丝蛋白支架材料及其制备方法_3

文档序号:9254534阅读:来源:国知局
明比较例I制备得到的支架材料进行红外测试,如图2,图2为本发明实施例I和比较例制备得到的支架材料的红外测试图,其中,a为比较例I所述未处理丝素溶液经甲醇处理得到支架的红外测试图;
[0075]对本发明比较例I制备得到的支架材料进行X-射线衍射检测,结果如图3所示,图3为本发明实施例1和比较例制备得到的支架材料的X-射线衍射检测图,其中,a为比较例I未处理丝素溶液经甲醇处理得到支架的红外测试图;
[0076]按照本发明所述方法对实施例1和比较例制备得到的支架进行压缩性能测定,结果如图4所示,图4为本实施例和比较例制备得到的支架进行压缩性能测定图,其中曲线a为比较例I曲线图,由图可以计算出,结果为23.66±3.87kPa ;
[0077]按照本发明所述方法对本实施例制备得到的支架进行酶降解处理测定,结果如图5所示,图5为本实施例和比较例制备得到的支架进行酶降解处理测定图,其中曲线a为比较例I降解曲线图。
[0078]对本发明比较例I制备得到的支架材料进行扫描电镜测试,结果如图1所示,图1为本发明实施例1制备得到的支架材料进行扫描电镜图,(C)为本发明比较例I制备得到的支架材料进行扫描电镜图;由图1(c)可以看出,支架孔完整,细胞难以穿越。且其模量范围不适宜内皮细胞生长
[0079]比较例2
[0080]取孔径为250 μ m和350 μ m的分样筛,两分样筛叠加使用(孔径大的在上方)筛选氯化钠颗粒。两分样筛之间的颗粒粒径为250 ym?350 μπι。取一个24孔板(用来代替专用的圆柱形容器),每个孔中加入2ml丝素溶液,将4gNaCl (粒径0.25mm?0.35mm)快速均匀地加入溶液中,室温下加盖放置I?2天。将24孔板放置于去离子水中浸泡I?2天后小心取出,取出后的支架继续在水中浸泡,共浸3天后取出支架。用去离子水冲洗后放置于-20°C冰柜中冷冻2小时。将冷冻支架用真空干燥机干燥。即可得到丝素多孔支架。
[0081]对本发明比较例2制备得到的支架材料进行红外测试,如图2,图2为本发明实施例I和比较例制备得到的支架材料的红外测试图,其中,b为比较例2所述未处理丝素溶液经盐析法得到支架的红外测试图;
[0082]对本发明比较例I制备得到的支架材料进行X-射线衍射检测,结果如图3所示,图3为本发明实施例1和比较例制备得到的支架材料的X-射线衍射检测图,其中,b为比较例2未处理丝素溶液经盐析法得到支架的红外测试图;
[0083]按照本发明所述方法对实施例1和比较例制备得到的支架进行压缩性能测定,结果如图4所示,图4为本实施例和比较例制备得到的支架进行压缩性能测定图,其中曲线b为比较例2曲线图,由图可以看出,结果为14.25±1.89kPa;
[0084]按照本发明所述方法对本实施例制备得到的支架进行酶降解处理测定,结果如图5所示,图5为本实施例和比较例制备得到的支架进行酶降解处理测定图,其中曲线b为比较例2降解曲线图。
[0085]对本发明比较例2制备得到的支架材料进行扫描电镜测试,结果如图1所示,图1为本发明实施例1制备得到的支架材料进行扫描电镜图,(d)为本发明比较例2制备得到的支架材料进行扫描电镜图;由图1(d)可以看出,支架孔完整但缝隙太大,细胞不易附着生长。且其模量范围不适宜内皮细胞生长。
[0086]实施例2
[0087]将50g蚕丝在0.5%的Na2CO^液中100°C煮60min,以去除蚕丝外部的丝胶蛋白,使用去离子水冲洗,重复以上操作3次后将蚕丝60°C下烘干。称取上述处理后的脱胶蚕丝15g溶解于10mL质量浓度为9.3mol/L LiBr溶液中,60°C下溶解处理4小时。然后用截留分子量3500的透析袋浸在去离子水中透析3天,期间每两小时换一次水,去除溶液中的LiBr,从而得到纯净的丝蛋白溶液,其质量浓度为6%。
[0088]将丝蛋白溶液在60 °C进行浓缩处理,浓缩时间为48小时,放入通风橱中浓缩48小时,丝蛋白浓缩后溶液质量浓度为28%。然后将丝蛋白水溶液的质量分数调整为0.5%再进行60°C温度处理48h形成水凝胶。将丝蛋白浓缩溶液与丝蛋白水凝胶按丝蛋白质量分数比15:1混合成丝蛋白质量分数为2%的混合液,用IM盐酸调节混合液pH调至4,剧烈搅拌5分钟,搅拌速度为2500rmp/min ;快速加入模具中于_20°C下进行冷冻处理24小时,然后真空干燥72小时。
