1〇〇"表示的可以是90到110之间的任何数值。此外，在"大约第 一数值到第二数值"的表述中，大约同时修正第一和第二数值两个数值。在某些情况下，近 似性语言可能与测量仪器的精度有关。
[0038] 除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人 员普遍理解的相同含义。
[0039] 1小鼠EAU(实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎，Experimentalautoimmune uveoretinitis)模型的建立
[0040] 1. 1实验动物的选取及饲养
[0041] 6-8周龄雌性SPF级C57BL/6J小鼠48只，体重15-20g。全部小鼠饲养于标准化 无特定病原体动物（SPF)级动物房，实验动物用标准颗粒饲料喂养，自由饮水摄食，室温为 (22 ± 2)°C，相对湿度为40 % -60 %。适应性饲养2-7d后用于实验。
[0042] 1. 2EAU小鼠模型制作原理
[0043] IRBPi2。多肽通过诱发T淋巴细胞介导的自身免疫反应，损伤小鼠视网膜组织，弓丨 起实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎。
[0044] 1 ? 3EAU小鼠模型的制备
[0045] 皮下注射乳化的IRBPi2。于模型组小鼠一侧后足掌垫、双侧尾根及后臀部，共注射 抗原300yg，同时腹腔内注射百日咳菌液1yg破坏小鼠的全身免疫耐受，以增强免疫效 果，免疫当天记作第〇天（day0)。
[0046]2实验方法
[0047]2. 1EAU小鼠的饲养条件
[0048] 饲养于标准化无特定病原体动物（SPF)级动物房，实验动物用标准颗粒饲料喂 养，自由饮水摄食，室温为（22 ± 2) °C，相对湿度为40 % -60 %。
[0049]2. 2给药方式和具体途径
[0050] 自免疫造模前3天（day-3)开始以25mg/kg?day的剂量每日连续对伏立诺他组 小鼠进行灌胃给药，直至免疫造模后第21天（day21)。对照组采用同样的方式以空白溶媒 PBS灌胃处理。
[0051 ] 2. 3伏立诺他对小鼠EAU病变临床治疗效果观察
[0052] 于免疫后第12天（day12)起每日连续观察对照组及伏立诺他组小鼠眼底损伤情 况，方法为：复方托吡卡胺滴眼液充分散瞳后，使用双目间接检眼镜，辅助+90D前置镜暗室 检查。
[0053] 于免疫后第21天（day21)对两组小鼠进行小鼠眼底损伤的临床评分，评分标准 见表1。由两位眼科医师共同对所有小鼠双侧眼底损伤情况进行随机双盲打分。
[0054] 表1C57BL/6J小鼠EAU模型临床评分
[0055]
[0056] 2. 4小鼠眼底图像采集
[0057] 于免疫后第21天（day21)对两组小鼠进行眼底图像采集。用复方托吡卡胺滴眼 液充分散瞳、盐酸奥布卡因滴眼液表面麻醉，角膜表面涂以医用透明质酸钠凝胶，上覆盖玻 片消除角膜曲率的影响。以〇度耳镜窥入眼底，计算机成像系统采集眼底图像。
[0058] 2. 5视网膜切片的HE染色及组织病理学评分
[0059] 2. 5. 1视网膜切片的HE染色
[0060] 2. 5. 1. 1 取材
[0061] 免疫后第21天（day21)处死小鼠，完整取出小鼠眼球。
[0062] 2. 5. 1. 2石蜡切片制备
[0063] (1)10%甲醛+5%冰乙酸溶液固定眼球，过夜，生理盐水冲洗眼球；
[0064] (2)脱水：眼球依次浸入75 %酒精、85 %酒精、95 %酒精I、95 %酒精II、95 %酒精 III、无水酒精I、无水酒精II、无水酒精III。
[0065] (3)透明：眼球依次浸入二甲苯I、II、III。
[0066] (4)浸蜡：将眼球放入预热的包埋盒中（含部分熔化的石蜡），继续加入熔化的石 蜡至组织全部浸没。
[0067] (5)冷却：将包埋盒置入4°C冰箱中充分冷却后取出。
[0068] (6)将包埋好的蜡块，用石蜡切片机连续切片，厚度为5ym，制成石蜡切片。
[0069] 2. 5. 1. 3HE染色
[0070] (1)石蜡切片脱蜡水化：顺序依次为，二甲苯浸洗2次共5min，100%、95%、90%、 80%、70%乙醇浸洗31^1^5，自来水洗涤1〇1^11 ;
[0071] (2)苏木精染色5min，自来水洗lmin;
[0072] (3) 1 %盐酸酒精分化30s，自来水洗lmin，PBS返蓝30s，自来水洗lmin;
