024]
[0026] 实施例三：制备无菌可注射透明质酸凝胶
[0027] 取0.lg高分子量透明质酸（4. OMDa)加入15ml中性生理性等渗磷酸缓冲液，添加 15mg硫辛酸。将制得溶液以3:7的比例添加至实施例一产物的一份中，再添加1%比例的 右旋糖酐，然后手动搅拌混匀。130°C、4min湿热灭菌。实施例三制得的透明质酸凝胶，性能 参数见表2,其中推挤力是通过一次性注射器带27G的针头、在推挤速度12. 5mm/min条件下 测定的。
[0028]表2.
[0029]
[0030] 实施例四：制备无菌可注射透明质酸凝胶
[0031] 取0.lg高分子量透明质酸（1. 8MDa)加入10ml中性生理性等渗磷酸缓冲液，添 加lmgAA2G?。将制得溶液以2:8的比例添加至实施例一产物的一份中，再添加10% (W/ W)比例的右旋糖酐和0. 1% (W/W)利多卡因，然后手动搅拌混匀。121°C、15min湿热灭菌。 实施例四制得的透明质酸凝胶，性能参数见表3,其中推挤力是通过一次性注射器带27G的 针头、在推挤速度12. 5mm/min条件下测定的。
[0032]表 3.
[0033]
[0034] 实施例五：制备无菌可注射透明质酸凝胶
[0035] 取0.lg高分子量透明质酸（3. 5M Da)加入5ml中性生理性等渗磷酸缓冲液，添加 lmg TPGS。将制得溶液以1:24的比例添加至实施例一产物的一份中，再添加3% (W/W)利 多卡因，然后手动搅拌混匀。12rC、15min湿热灭菌。实施例五制得的透明质酸凝胶，性能 参数见表4,其中推挤力是通过一次性注射器带27G的针头、在推挤速度12. 5mm/min条件下 测定的。
[0036] 表 4.
[0037]
[0038] 实施例六：制备无菌可注射透明质酸凝胶
[0039] 取lg高分子量透明质酸（1. 2MDa)和0. lg低分子量透明质酸（0. 4MDa)干粉溶解 于50ml、pH 9.0的水溶液，添加二乙烯基砜交联，采取垂直水平方向交错交联。接着用中性 生理性等渗磷酸缓冲液溶胀至pH值为7. 2除去未交联的交联剂，交联产物的交联度是5%。 在8°C均质化，然后放置在4-12°C直至形成均一的交联透明质酸凝胶，分为两等份。
[0040] 取0.0 lg高分子量透明质酸（2. OMDa)溶解于10ml中性生理性等渗磷酸缓冲液， 添加10mg AA2G?。将制得溶液以3:7的比例添加至前步制备的一份交联透明质酸凝胶中， 然后手动搅拌混匀。130°C、4min湿热灭菌。实施例六制得的透明质酸凝胶，性能参数见表 5,其中推挤力是通过一次性注射器带27G的针头、在推挤速度12. 5mm/min条件下测定的。 [0041 ]表 5.
[0042]
[0043] 实施例七：制备无菌可注射透明质酸凝胶
[0044] 取0. lg高分子量透明质酸（2. OMDa)加入20ml中性生理性等渗磷酸缓冲液，添加 lmg AA2G?和10mg TPGS。将制得溶液以3:7的比例添加至实施例六制备的另一份交联透 明质酸凝胶中，再添加3% (W/W)利多卡因，然后手动搅拌混匀。12rC、20min湿热灭菌。实 施例七制得的透明质酸凝胶，性能参数见表6,其中推挤力是通过一次性注射器带27G的针 头、在推挤速度12. 5mm/min条件下测定的。
[0045] 表 6.
