降低5-ht2br含量和抑制其活性的物质在制备治疗和预防动脉粥样硬化产品中的应用_2

文档序号:9798557阅读:来源:国知局
序列2;大鼠 的5-HT2BR的氨基酸序列为序列3。
[0033] 本发明中的血管平滑肌细胞的表型转换是指血管平滑肌细胞在分化程度较高的 收缩型(分化型)血管平滑肌细胞和分化程度较低的分泌型(未分化型或去分化型)血管平 滑肌细胞间的转换。
[0034]实验证明,本发明的5-HT2BR及其编码基因分别可以作为治疗和/或预防动脉粥样 硬化所致疾病的靶标蛋白和靶标基因。在RNA和蛋白质水平上,5-HT2BR在动脉粥样硬化动 物主动脉中的表达水平均显著高于非动脉粥样硬化动物。降低5-HT2BR表达水平的5-HT2BR 特异性拮抗剂可以抑制平滑肌细胞的迀移,提高5-HT2BR表达水平的5-HT2BR特异性激动剂 可以促进平滑肌细胞的迀移:1)在处理24小时,5-HT2BR特异性激动剂处理后的平滑肌细胞 的迀移距离为221.4± 12.8_,分别为未处理和5-HT处理的1.621倍和0.922倍;5-HT2BR特 异性拮抗剂处理后的平滑肌细胞的迀移距离为133.7± 10.9wii,分别为未处理、5-HT和5-HT2BR特异性激动剂处理的0.979倍、0.557倍和0.604倍。2)在处理24小时,5-HT2BR特异性 激动剂处理后的平滑肌细胞的迀移活性为96.80 ±20.63,分别为未处理和5-HT处理的 2.151倍和0.896倍;5-HT2BR特异性拮抗剂处理后的平滑肌细胞的迀移活性为52.60 土 7.467,分别为未处理、5-HT和5-HT2BR特异性激动剂处理的1.169倍、0.487倍和0.543倍。降 低5-HT2BR表达水平的5-HT2BR特异性拮抗剂可以抑制动脉粥样硬化斑块的形成:5-HT2BR 特异性拮抗剂RS127445处理的实验组动物的动脉粥样硬化斑块面积2.758 ±0.456mm2,显 著小于对照组动物;5-HT2BR特异性拮抗剂RS127445处理的实验组动物的主动脉瓣斑块面 积为0.138 ± 0.022mm2,显著小于对照组动物。降低5-HT2BR表达水平的5-HT2BR特异性拮抗 剂可以降低动物的体重以及动物血浆中总胆固醇含量和总甘油三酯含量。降低5-HT2BR表 达水平的5-HT2BR特异性拮抗剂还可以降低动脉粥样硬化斑块中平滑肌细胞的含量:5-HT2BR特异性拮抗剂处理的实验组动物主动脉瓣斑块中平滑肌细胞占斑块面积的百分比为 0.106±0.023%,为对照动物的0.435倍,显著低于对照组动物。5-HT2BR特异性拮抗剂可以 降低动物血浆中总胆固醇含量与总甘油三酯含量:在处理第12周,实验组动物血浆中总胆 固醇含量为对照组动物的〇. 78倍,实验组动物血浆中总甘油三酯含量为对照组动物的0.61 倍。
[0035]实验证明,本发明的5-HT2BR及其编码基因分别可以作为治疗和/或预防动脉粥样 硬化所致疾病的靶标蛋白和靶标基因。降低5-HT2BR表达水平的物质可以用来治疗和/或预 防动脉粥样硬化所致疾病,也可以用来制备治疗和/或预防动脉粥样硬化所致疾病的药物。
【附图说明】
[0036]图1为ApoE-/-小鼠与C57BL/6J小鼠喂养不同食物后主动脉的油红0染色结果。其 中,A-F图表示ApoE-/-小鼠西方饮食(western diet,WD)喂养12周后斑块油红0染色(说明 动脉粥样硬化动物模型建立成功)。
[0037]图2为各组小鼠主动脉中的5-HT2BR的表达情况。其中,A为在RNA水平上各组小鼠 主动脉中的5-HT2BR的表达情况,B为在蛋白质水平各组小鼠主动脉中的5-HT2BR的表达情 况;表示差异达到显著水平。
[0038]图3为各组小鼠主动脉用5-HT2BR抗体进行免疫组化染色的结果。其中,A为ApoE WD(western diet,西方饮食)组小鼠主动脉(带有斑块部位)的免疫组化染色结果,A中左下 图为染色结果的局部放大图;B为ApoE WD(western diet,西方饮食)组小鼠主动脉(不带有 斑块部位)的免疫组化染色结果,B中左下图为染色结果的局部放大图;C为C57小鼠主动脉 免疫组化染色结果,C中左下图为染色结果的局部放大图;D为阴性对照。
