用药材质量9倍量 的95%乙醇回流提取2次，每次提取1小时，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂，干燥，粉碎得 败酱草提取物。
[0029] 利用紫外-可见分光光度法（以黄花败酱皂苷C为对照品）测得本实施例制得败 酱草提取物中皂苷类成分的总含量为8% (含量不到50% )。
[0030] 败酱草肠宁片的制备 以实施例1制备得到的败酱草提取物来制备败酱草肠宁片，制备方法为：称取250g败 酱草提取物，加入250g硫酸钙、IOg交联聚维酮混匀。以适量80%乙醇作润湿剂制成软材， 以14目筛制粒，于60°C温度下干燥后过12目筛整粒，加入IOg交联聚维酮及3g硬脂酸镁 混匀后，制成1000片。
[0031] 以实施例2制备得到的败酱草提取物来制备败酱草肠宁片，制备方法同上。
[0032] 以实施例3制备得到的败酱草提取物来制备败酱草肠宁胶囊，制备方法为：称取 250g败酱草提取物，加入250g硫酸钙、IOg交联聚维酮混匀。以适量80 %乙醇作润湿剂制 成软材，以14目筛制粒，于60°C温度下干燥后过12目筛整粒，填入空胶囊中，即得。
[0033] 败酱草肠宁片对三硝基苯磺酸诱导的大鼠结肠炎组织的保护作用 具体步骤如下： 材料与仪器：败酱草肠宁片（BJC);柳氮磺胺吡啶（SASP，海南红惠制药有限公司生产， 临用前用蒸馏水配成〇. 3mg/mL的混悬液）；2, 4, 6-三硝基苯磺酸（TNBS, Sigma公司）；戊 巴比妥钠（北京化学试剂公司）；MP0、SOD、MDA检测试剂盒（南京建成生物工程研究所）。 SPF级SD大鼠60只，体质量180~220g，均由广东省（医学）实验动物中心提供，合格证号 SCXK(粵）2008-0002。U-2900型可见-紫外分光光度计（日本日立公司）；KDC-220HR高 速冷冻离心机（科大创新股份有限公司中佳分公司）；星海旋转蒸发仪（无锡市星海王生 化设备有限公司）；420恒温水浴锅（金坛市正基仪器有限公司）；XH-B旋涡混合器（姜堰 市康健医疗器械有限公司）；玻璃匀浆器（上海玻璃仪器厂）；AEL-160电子分析天平（日 本岛津公司）。
[0034] 试验方法： 造模与取材：6〇只SD大鼠适应饲养1周后，随机将大鼠分为正常组、模型组、SASP组 (0. 3g/kg)，BJC高、中、低剂量组（16,8,4g生药/kg)，每组10只，禁食不禁水。24h后10% 的戊巴比妥钠3. 5mL · kg 1腹腔麻醉，将直径2_的乳胶管经肛门轻轻插入大鼠体内大约 8cm处，用注射器一次性注入TNBS的50%乙醇溶液到大鼠的肠腔内（TNBS125mg/kg)每只 0. 5mL，将大鼠的尾部提起，倒置30s，使造模剂充分渗透入大鼠的肠腔，正常组注入等量 50 %乙醇溶液。造模24h后开始灌胃给药，正常组和模型组给予等量生理盐水，持续给药4 周。末次给药2h后将大鼠颈椎脱白处死，开腹分离结肠，沿肠系膜缘剪开肠腔，4°C生理盐 水冲洗，平铺在塑料板上，肉眼观察结肠损伤程度，进行结肠大体形态损伤评分，指标包括 粘连局部充血、溃疡形成及炎症。留取距肛门8~IOcm的结肠黏膜组织，石蜡包埋，切片， 脱蜡，苏木精-伊红（HE)染色，酒精脱水，二甲苯透明封片，光镜下观察结肠黏膜损伤，进行 结肠组织学损伤评分，指标包括溃疡炎症肉芽肿、纤维化及病变深度。余下的大鼠结肠组织 液氮_70°C保存待测。
[0035] 生化指标测定：取大鼠结肠组织，按照试剂盒说明测定MPO、SOD、MDA含量。
[0036] 数据统计处理方法：采用统计软件SPSS13. 0进行单因素方差分析处理，实验结果 以均数土标准差0表示，对大体形态和组织学损伤等级资料采用秩和检验，P〈〇. 05为具 有统计学意义。
[0037] 试验结果： BJC对TNBS诱导的溃疡性结肠炎大鼠结肠大体形态和组织学损伤的影响：结果见表1。 正常组大鼠无腹泻、便血，结肠黏膜光滑无溃疡，腺体排列整齐。模型组（TNBS组）大鼠表现 为萎靡、竖毛、拱背、懒动、厌食，均出现不同程度的腹泻、稀便，伴有血便，可持续3周以上。 4周后处死动物，可见结肠与组织粘连，黏膜充血水肿，溃疡形成，肠管病变部位出现狭窄， 光镜下可见溃疡及炎性渗出物，主要表现为中性粒细胞浸润，出现黏膜腺体排列变形，与正 常组比较大体形态评分和组织学评分明显增高（P〈〇. 05)。BJC高、中、低剂量组及SASP组 大体形态评分和组织学评分明显降低，与模型组比较（P〈〇. 05)，均可改善结肠充血水肿等 炎性症状，减少溃疡面积，促进溃疡愈合。