[0046]
[0047] 实施例八：制备无菌可注射透明质酸凝胶
[0048] 取0. 3g高分子量透明质酸（2. 3MDa)和0. 02g低分子量透明质酸（0. 5MDa)干粉 溶解于l〇ml、pH 8. 5的水溶液，分别添加BDDE与二乙烯基砜交联，使交联产物的交联度是 15%。接着用pH7. 2中性生理性等渗磷酸缓冲液溶胀中和至pH值为7. 1。在液氮处理后粉 碎均质化，形成均一的交联透明质酸凝胶微粒，分成两等份。
[0049] 取0.Olg高分子量透明质酸（1. 2M Da)加入1ml中性生理性等渗磷酸缓冲，添加 0. 5mg TPGS。将制得溶液添加至前步制备的一份交联透明质酸凝胶中，然后手动搅拌混匀。 121°C、15min湿热灭菌。实施例八制得的透明质酸凝胶，性能参数见表7,其中推挤力是通 过一次性注射器带27G的针头、在推挤速度12. 5mm/min条件下测定的。
[0050] 表 7.
[0051]
[0052] 实施例九：制备无菌可注射透明质酸凝胶
[0053] 取0.0 lg高分子量透明质酸（2. 2M Da)加入1ml中性生理性等渗磷酸缓冲，添加 lmg TPGS。将制得溶液添加至实施例八制备的另一份交联透明质酸凝胶中，再添加0.3% (W/W)利多卡因，然后手动搅拌混匀。12rC、15min湿热灭菌。实施例九制得的透明质酸凝 胶，性能参数见表8,其中推挤力是通过一次性注射器带27G的针头、在推挤速度12. 5_/ min条件下测定的。
[0054] 表 8.
[0055]
[0056] 实施例十：不同灭菌方式的无菌可注射透明质酸凝胶流变性能和推挤力
[0057] 在本实验中，对比了不同灭菌方式的透明质酸凝胶和瑞蓝2 (Restylane<IO的流变性 能和推挤力。10-1至10-5所有样品，交联剂是1，4-丁二醇缩水甘油醚，交联度为5 %，透 明质酸浓度时22mg/ml，样品的pH值为7. 3。推进力是通过一次性注射器带27G的针头、在 推挤速度12. 5mm/min条件下测定的，测试是在23°C环境下进行，具体数据见表9。
[0058] 表 9.
[0059]
[0060] 表9显示了水溶性维生素对不同灭菌方式后弹性模量G'值的影响，不同灭菌方式 后的产品推挤力明显小于瑞蓝2号产品。
[0061] 实施例十一：不同灭菌方式的无菌可注射透明质酸凝胶的体外降解性能
[0062] 在本实施例中，对比了不同灭菌方式透明质酸凝胶的体外酶解性能。11-1至11-6 样品，交联剂是1，4- 丁二醇缩水甘油醚，交联度为2. 5%，透明质酸浓度时25mg/ml，MAP添 加物的浓度是〇. 3mg/ml，样品的pH值为7. 2。
[0063] 将lg的样品装入1ml离心管，离心甩平管内液面，然后向各管内加入100 y 1透明 质酸酶溶液，使透明质酸酶的作用浓度是150IU/ml。以不加酶、其他操作保持一致的样品 为对照品。37°C恒温16小时。反应后将各管倒立，将液态样品用纸吸收，测定残留在管底 部的样品重量。将各试样的试验品以及对照品的样品重量测定结果以理论残留样品百分率 (%)的计算，具体数据见表10。
[0064] 表 10.
[0065]
[0066] 实施例十二：不同粒径可注射透明质酸凝胶的降解性能
[0067] 本实施例对比不同粒径的可注射透明质酸凝胶与瑞蓝2 tRestylane?}的体外降解 性能，具体操作步骤同实施例十一。12-1至12-8样品，交联剂是1，4- 丁二醇缩水甘油醚， 交联度为10%，透明质酸浓度时20mg/ml，水溶性维生素添加浓度是0. 4mg/ml，右旋糖酐和 利多卡因的浓度分别为6% (W/W)和0. 3% (W/W)，湿热灭菌条件为121°C、30min，样品的pH 值为7. 2。将各试样的试验品以及对照品的样品重量测定结果以理论残留样品百分率（％ ) 的计算，具体数据见表11。
[0068] 表 11.