[0073] (4)伊红染色2min;自来水洗3min;
[0074] (5)梯度酒精脱水，二甲苯透明；
[0075] (6)中性树脂胶封片，光镜下观察并拍照。
[0076] 2. 5. 2组织病理学评分
[0077] 分别取对照组和伏立诺他组小鼠眼球的HE染色切片在光学显微镜下观察视网膜 及玻璃体腔的组织结构、炎性细胞浸润情况，并进行组织病理学评分，评分标准见表2。由两 位眼科病理学医师共同对两组小鼠眼球切片分别进行随机双盲打分。
[0078] 表2C57BL/6J小鼠EAU模型组织病理学评分
[0079]
[0080] 2. 6伊文思蓝（EB)血管灌注造影视网膜铺片
[0081] 于免疫后第21天（day21)将EAU对照组和伏立诺他组分别取4只小鼠，进行EB 血管灌注造影视网膜铺片。
[0082] (1)麻醉：称重后10%水合氯醛以30〇11^/1^腹腔注射麻醉；
[0083] (2)EB注射：29G针头穿刺入尾静脉内注射2%EB100y1，循环2小时；
[0084] (3)固定：处死小鼠，摘取眼球，置于浓度为4%多聚甲醛溶液中固定3小时；
[0085] (4)剥离视网膜：在手术显微镜下用角巩膜剪于眼球角巩膜缘后约0. 5mm处剪开， 除去角膜、虹膜，娩出晶状体和玻璃体。将视网膜以视盘为中心放射状剪开4刀，置于载玻 片上，用显微有齿镊小心将巩膜翻转，完整分离出视网膜，平铺于载玻片上；
[0086] (5)封片：滴少许封片剂后以盖玻片封片；
[0087] (6)照相：立即置于激光扫描共聚焦荧光显微镜下观察、照相。
[0088] 2. 7视网膜免疫组织化学染色
[0089] 2. 7. 1 取材
[0090] 免疫后第21天（day21)处死小鼠，完整取出小鼠眼球。
[0091] 2. 7. 2石蜡切片制备
[0092] (1)10%甲醛+5%冰乙酸溶液固定眼球，过夜，生理盐水冲洗眼球；
[0093] (2)梯度酒精脱水、二甲苯透明、浸蜡、冷却（方法同第一部分）。
[0094] (3)将包埋好的蜡块，用石蜡切片机连续切片，厚度为5ym，制成石蜡切片。
[0095] 2. 7. 3免疫组织化学染色
[0096] (1)石蜡切片置于65°C烤箱烘烤2小时，取出后冷却至室温；
[0097] (2)二甲苯脱腊（二甲苯I10分钟、二甲苯II10分钟），梯度酒精水化（100%乙 醇I5分钟、100 %乙醇II5分钟、95 %乙醇10分钟、80 %乙醇10分钟），自来水洗lmin，蒸 馏水洗lmin;
[0098] (3)切片浸入PH= 6. 4柠檬酸盐缓冲液，微波加热，高火加热lOmin后，低火加热 lOmin，从微波炉取出后冷却至室温，浸入蒸馏水洗5min;
[0099] (4)将切片置于3%H202，水平震荡5min，蒸馏水洗5min [0100] (5)加入5%BSA封闭液，室温孵育lh，甩掉封闭液；
[0101] (6)滴加50y1 -抗F4/80抗体（1 :200稀释），置于湿盒中4°C孵育过夜，0. 1% PBST水平震荡洗3次，5min/次；
[0102] (7)滴加50y1生物素标记的二抗（山羊抗大鼠抗体）（1 :200稀释），室温下孵育 lh，0. 1 %PBST水平震荡洗3次，5min/次；
[0103] (8)滴加50y1辣根过氧化物酶-生物素偶联的三抗，室温下孵育2h，0. 1 %PBST 水平震荡洗3次，5min/次；
[0104] (9)DAB显色：1ml蒸馏水加A、B、C液各一滴，现用现配；将配好的DAB显色液滴加 到切片上覆盖全部组织，镜下观察以特异性着色良好背景不出现着色为标准，自来水冲洗 终止显色；
[0105] (10)苏木精复染lmin，0. 5%盐酸酒精分化，视复染深浅而定，氨水返蓝；
[0106] (11)梯度酒精脱水（80 %乙醇1分钟、95 %乙醇5分钟、100 %乙醇I5分钟、100 % 乙醇II10分钟），二甲苯透明（二甲苯I10分钟、二甲苯II10分钟）；
[0107] (12)中性树胶封片，光镜下观察并拍照。光学显微镜下F4/80阳性细胞表现为胞 浆染色为深棕色。
[0108] 2. 8视网膜免疫荧光染色
[0109] 2. 8. 1取材及冰冻切片制备
[0110] (1)免疫后第21天（day21)处死小鼠，完整取出小鼠眼球；
[0111] (2)立即将小鼠眼球于液氮中冷冻10-15秒，以0CT包埋；
[0112](3)立即将0CT包埋的小鼠眼球冷冻于-80°C超低温冰箱，15分钟