一种胶原蛋白海绵及其制备方法与应用
【专利摘要】本发明公开了一种胶原蛋白海绵及其制备方法与应用。该制备方法是以胶原蛋白和羧甲基纤维素钠为原料，制备得到以羧甲基纤维素钠为支撑结构的胶原蛋白和羧甲基纤维素钠的复合材料，即胶原蛋白海绵。所述方法包括如下步骤：将胶原蛋白和羧甲基纤维素钠进行交联反应，得到胶原蛋白海绵。具体可包括如下步骤：在胶原蛋白和羧甲基纤维素钠的水溶液中加入交联剂，经反应后干燥即可得到所述胶原蛋白海绵。本发明利用羧甲基纤维素为海绵提供支架结构，能够有效防止吸水后材料塌陷，提供膨胀支撑作用，且兼有止血性能和膨胀填充性能；采用有效的交联技术，使得降解时间延长，避免降解速度过快。
【专利说明】
一种胶原蛋白海绵及其制备方法与应用
技术领域
[0001]本发明涉及一种胶原蛋白海绵及其制备方法与应用，属于生物医用材料领域。
【背景技术】
[0002]脏器切除是一种治疗原发性癌症及其他良恶性占位性病变的常规外科手段。在脏器切除手术中，手术创面的渗血是非常棘手的问题，特别是对于凝血功能不佳的患者而言，手术中渗血往往非常难止，过去一般采用热盐水纱布进行压迫，使得创面微血管收缩而凝血，然而高温容易损伤组织，导致不同程度的烧伤，进而导致感染。寻找一种适合脏器切除手术中止血的材料成为医疗领域的研究重点。
[0003]胶原蛋白是一种细胞外基质蛋白，其具有长而坚韧的三股螺旋结构，具有良好的生物相容性、可降解性以及低免疫原性等多种功能。胶原蛋白为主动型止血剂，参与内源性止血机制，具有快速止血等优越性。胶原蛋白在伤口部位与凝血因子相互作用，增强血小板聚集、止血，诱发成纤维母细胞的活性，激活并调节不同血细胞，保护伤口，激活生长因子，促进伤口修复。根据胶原蛋白良好的止血及促进伤口愈合及组织修复的功能，使其在脏器切除的填充止血上具有良好的应用前景。
[0004]虽然胶原蛋白具有诸多优点，但是胶原蛋白海绵吸水后容易塌陷，力学强度差，降解时间短，限制了其在组织填充方面的应用。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种胶原蛋白海绵及其制备方法与应用，该胶原蛋白采用羧甲基纤维素钠作为支架结构，可有效防止吸水后材料塌陷，提供膨胀支撑作用;且采用有效的交联技术，使得降解时间延长，避免降解速度过快，是一种兼有止血性能和膨胀填充性能的胶原蛋白海绵。
[0006]本发明提供的胶原蛋白海绵的制备方法，所述方法是以胶原蛋白和羧甲基纤维素钠为原料，制备得到以羧甲基纤维素钠为支撑结构的胶原蛋白和羧甲基纤维素钠的复合材料，即胶原蛋白海绵。
[0007]上述的方法中，所述方法可包括如下步骤:将胶原蛋白和羧甲基纤维素钠进行交联反应，得到胶原蛋白海绵。
[0008]上述的方法中，所述方法具体可包括如下步骤:在胶原蛋白和羧甲基纤维素钠的水溶液中加入交联剂，经反应后干燥即可得到所述胶原蛋白海绵。
[0009]上述的制备方法中，所述胶原蛋白和羧甲基纤维素钠的水溶液可由胶原蛋白水溶液和羧甲基纤维素钠水溶液混合得到，所述胶原蛋白水溶液和所述羧甲基纤维素钠水溶液的质量比可为(0.1?10):1，具体可为(I?1.5): 1、1:1或1.5:1;所述胶原蛋白水溶液中，胶原蛋白与水的质量比可为(20?60): 100，具体可为(20?30):100、20:100或30:100;所述羧甲基纤维素钠水溶液中，羧甲基纤维素钠的质量浓度可为2%?6%，具体可为3%?4%、3% 或
[0010]上述的制备方法中，在所述胶原蛋白和羧甲基纤维素钠的水溶液中加入交联剂得到的混合液中，所述交联剂的质量浓度可为0.05%?5%，具体可为0.3%?0.5%、0.3%或0.5%;所述交联剂可为戊二醛、京尼平或环氧化合物交联剂，所述环氧化合物交联剂可为I，4_丁二醇缩(脱)水甘油醚、丙三醇缩(脱)水甘油醚或乙二醇二缩(脱)水甘油醚。
