沙门氏菌菌株"是指沙门氏菌突变体，即不同于野生型，当以药 物有效剂量给予时其基本上不感染/存留于组织中并且基本上不能够恢复为完整的毒力。 优选地，本发明的肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的活的减毒突变体和/或肠道沙门氏菌 伤寒血清变型菌株的无活力的减毒突变体是非重组的。该术语"非重组的"是指这些菌株 不含有来自其他属或种的基因和/或不表达重组蛋白。这不同于现有技术（特别是以下专 利文件）中已知的内容 ：US2007/0298012(I.King&L.-M.Zheng) ;TO2009/098246(Aeterna ZentarisGmbH) ;W02006/076678(Univ.JohnHopkins);US6,962,696(D.Bermudes etal. ) ；W098/15631 (Fond.pourleperfectionnementetlarechercheen gyn6cologie-〇bst6trique);TO2008/091375(美国政府）和W02005/123762(Indian ImmunologicalsLtd)。在以上提及的专利/专利申请中所述的菌株都是重组菌株，因为它 们含有来自其他属或种的基因和/或表达重组蛋白，并且所述沙门氏菌菌株被用作靶向肿 瘤的载体。通常，以上现有技术中所述的菌株中含有的来自其他属或种的基因编码针对肿 瘤或癌细胞的重组蛋白。
[0031] "药物有效剂量"是指当被给予至人或动物生物体时诱导可检测的药理学和/或生 理作用的化学物质或化合物。在本发明中，药物有效剂量的肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌 株的活的减毒非重组突变体和/或肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的无活力的减毒非重 组突变体诱导有效的肿瘤或癌症消退（regression)和/或对肿瘤或癌症的复发/发展的 限制。
[0032] 通常，与适合的对照相比，本发明的药物组合物可显著使肿瘤的大小或体积减少 2 %或更多，3 %或更多，4%或更多，5 %或更多，例如10 %或更多，例如20 %或更多，例如 30%或更多，例如50%或更多，例如90%或更多，例如95%或更多，或显著减少复发肿瘤的 组织学阶段（例如从低到高阶段）。
[0033] 肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的活的减毒非重组突变体和/或肠道沙门氏菌 伤寒血清变型菌株的无活力的减毒非重组突变体的药物有效剂量可由本领域技术人员确 定，并且可以基于患者的临床状况，以及药物组合物的效力、佐剂或制剂的使用和类型、给 药途径和方案、接受者的免疫状态、体重等。优选地，所述药物组合物包含溶于可药用载体 或稀释剂（例如但不限于磷酸盐缓冲盐水（PBS))中的具有至少约IX10s菌落形成单位和 1X10s细菌细胞，更优选1X10 9菌落形成单位和1X10 9细菌细胞，甚至更优选2X10 9菌落 形成单位和5X109细菌细胞的肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的活的减毒非重组突变体 和/或肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的无活力的减毒非重组突变体。
[0034] 减毒沙门氏菌菌株现已在用于癌症治疗的小鼠模型中使用多年，这是由于它们 的特异性靶向肿瘤细胞的独特能力：这些细菌是能够在含氧量低或坏死的肿瘤区域中生 长的兼性厌氧菌，导致小鼠中的肿瘤消退（综述参见Wall,Srikanth, &McCormick, 2010)。 但是，这种情况并未出现在癌症患者中，在其中静脉注射减毒的肠道沙门氏菌伤寒血清变 型菌株未显示优先的肿瘤定植（colonization)和/或随后的肿瘤消退的诱导（Tosoet al.，2002)。不同于该出版物和现有技术，本发明的肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的活的 减毒非重组突变体和/或肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的无活力的减毒非重组突变体 不在癌组织（例如膀胱癌组织）中生长，如实施例2所示。因此，本发明的肠道沙门氏菌伤 寒血清变型菌株的活的减毒非重组突变体和/或肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的无活 力的减毒非重组突变体不存留于肿瘤或癌组织中，这不同于现有技术中已知的情况。
[0035] 通常，本发明的肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株选自Ty21a、CVD908-htrA、CVD 909、Ty800、M01ZH09 或x9633、X9639 和x9640、x8444。
