石止血散的质量浓度，其中Ml= 0. 002g/mL、M2 =0. 006g/mL、M3 = 0. 02g/mL、M4 = 0. 2g/mL，抑菌圈直径（mm)大小表示抑菌活性的强弱， 见表6。
[0111] 表6为不同浓度锌基蒙脱石抑菌圈直径（mm)
[0112]
[0113] 由表6可知，质量浓度为0. 001和0. 005g/mL的锌基蒙脱石有一定抑菌活性，当锌 基蒙脱石的质量浓度为0.02和0.2g/mL时，抑菌活性基本相同，无显著差异，表明随着锌基 蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散止血散质量浓度的增加，其抑菌活性达到一个稳定值，锌 基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散抑菌有效浓度为〇.〇2g/mL。
[0114] 2、抑菌活性
[0115] 质量浓度为0. 02g/ml的（1)钙基蒙脱石、（2)钠基蒙脱石、（3)锌基蒙脱石与钙基 蒙脱石无菌止血散对4种细菌的抑菌活性列于表7。
[0116] 表7为各种蒙脱石抑菌圈直径（mm)
[0117]
[0118] 由表7可知，锌基蒙脱石的抑菌活性明显较高，与钙基蒙脱石和钠基蒙脱石相比 有显著差异，并抑菌范围针对这四种菌比四环素广。
[0119] 实验例5:锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散对伤口收敛、愈合影响的组织学 研究实验
[0120] 创伤愈合是指机体由于外伤或其他伤病造成皮肤等组织出现离断或缺损后，局部 组织通过再生、重建进行修补恢复的一系列病理生理过程，它是医学中最基本的问题之一， 同时也是外科领域长期致力于探索的重要临床研究课题。本发明选择兼具有止血、抗菌、促 进伤口愈合作用的锌基蒙脱石与钙基蒙脱石散剂，并应用病理实验技术观察在伤口愈合过 程中对创面组织影响的组织学变化且探讨其机制，为临床上探索一条促进伤口愈合的有效 途径，并为皮肤创伤愈合临床研究提供可靠的实验依据。
[0121] 1、材料和方法
[0122] 1.1 材料
[0123] 实验动物：健康家兔24只，雌雄各半，体重2. 5~3.Okg(购于山东大学非临床研 究中心）；
[0124] 药品：锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散实施例1方法制备；
[0125] 1.2实验方法
[0126] 动物模型建立方法：以手术切割方法造模，造模前一天家兔背部以8 %硫化钠脱 毛备皮。术前腹腔注射2%戊巴比妥钠（30mg/kg)，家兔俯卧位，常规碘伏消毒后，距脊柱正 中旁开2cm处做皮肤全层切口，面积约2cmX2cm，共6个，左右各3个，创面间隔约2cm。用 生理盐水冲洗伤口，消毒后备用。
[0127] 实验动物分组：将家兔随机分为三组：空白组（即盐水处理组）、实验组1 (即蒙脱 石组）、和实验组3 (锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散组），每组均为8只，分别给予生 理盐水、蒙脱石、锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散治疗。即术后第3、5、7和10天组和 伤口自然愈合组。
[0128] 取材：四组家兔在术后第3、5、7、10天分别于伤口处距边缘约0. 2cm取全厚皮肤组 织。所取组织中部分用4%多聚甲醛及时固定，4°C保存待做石蜡切片及HE、Mass〇n染色。
[0129] 伤口愈合时间的观察：伤口愈合标准以创面面积小于总面积的5%或愈合面积大 于95%为完全愈合。
[0130] 伤口愈合速率的观察：各组动物分别在伤后第3、5、7、10天，用0. 25cmX0. 25cm的 透明方格纸测定伤口面积，用德国产ASM. 68K半自动图像分析仪计算伤口面积，伤口愈合 速率=愈合面积/原伤口面积。
[0131] 统计学处理：用SAS6. 12统计学处理软件，对各种数据进行统计学处理。
[0132] 2、实验结果
[0133] 2. 1 -般情况：所有动物于麻醉后约2~4h苏醒，开始活动，自由进食、进水。喂 养期间动物活动好，食欲可，体重较稳定。
[0134] 2. 2伤口愈合率：从表1和表2可见，术后第3天，盐水处理组、蒙脱石、锌基蒙脱 石与钙基蒙脱石无菌止血散组比较。术后第10天，空白组（盐水处理组）、蒙脱石组、锌基 蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散组比较，见表8、表9 ;
[0135] 表8术后第三天伤口愈合率的比较（％ )
[0136]
[0137] 注：蒙脱石与空白组（盐水处理组）比较/p< 0. 05 ;锌基蒙脱石与钙基蒙脱石 无菌止血散与蒙脱石比较P< 0. 05 ;锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散与空白组（盐水 处理组）比较，Up< 0.01 ;
[0138] 表9术后第十天伤口愈合率的比较(% )
[0139]
[0140] 注：蒙脱石与空白组（盐水处理组）比较/p< 0. 05 ;锌基蒙脱石与钙基蒙脱石 无菌止血散与蒙脱石比较P< 0. 05 ;锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散与空白组（盐水 处理组）比较，Up<0.01 ;
