来酸盐 或富马酸盐。
[0015] 细胞系：乳腺癌细胞系MCF-7 (中南大学湘雅医学院细胞库提供)。
[0016] 试剂：噻唑蓝（MTT)、RPMI1640培养液、新生牛血清、抗生素(美国英杰生命技术 公司）;胰酶(美国AMRESC0公司）;96孔培养板(美国英杰生命技术公司）；二甲基亚砜(美国 Sigma公司）。
[0017] 仪器：HFsafe-1500型超净工作台、HF151UV型CO2培养箱(上海力申科学仪器有 限公司）；XSP-15C型倒置显微镜（上海长方光学仪器有限公司）；MultiskanMK3型酶标仪 (美国Thermo公司）；超纯水制备仪(美国Milli-Q公司）。
[0018] 实验操作：试样对Hela细胞、A549细胞和MCF-7细胞的测试。每种细胞的实验操 作过程相同，一次实验过程中，每种试样设置5个浓度梯度（0. 010ymol/mL、0. 030ymol/ mL、0. 100timol/mL、0.300ymol/mL和 1.000ymol/mL)，每个浓度四个平彳丁试样，每组实 验平行3次，并通过空白组对照得出结论。酶标仪检测各孔OD值，检测波长570nm。
[0019] 3.抗肿瘤活性评价 (1)细胞抑制率计算：
(2)IC5。值计算 试样浓度对数值与细胞抑制率线性回归，利用软件计算试样对细胞的半数抑制浓度IC50 值。
[0020]A(4-叔丁基-5-(1-(4-氯苯基）-2-硝基乙基）噻唑-2-基）-4-氯丁酰胺和 A(4-叔丁基-5- (1- (4-氯苯基）-2-硝基乙基）噻唑-2-基）-2, 2-二氯乙酰胺对人乳腺 癌细胞（MCF-7 细胞）的IC5。为 46±1ymol/L和 23 ±1ymol/L。
[0021] 试结果显示，5- (2-硝基乙基）噻唑衍生物或其盐对人乳腺癌细胞（MCF-7细胞） 具有良好的抑制活性，可用于制备抗肿瘤药物。
[0022] 实施例5 5- (2-硝基乙基）噻唑衍生物及其盐抗慢性粒细胞性白血病细胞株K562活性测定 1.抗肿瘤活性原理 MTT法生物活性测试又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT分析 法以活细胞代谢物还原剂噻唑蓝[3- (4, 5-二甲基-2-噻唑）-2, 5-二苯基溴化四氮唑； 3_(4, 5-dimethylthiazol_2-yl)-2, 5-diphenyltetrazoliumbromide，MTT]为基础。MTT是 一种能接受氢原子的染料。活细胞线粒体中与NADP相关的脱氢酶在细胞内可将黄色的MTT 转化成不溶性的蓝紫色的甲馈（formazon)，而死细胞则无此功能。用DMSO溶解formazon 后，在一定波长下用酶标仪测定光密度值，既可定量测出细胞的存活率。根据光密度值的变 化观察样品对肿瘤细胞的抑制作用。
[0023] 2?抗肿瘤活性实验 试样：5- (2-硝基乙基）噻唑衍生物（I)及其盐：
式中R选自=C1-C2烷基、C3~C4直链烷基或C3~C4支链烷基；Y选自：氟、氯、溴或碘；n选 自：0、1、2、3或4;m选自：1、2;X选自氟、氯、溴或碘；盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝 酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐 或富马酸盐。
[0024] 细胞系：慢性粒细胞性白血病细胞株K562。
[0025] 试剂：噻唑蓝（MTT)、RPMI1640培养液(美国Hyclone公司）、新生牛血清(浙江天 杭生物科技股份有限公司）、抗生素(美国英杰生命技术公司）；96孔培养板(美国美国康宁 公司）；二甲基亚砜(美国Sigma公司）。
[0026] 仪器：HFsafe-1500型超净工作台、Forma3111CO2培养箱（美国Thermo公司）； 1X70荧光倒置显微镜（日本OLYMPUS有限公司）;SynergyHTX多功能微孔板检测仪(美国伯 腾仪器有限公司）！PureMaximaLS纯水仪(英国ELGA公司）。
[0027] 实验操作：试样对K562细胞的体外抑制活性测试。实验过程中，每种试样设置五 个浓度梯度（浓度梯度设置范围为500ymol/L~5. 5ymol/L)，每个浓度六个平行试样， 每组实验平行3次，并通过空白组对照得出结论。酶标仪检测各孔OD值，检测波长490nm。
[0028] 3?抗肿瘤活性评价 (1) 细胞抑制率计算：
(2) 1(：5。值计算 试样浓度对数值与细胞抑制率线性回归，利用软件SPSS13. 0计算试样对细胞的半数 抑制浓度IC5。值。
[0029] 妒(4-叔丁基-5-(1-(4-氯苯基）-2_硝基乙基）噻唑-2-基）-2, 2-二氯乙酰胺 对慢性粒细胞性白血病细胞株K562的IC5。为85ymol/L。
[0030] 活性测试结果显示，5- (2-硝基乙基）噻唑衍生物或其盐具有良好的抑制慢性粒 细胞性白血病细胞株K562活性，可用于制备抗慢性粒细胞性白血病细胞株K562药物。
【主权项】
1. 化学结构式I所示化合物或其盐在制备抗人乳腺癌MCF-7细胞或抗慢性粒细胞性 白血病细胞株K562药物中的应用： I式中R选自烷基、C3~C4直链烷基或C3~C4支链烷基；Y选自：氟、氯、溴或碘；n选 自：0、1、2、3或4;m选自：1或2;X选自氟、氯、溴或碘；盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、 硝酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、琥泊酸盐、马来酸 盐或富马酸盐。2. 权利要求1所述的应用，其中式I所示的化合物是，(4-叔丁基-5-(l- (4-氯苯 基）-2_硝基乙基）噻唑_2_基）_2, 2_二氣乙醜胺。3. 权利要求1所述的应用，其中式I所示的化合物是，(4-叔丁基-5-(l- (4-氯苯 基）-2-硝基乙基）噻唑-2-基）-4-氯丁酰胺。
【专利摘要】本发明涉及化学结构式<b>Ⅰ</b>所示5-（2-硝基乙基）噻唑衍生物或其盐在制备抗人乳腺癌细胞（MCF-7细胞）或抗慢性粒细胞性白血病细胞株K562药物中的应用：？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？<b>I</b>式中R选自：C1~C2烷基、C3~C4直链烷基或C3~C4支链烷基；Y选自：氟、氯、溴或碘；n选自：0、1、2、3或4；m选自：1或2；X选自氟、氯、溴或碘；盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐或富马酸盐。
【IPC分类】A61P35/00, A61P35/02, C07D277/46, A61K31/426
【公开号】CN105078977
【申请号】CN201510545577
【发明人】彭俊梅, 申坤, 刘映, 胡艾希
【申请人】南华大学
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2015年8月31日