55，030)。在所述scFv中，重链V区和轻链V区通过接头(优选多肽接头)连接在一起(Huston, J.S.等，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A, 1988, 85, 5879-5883)。scFv 中的重链V区和轻链V区可来源于相同的抗体，或来源于不同的抗体。用来连接V区的肽接头可以是由12-19个残基组成的任何单链肽。可通过使用编码所需氨基酸序列的选自编码上述抗体的重链或重链V区的DNA和编码上述抗体的轻链或轻链V区的DNA的完整DNA或部分DNA作为模板；使用限定2个末端的引物对，通过PCR扩增编码scFv的DNA。然后可使用编码肽接头部分的DNA和限定分别与重链和轻链连接的DNA的2个末端的引物对的组合，进行进一步的扩增。在构建编码scFv的DNA后，可采用常规方法获得包含这些DNA的表达载体和被这些表达载体转化的宿主。此外，可使用所得宿主，按照常规方法获得scFv。如上所述，可通过获得编码抗体片段的基因，并表达这些基因，在宿主中产生这些抗体片段。与不同类型的分子(例如聚乙二醇(PEG))结合的抗体可用作修饰的抗体。本领域已确立了用于修饰抗体的方法。本发明中的术语“抗体”还包括上述抗体。
[0086]可将所获得的抗体纯化至均质。可通过常规用于分离和纯化蛋白质的方法，分离并纯化抗体。可通过联合使用适当选自以下的一种或多种方法来分离并纯化抗体:柱色谱法、过滤、超滤、盐析、透析、制备型聚丙稀酰胺凝胶电泳和等电聚焦，例如(Strategies forProtein Purificat1n and Characterizat1n: A Laboratory Course Manual, DanielR.Marshak 等编辑，Cold Spring Harbor Laboratory Press (1996) ；Antibodies: ALaboratory Manual.编辑 Harlow 和 David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory,1988)。这类方法不限于上列这些。色谱方法包括亲和色谱法、离子交换色谱法、疏水色谱法、凝胶过滤、反相色谱法和吸附色谱法。可采用液相色谱法，例如HPLC和FPLC，实施这些色谱方法。用于亲和色谱法的柱包括蛋白质A柱和蛋白质G柱。例如，蛋白质A柱包括Hyper D、P0R0S和Sepharose F.F.(Pharmacia)。还可利用抗原结合，使用抗原固定在之上的载体，来纯化抗体。
[0087]本发明的抗体可按照标准方法配制(参见例如Remington’s PharmaceuticalScience, latest edit1n, Mark Publishing Company, Easton, U.S.A)，并可包含药学上可接受的载体和/或添加剂。本发明涉及包含本发明的抗体和药学上可接受的载体和/或添加剂的组合物(包括试剂和药物)。示例性载体包括表面活性剂(例如PEG和Tween)、赋形剂、抗氧化剂(例如抗坏血酸)、着色剂、矫味剂、防腐剂、稳定剂、缓冲剂(例如磷酸、柠檬酸和其它有机酸)、螯合剂(例如Η)ΤΑ)、助悬剂、等渗剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、流动性促进剂和矫味剂。然而，可用于本发明的载体不限于该列表。实际上，可使用合适的其它常用的载体:轻质无水硅酸、乳糖、结晶纤维素、甘露糖醇、淀粉、羧甲纤维素钙(carmelosecalcium)、羧甲纤维素钠、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯乙缩醛二乙胺醋酸酯、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、中链脂肪酸甘油三酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油60、蔗糖、羧甲基纤维素、玉米淀粉、无机盐等。组合物还可包含其它低分子量多肽、蛋白质(例如血清白蛋白、明胶和免疫球蛋白)和氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸和赖氨酸。当组合物作为注射用水性溶液剂制备时，它可包含含有例如生理盐水、葡萄糖、D-山梨糖醇、D-甘露糖、D-甘露糖醇和氯化钠的等渗溶液剂，其还可含有合适的增溶剂，例如醇(例如乙醇)、多元醇(例如丙二醇和PEG)和非离子去污剂(聚山梨酯80和HC0-50)。
