消化酶分解，更限制了 口服制剂的开 发。本发明中所涉及的绿原酸及其衍生物即包括绿原酸及其与钠、钾、钙形成的盐。
[0005] 磷酸甘油酯是一类含磷的脂质类物质，俗称磷脂，是动植物细胞膜、核膜和类脂膜 的基本成分。它不是单一的物质，主要是由为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂 酰丝氨酸、磷脂酰甘油、二磷脂酰甘油等成分组成。我们通常所说的大豆磷脂就是一种混合 磷脂，主要由磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇等组成；而卵磷脂的主要成分是磷脂 酰胆碱和不饱和脂肪酸；其主要成分为磷脂酰乙醇胺。
[0006] 磷脂具有极性基团磷酸酯基（亲水头部）和非极性脂肪酸链（疏水尾部）而表现 双亲性。但由于带有两条较长的脂肪链，亲脂性大于亲水性；当磷脂的极性部分与药物分子 通过电荷作用形成脂质修饰物，又称为磷脂复合物。其形成机理是磷脂中磷原子上羟基中 的氧原子有较强的得电子倾向，而磷脂酰胆碱基团中氮原子有较强的失电子倾向，因此在 一定条件下可与一定结构的药物复合而形成复合物。复合后其电荷被中和，两者极性均降 低，被包裹的药物分子与磷脂脂肪链间的范德华力增强；此外，由于药物分子与磷脂发生作 用后，彼此被固定，抑制了分子间及分子内键的自由转动；同时，药物分子插入磷脂分子中， 使得磷脂的两条长脂肪链间的有序性降低。因此，可自由转动的两条长脂肪链将被固定的 磷脂极性端及药物包裹起来形成一个具有亲脂性表面的微小球囊状结构。有利于增强药物 分子的亲脂性，增强与细胞膜的亲和力，促进药物吸收，降低药物不良反应，增加药物在体 内作用时的生物利用度。
[0007] 经科技文献及专利检索，尚未发现利用磷脂对绿原酸及其盐进行结构修饰的报 道。本发明即是在上述【背景技术】下开始的研宄，目的是希望通过磷脂对绿原酸及其盐进行 脂质修饰，从而获得一种脂质修饰物，以克服其膜透过性差，给药时生物利用度低的局限 性，同时改善了绿原酸及其盐的溶解性能，便于后续制剂的开发和加工，尤其能够解决其在 胃肠道中由于易被各种消化酶分解，限制口服制剂的开发等方面的问题。
【发明内容】
[0008] 本发明针对绿原酸及其衍生物由于良好的极性，膜透过性差，给药时生物利用度 低，且在胃肠道中由于易被各种消化酶分解，限制口服制剂的开发等方面的问题，制备一种 绿原酸及其衍生物的脂质修饰物，即磷脂复合物，以改善药物的亲脂性，增强其与体内细胞 的亲和力，增加药物作用时的生物利用度，并且为后续制剂的加工成型提供更易操作的中 间体。
[0009] 本发明的绿原酸及其衍生物脂质修饰物，包括绿原酸及其衍生物和磷酸甘油酯， 其中，绿原酸及其衍生物与磷酸甘油酯的重量比为1 : 0.5~25。其中，所述绿原酸及其衍 生物与磷酸甘油酯的质量比优选为I : 1~15,进一步优选为1 : 3~10。其中，绿原酸 及其衍生物为绿原酸、绿原酸钠盐、绿原酸钾盐和绿原酸钙盐中的一种或一种以上任意比 例的混合物。其中，磷酸甘油脂为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、 磷脂酰甘油、二磷脂酰甘油中的一种或一种以上任意比例的混合物。
[0010] 所述绿原酸及其衍生物的脂质修饰物的制备和纯化方法，包括如下步骤：
[0011] (1)绿原酸及其衍生物脂质修饰物的制备：
[0012] a、取绿原酸及其衍生物以及相当于绿原酸及其衍生物重量0. 5~25倍的脂质；