[0039]图4为小鼠主动脉的免疫荧光染色结果。其中,5-HT2BR表示ApoE WD组小鼠主动脉 5-HT2BR抗体的免疫荧光染色结果;SMA表示ApoE WD组小鼠主动脉a-SMA抗体的免疫荧光染 色结果;DAPI表示ApoE WD组小鼠主动脉细胞核染色结果;Merge表示5-HT2BR、SMA和DAPI的 叠加;NC表示negtive contro 1 (阴性对照)。
[0040]图5为不同处理平滑肌细胞迀移的细胞划痕实验结果。其中,A为不同处理平滑肌 细胞迀移情况,B为不同处理平滑肌细胞的迀移距离;表示差异达到显著水平。
[0041 ] 图6为不同处理平滑肌细胞迀移的trans-well实验结果。其中,A为不同处理平滑 肌细胞迀移情况,B为不同处理平滑肌细胞的迀移活性;表示差异达到显著水平。
[0042]图7为RS127445对动脉粥样硬化模型小鼠动脉粥样硬化斑块的影响。其中,A为 RS127445处理后小鼠的主动脉粥样硬化斑块;B为RS127445处理后小鼠的主动脉粥样硬化 斑块的具体测量值;C为RS127445处理后小鼠的主动脉瓣动脉粥样硬化斑块;D为RS127445 处理后小鼠的主动脉瓣动脉粥样硬化斑块的具体测量值。RS127445表示实验组,velhicle 表示对照组。表示差异达到显著水平。
[0043]图8为RS127445对动脉粥样硬化模型小鼠体重以及血浆中总胆固醇含量和总甘油 三酯含量的影响。其中,A为RS127445对体重的影响,B为RS127445对血浆中总胆固醇含量的 影响,C为RS127445对血浆中总甘油三酯含量的影响。RS127445表示实验组,velhicle表示 对照组。" "表示差异达到显著水平。
[0044]图9为RS127445对动脉粥样硬化模型小鼠平滑肌细胞的影响。其中,A为免疫荧光 染色结果,lumen表示主动脉血管腔,RS127445表示实验组,velhicle表示对照组;B为平滑 肌细胞占斑块面积的百分比,RS表示实验组,V表示对照组,表示差异达到显著水平。 SMA表示a-SMA抗体的免疫荧光染色结果;DAPI表示细胞核染色结果;Merge表示SMA和DAPI 的叠加;NC表示negtive control (阴性对照)。
[0045]图10为RS127445对动脉粥样硬化模型小鼠中5-HT2BR表达水平的影响。其中,A为 在RNA水平上主动脉中的5-HT2BR的表达情况;B为利用western-blot对5-HT2BR表达情况的 检测结果;C为利用免疫组化染色对5-HT2BR表达情况的检测结果,C1为Velhicle图的局部 放大图,C2为RS127445图的局部放大图。RS127445表示实验组,Velhicle表示对照组, 表示差异达到显著水平。
【具体实施方式】
[0046] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行进一步的详细描述,给出的实施例仅为了阐 明本发明,而不是为了限制本发明的范围。
[0047] 下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。
[0048] 下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
[0049] 下述实施例中的ApoE-/-小鼠是Jackson Lab公司产品,货号为002052;下述实施 例中的C57BL/6J小鼠是Jackson Lab公司产品,货号为000664。
[0050]实施例1、5-HT2BR在动脉粥样硬化小鼠主动脉中高表达 [0051] 1、动脉粥样硬化模型的建立
[0052] 将20只8周龄的雄性ApoE-/-小鼠随机分为两组,分别为ApoE CD(chow diet,正常 饮食)组和ApoE WD(western diet,西方饮食)组,每组10只;将20只8周龄的雄性C57BL/6J 小鼠随机分为两组,分别为C57CD组和C57WD组,每组10只。分别对ApoE⑶组和C57⑶组中的 每只小鼠
当前第2页1 2 3 4 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1