[0036]这些菌株记载于以下文献中：LevineMM,TacketCO,SzteinMB.Host-Salmonella interaction:humantrials.MicrobesInfect2001 ；3:1271 - 9；LevineMM.Typhoid fevervaccines.In:PlotkinSA，MortimerEA,eds.Vaccines, 2nded.Philadelphia:W. B.Saunders, 1994:597 - 633；CrumpJA,LubySP,MintzED.Theglobalburdenof typhoidfever.BullWorldHealthOrgan2004 ；82:346 - 53；LevineMM,Galen JE，TacketCO,BarryEM,PasettiMF，SzteinMB.AttenuatedstrainsofSalmonella entericaserovarTyphiasliveoralvaccinesagainsttyphoidfever.In:Levine MM，KaperJB，RappuoliR，LiuM，GoodM,eds.Newgenerationvaccines, 3rded.New York:MarcelDekker, 2004:479 - 86；ShiH,SantanderJ,BrennemanKE,WandaSY,Wang S，SenechalP，Sunff,RolandKL，CurtissR.LiverecombinantSalmonellaTyphi vaccinesconstructedtoinvestigatetheroleofrpoSinelicitingimmunityto aheterologousantigen.PLoSOne. 2010Jun18 ;5 (6))。这些文章的教导全文纳入本文。
[0037] 优选地，所述非重组肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株为Ty21a。Ty21a通常以 已知安全的口服疫苗形式存在（Begier，Burwen,Haber,Ball,&VaccineAdverseEvent ReportingSystemWorking, 2004 ;Engels,Falagas,Lau, &Bennish, 1998)，并且如果发生 全身感染，Ty21a对抗生素非常敏感。之前已证明，人Ty21a的口服免疫诱导特异性的⑶8 T细胞，其分泌炎性细胞因子如IFN-γ、TNF-α和IL-2。在小鼠中，已证明其他减毒的伤寒 沙门氏菌菌株可诱导Thl型免疫应答。
[0038] 不同于该出版物和现有技术，本发明的肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的活的减 毒非重组突变体和/或肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的无活力的减毒非重组突变体i) 未用来自其他属或种的基因转化；ii)不表达一种或多种异源蛋白或抗原；和/或iii)不 充当疫苗载体。
[0039] 参照实施例，申请人进行了对ivesTy2la和BCG治疗使已建立的小鼠原位 MB49-1UC肿瘤消退的能力的并列比较，表明Ty21a具有更好的功效，因为使用1/100剂量时 维持了有效的肿瘤消退。
[0040] 已进行了在先的研究来试图替代对膀胱癌的BCG治疗。使用TLR-9激动剂CpG时， 不同的研究已证明同时使皮下（s.c.)(Hegeleetal.，2004;Loskogetal.，2005)或膀 月光（Hegeleetal.，2005;Mangsboetal.，2008 ;Ninalga，Loskog，Klevenfeldt，Essand，& Totterman，2005)MB-49 肿瘤消退的能力。但是，仅Mangsbo等人（Mangsboetal.，2008) 证明这种疗法优于BCG。检验其他细菌菌株的作用的研究使用了益生菌（probiotic)。热 灭活的干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei)(Takahashietal·，2001)或活的鼠李糖乳杆 菌（Lactobacillusrhamnosus)GG(Seowetal·，2010)的ives滴注导致与BCG相似的膀 胱肿瘤消退。本发明人的数据表明，在用Ty21a处理的健康膀胱中，可观察到嗜中性粒细胞 和巨噬细胞的短暂浸润。此外，在滴注后一周，⑶4T细胞的频率增加。在患者的ivesBCG 治疗的过程中，存在于膀胱内的主要免疫细胞群是嗜中性粒细胞，相当于尿液中存在的细 胞的75%，然后是巨噬细胞和NK细胞（DeBoeretal.，1991)。在小鼠中，在早期时间点， BCG诱导急性膀胱炎症，其具有嗜中性粒细胞的重要浸润，到第21至28天，巨噬细胞显著增 加（Sabanetal.，2007)。此外，与本发明人使用Ty21a的观察结果相比，在这些小鼠中存 在膀胱水肿形成，并且在治疗中止之后炎症水平维持最长达三周。因为细菌不存留于膀胱 中，炎性细胞浸润是短暂的。申请人已表明Ty21a诱导比BCG更少的副作用，BCG存留于膀 胱中并诱导重要的炎症反应，导致患者所遭受的大部分副作用（Alexandroff,Jackson, 0'D onnell，&James，1999)。此外，Ty21a不能感染鼠和人尿道上皮细胞系，表明在人体中，Ty21a 不能感染尿道上皮细胞，降低了扩散的风险并提高了安全性。
