] 在皮肤急性毒性实验过程中，家兔无死亡，饮食、活动、皮毛、粪便及口、眼、鼻分泌 物等均无异常。完整皮肤反应：对剪除背部毛发面积为6cmX6cm的家兔，在24h内外用锌 基蒙脱石与钙基蒙脱石给药，家兔食欲、精神及粪便未见异常，也未见死亡。停药后7天内 也未见动物死亡和其他异常表现。
[0167] 破损皮肤反应：对家兔已剪除背部毛发的皮肤用砂纸擦伤至渗血，24h内外用锌 基蒙脱石与钙基蒙脱石，给药时间内家兔食欲、精神及粪便未见异常，未见病变器官，也未 见死亡。即锌基蒙脱石与钙基蒙脱石外用给药后7天内饮食、排便、毛色、呼吸、运动、皮肤 及试验局部均未见异常反应。
[0168] (3)结论
[0169] 皮肤急性毒性实验表明锌基蒙脱石与钙基蒙脱石均未引起家兔皮肤局部毒性和 全身急性毒性反应，提示锌基蒙脱石与钙基蒙脱石对家兔破损皮肤未见明显毒性反应。
[0170] 实验例8:锌基蒙脱石与钙基蒙脱石处方配比研究实验
[0171] 本发明通过凝血时间实验，比较了锌基蒙脱石与钙基蒙脱石不同的配比的凝血时 间和出血时间，从而考察锌基蒙脱石与钙基蒙脱石配比处方。
[0172] 锌基蒙脱石与钙基蒙脱石混悬液的制备：将不同比例的锌基蒙脱石与钙基蒙脱石 混合物，分别加入烧杯中，按照锌基蒙脱石与钙基蒙脱石混合物：纯化水=1:10 (质量比）， 室温下进行超声波处理，制成不同比例的锌基蒙脱石与钙基蒙脱石混悬液，备用。
[0173] 取18~22g小鼠48只，雌雄不分，禁食禁水24h。摘眼球取血lmL，放入加有0.ImL 朽1檬酸钠溶液（38mg/mL)的离心管内，混勾后以1000r/min离心lOmin，取内径8mm试管1 支，加入混合血浆和生理盐水各80mL，随即放入37°C水浴中温浴2min，然后加入80mL不同 比例锌基蒙脱石与钙基蒙脱石混悬液（2. 8mg/mL)，混匀后再放入37°C水浴中，立即计时， 记录自加药后至纤维蛋白形成、液面不动所需时间，即为锌基蒙脱石与钙基蒙脱石混悬液 血浆复钙时间。结果见表12。
[0174] 表12锌基蒙脱石与钙基蒙脱石不同配比对血浆复钙时间的影响
[0175]
[0176] 注：从表中分析，但实验1血浆复钙时间为422s，与实验例2、3、4、5、6、7相比p < 0. 05。实验7血浆复钙时间为312s;与实验例2、3、4、5、6相比p> 0. 05。从经济利益和 临床效果考虑，根据以上实验结果，本发明处方选择；锌基蒙脱石：钙基蒙脱石=5:8、7:9、 8:10、9:11、10:12 (质量百分比）；优选处方：锌基蒙脱石：钙基蒙脱石为5: 8、7: 9、8:10 (质 量百分比）。
[0177] 实验例9 :锌基蒙脱石与钙基蒙脱石体外凝血研究实验
[0178] 1材料与方法
[0179] I. 1药物及试剂：锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散（实施例1制备）；云南白 药（云南白药集团股份有限公司）；淀粉（湖南尔康制药有限公司）；
[0180] 1. 2实验动物：健康成年新西兰大白兔，体重2. 0~2. 5kg，雌雄兼用（普通级，山 东大学实验动物中心提供）；
[0181] 2 方法
[0182] 体外凝血时间的测定：取试管32支，按实验药物分为4组：空白组、淀粉组、阳性 对照云南白药组和锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散组，每组8支试管，空白组不加任 何药物，其他组分别加入不同药物各l〇〇mg。选取健康新西兰大白兔8只，雌雄各半。动物 适应性饲养1周后进行试验，将兔子固定后心脏取血，每只8ml。取血后迅速注入试管，每支 2ml，立即摇匀，同时计时开始，每隔15S轻轻倾斜试管1次，观察有无凝血出现，直至试管内 血液不再流动为止，即血液完全凝固时间（S)。结果见表13 ;
[0183] 表13对新西兰大白兔体外凝血时间的影响（n= 8)
[0184]
[0185] 实验结果评价：锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散组与空白组比较P<0. 01 ; 与淀粉组比较P< 0.01 ;与云南白药组比较P< 0.05。
[0186] 3结果：淀粉组与空白组比较凝血时间虽然有缩短，但无显著性差异（P> 0. 05)。 云南白药组与空白组比较；有明显缩短凝血时间（P< 0.01)。锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无 菌止血散组与淀粉组比；体外凝血时间有非常明显缩短（P< 0. 01)。与阳性药云南白药比 较，止血材料锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散组体外凝血效果较好，有统计学意义（P < 0. 05)。试验结果说明锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散有较好的体外凝血效果。
[0187] 实验例10 :锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散止血作用的研究实验
[0188] 1、实验材料
[0189]I. 1巴马小型猪，体重22~30kg，雌雄兼用，普通级，由山东乳山市华乳养猪厂提 供；
[0190] 1. 2锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散由实施例1制备；
