YLQMNSLRPEDTAAYSCNAVTKWAARVGGSAEYEYWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO：28)；A69449: QVQLVESGGGVVQAGGSLRLSCVASGSVFSIDAMGWYRQAPGNQRELVAAMTNAGSTNYADSVKGRFTISRDNAENT VYLQMNSLKPEDTAVYYCNARSKLIARINNPYEYWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO：56)；A69433： QVKLEESGGGLVQAGGSLRLSCVASGNVFGIDAVGWYRQAPGKQRELVAATTTSGSSTNYADSVKGRFTISRDIAKN TVYLQMDSLKPEDTAVYYCYARPKQATLIRDDYWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO :58);和A69447: QVKLEESGGGSVQAGGSLRLSCTGSGSIFPLNDMGWYRQAPGKQRELVATITRGGTTNYADSVKGRFTISRDSNAKN TVYLQMNSLKVEDTAVYYCNMDNRVGGSYWGQGTQVTVSS(SEQ ID N0:62)。11. 根据权利要求1至10中任一项中所述的和转铁蛋白具有ΠΓ-9Μ或更好的解离常数 (Kd)的抗体或其片段。12. 根据权利要求1至11中任一项中所述的分离的抗体的或其片段，其中所述转是人人 转铁蛋白或猴转铁蛋白。13. 根据权利要求1至12中任一项中所述的分离的抗体的或其片段为重组产生。14. 一种编码权利要求1至13任一项中分离的抗体或其片段的核酸，其包含cDNA或合成 的 DNA。15. -种包括权利要求14中核酸的表达载体。16. -种包含权利要求15表达载体的重组宿主细胞。17. -种融合蛋白，包含特异性结合转铁蛋白抗体或其片段，靶蛋白，和任选的连接体， 其中所述抗体或其片段融合于靶蛋白的羧基末端或氨基末端，并且连接体可随意分隔抗体 在靶蛋白的羧基末端或氨基末端。18. 根据权利要求17所述的融合蛋白，其中所述抗体或其片段是单域抗体(sdAb)，其包 括一个 CDR1，CDR2 和的 CDR3。19. 根据权利要求17所述的融合蛋白，其中所述抗体或其片段包含一种或选自下组中 选择： (a) -种互补决定区1(CDR1)，其氨基酸序列来自下列序列组成之一 GSGFGINGVI(SEQ ID NO：l)；GSGFGVNGVI(SEQ ID NO：2)；GNVFTIAAMG(SEQ ID NO：3)；GNVFTIAAMA(SEQID NO： 4)；GNVFTIDAMG(SEQ ID NO：5)；GSVFSIDAMG(SEQ ID N0：6)；GNVFGIDAVG(SEQ ID N0：7)； GSIFSIKVMG(SEQ ID N0:8);和GSIFPLNDMG(SEQ ID N0:9); (b) -种互补决定区2(⑶R2)，其氨基酸序列来自下列序列组成之一 LIKSDGYTNYRESVKG (SEQID N0：10)；LIKSDGYTNYRESVRG(SEQ ID NO：11)；GITTGGSTNYADSVKG(SEQ ID NO：12)； GMTNGGKTNYADSVKG(SEQ ID NO：13)；AMTNAGSTNYADSVKG(SEQ ID NO：14)； ATTTSGSSTNYADSVKG(SEQIDN0:15);DITSGGSTDYSDSVKG(SEQIDN0:16)jP TITRGGTTNYADSVKG(SEQIDN0:17)jP (c) 一种互补决定区3(⑶Rl)，其氨基酸序列来自下列序列组成之一包含选自的组中 PGVP(SEQIDN0:18)的氨基酸序列的CDR3;VTKWAARVGGSAEYE(SEQIDN0 :19); RSKLIATINNPYDY(SEQ ID N0：20)；RSKLIARINNPYEY(SEQ ID NO：21)；RPKQATLIRDDY(SEQ ID N0:22);DLGCSGAGSCPDY(SEQ ID N0:23);和DNRVGGSY(SEQID N0:24)。20. 