[0141] 本实验通过观察锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散对伤口愈合的促进作用得 出以下几点结论：
[0142] ①蒙脱石能够促进伤口愈合，减少组织液渗出，创面干燥，能减轻局部创口水肿程 度，加速肉芽组织生成，加速愈合，能达到收敛生肌的目的，在创面形成保护膜，预防感染。
[0143] ②锌基蒙脱石解离出的锌离子能增强吞噬细胞吞噬功能、趋化活力及杀菌功能， 并通过超氧化物歧化酶来保持吞噬细胞内的自由基水平，发挥杀菌作用，加速伤口的愈合； 另外锌离子能沉淀蛋白质，外用有收敛防腐作用，帮助肉芽组织形成；提高伤口愈合质量； 其中钙基蒙脱石解离出的钙离子可缩短出血时间及血浆复钙时间。
[0144] ③锌基蒙脱石与钙基蒙脱石通过促进表皮细胞、血管内皮细胞和成纤维细胞增殖 分化来加速伤口愈合作用优于单用蒙脱石，其锌基蒙脱石在表皮缓慢释放锌离子，从而有 利于蒙脱石最大限度的发挥功效；二者结合有望作为一种新的促进伤口愈合的药物应用于 临床，具有良好的临床推广应用前景。
[0145] 实验例6:锌基蒙脱石与钙基蒙脱石散剂中锌离子释放度、钙离子释放度实验
[0146] 1、试药和仪器
[0147]I. 1药品：锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散，实施例1、2、3制备；
[0148] 1. 2仪器：紫外分光光度计、智能溶出试验仪；
[0149] 2、释放度的测定
[0150] 锌离子释放度取本品lg，按中国药典2010版二部附录XC中的第一法，转速为 lOOrpm，释放介质为以磷酸盐缓冲液（pH6.8) 1000ml，温度为（37±0.5)°C，分别于1、1.5、 2、2. 5、3h时间点处取样5ml，同时补充同温的释放介质5ml;取出的样品微孔滤膜过滤后， 置100mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀。然后再精密量取IOml溶液置100mL容量 瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀作为供试品溶液。取对照品溶液与供试品溶液分别测定吸 光度，计算样品中的锌含量。结果见表10。
[0151] 表10实施例样品不同时间点锌离子累计释放率（％ )
[0152]
[0153] 以时间（小时h)对三批的锌离子累计释放量（％)作曲线，即得各样品的累计释 放曲线，结果见附图3。
[0154] 钙离子释放度取本品lg，按中国药典2010版二部附录XC中的第一法，转速为 lOOrpm，释放介质为以磷酸盐缓冲液（pH6.8) 1000ml，温度为（37±0.5)°C，分别于1、2、3、 4h时间点处取样5ml，同时补充同温的释放介质5ml;取出的样品微孔滤膜过滤后，置100mL 容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀。然后再精密量取IOml溶液置100mL容量瓶中，加氢 氧化钠试液15ml与钙紫红素指示剂0.lg，用乙二胺四醋酸二钠滴定液（0. 05mol/L)滴定至 溶液自紫红色转变为纯蓝色。每Iml乙二胺四醋酸二钠滴定液（0. 05mol/L)相当于25mg 的钙离子，结果见表11。
[0155] 表11实施例样品不同时间点钙离子累计释放率（％ )
[0156]
[0157]
[0158] 以时间（小时h)对三批的钙离子累计释放量（％ )作曲线，即得各样品的累计释 放曲线，结果见附图4。
[0159] 结果分析：在本发明中锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散中解离出的的蒙脱石 即作为缓释材料又作为破损皮肤保护剂，一方面使锌、钙离子缓慢释放，降低了锌、钙离子 对皮肤的刺激作用；另一方面对破损皮肤有很强的覆盖保护能力，提高皮肤屏障对攻击因 子的防御能力和局部皮肤保护作用。
[0160] 实验例7 :锌基蒙脱石与钙基蒙脱石对动物皮肤急性毒性实验
[0161] 1、药物：锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散由实施例2制备，置于研钵中研成 细粉，待用。
[0162] 2、动物：健康日本大耳白家兔，体质量2.0~2. 4kg，雌雄各半，由山东大学实验动 物中心提供。
[0163] (1)方法
[0164] 家兔16只随机分为锌基蒙脱石与钙基蒙脱石完整皮肤组、锌基蒙脱石与钙基蒙 脱石破损皮肤组、溶媒完整皮肤组、溶媒破损皮肤组，每组4只。动物受试前24h背部用6 % 的Na2S去毛，去毛面积SOcm2。给药前检查去毛部位皮肤是否因去毛而受损，受伤皮肤不宜 做完整皮肤的毒性实验。破损皮肤组造模是在实验前进行。将家兔皮肤消毒后用消毒手术 刀作"井"字形划破表皮，以皮肤出现轻微渗血为度。锌基蒙脱石与钙基蒙脱石为直接外用， 溶媒均匀涂抹于家兔去毛皮肤，面积约为70cm2，稍干后再均匀涂抹1次（两次共约8mL)。 乘湿以无刺激性纱布固定，在其上覆以聚乙烯薄膜，然后再包扎固定，以防止液体挥发。给 受试物后24h无家兔中毒死亡，用温水、棉签洗去残留于皮肤的受试物，继续观察，连续7d。 观察家兔死亡情况和全身中毒表现，即严密观察家兔的饮食、活动、皮毛、粪便及口、眼、鼻 分泌物等反应。7天后空气栓塞处死家兔，肉眼观察其肝、肺、肾、胃、肠等内脏器官。
[0165] (2)结果
[0166