治疗高脂血症、动脉粥样硬化的药物及制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种治疗高脂血症及动脉粥样硬化的药物及其制备方法以及何首乌 游离蒽醌类衍生物在制备治疗高脂血症及动脉粥样硬化药物中的应用，属于医药技术领 域。
【背景技术】
[0002] 高脂血症（Hyperlipidemia)与动脉粥样硬化（AS)密切相关，是引起心脑血管病 变的重要原因之一。随着人民生活水平的不断提高，饮食结构的改变，我国高脂血症的发生 率呈逐年上升趋势，因此，防治高脂血症一直是医学领域的重要课题之一。降脂治疗可减轻 或避免AS的发生，从而降低冠心病和脑卒中的发病率。目前虽多种西药有降脂作用，但长 期应用多有不良反应。何首乌（FallopiamultifloraHarald)作为一味药用历史悠久的 中药材，在抗衰老、抗菌、增强机体免疫功能、促进血细胞的新生和发育等方面有明显药理 作用，但在治疗高脂血症与动脉粥样硬化方面的相关报道和研宄较少。
【发明内容】
[0003] 本发明所要解决的技术问题在于提供一种可有效治疗高脂血症、动脉粥样硬化的 新药物及其制备方法，同时提供何首乌游离蒽醌类衍生物在治疗高脂血症、动脉粥样硬化 方面的新应用。
[0004]为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
[0005]-种治疗高脂血症、动脉粥样硬化的药物，该药物按照重量份计算，是以何首乌游 离蒽醌类衍生物中的活性成分大黄素80~100份、芦荟大黄素4~6份为原料制成。
[0006]上述的治疗高脂血症、动脉粥样硬化的药物，优选方案，按照重量份计算，是以何 首乌游离蒽醌类衍生物中的活性成分大黄素80份、芦荟大黄素4份为原料制成。
[0007]前述治疗高脂血症、动脉粥样硬化药物制备方法，包括以下步骤：
[0008] 1)何首乌炮制：取生何首乌饮片适量，置非铁质容器内，按照16:1的重量比加入 黑豆汁拌匀，焖润8小时，再将其置非铁质蒸锅中隔水蒸制48小时，拌回蒸液，取出间隙性 置于60°C晒干，得制首乌，备用；
[0009] 2)游离蒽醌提取：制首乌粉碎成粗粉，加乙醇回流提取三次，每次lh，减压回收乙 醇，浓缩液加入1 :1稀盐酸溶液分散，三氯甲烷萃取至无色，减压回收三氯甲烷，减压干燥， 得醇浸膏备用；
[0010] 3)大黄素、芦荟大黄素的提取：用8%盐酸溶液分散醇浸膏，用CH3CL2萃取，得 CH3CL2层；CH3CL2提取液用5%NaHC03萃取，得碱液层与CH3CL2液层；碱液层酸化后获得 沉淀物，重结晶后得黄色针状结晶即大黄酸；CH3CL2液层用5%Na3C03溶液萃取，得碱液层 与CH3CL2液层，碱液层酸化后获得沉淀物，重结晶后得橙色大针状结晶即大黄素；CH3CL2 液层用0. 5%NaOH溶液萃取，得碱液层与CH3CL2液层，CH3CL2层加入5%NaOH萃取，得水 层，将水层用HCL酸化，再加入热的异戊醇溶液，得异戊醇液层与不容物，取异戊醇液层，浓 缩蒸干，得棕黑色固体，再用CH3CL2重结晶，即得芦荟大黄素；去不容物用热吡啶溶解，得 吡啶液，浓缩，得大黄素甲醚；
[0011] 4)将大黄素和芦荟大黄素按处方混匀，然后按照常规制剂工艺制成临床上常见的 药物制剂。
[0012] 上述治疗高脂血症、动脉粥样硬化药物的制备方法中，所述的药物制剂为口服制 剂，包括片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂或口服液。
[0013] 本发明还涉及何首乌游离蒽醌类衍生物在制备治疗高脂血症、动脉粥样硬化药物 中的应用。
[0014] 本发明的有益效果：本发明开发了何首乌游离蒽醌类衍生物的新应用，使作为传 统老药的何首乌及其活性成分的研宄具有了广阔的应用前景和药用价值。而且本发明以何 首乌游离蒽醌类衍生物中筛分的活性成分大黄素、芦荟大黄素为原料制备的药物在治疗高 脂血症及动脉粥样硬化方面疗效显著，具有良好的应用前景。
[0015] 何首乌主要含有蒽醌类衍生物、多糖、二苯乙烯苷类化合物、磷脂类化合物及 多种微量元素等多种化学成分，其中游离蒽醌类衍生物有大黄素（Emodin)，芦荟大黄素 (aloe-emodin)、大黄酸（rhein)、大黄酷（rhubarb)、大黄素甲酿（emodinmethylether) 等活性成分，以上哪几种活性成分的联合在治疗高脂血症及动脉粥样硬化方面发挥着重要 作用，目前尚不清楚。因此从何首乌游离蒽醌类衍生物繁多的成分中准确寻找到治疗高脂 血症的成分作用靶点及最佳有效组分成为本发明重点解决的问题。
[0016] 为验证本发明的效果，申请人进行了何首乌游离蒽醌类衍生物中最佳有效组分配 方的筛选及药效学实验，经筛选得到的最佳有效组分从在体的动物实验中均得到验证，有 效筛选出了何首乌游离蒽醌类衍生物中最佳有效组分配方的活性及药效，能够更多的寻找 到何首乌游离蒽醌及组分配比降血脂和抗动脉粥样硬化物质基础及作用靶点，更有力的保 障了其治疗高脂血症及动脉粥样硬化的功能，同时也为临床应用中药有效成分研宄治疗疾 病提供新思路和方法。