[0069]
[0070] 表11显示了不同粒径的透明质酸凝胶与瑞蓝2号的体外降解对比结果，整体上实 施例中的体外降解均明显好于瑞蓝产品，说明实施例的产品降解周期明显优于瑞蓝2号。
【主权项】
1. 一种无菌可注射材料的制备方法，包括以下几步骤：1)、提供交联透明质酸凝胶： 将平均分子量为I. 0-4. O MDa的高分子透明质酸和平均分子量为0. 2-0. 99 MDa的低分 子透明质酸以至少3:1 (W/W)的比例溶解，在碱性条件下加入交联剂交联，形成交联度为 2. 5%-15%的交联透明质酸凝胶；2)、将1)产物低温均质，形成粒径为40-300 ym的均一颗 粒；3)、将高分子透明质酸干粉溶解于中性生理性等渗磷酸缓冲液中形成自由透明质酸溶 液，加入水溶性维生素，接着将自由透明质酸溶液与以1:49-3:7 (W/W)比例添加到2)产物 中，在不剪切透明质酸分子链的机械力作用下混匀；4)、将3)形成的混合物进行灭菌。2. 根据权利要求1所述无菌可注射材料的制备方法，其特征在于：所述交联剂是 1，4- 丁二醇缩水甘油醚、乙二醇而缩水甘油醚、1-乙基-3- (3-二甲氨基-丙基）-碳二亚 胺、二乙烯基砜、聚乙二醇、1，3-二环氧丁烷、N-羟基琥珀酰亚胺、1，2, 7, 8-二环氧辛烷的 一种或几种。3. 根据权利要求1所述无菌可注射材料的制备方法，其特征在于：所述低温均质可以 是不高于8°C下的研磨均质、粉碎均质、切割均质其中的一种或多种组合。4. 根据权利要求1所述无菌可注射材料的制备方法，其特征在于：所述灭菌是湿热灭 菌、环氧乙烷灭菌、辐照灭菌其中的一种或多种组合。5. 根据权利要求1所述无菌可注射材料的制备方法，其特征在于：还有添加右旋糖酐、 利多卡因其中一种或两种的步骤。6. 根据权利要求1所述无菌可注射材料的制备方法，其特征在于：水溶性维生素的添 加浓度范围是〇? 01_50mg/ml。7. 根据权利要求6所述无菌可注射材料的制备方法，其特征在于：所述水溶性维生素 为维生素B、维生素C、维生素E的衍生物中的一种或多种。8. 根据权利要求7所述无菌可注射材料的制备方法，其特征在于：所述维生素B衍生 物可以是硫辛酸。9. 根据权利要求7所述无菌可注射材料的制备方法，其特征在于：所述维生素C衍生 物是AA2G?、维生素C磷酸酯镁、维生素C磷酸酯钠、维生素C磷酸酯钙其中的一种或几种。10. 根据权利要求7所述无菌可注射材料的制备方法，其特征在于：所述维生素E衍生 物是TPGS。
【专利摘要】本发明涉及一种无菌可注射材料的制备方法，主要包括以下几步骤：1）、提供交联透明质酸凝胶，将高分子透明质酸和低分子透明质酸干粉溶解形成水溶液，用交联剂进行交联；2）、将1）产物低温均质；3）将高分子透明质酸干粉溶解形成水溶液，然后添加水溶性维生素等成分，与2）产物在不剪切透明质酸分子链的机械力作用下混匀；4）将3）形成的混合物灭菌。该方法制备的无菌可注射材料降解周期长、可塑性强、稳定性好且柔软度高，可用于皮下组织填充或皮肤修复、手术防粘连以及关节腔润滑等。
【IPC分类】A61L31/04, A61L31/14, A61L27/20, A61L27/50, A61L27/54, A61L31/16
【公开号】CN105107018
【申请号】CN201510512623
【发明人】李媚
【申请人】李媚
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年8月19日