[0088]必要时，本发明的抗体可包封在微囊(由羟基纤维素、明胶、聚甲基丙烯酸甲酯等制成的微囊)中，并制成胶态药物递送系统(脂质体、白蛋白微球、微乳、纳米粒和纳米囊)的组分(例如参见“Remington’s Pharmaceutical Science 16th edit1n”, Oslo 编辑(1980)) ο此外，用于制备缓释药物的方法是已知的，这些可应用于本发明的抗体(Langer等，J B1med.Mater.Res.15: 167-277 (1981) ；Langer, Chem.Tech.12: 98-105(1982);美国专利号 3，773，919 ;欧洲专利申请号 58，481 ;Sidman 等，B1polymers 22:547-556 (1983) ;EP: 133，988)。
[0089]“免疫应答”是指体液免疫应答和/或导致B淋巴细胞和/或1淋巴细胞和/或抗原呈递细胞活化或增殖的细胞免疫应答。在一些情况下，然而，免疫应答可以具有低强度，并且只有当使用本发明的至少一种物质时变得可检出。“免疫原”是指用于刺激活的生物体的免疫系统的作用剂，使得免疫系统的一个或多个功能提高并直指免疫原性物质。“免疫原性多肽”是诱导细胞和/或体液免疫应答的不论是单独还是与载体连接的多肽。优选抗原呈递细胞可被激活。
[0090]“提高”免疫应答的物质是指其中当与不加入某一物质时测量的免疫应答相比时，加入该物质时观察到更大或增强或以任何方式偏离的免疫应答的物质。例如采用51Cr释放测定法，可在免疫期间在有或没有所述物质的情况下获得的样品中，测量细胞毒性T细胞的裂解活性。与没有所述物质的CTL裂解活性相比，CTL裂解活性随之提高的所述物质的量被称为足以提高动物对抗原的免疫应答的量。在某些实施方案中，免疫应答提高至少约2倍，例如约3或更多倍。还可改变分泌的细胞因子的量或类型。或者，可改变所诱导的抗体的量或其亚类。
[0091]术语“使……免疫”或“免疫”或相关术语是指赋予发起显著的针对靶抗原或表位的免疫应答(包括抗体和/或细胞免疫，例如效应子CTL)的能力。这些术语不需要产生完全免疫力，而是产生显著大于基线的免疫应答。例如，如果在应用本发明的方法后发生针对靶抗原的细胞和/或体液免疫应答，则可认为针对靶抗原使哺乳动物免疫。
[0092]术语“免疫治疗药”是指用于治疗疾病、病症或病况的组合物。更具体地讲，该术语用于指治疗的方法，其中通过接种或通过免疫分子转移产生有益的免疫应答。“免疫有效量”是指当引入个体时足以在该个体中诱导免疫应答的组合物的量。在主动免疫的情况下，该术语与“产生免疫的有效量”同义。成为免疫有效的所必需的组合物的量随许多因素而变化，包括组合物、组合物中其它组分的存在、抗原、免疫途径、个体、既往免疫或生理状况等。
[0093]制剂和给药方法
本发明的疫苗和组合物可配制成为药物组合物，并以适于所选的给药途径的各种形式给予哺乳动物宿主，例如人患者，所述给药途径即口服、鼻内、皮内或肠胃外、静脉内、肌内、局部或皮下途径。
[0094]因此，可与药学上可接受的溶媒(例如惰性稀释剂或可同化的食用载体)组合系统(例如口服)给予本发明的化合物。它们可包封在硬壳或软壳明胶胶囊中、可压制成片剂或可直接掺入患者饮食的食物中。对于口服治疗给药，可将活性化合物与一种或多种赋形剂混合，并以以下形式使用:可摄食片剂、口含片剂、锭剂、胶囊剂、酏剂、混悬剂、糖浆剂、糯米纸囊剂等。所述组合物和制剂应含有至少0.1%的活性化合物。当然，组合物和制剂的百分比可变化，并可适宜地为指定单位剂型重量的约2-约60%。这类治疗有用的组合物中活性化合物的量使得可获得有效剂量水平。
[0095]片剂、锭剂、丸剂、胶囊剂等还可含有:粘合剂，例如西黄蓍胶、阿拉伯树胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，例如磷酸二钙；崩解剂，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉、藻酸等；润滑剂，例如硬脂酸镁；且可加入矫味剂，例如蔗糖、果糖、乳糖或阿司帕坦(aspartame)或矫味剂，例如薄荷、冬青油或樱桃调味料。当单位剂型为胶囊剂时，除上述类型的材料以外，还可含有液体载体，例如植物油或聚乙二醇。各种其它材料以包衣材料提供或以别的方式改变固体单位剂型的外观。例如，片剂、丸剂或胶囊剂可用明胶、蜡、虫胶或糖等包衣。糖浆剂或酏剂可含有活性化合物、作为甜味剂的蔗糖或果糖、作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、染料和调味料例如樱桃味或橙味。当然，用于制备任何单位剂型的任何材料应是药学上可接受的且所用的量是实质上无毒的。另外，可将活性化合物掺入缓释制剂和装置中。