[0017] 本发明所用的试剂有大黄酸，大黄素，芦荟大黄素，何首乌总蒽醌，均由贵阳中 医学院炮制实验室提供。何首乌游离蒽醌类衍生物中大黄酸、大黄素、芦荟大黄素三种 组分作为考察因素，共设计8种组分配比方案，完成均匀设计试验实验，经过高脂动物模 型的建立，给药组动物按均匀设计表配伍进行灌胃，治疗4周后，股静脉采血，检测血清 TG、TC、HDL-C、LDL-C含量作为筛选指标，采用SPSS17. 0软件包进行逐步回归分析，获 得回归方程，得出最佳有效组分配方。何首乌游离蒽醌类衍生物中有效组分配方药效学 验证实验，再次运用高脂饮食饲料饲养加高脂乳剂灌胃4周的方法诱导大鼠高脂血症动 物模型，将筛选出的"有效组分配方"与何首乌游离蒽醌对高脂血症大鼠血脂水平作用 进行比较，并设立血脂平作为对照药，以验证筛选出的"有效组分"的药效。根据实验结 果，并采用加权评分法进行综合评分，并根据评分进行逐步回归分析。得回归方程：y= 54. 63+0. 061A-0. 158B+2. 314C，优选配方为：大黄素 0. 8g/kg，芦荟大黄素 0. 04g/kg。
[0018] 1?实验材料
[0019] 1. 1动物：SD大鼠130只，SPF级，雌雄各半，体质量（200±10)g，购自中国人民解 放军第三军医大学实验动物中心，合格证号：SCXK(渝）2012-0003。
[0020] 1. 2主要药物及试剂
[0021] 丙硫氧嘧啶片（丙赛优）：上海朝晖有限公司，批号1304F17
[0022] 吐温-80 :重庆川江化学试剂厂
[0023] 胆固醇：北京索莱宝（solarbio)科技有限公司，批号121B102
[0024] 脱氧胆酸钠：北京索莱宝（solarbio)科技有限公司，批号322A022猪油：自制
[0025] 大黄酸，大黄素，芦荟大黄素，何首乌总蒽醌，均由贵阳中医学院炮制实验室提供。
[0026] 0-疏基乙醇（0-MercaptoethanolbiotechnologyGrade):Amresco公司，批号 0482
[0027]琼脂糖：BI0WEST公司，批号 111860、
[0028]RNA染料（GelRedTMlO, 000Xinwater) :BI0TIUM公司，批号 4100350XTea buffer:康为世纪生物科技有限公司，批号00912G
[0029]ELISA试剂盒（HMG-CoA、ACAT2、CETP、CYP7A1、ATGL、PHTA):康为世纪生物科技有 限公司，批号20130879
[0030] 超纯RNA提取试剂盒（UltrapureRNAKit):康为世纪生物有限公司，批号 00021303
[0031]HiFi-MMLVcDNA第一链合成试剂盒（HiFi-MMLVcDNAKit):康为世纪生物有限公 司，批号
[0032] 2XTaqMasterMix(含染料）：康为世纪生物有限公司，批号1912L
[0033]DM500:康为世纪生物有限公司，批号00021304
[0034] 无水乙醇分析纯：国药集团化学试剂厂
[0035] 2试验方法
[0036] 2. 1尚脂乳剂及尚脂伺料的制备
[0037] 2. 1. 1高脂乳剂：①猪油200g，磁力搅拌器加热至100°C，加胆固醇80g、丙赛优8g 充分研磨搅匀，再加入200ml吐温80,制成油相。②同时，另一烧杯中加入640ml蒸馏水和 160ml丙二醇电路加热至60°C，再加脱氧胆酸钠16g搅拌至充分溶解，制成水相。③将水相 加入油相，混匀制成乳剂。
[0038] 2. 1. 2高脂饲料：用1. 5%胆固醇、0. 5%脱氧胆酸钠、3%白糖、0. 2%丙硫氧嘧啶、 10 %猪油、5 %蛋黄、79. 8 %基础饲料均匀混合制作高脂饲料。
[0039]2. 2均匀设计实验方案
[0040]用以何首乌游离蒽醌衍生物大黄酸、大黄素、芦荟大黄素三种组分作为考察因素， 每个因素各设8个水平，按均匀设计表U8 (85)及其使用表进行安排，共得8种组分配比方 案，将购买到的五种单体依据方案进行配制，得到实验用药物，其具体配伍见表1。
[0041]表 1
[0043]
[0044] 2. 3有效组分配方筛选实验
[0045] 大鼠80只，设对照组、模型组、均匀设计配方8组，共10组，每组各8只。除空白对 照组外，其余各组均给予高脂饮食饲料饲养加高脂乳剂（l〇ml/kg)灌胃4周，进行高脂血症 模型的建立，在第四周随机抽取10只大鼠眼眶取血，检测血清1^、了6、册1^-0、〇^-(：含量， 确定造模成功后，开始给药。各给药组按均匀设计表配伍用药（表1)，各组药物均用〇. 5% 吐温-80配制成相应浓度的混悬液，以10ml/kg大鼠体质量进行灌胃给药。治疗4周后， 以2%戊巴比妥钠按2ml/kg剂量腹腔注射麻醉，股静脉采血，4°C过夜，离心分离血清，送由 贵阳中医学院第一附属医院检测血清TG、TC、HDL-C、LDL-C含量作为筛选指标，采用SPSS 17. 0软件包进行逐步回归分析，获得回归方程，得出最佳有效组分配方。
[0046] 2. 4有效组分配方药效学验证实验