[0191] 2、方法与结果
[0192] 2. 1对巴马小型猪股静脉、动脉创伤止血效果的研究，选用健康巴马小型猪18只， 雌雄各半，随机分3组，每组6只，即阴性对照淀粉组、阳性对照云南白药组、锌基蒙脱石与 钙基蒙脱石无菌止血散组。
[0193]①实验动物巴马小型猪建立血管创伤模型，苯巴比妥钠耳缘静脉麻醉（30mg/kg);仰位固定在手术台上，消毒、充分暴露并游离股静脉约6cm，用动脉夹夹住近心端股静 脉，另一端用绳提拉住，在股静脉中间部位采用医用动脉导管穿刺鞘（直径〇.3cm)穿刺暴 露好的股静脉，模型建立后，放开动脉夹后血液从穿刺孔喷出，立即对出血创面按压止血包 (每个出血创面均使用30g受试材料：阴性对照淀粉、阳性对照云南白药、试验药物锌基蒙 脱石与钙基蒙脱石无菌止血散，制做成的（止血包）进行止血，按压2min后，观察记录各组 动物创面的止血效果。
[0194]②以同样的方法在后肢另一侧建立股动脉出血模型，按压同时开始计时，按压 2min后每隔30s观察一次出血部位，至5s不见渗血时停止计时，S卩出血时间。观察记录各 组动物创面的止血效果。按压出血部位过程中，动脉创面出血被吸附在止血包里，止血包按 压前先用电子天平称重，记录重量，止血后再称止血包的湿重，用止血后的重量减去止血前 的重量，即可代表出血的量。
[0195]③观察结束后逐层缝合腹膜、肌肉、皮肤，并在缝合表面洒上聚维酮碘以防止感 染，实验过程注意无菌操作。若未能控制股动脉出血不再应用其他干预措施，记录24h内动 物死亡数，并及时取下股动脉创面组织；存活实验动物，术后自由饮水、饮食，于手术后24h 麻醉观察股动脉创面，取下股动脉创面组织，用10%中性甲醛固定，石蜡包埋，做组织切片， HE染色观察创面组织病理变化情况。
[0196] 2. 2统计学处理实验数据以f±4表示，用SPSS13. 0软件，采用单因素方差分析 进行统计学处理，对非正态分布的计数资料采用检验。显著性水平P< 〇. 05。
[0197] 2. 3对巴马小型猪股静脉创伤止血效果的影响
[0198] 在巴马小型猪股静脉创伤止血试验中，阴性对照淀粉按压2min后均不能有效止 血，有明显的渗血；阳性对照云南白药按压2min后其中有一只动物伤口处有渗血，止血有 效率85. 6 %;锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散止血包按压2min后均可以有效止血。与 淀粉对照组比较，阳性对照云南白药和锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散止血包对巴马 小型猪股静脉创伤出血的止血作用有显著性差异（P< 0. 05,P< 0. 01)。见表14。
[0199] 表14对巴马小型猪股静脉创伤止血效果的影响（n= 6)
[0200]
[0202] 1P< 0? 05,2P< 0? 01，与淀粉组比较。
[0203] 2. 4对巴马小型猪股动脉创伤止血效果的影响
[0204] 巴马小型猪股动脉创伤止血试验结果显示，与淀粉对照组比较，云南白药组和 锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散组均能显著缩短巴马小型猪股动脉出血时间（P < 0.01)，并减少出血量（P< 0.05,P< 0.01)。锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散 组对巴马小型猪股动脉创伤止血效果要明显好于云南白药组，出血时间有显著缩短（P < 0. 05)，出血量也明显减少（P< 0. 05)。受试止血材料锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止 血散止血包按压大约5min后可均可有效止血；阴性对照淀粉组不采取其他措施，24h内其 中有2只巴马小型猪因失血过多造成休克性死亡。结果见表15。
[0205] 表15对巴马小型猪股动脉创伤止血效果的影响（t*~n=6)
[0206]
[0207]1P< 0. 05,2P< 0. 01，与淀粉组比较；3P< 0. 05,与云南白药组比较。
[0208] 试验表明，锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散止血包对巴马小型猪股动、静脉 致命性出血模型均有显著的止血效果，降低死亡率。
[0209] 2. 5股动脉止血部位的病理观察组织切片HE染色后，于显微镜下观察可见，受试 止血材料淀粉组、云南白药组和锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散组，各组血管创面及 附近均未发现有血管壁的不规则增厚、溃疡、坏死或动脉瘤形成等改变，各组病理检验无明 显异常改变，但各组均有血管腔面的血栓附着，其相应的显微镜下主要表现为新鲜血栓形 成。病理观察结果如下；
[0210] A、淀粉组股动脉血管创面，未发现有血管壁的不规则增厚、溃疡、坏死或动脉瘤形 成等改变；
[0211] B、淀粉组股动脉血管腔面有血栓附着；
[0212] C、云南白药组股动脉血管创面，未发现有血管壁的不规则增厚、溃疡、坏死或动脉 瘤形成等改变；
[0213]D、云南白药组股动脉血管腔面有新鲜的血栓形成；
[0214]E、锌基蒙脱石与钙基蒙脱石无菌止血散组股动脉血管创面，未发现有