microRNA-548k抑制剂在治疗和/或预防食管鳞状细胞癌中的用图【
技术领域：
】[0001]本发明涉及micr〇RNA-548k抑制剂在治疗和/或预防食管鳞状细胞癌的
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。另一方面，本发明涉及microRNA-548k作为分子标记物用于诊断食管鳞状细胞癌的
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背景技术：
】[0002]食管癌是常见的消化道肿瘤，全世界每年约有30万人死于食管癌，其是全世界癌症死亡的第六大原因，参见Kamangar,F.，G.M.Dores,等人（2006)."Patternsofcancerincidence,mortality,andprevalenceacrossfivecontinents:definingprioritiestoreducecancerdisparitiesindifferentgeographicregionsoftheworld.〃JClin0ncol24(14):2137-2150。全球大约70%的食管癌发生在中国，而在中国90%的食管癌的为食管鳞状细胞癌。到目前为止，对食管鳞状细胞癌的发生发展机制了解甚少，因此针对食管鳞状细胞癌早期诊断及治疗的手段和方法非常有限，食管鳞状细胞癌患者的5年生存率只有10%，参见乂11，￥.，乂.￥11，等人（2012).〃他〇3(1加￥3111：￥618118adjuvanttreatment:whichoneisbetterforresectableesophagealsquamouscellcarcinoma?"WorldJSurgOncollO:173;Zhang，S.W.，M.Zhang，etal.(2012)."AnAnalysisofIncidenceandMortalityofEsophagealCancerinChina，2003~2007."China分子靶向治疗为近年来研究热点，并在部分恶性肿瘤治疗中取得突破性进展。如吉非替尼（Irresa)治疗非小细胞肺癌，尤其女性、不吸烟、腺癌患者预后更佳；伊马替尼治疗胃肠道间质瘤，特别是对于有Kit外显子11突变者可获得更好的疗效，参见NilssonB，S.K.,KindblomLG,等人（2007)."Adjuvantimatinibtreatmentimprovesrecurrence-freesurvivalinpatientswithhigh-riskgastrointestinalstromaltumours(GIST)·〃BrJCancer96:1656-1658(NilssonB2007);C225联合放疗治疗局部晚期头颈部癌，较单纯放疗，生存率提高近I倍，参见BonnerJA,H.P·，GiraltJ,等人（2006)."Radiotherapypluscetuximabforsquamous-cellcarcinomaoftheheadandneck.〃NEnglJMed354:567-578。因此，阐明食管鳞状细胞癌发生发展的分子机制是人类攻克食管鳞状细胞癌的前提。[0003]MicroRNA由18-25个核苷酸组成，系非编码RNA分子，可以通过和mRNA结合抑制mRNA功能，调节翻译过程。MicroRNA在肿瘤中的发生和发展中均发挥了重要作用，并且有些MicroRNA还与肿瘤的预后相关，如在慢性淋巴瘤，急性髓细胞样白血病，非小细胞肺癌，胰腺癌，神经母细胞瘤，结肠癌，小细胞肺癌中得到证实：miRNA对预后影响显著。[0004]microRNA-548k定位于11号染色体，含有22个核苷酸，其genbank登录号为：GeneID:100313770,在文献中未见报道对其相关功能的研究。[0005]本发明人运用高通量测序和比较基因组杂交技术对我国食管鳞状细胞癌的基因组进行了研究，出人意料的发现，llql3.3-13.4这个区域在48.1%的样本中存在扩增，且与淋巴结转移相关，此外，在这个区域中存在micr〇RNA-548k的同步高表达。随后我们的功能实验表明，micr〇RNA-548k在食管鳞状细胞瘤细胞系中普遍存在高表达，并且microRNA-548k能正性调节食管鳞状细胞瘤细胞的恶性表型。因此，microRNA-548k有望可以作为食管鳞状细胞癌诊断的分子标志物和治疗的祀点。【
发明内容】[0006]本发明提供了microRNA_548k抑制剂用于制备治疗和/或预防食管鳞状细胞癌的药物中的用途。[0007]优选地，根据本发明的microRNA-548k抑制剂是核酸抑制剂；进一步优选地，本发明的核酸抑制剂是与micr〇RNA-548k序列互补的反义核酸分子。[0008]另一方面，本发明提供了一种或多种特异地检测microRNA_548k表达水平的引物和/或探针在制备用于诊断食管鳞状细胞癌患者的试剂中的用途。[0009]更进一步地，根据本发明所述引物和/或探针包含与microRNA-548k序列互补的核苷酸序列，或由与micr〇RNA-548k序列互补的核苷酸序列组成。[0010]优选地，根据本发明的诊断食管鳞状细胞癌患者的用途中其进一步包括：[0011]a)提供来自个体的食管鳞状细胞癌组织和癌旁组织的样品；和[0012]b)确定样品中如microRNA_548k的表达水平；[0013]c)比较癌组织和癌旁组织的样品中microRNA-548k的表达水平。优选地，在上述用途中，其中在所述步骤b)中使用选自宏阵列筛选、微阵列筛选、纳米阵列筛选、逆转录PCR、实时PCR或原位PCR的方法进行。[0014]优选地，根据本发明所述的用途，其中所述食管鳞状细胞癌指哺乳动物中的食管鳞状细胞癌。[0015]进一步优选地，根据本发明所述的用途，其中所述哺乳动物是人。[0016]另一方面，本发明提供了一种治疗和/或预防哺乳动物食管鳞状细胞癌的方法，包括向遭受所述癌症的患者给药治疗有效量的microRNA-548k抑制剂。【附图说明】[0017]图1表明人食管鳞状细胞癌的肿瘤组织分析的电泳结果。[0018]图2表明改变microRNA-548k表达后对细胞生长的影响情况。其中，miR-NC指microRNA阴性对照。[0019]图3A-3F表明改变microRNA-548k表达后对细胞克隆形成的影响情况。图3A和3B表明在KYSE30细胞系中microRNA-548k表达的改变对细胞克隆形成的影响；图3C和3D表明在KYSE150细胞系中microRNA-548k表达的改变对细胞克隆形成的影响；图3E和3F表明在KYSE410细胞系中microRNA-548k表达的改变对细胞克隆形成的影响。[0020]图4A-4I表明改变micr〇RNA-548k表达后对细胞迁移及侵袭的影响情况。图4A-4C表明microRNA-548k表达的改变对KYSE30细胞系迁移及侵袭的影响；图4D-4F表明mi当前第1页1 2