[0038] 表1 BJC对TNBS诱导的溃疡性结肠炎大鼠结肠大体形态和组织学损伤的影响 (3T ± S )
与正常组比较，▼ P〈〇. 05 ;与模型组比较，*P〈0. 01 ;n = 10。
[0039] BJC对TNBS诱导的溃疡性结肠炎大鼠结肠组织S0D、MP0活性及MDA水平的影响： 结果见表2。模型组大鼠结肠黏膜组织SOD值显著低于正常组，MPO、MDA值显著高于正常 组（P〈0. 05)。BJC各剂量组及SPSA组均能升高溃疡性结肠炎大鼠 SOD值，降低MP0、MDA值 (Ρ〈0· 05) 〇
[0040] 表2 BJC对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中SOD、MPO和MDA的影响（^ 土 S )
与正常组比较，▼ P〈〇. 05 ;与模型组比较，*P〈0.0 l ;n = 10。
[0041] 败酱草肠宁片对对溃疡性结肠炎大鼠结肠 IL-I β、IL-10及TNF- α表达的干预作 用 具体步骤如下： 材料与仪器：败酱草肠宁片（BJC) JNBS由美国Sigma公司生产，批号为090Μ5000,购 自上海Sigma-Aldrich生物技术有限公司；巴柳氮钠片，规格：0. 5g/片，山西安特生物制药 股份有限公司生产，国药准字H20041706 ;水合氯醛由天津科密欧化学试剂有限公司生产， 批号为20090922 ;AR级无水乙醇由天津大茂化学试剂有限公司生产，批号为20090318 ;大 鼠 TNF- a、IL-1、IL-10酶联免疫检测试剂盒为美国BD公司产品，由上海宝生物科技有限公 司进口分装。SD大鼠40只，雌雄各半，体重180-220g，购自广东省医学实验动物中心提供， 合格证号SCXK (粵）2008-0002,试验前适应性饲养一周。电子分析天平（型号为FA1004) 为上海精密科学仪器有限公司；恒温箱（型号：HPX-9052MBE)为上海博迅实业有限公司； RM2135型轮转式切片机、EG1140石蜡包埋机、HI1210摊片机、HI1220烘干机，德国徕卡公 司；全自动生化分析仪，意大利ECHO公司；Leica DMR高级研究型荧光生物显微镜成像系 统，德国Leica公司；多功能酶标仪，美国perkinElmer公司；HC-3618R高速冷冻离心机，安 徽中科中佳科学仪器有限公司；一次性无菌注射器，手术器械等。
[0042] 试验方法： 药物配制：用研钵将败酱草肠宁胶囊内的颗粒研成细末，加蒸馏水配成药物浓度为 0. 2g/mL的溶液。用研钵将巴柳氮钠片研成细末，用0. 5%的羧甲基纤维素钠配成药物浓度 为0. lg/mL的溶液。
[0043] 分组、造模及给药：将40只大鼠随机分成4组，每组10只：正常组、模型组、BJC组 和巴柳氮组，除正常组外，其余各组大鼠禁食不禁水24h，10 %水合氯醛腹腔注射麻醉后，用 大鼠灌胃针管由肛门缓慢插入8cm，模型组和BJC组推入造模溶液（使用50%乙醇0. 25mL 配成的100mg/kgTNBS)，正常组给予同体积生理盐水灌肠，各组大鼠倒立30s后，仰卧放回 笼子。灌肠24h后，正常组及模型组灌胃生理盐水10mL/kg. d，BJC组灌胃败酱草水溶液 10mL/kg. d，巴柳氮组灌胃巴柳氮钠水溶液10mL/kg. d (即巴柳氮钠 lg/kg，大鼠给药量为成 人临床剂量10倍）灌胃，连续l〇d。
[0044] 取材：末次给药完成后各组动物禁食24h，颈椎脱白处死，开腹腔迅速取出结肠， 沿肠系膜缘剪开肠腔，用生理盐水清洗肠组织，平铺于冰盘上，肉眼观察结肠大体外观形 态。取肉眼观察结肠病变最严重处，一部分置10%中性甲醛中固定后，石蜡包埋，切片，HE 染色，光镜下观察组织病理组织学变化，其余部分放在_80°C，用于TNF-a、IL-I β、IL-10 水平的检测。
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