[0096]还可通过输注或注射静脉内或腹膜内给予活性化合物。可在水中制备活性化合物或其盐的溶液剂，任选与无毒表面活性剂混合。还可在甘油、液体聚乙二醇、三醋精及其混合物中和在油中制备分散剂。在贮存和使用的通常情况下，这些制剂含有防止微生物生长的防腐剂。
[0097]适于注射或输注的药物剂型可包括无菌水性溶液剂或分散剂，或包含适于临用时配制无菌注射用或输注用溶液剂或分散剂的活性成分的无菌散剂，任选包封在脂质体中。在所有情况下，最终剂型应是在制备和贮存条件下无菌的、流动的和稳定的。液体载体或溶媒可以是包含以下的溶剂或液体分散介质:例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)、植物油、无毒甘油酯及其合适的混合物。例如可通过形成脂质体、在分散剂的情况下通过保持所需粒度或通过使用表面活性剂，可保持适当的流动性。可通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯代丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等，产生对微生物作用的防止。在许多情况下，包括等渗剂(例如糖、缓冲液或氯化钠)将是优选的。可通过在组合物中使用延迟吸收的作用剂(例如单硬脂酸铝和明胶)引起注射用组合物的延长吸收。
[0098]按需要，在含上文列举的各种其它成分的合适的溶剂中掺入所需量的活性化合物，接着除菌过滤，来制备无菌注射用溶液剂。在用于制备无菌注射用溶液剂的无菌散剂的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，这产生存在于之前无菌过滤的溶液剂中的活性成分加任何其它所需成分的散剂。
[0099]对于局部给药，本发明的化合物可以纯的形式施用，即当它们是液体剂时。然而，一般将会是可取的是，将它们作为与皮肤上可接受的载体组合的组合物或制剂(其可为固体或液体)给予皮肤。
[0100]有用的固体载体包括细碎的固体，例如滑石、粘土、微晶纤维素、二氧化硅、氧化铝等。有用的液体载体包括水、醇或二醇或水-醇/二醇共混物，本发明的化合物可以有效水平溶解或分散在其中，任选借助于无毒表面活性剂。可加入其它成分例如香料或抗微生物剂，以使用于指定用途的性质最优。所得液体组合物可自用于浸透绷带和其它敷料的吸收垫(absorbent pad)施用，或使用栗送型或气雾剂喷雾器喷洒到受累区域。
[0101]例如合成聚合物、脂肪酸、脂肪酸盐和酯、脂肪醇、改性纤维素或改性矿物材料等增稠剂也可与液体载体一起使用以形成可涂敷的糊剂、凝胶剂、软膏剂、皂等，用于直接施用于使用者的皮肤。
[0102]可用于将本发明的化合物递送至皮肤的有用的皮肤组合物的实例是本领域已知的；例如参见Jacquet等(美国专利号4，608，392)、Geria (美国专利号4，992，478)、Smith等(美国专利号4，559，157)和ffortzman (美国专利号4，820，508)。
[0103]可通过比较其在动物模型中的体外活性和体内活性，来确定本发明的化合物的有用剂量。用于从小鼠和其它动物的有效剂量推知人的有效剂量的方法是本领域已知的；例如参见美国专利号4，938，949。
[0104]一般而言，液体组合物(例如洗剂)中本发明的化合物的浓度可为约0.1-25wt-%，优选约0.5-10 wt-%。半固体或固体组合物(例如凝胶剂或散剂)中的浓度可为约0.1-5 wt-%，优选约 0.5-2.5 wt-% ο
[0105]用于治疗所需要的化合物或其活性盐或衍生物的量不仅仅随所选择的具体盐而变化，而且还随给药途径、待治疗的病况的性质、患者的年龄和状况而变化，并且最终将由巡诊医生或临床医生决定。
[0106]然而，一般而言，合适剂量的范围可为约0.5-约100 mg/kg，例如约10-约75 mg/kg体重/天，例如3-约50