根据权利要求19所述的融合蛋白，其中所述抗体或其片段是一种sdAb包含选自下 列组中的氨基酸序列 A60219: QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCVASGSGFGINGVIWYRQAPGKQRELVALIKS DGYTNYRESVKGRFTISRDDAKNTVWLQMNALEPEDTGVYYCKTPGVPFGQGTQVTVSS(SEQ ID NO：26)； A60401：QVKLEESGGGLVQAGGSLRLSCEASGNVFTIAAMGWFRQAPGKERELVAGITTGGSTNYADSVKGRFTIS RDNAQNTMYLQMNSLRPEDTAAYSCNAVTKWAARVGGSAEYEYWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO：28)；A69449： QVQLVESGGGVVQAGGSLRLSCVASGSVFSIDAMGWYRQAPGNQRELVAAMTNAGSTNYADSVKGRFTISRDNAENT VYLQMNSLKPEDTAVYYCNARSKLIARINNPYEYWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO：56)；A69433： QVKLEESGGGLVQAGGSLRLSCVASGNVFGIDAVGWYRQAPGKQRELVAATTTSGSSTNYADSVKGRFTISRDIAKN TVYLQMDSLKPEDTAVYYCYARPKQATLIRDDYWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO :58);和A69447: QVKLEESGGGSVQAGGSLRLSCTGSGSIFPLNDMGWYRQAPGKQRELVATITRGGTTNYADSVKGRFTISRDSNAKN TVYLQMNSLKVEDTAVYYCNMDNRVGGSYWGQGTQVTVSS(SEQ ID N0:62)。21. -种包含编码权利要求17至20的融合蛋白的核酸序列的核酸。22. -个包含权利要求21的核酸的表达载体。23. -种包含权利要求22的表达载体的重组宿主细胞。24. -种用于提高靶蛋白的半衰期的方法，该方法包括： (1) 产生的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含抗体或其片段特异性结合转铁蛋白，所述 靶蛋白，和任选的连接体，其中所述抗体或其片段融合于靶蛋白的羧基末端或氨基末端，并 且连接体任选分离抗体和或靶蛋白羧基末端的氨基末端;和 (2) 向转铁蛋白暴露融合蛋白，相对于单独的靶蛋白，增加融合蛋白中靶蛋白的半衰 期，在。25. 根据权利要求24所述的方法，其中所述暴露步骤包括在体内或体外将融合蛋白给 予包含含转铁蛋白的血清。26. 根据权利要求24至25所述的方法，其中所述抗体或其片段包含一种或多种选自下 组中选择： (a) -种互补决定区1(CDR1)，其氨基酸序列来自下列序列组成之一 GSGFGINGVI(SEQ ID NO：l)；GSGFGVNGVI(SEQ ID NO：2)；GNVFTIAAMG(SEQ ID NO：3)；GNVFTIAAMA(SEQID NO： 4)；GNVFTIDAMG(SEQ ID NO：5)；GSVFSIDAMG(SEQ ID N0：6)；GNVFGIDAVG(SEQ ID N0：7)； GSIFSIKVMG(SEQ ID N0:8);和GSIFPLNDMG(SEQ ID N0:9); (b) -种互补决定区2(⑶R2)，其氨基酸序列来自下列序列组成之一 LIKSDGYTNYRESVKG (SEQID N0：10)；LIKSDGYTNYRESVRG(SEQ ID NO：11)；GITTGGSTNYADSVKG(SEQ ID NO：12)； GMTNGGKTNYADSVKG(SEQ ID NO：13)；AMTNAGSTNYADSVKG(SEQ ID NO：14)； ATTTSGSSTNYADSVKG(SEQIDN0:15);DITSGGSTDYSDSVKG(SEQIDN0:16)jP TITRGGTTNYADSVKG(SEQIDN0:17)jP (c) 一种互补决定区3(⑶Rl)，其氨基酸序列来自下列序列组成之一包含选自的组中 PGVP(SEQIDN0:18)的氨基酸序列的CDR3;VTKWAARVGGSAEYE(SEQIDN0 :19); RSKLIATINNPYDY(SEQ ID N0：20)；RSKLIARINNPYEY(SEQ ID NO：21)；RPKQATLIRDDY(SEQ ID N0:22);DLGCSGAGSCPDY(SEQ ID N0:23);和DNRVGGSY(SEQID N0:24)。