[0011]上述的制备方法中，所述反应的温度可为10?30°C，具体可为20?25°C，时间可为0.5?2处，具体可为1?511、1?211、111或211。
[0012]上述的制备方法中，所述干燥可为冻干，具体为先预冻6?16h(如8?10h、8h或1h)，然后冻干 12?36h(如24?32h、24h或32h)。
[0013]上述的制备方法中，所述胶原蛋白的制备方法如下:
[0014]I)选取哺乳动物皮为原料，除去皮下组织；
[0015]2)将经步骤I)处理的原料进行碱处理后水洗；
[0016]3)将经过步骤2)处理的原料进行表面活性剂处理后水洗、甩干；
[0017]4)裁剪经过步骤3)处理的原料；
[0018]5)将经过步骤4)处理的原料进行酸处理后水洗，即可得到所述胶原蛋白。
[0019]上述胶原蛋白的制备方法中，
[0020]步骤I)中，所述哺乳动物皮具体可为猪皮或牛皮。
[0021]步骤2)中:所述碱处理为将经步骤I)处理的原料浸泡至碱的水溶液中；所述碱的水溶液中碱的摩尔浓度可为0.5?4mol/L，具体可为1.5?2mol/L、1.5mol/L或2mol/L;所述碱可为NaOH或Κ0Η;所述浸泡时，原料与碱的水溶液的质量比可为1: (I?20)，具体可为I: (5?6)、1:5或I: 6 ；浸泡时间(即处理时间)可为I?3小时，具体可为I小时;碱的水溶液的温度控制在4?25 °C，具体可为10?15 °C、10 °C或15 °C。
[0022]步骤3)中:所述表面活性剂处理为将经步骤2)处理的原料浸泡至表面活性剂水溶液中，所述表面活性剂溶液中表面活性剂的浓度可为0.5?3g/100mL，具体可为0.6?Ig/100mL、0.6g/10mL或lg/10mL；所述表面活性剂可为聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100)、聚氧乙稀山梨糖醇酐单油酸酯(Tween-80)或聚氧乙稀失水山梨醇脂肪酸酯(Tween-40);所述浸泡时，原料与表面活性剂溶液的质量比可为I: (10?40)，具体可为I:10；浸泡时间可为10?72h，具体可为40?48h、40h或48h。
[0023]步骤4)中:所述裁剪后的宽度可为O?3cm(如I?2cm、2?3cm)，但不为O;长度不限(如3?6cm、6?8cm)。
[0024]步骤5)中:所述酸处理为将经步骤4)处理后的原料浸泡至酸的水溶液中，所述酸的水溶液中酸的质量浓度可为0.5%?4%，具体可为I?3%、1%或3% ;所述酸可为醋酸、盐酸或柠檬酸;所述浸泡时，材料与酸的水溶液的质量比可为1: (10?40)，具体可为1: (15?20)、1: 15或1:20;浸泡时间(即处理时间)可为6?72h，具体可为8?12h、8h或12h。
[0025]步骤2)中:所述水洗可为水浸泡；原料与水的质量比可为1:(I?20)，具体可为I:(5?6)、1:5或1:6;浸泡时间可为30?60min，具体可为30min ；浸泡次数可为3?5次，具体可为5次;终点pH值可为8.0?9.5。
[0026]步骤3)中:所述水洗可为水浸泡;原料与水的质量比可为I: (10?40)，具体可为I:10；浸泡时间可为30?60min，具体可为30min ；浸泡次数可为3?5次，具体可为5次;终点pH值可为7.0?8.0。
[0027]步骤5)中:所述水洗可为水浸泡;原料与水的质量比可为I: (10?40)，具体可为I:(15?20)、1:15或1:20;浸泡时间可为30?60min，具体可为30min;浸泡次数可为3?5次，具体可为5次;终点pH值可为5?6，具体可为5.5。
