静电电压为5kV，喷射头与接收板之间的距离为10cm，溶液从喷射头的流出速度为0.lmL/h，周围环境温度为15°C，空气相对湿度为45% ;电喷完成后，将收集板上颗粒收集，静置使有机溶剂自然挥发，得到固体微粒；取50mg的固体微粒，加入7.5mL去离子水中，超声5min后(超声功率为40W，超声频率为20kHz)，持续搅拌4h(搅拌的转速为100r/min)，制得高分子囊泡。本实施例所制备的固体微粒的平均粒径为20 μ m，高分子囊泡粒径平均为lOOnm。本实施例制备的固体微粒的扫描电镜照片如图2所示。
[0036]实施例2
[0037]称取0.05g三嵌段共聚物PCL2QQQ-mPEG4MQ-PCL2。。。，加入到lg的THF中，机械搅拌60min(搅拌的转速为800r/min)，制得嵌段高分子溶液(嵌段共聚物的用量为有机溶剂的5wt% );将嵌段高分子溶液装入带有喷射头的注射器中通过高压静电喷射法进行电喷，所述电喷的具体条件为:高压静电电压为20kV，喷射头与接收板之间的距离为30cm，溶液从喷射头的流出速度为15mL/h，周围环境温度为30°C，空气相对湿度为85% ;电喷完成后，将收集板上颗粒收集，静置使有机溶剂自然挥发，得到固体微粒；取下50mg的微粒，加入到7.5mL去离子水中，持续搅拌48h后(搅拌的转速为100r/min)即制得高分子囊泡。本实施例所制备的固体微粒的平均粒径为30 μ m，高分子囊泡平均粒径为150nm。
[0038]实施例3
[0039]称取0.05g 二嵌段共聚物PLA5QQQ-PEG5。。。，加入到lg丙酮/DMAC(体积比2:1)复合溶剂中，机械搅拌60min(搅拌的转速为lOOr/min)，得到嵌段高分子溶液(嵌段共聚物的用量为有机溶剂的5wt% );将嵌段高分子溶液装入带有喷射头的注射器中通过高压静电喷射法进行电喷，所述电喷的具体条件为:高压静电电压为20kV，喷射头与接收板之间的距离为30cm，溶液从喷射头的流出速度为15mL/h，周围环境温度为25°C，空气相对湿度为85%;电喷完成后，将收集板上颗粒收集，静置使有机溶剂自然挥发，得到固体微粒；取下50mg的微粒，加入到7.5mL去离子水中，机械搅拌4h后超声5min (超声功率为40w，超声频率为20kHz)，再持续搅拌4h后(搅拌的转速为100r/min)即制得高分子囊泡。本实施例所制备的固体微粒的平均粒径为40 μ m，高分子囊泡平均粒径为200nm。本实施例制备的高分子囊泡的透射电镜照片如图3所示。
[0040]实施例4
[0041 ] 称取0.5g三嵌段共聚物PCL2WM-mPEG4aM-PCL2。。。和25mg的FITC染色剂一起加入到lg的THF有机溶剂中，机械搅拌60min (搅拌的转速为100r/min)，溶解完成后制得50wt %嵌段高分子溶液(嵌段共聚物的用量为有机溶剂的50wt% );将嵌段高分子溶液装入带有喷射头的注射器中通过高压静电喷射法进行电喷，所述电喷的具体条件为:高压静电电压为20kV，喷射头与接收板之间的距离为30cm，溶液从喷射头的流出速度为15mL/h，周围环境温度为25°C，空气相对湿度为85 % ;电喷完成后，将收集板上颗粒收集，静置使有机溶剂自然挥发，得到固体微粒；取下50mg的固体微粒和0.4mg阿霉素(D0X) —并加入到7.5mL的PBS溶液中，超声15min后(超声功率为100w超声频率为700kHz)，持续搅拌48h后(搅拌的转速为100r/min)即制得高分子囊泡，透析除去未被包裹的D0X后进行细胞培养(图4)。图4中(1)为被FITC标记的囊泡的激光共聚焦显微镜照片，囊泡显示出绿色；(2)为D0X的激光共聚焦显微镜照片，D0X显示出红色；(3)为D0X的白光条件下激光共聚焦显微镜照片，⑷为⑴?⑶这三者的合并图。本实施例所制备的固体微粒的平均粒径为30 μm，高分子囊泡平均粒径为150nm。
[0042]实施例5
[0043]称取0.05g 二嵌段共聚物PLA5_-PEG5。。。和0.lmg的罗丹明B染色剂一起加入到lg的THF有机溶剂中，机械搅拌15min(搅拌的转速为800r/min)，得到高分子溶液(嵌段共聚物的用量为有机溶剂的5wt% );将高分子溶液装入带有喷射头的注射器中通过高压静电喷射法进行电喷，所述电喷的具体条件为:高压静电电压为20kV，喷射头与接收板之间的距离为30cm，溶液从喷射头的流出速度为0.lmL/h，周围环境温度为30°C，空气相对湿度为45%;电喷完成后，将收集板上颗粒收集，静置使有机溶剂自然挥发，得到固体微粒；取50mg的固体微粒和15 μ Μ的分子量为500daltons的DNA片段共同加入到7.5mL的PBS溶液中，超净环境下，超声15min后(超声功率具体为40W，超声频率具体为20kHz)持续搅拌48h后(搅拌的转速为lOOr/min)即制得高分子囊泡，透析除去未被包裹的DNA片段后进行细胞培养。本实施例所制备的固体微粒的平均粒径为40 μπι，高分子囊泡平均粒径为200nmo