27. 根据权利要求24至26所述的方法，其中所述抗体或其片段是单域抗体(sdAb)，包含 CDR1，CDR2和CDR3。28. 根据权利要求27所述的方法，其中所述sdAb包括氨基酸序列，A602 19 : QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCVASGSGFGINGVIWYRQAPGKQRELVALIKSDGYTNYRESVKGRFTISRDDAKNT VffLQMNALEPEDTGVYYCKTPGVPFGQGTQVTVSS(SEQ ID NO：26)；A60401： QVKLEESGGGLVQAGGSLRLSCEASGNVFTIAAMGWFRQAPGKERELVAGITTGGSTNYADSVKGRFTISRDNAQNT MYLQMNSLRPEDTAAYSCNAVTKWAARVGGSAEYEYWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO：28)；A69449： QVQLVESGGGVVQAGGSLRLSCVASGSVFSIDAMGWYRQAPGNQRELVAAMTNAGSTNYADSVKGRFTISRDNAENT VYLQMNSLKPEDTAVYYCNARSKLIARINNPYEYWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO：56)；A69433： QVKLEESGGGLVQAGGSLRLSCVASGNVFGIDAVGWYRQAPGKQRELVAATTTSGSSTNYADSVKGRFTISRDIAKN TVYLQMDSLKPEDTAVYYCYARPKQATLIRDDYWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO :58);或A69447: QVKLEESGGGSVQAGGSLRLSCTGSGSIFPLNDMGWYRQAPGKQRELVATITRGGTTNYADSVKGRFTISRDSNAKN TVYLQMNSLKVEDTAVYYCNMDNRVGGSYWGQGTQVTVSS(SEQ ID N0:62)。29. 根据权利要求24至28所述的方法，其中所述融合蛋白是通过以下方法产生： (a) 获得编码融合蛋白的表达载体； (b) 将表达载体导入细胞以得到重组细胞； (c) 在合适条件下生长重组细胞，表达融合蛋白；和 (d) 从重组细胞或其上清液获取融合蛋白。30. -种组合物，包括一种有效量的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含抗体或其片段特 异性结合转铁蛋白，靶蛋白，和任选的连接体，其中所述抗体或其片段融合于靶蛋白羧基末 端或的氨基末端，和连接体任选分离抗体和靶蛋白的羧基末端或氨基末端。31. 根据权利要求30所述的组合物，可进一步包含转铁蛋白。32. -种增加靶蛋白半衰期的方法，该方法包括将权利要求30中的组合物暴露给转铁 蛋白，从而增加融合蛋白中靶蛋白的半衰期。33. -种系统，用于提高靶蛋白的半衰期，该系统包括： (1) 一个表达载体，包含编码特异性结合转铁蛋白抗体或其片段的第一个核苷酸序列， 和任选的编码连接体的第二个核苷酸序列，其中第一和第二核苷酸序列连接在一起， (2) 宿主细胞;和 (3) 转铁蛋白。
【专利摘要】对特异性结合转铁蛋白的新抗体，如单域抗体(sdAbs)，或其片段进行了描述。对结合人转铁蛋白的抗体或片段用于增加靶蛋白在血清的半衰期的组合物，方法和系统进行描述。
【IPC分类】A61K39/395
【公开号】CN105555310
【申请号】CN201480038652
【发明人】章方良, 张剑冰, 武术
【申请人】南京金斯瑞生物科技有限公司
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2014年7月8日
【公告号】EP3019192A2, US20160200830, WO2015006337A2, WO2015006337A3