[0041] 本发明的药物组合物中使用的具体可药用载体和/或稀释剂在本领域中是常规 的。稀释剂的实例包括：用于缓冲胃中的胃酸的缓冲剂，例如包含蔗糖的柠檬酸盐缓冲剂 (pH7. 0)、单独的碳酸氢盐缓冲剂（pH7. 0)(Blacketal.，1990 ;Levine,Ferreccio,Blac k,Tacket, &Germanier, 1989)，或包含抗坏血酸、乳糖和任选的阿斯巴甜的碳酸氢盐缓冲剂 (pH7. 0)(Levineetal.，1988)。载体的实例包括：蛋白质，例如在脱脂乳中存在的蛋白质； 糖类，例如蔗糖；或聚乙烯吡咯烷酮。
[0042]例如，药物组合物(TyphoidVaccineLiveOralTy21a)包含在处于受 控条件下的发酵罐中的培养基中生长的Ty21a菌株，所述培养基包含酵母提取物的消化产 物、酪蛋白的酸消化产物、葡萄糖（dextrose)和半乳糖。然后通过离心收集细菌，与包含蔗 糖、抗坏血酸和氨基酸的稳定剂混合，并冻干。将冻干的细菌与乳糖和硬脂酸镁混合，并填 充到明胶胶囊中，所述胶囊被有机溶液包被以使其抵抗胃酸的溶解作用。
[0043] -粒Vivotif*(TyphoidVaccineLiveOralTy21a)* 的肠溶胶囊的内容物如表 1所示。
[0044]表1
[0045]
[0046] *来源：FDA的制造商（Crucell)说明（2006版）
[0047] 如果要通过ives滴注来给予肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株Ty21a，则将Ty21a 的口服疫苗Vivotif的胶囊，例如，在缓冲液中复原，所述缓冲液优选PBS，最优选无菌PBS。
[0048] 可选地或额外地，本文所述的本发明组合物可单独给予或与其他治疗、疗法或试 剂组合给予（同时或惯序），取决于待治疗的癌症。例如，本发明的组合物可与放射疗法、化 学疗法或免疫疗法联合给予。
[0049] 本发明还涉及诱导癌细胞中的细胞凋亡的方法，所述方法包括给予包含肠道沙门 氏菌伤寒血清变型菌株的活的减毒非重组突变体和/或肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株 的无活力的减毒非重组突变体的药物组合物。
[0050] 通常，本发明的药物组合物在给定浓度下可特异性地增加癌细胞中的细胞凋亡。 例如，与合适的对照相比，本发明的方法可将癌细胞中的细胞凋亡率提高2%或更多，例如 5%或更多，例如10%或更多，例如25%或更多，例如50%或更多，例如75%或更多，例如 100%〇
[0051] 本发明还涉及肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的活的减毒非重组突变体和/或 肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的无活力的减毒非重组突变体用于制备用于治疗和/或 预防膀胱癌的药物的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的活的或无活 力的减毒非重组突变体不在肿瘤或癌症组织中存留。优选地，所述肠道沙门氏菌伤寒血清 变型菌株的活的减毒非重组突变体和/或肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的无活力的减 毒非重组突变体选自Ty21a、CVD908-htrA、CVD909、Ty800、M01ZH09、x9633、x9639、x9640 和x8444。
[0052] 本发明还包括治疗和/或预防癌症（特别是膀胱癌）的方法，所述方法包括向需 要其的患者给予肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的活的减毒非重组突变体和/或肠道沙 门氏菌伤寒血清变型菌株的无活力的减毒非重组突变体。优选地，所述肠道沙门氏菌伤寒 血清变型菌株的活的减毒非重组突变体和/或肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的无活力 的减毒非重组突变体选自Ty21a、CVD908-htrA、CVD909、Ty800、M01ZH09、X9633、X9639、 x9640 和x8444。
[0053] 本发明还包括促进人癌细胞系分泌炎性细胞因子