【主权项】
1.一种高分子囊泡的复合方法，其特征在于:具体步骤为: 1)将嵌段共聚物或嵌段共聚物与荧光染料加入有机溶剂中，搅拌溶解，得到高分子溶液； 2)将高分子溶液装入高压静电发生装置的带有喷射头的储存容器中，然后通过高压静电喷射法进行电喷，得到固体微粒；所述高压静电喷射的具体条件为:高压静电电压为5?30kV，喷射头与接收板之间的距离为5?50cm，溶液从喷射头的流出速度为0.1?15mL/h，周围环境温度为15?50°C，空气相对湿度为30?90% ; 3)将固体微粒加入水或PBS缓冲溶液中进行水合反应，得到高分子囊泡；或将固体微粒与需包埋或负载的物质加入水或PBS缓冲溶液中进行水合反应，得到载有负载物的高分子囊泡。2.根据权利要求1所述高分子囊泡的复合方法，其特征在于:步骤1)中所述的嵌段共聚物为 PEG-PLA、PEG-PCL、PLA-mPEG-PLA 或 PCLiPEG-PCL 中的一种以上。3.根据权利要求2所述高分子囊泡的复合方法，其特征在于:所述嵌段共聚物是由聚乙二醇与己内酯或丙交酯在催化剂的作用下反应制备得到。4.根据权利要求1所述高分子囊泡的复合方法，其特征在于:步骤3)所述水合反应是搅拌反应或先超声反应再搅拌反应或先搅拌反应再超声反应或搅拌超声再搅拌。5.根据权利要求3所述高分子囊泡的复合方法，其特征在于:所述超声时间为5?15min，所述超声功率为40?100W，超声频率为20?500kHz ;所述搅拌时间为4?48h，所述搅拌转速为100?800r/min。6.根据权利要求1所述高分子囊泡的复合方法，其特征在于:步骤1)中所述的有机溶剂为四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二氯甲烧、氯仿、醋酸甲酯、甲基氰、乙醇、甲基异丁酮、六氟异丙醇或丙酮中的一种以上； 步骤1)中所述的荧光染料为罗丹明、尼罗红、藻红蛋白或异硫氰酸荧光素。7.根据权利要求1所述高分子囊泡的复合方法，其特征在于:步骤1)中所述搅拌时间为15?60min ;步骤1)中所述搅拌的转速为100?800r/min ;所述嵌段共聚物的用量为有机溶剂重量的5?50wt%，所述嵌段共聚物与荧光染料的重量比为1000: (1?50)。8.根据权利要求1所述高分子囊泡的复合方法，其特征在于:步骤3)中所述固体微粒与水或PBS缓冲液的质量体积比为50mg: (5?10)mL ;所述固体微粒与需包埋或负载的物质质量比为1000:(5?100)。9.根据权利要求8所述高分子囊泡的复合方法，其特征在于:所述需包埋或负载的物质为药物、抗体、蛋白、基因片段或生长因子。10.一种由权利要求1?9任一项所述复合方法制备得到的高分子囊泡，其特征在于:所述高分子囊泡平均粒径为50?300nm。
【专利摘要】本发明属于高分子囊泡制备的技术领域，公开了一种高分子囊泡及其复合方法。所述方法为：1)将嵌段共聚物或嵌段共聚物与荧光染料加入有机溶剂中，搅拌溶解，得到高分子溶液；2)将高分子溶液装入高压静电发生装置的储存容器中，通过高压静电喷射法进行电喷，得到固体微粒；3)将固体微粒加入水或PBS缓冲溶液中进行水合反应，得到高分子囊泡；或将固体微粒与需包埋或负载的物质加入水或PBS缓冲溶液中进行水合反应，得到载有负载物的高分子囊泡。本发明的方法简单可行，生产效率高、重复性好，适合于不同需求的高分子囊泡大规模量产；同时高分子囊泡尺寸均一，载药效果均匀，可用于生物医药递送、纳米反应器及荧光探针领域。
【IPC分类】A61K48/00, A61K31/704, A61K47/34, A61K31/7088, A61K9/127
【公开号】CN105395486
【申请号】CN201510824570
【发明人】王林格, 李卫昌
【申请人】华南理工大学
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2015年11月24日