8 土 0.456mm2，显著小于注射velhicle的对照组小鼠。表明，5-HT2BR诘抗剂可以抑制动脉粥样 硬化斑块的形成。
[0072] 2)对照组和实验组小鼠分别经相应的处理后，在处理第12周分别取其主动脉瓣斑 块进行冰冻切片并进行油红0染色（图7中C)，并测量主动脉瓣斑块的总面积(图7中D)。结果 显示，注射RS127445的实验组小鼠的主动脉瓣斑块面积小于注射velhicle的对照组小鼠， 注射velhicle的对照组小鼠的主动脉瓣斑块面积为0.269 ±0.034mm2，注射RS127445的实 验组小鼠的主动脉瓣斑块面积为0.138±0.022mm 2，显著小于注射velhicle的对照组小鼠。 表明，5-HT2BR拮抗剂可以抑制主动脉瓣动脉粥样硬化斑块的形成。
[0073] 3 )在对照组和实验组小鼠经相应处理后，每周测量体重一次（图8中A)。在 ve lhi cl e处理对照组小鼠的第0-7周，对照组小鼠体重与RS 127445处理相应时间的实验组 小鼠体重基本无差异，在ve lhi cl e处理对照组小鼠的第8、9、11和12周，对照组小鼠体重显 著高于RS127445处理相应时间的实验组小鼠体重:velhicle处理第8、9、11和12周，对照组 小鼠的体重分别为 29.7±0.48、29.9±0.48、29.8±0.58和30.2±0.58;1?127445处理第8、 9、11和12周，实验组小鼠的体重分别为28.0±0.4 8、28.2±0.58、27.9±0.58和28.1± 0.5g。表明，RS127445可以降低小鼠体重。
[0074] 4)在对照组和实验组小鼠经相应处理后，每三周分别测量小鼠血浆中总胆固醇含 量和总甘油三酯含量(图8中B和C、表1)。
[0075] 表1、不同处理的小鼠血浆中的总胆固醇含量和总甘油三酯含量(mg/dL)
[0077] 结果显示，在处理第3-12周，实验组小鼠血浆中总胆固醇含量分别显著低于相应 处理时间的对照组小鼠，在处理第12周，实验组小鼠血浆中总胆固醇含量为对照组小鼠的 0.78倍;在处理第6-12周，实验组小鼠血浆中总甘油三酯含量分别显著低于相应处理时间 的对照组小鼠，在处理第12周，实验组小鼠血浆中总甘油三酯含量为对照组小鼠的0.61倍。 表明，RS127445可以降低小鼠血浆中总胆固醇和总甘油三酯含量。
[0078] 5)对照组和实验组小鼠分别经相应的处理后，分别取其主动脉瓣斑块进行冰冻切 片进行免疫荧光染色，使用实施例1中的a-SMA抗体对平滑肌细胞进行染色，并用DAPI染剂 对细胞核进行定位。
[0079] 实验组小鼠主动脉瓣斑块的平滑肌细胞含量减少（图9 )，对照组小鼠主动脉瓣斑 块中平滑肌细胞占斑块面积的百分比为0.2441 ±0.0224%，实验组小鼠主动脉瓣斑块中平 滑肌细胞占斑块面积的百分比为0.1061 ±0.0227%，为对照小鼠的0.44倍，显著低于对照 组小鼠。表明RS127445在动脉粥样硬化斑块形成过程中，影响了平滑肌迀移功能。
[0080] 6)对照组和实验组小鼠分别经相应的处理后，分别取其主动脉检测5-HT2BR的表 达情况。
[0081 ]按照实施例1中的方法，在RNA水平上检测主动脉中的5-HT2BR的表达情况（图10中 A)。结果显示，在RNA水平上，对照组小鼠主动脉中的5-HT2BR表达显著高于实验组。
[0082]按照实施例1中的方法，利用western-blot在蛋白质水平上检测5-HT2BR的表达情 况（图10中B)。结果显示，在蛋白质水平上，对照组小鼠主动脉中的5-HT2BR表达高于实验 组。
[0083]按照实施例1中的方法，用5-HT2BR抗体对小鼠主动脉进行免疫组化染色（图10中 C)。结果显示，在蛋白质水平上，对照组小鼠主动脉中的5-HT2BR表达高于实验组。
[0084] 以上结果表明，RS127445可以抑制5-HT2BR的表达。
【主权项】