[0089]将得到的组织泡去剩余的酸溶液,再将组织于_20°C下进行冷冻处理24小时,然后真空干燥72小时,获得干态的丝蛋白支架材料,其孔隙率高达95%以上。
[0090]按照本发明所述方法对本实施例制备得到的支架进行压缩性能测定,测定结果为6.97±1.41kPa。按照本发明所述方法对本实施例制备得到的支架进行血管的形成实验,实验结果表明本发明实施例2制备的支架材料有利于血管的形成。
[0091]实施例3
[0092]将50g蚕丝在0.5%的Na2CO^液中100°C煮60min,以去除蚕丝外部的丝胶蛋白,使用去离子水冲洗,重复以上操作3次后将蚕丝60°C下烘干。称取上述处理后的脱胶蚕丝15g溶解于10mL质量浓度为9.3mol/L LiBr溶液中,60°C下溶解处理4小时。然后用截留分子量3500的透析袋浸在去离子水中透析3天,期间每两小时换一次水,去除溶液中的LiBr,从而得到纯净的丝蛋白溶液,其质量浓度为6%。
[0093]将丝蛋白溶液在60 °C进行浓缩处理,浓缩时间为48小时,放入通风橱中浓缩48小时,丝蛋白浓缩后溶液质量浓度为28%。然后将丝蛋白水溶液的质量分数调整为0.3%再进行60°C温度处理48h形成水凝胶。将丝蛋白浓缩溶液与丝蛋白水凝胶按丝蛋白质量分数比15:1混合成丝蛋白质量分数为2%的混合液,用IM盐酸调节混合液pH调至4,剧烈搅拌5分钟,搅拌速度为3000rmp/min ;快速加入模具中于_20°C下进行冷冻处理24小时,然后真空干燥72小时。
[0094]将得到的组织泡去剩余的HCL溶液,再将组织于_20°C下进行冷冻处理24小时,然后真空干燥72小时,获得丝蛋白支架材料。其孔隙率高达95%以上。
[0095]对本发明实施例3制备得到的支架材料进行扫描电镜测试,结果如图7所示,图7为本发明实施例3所述所得丝蛋白支架的电镜图。
[0096]按照本发明所述方法对本实施例制备得到的支架进行压缩性能测定,测定结果为6.39±2.36kPa。按照本发明所述方法对本实施例制备得到的支架进行血管的形成实验,实验结果表明本发明实施例3制备的支架材料有利于血管的形成。
[0097]实施例4
[0098]将50g蚕丝在0.5%的Na2CO^液中100°C煮60min,以去除蚕丝外部的丝胶蛋白,使用去离子水冲洗,重复以上操作3次后将蚕丝60°C下烘干。称取上述处理后的脱胶蚕丝15g溶解于10mL质量浓度为9.3mol/L LiBr溶液中,60°C下溶解处理4小时。然后用截留分子量3500的透析袋浸在去离子水中透析3天,期间每两小时换一次水,去除溶液中的LiBr,从而得到纯净的丝蛋白溶液,其质量浓度为6%。
[0099]将丝蛋白溶液在60 °C进行浓缩处理,浓缩时间为48小时,放入通风橱中浓缩48小时,丝蛋白浓缩后溶液质量浓度为30%。然后将丝蛋白水溶液的质量分数调整为0.5%再进行60°C温度处理24h形成水凝胶。将丝蛋白新鲜溶液与丝蛋白水凝胶按丝蛋白质量分数比15:1混合成丝蛋白质量分数为2 %的混合液,用IM硝酸调节混合液pH调至4,剧烈搅拌5分钟,搅拌速度为2500rmp/min ;快速加入模具中于_20°C下进行冷冻处理24小时,然后真空干燥72小时。
[0100]将得到的组织泡去剩余的酸溶液,再将组织于-20°c下进行冷冻处理24小时,然后真空干燥72小时,获得干态的丝蛋白支架材料。其孔隙率高达95%以上。
[0101]按照本发明所述方法对本实施例制备得到的支架进行压缩性能测定,测定结果为
6.32±1.42kPa。按照本发明所述方法对本实施例制备得到的支架进行血管的形成实验,实验结果表明本发明实施例4制备的支架材料有利于血管的形成。
[0102]实施例5
[0103]将50g蚕丝在0.5%的似20)3溶液中100°C煮60min,以去除蚕丝外部的丝胶蛋白,使用去离子水冲洗,重复以上操作3次后将蚕丝60°C下烘干。称取上述处理后的脱胶蚕丝15g溶解于10mL质量浓度为9.3mol/L LiBr溶液中,60°C下溶解处理4小时。然后用截留分子量3500的透析袋浸在去离子水中透析3天,期间每两小时换一次水,去除溶液中的LiBr,从而得到纯
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