[0013] b、加入适量溶剂，所用溶剂的用量为使绿原酸及其衍生物的反应浓度保持在一定 浓度范围内；
[0014] c、于适宜温度条件下恒温磁力搅拌回流一定时间得反应液；
[0015] d、将步骤c所述反应液冷冻干燥或减压干燥，得绿原酸及其衍生物脂质修饰物脂 月吴粗品；
[0016] (2)绿原酸及其衍生物脂质修饰物的纯化：
[0017] a、向上述步骤（1)制备得到的绿原酸及其衍生物脂质修饰物脂膜粗品加入复溶 剂，使其充分分散得分散液；
[0018] b、将上述分散液过滤，取其滤液再次冷冻干燥或减压干燥，即得绿原酸及其衍生 物脂质修饰物精品。
[0019] 在上述制备和纯化过程中，对反应条件及反应所用试剂进行了进一步的优选和限 定，具体如下：
[0020] 其中，绿原酸及其衍生物脂质修饰物的制备过程中，加入的反应溶剂的用量为能 够使绿原酸及其衍生物的药物浓度在6~48mg/ml的范围内。
[0021] 其中，绿原酸及其衍生物脂质修饰物制备过程中所用溶剂选自氯仿、二氯甲烷、正 己烷、乙醇、四氢呋喃、二氧六环、乙酸乙酯和丙酮中的一种或一种以上任意比例的混合溶 剂。
[0022] 其中，绿原酸及其衍生物脂质修饰物制备过程中所述的适宜温度范围为10~ 65°C，优选15~55°C，进一步优选为20~50°C。
[0023] 其中，绿原酸及其衍生物脂质修饰物纯化过程中所用复溶剂选自乙醚、氯仿、二氯 甲烷、乙酸乙酯和苯中的一种或一种以上任意比例的混合溶剂。复溶过滤纯化的机理在于 绿原酸及其衍生物与脂质复合后形成的脂质修饰物能够或易溶于所选择的复溶剂中，而绿 原酸及其盐在这些复溶剂中难溶或不溶或溶解度极低，经过复溶后，游离的未被复合的绿 原酸及其盐会形成沉淀析出，过滤后除去游离药物即得脂质修饰物的溶液，除去溶剂后得 到脂质复合物精品。
[0024] 其中，在绿原酸及其衍生物脂质修饰物的制备和纯化过程中冷冻干燥或减压干燥 的温度为25~55 °C。
[0025] 本发明所制备得到脂质修饰物是一种复合物，而不是新的化合物。高效液相色谱 法测定结果显示，脂质修饰物与绿原酸及其衍生物具有相同的保留时间。此外，脂质修饰物 与绿原酸及其衍生物和磷脂的物理混合物在差示扫描量热图中存在明显差别，脂质修饰物 没有明显的吸放热现象，而物理混合物有吸放热现象，且吸放热速率不均一。
[0026] 绿原酸及其衍生物与脂质在一定条件下反应后形成的磷脂复合物，具有以下的有 益效果：
[0027] 1、提高了药物的亲脂性，增强了药物作用时的膜透过性，提高药物的生物利用度。
[0028] 2、降低或消除了胃肠道中被各种消化酶分解，解决了 口服制剂开发中的诸多问题 和难题。
[0029] 3、增强了绿原酸及其衍生物在油相、乳化剂、助乳化剂等中的溶解度，便于后续制 剂的加工成型。
[0030] 本发明所制备的绿原酸及其衍生物的脂质修饰物，可以作为有效成分与药学上可 以接受的其他药物辅料一起制备适合临床给药的任何给药形式。其中所述药学上可以接 受的其它药用辅料包括纤维素衍生物、淀粉类、水、小分子醇类、磷脂、胆固醇、环糊精、乳化 剂、高分子聚合物等。
[0031 ] 本发明中所制备的绿原酸及其衍生物的脂质修饰物，可以用于制备药剂学中传统 的及临床上使用最为广泛的片剂、胶囊剂、注射剂、注射用冻干粉针剂及药剂学上一些新型 给药系统，如钠米给药系统。其中片剂可为普通片剂或包衣片剂，胶囊剂可为软胶囊或硬胶 囊，尤其是可供制备明胶软胶囊剂型。其中所述的钠米给药系统包括脂质体、钠米粒、聚合 物胶束和树枝状聚合物等具有靶向定