1. 降低动物机体中5-HT2BR含量的物质或/和抑制动物机体中5-HT2BR活性的物质在制 备治疗和/或预防动脉粥样硬化产品或由动脉粥样硬化所致疾病的产品中的应用。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于:所述降低动物机体中5-HT2BR含量的物质 为降低动物机体中5-HT2BR编码基因表达的物质。3. 根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于:所述降低动物机体中5-HT2BR含量的物 质或所述抑制动物机体中5-HT2BR活性的物质为5-HT2BR拮抗剂;和/或，所述产品为药物； 和/或，所述动物机体为动脉。4. 下述任一应用： H1)权利要求1-3中任一所述降低动物机体中5-HT2BR含量的物质或所述抑制动物机体 中5-HT2BR活性的物质在治疗和/或预防动脉粥样硬化或由动脉粥样硬化所致疾病中的应 用； H2)权利要求1-3中任一所述降低动物机体中5-HT2BR含量的物质或所述抑制动物机体 中5-HT2BR活性的物质在制备抑制平滑肌细胞迀移产品中的应用； H3)权利要求1-3中任一所述降低动物机体中5-HT2BR含量的物质或所述抑制动物机体 中5-HT2BR活性的物质在抑制平滑肌细胞迀移中的应用； H4)5-HT2BR作为靶标蛋白在治疗和/或预防动脉粥样硬化或由动脉粥样硬化所致疾病 中的应用； H5)5-HT2BR的编码基因作为靶标基因在治疗和/或预防动脉粥样硬化或由动脉粥样硬 化所致疾病中的应用； H6)5-HT2BR或5-HT2BR激动剂在制备动脉粥样硬化模型中的应用。5. 根据权利要求4所述应用，其特征在于:所述5-HT2BR激动剂为BW723C86;和/或，所述 动物机体为动脉。6. 根据权利要求3或5所述应用，其特征在于:所述动脉为主动脉、主动脉分支、冠状动 脉、颈动脉、脑动脉、肾动脉、肠系膜动脉、肺动脉或四肢动脉。7. 根据权利要求1-6中任一所述应用，其特征在于:所述动脉粥样硬化所致疾病为血管 平滑肌细胞异常或总胆固醇或总甘油三酯含量的异常引发的疾病;所述动脉粥样硬化为血 管平滑肌细胞异常或总胆固醇或总甘油三酯含量的异常引发的动脉粥样硬化。8. 根据权利要求7中所述应用，其特征在于:所述血管平滑肌细胞异常为所述血管平滑 肌细胞的迀移、增殖和/或表型转换;和/或，所述总胆固醇或总甘油三酯含量为血浆中总胆 固醇或总甘油三酯含量。9. 根据权利要求1-8中任一所述应用，其特征在于:所述动脉粥样硬化所致疾病为冠心 病。10. 下述 XI)或 X2): XI)治疗和/或预防权利要求1-9中任一所述动脉粥样硬化或所述动脉粥样硬化所致疾 病的药物，其活性成分为权利要求1-3中任一所述降低动物机体中5-HT2BR含量的物质或所 述抑制动物机体中5-HT2BR活性的物质； X2)用于治疗和/或预防权利要求1-9中任一所述动脉粥样硬化或所述动脉粥样硬化所 致疾病的物质X，所述物质X为权利要求1-3中任一所述降低动物机体中5-HT2BR含量的物质 或所述抑制动物机体中5-HT2BR活性的物质。
【专利摘要】本发明公开了降低5-HT2BR含量和抑制其活性的物质在制备治疗和预防动脉粥样硬化产品中的应用。实验证明，降低5-HT2BR表达水平的5-HT2BR特异性拮抗剂可以抑制平滑肌细胞的迁移，可以降低动脉粥样硬化斑块中平滑肌细胞的含量，可以抑制动脉粥样硬化斑块的形成；提高5-HT2BR表达水平的5-HT2BR特异性激动剂可以促进平滑肌细胞的迁移。本发明的5-HT2BR及其编码基因分别可以作为治疗和/或预防动脉粥样硬化病变的靶标蛋白和靶标基因，降低5-HT2BR表达水平或抑制其活性的物质可以用来治疗和预防动脉粥样硬化所致疾病，也可以用来制备治疗和/或预防动脉粥样硬化所致疾病的药物。
【IPC分类】A61K45/06, A61P9/10
【公开号】CN105561313
【申请号】CN201610049371
【发明人】汪南平, 刘雅涵, 王志鹏
【申请人】北京大学
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2016年1月25日