[0028]上述的制备方法中，所述方法在所述干燥之后还包括去除所述胶原蛋白海绵中残留的交联剂的步骤，操作如下:
[0029]将所述胶原蛋白海绵依次浸泡在体积浓度为75%、80%、90%和100%的乙醇水溶液或乙醇中，每次浸泡的时间可为3?8h，具体可为4?5h、4h或5h。
[0030]上述的制备方法中，所述方法在除去所述胶原蛋白中残留的交联剂中的步骤后还包括辐照灭菌的步骤，所述辐照的剂量可为15?30KGy，具体可为20KGy。
[0031]由上述的制备方法制备得到的胶原蛋白海绵，也在本发明的保护范围内。
[0032]本发明进一步提供了上述的胶原蛋白海绵在下述1)-4)中的至少一种中的应用:
[0033]I)作为组织填充材料；
[0034]2)作为止血材料；
[0035]3)作为脏器切除手术填充材料；
[0036]4)作为脏器切除手术止血材料。
[0037]本发明具有如下有益效果:
[0038](I)本发明利用羧甲基纤维素为海绵提供支架结构，能够有效防止吸水后材料塌陷，提供膨胀支撑作用，且兼有止血性能和膨胀填充性能。
[0039](2)本发明采用有效的交联技术，使得降解时间延长，避免降解速度过快。
【具体实施方式】
[0040]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0041]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0042]以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
[0043]羧甲基纤维素钠购于安徽山河药用辅料股份有限公司，分子量3KDa。
[0044]实施例1、制备胶原蛋白海绵
[0045]按照如下步骤制备胶原蛋白海绵:
[0046](I)由专人从规范化管理的屠宰厂中收集刚完成屠宰的猪皮，尽量避免接触污染物，收集后立即冷冻储存。
[0047](2)将冷冻的原料解冻后对其进行充分清洗，同时除去不适合加工的部分(如采用剖层机除去皮下组织)。
[0048](3)使用2mo I /L的KOH水溶液浸泡处理原料Ih (原料与碱的水溶液的质量比为1:
5)，溶液温度控制在10°C左右，目的是破坏细胞结构，除去原料中的非胶原类蛋白，随后使用纯化水清洗，清洗时间为30min，清洗次数为5次，终点检测pH为8.5。
[0049](4)将原料清洗后使用0.6g/100mL的TrironX-1OO溶液浸泡处理48h(原料与TrironX-1OO溶液的质量比为1:10)，目的是进一步除去原料中的非胶原蛋白成分，随后使用纯化水清洗，清洗时间为30min，清洗次数为5次，终点检测pH为7.8，清洗后使用离心甩干机甩干。
[0050](5)使用压面机对原料进行裁剪，裁剪的宽度为l-2cm，长度为3-6cm0[0051 ] (6)对裁剪好的原料进行酸处理，所用的酸为盐酸，浓度为IWt%，处理时间为12h，浸泡比例即原料与酸的水溶液的质量比为1:15，随后随用纯化水清洗5次，每次浸泡清洗30min，终点检测pH为5.5，经过甩干后冷冻。
[0052](7)将冷冻后的原料与纯化水混合，比例为20:100(质量比)，经过均质机打碎混勾，混勾时间为5min。
[0053](8)配置3的％羧甲基纤维素钠水溶液，将其与事先制备好的胶原蛋白溶液混合，两种溶液的质量混合比例为I: I，同时加入交联剂I，4_丁二醇缩水甘油醚，使得I，4_丁二醇缩水甘油醚在混合液中的浓度为0.5wt%，置于均质机中搅拌均匀，(反应温度20°C，反应时间 Ih) ο
[0054](9)将制得的溶液置于冻干机中预冻8h，随后进行冻干，冻干时间为24h。
[0055](10)将制得的胶原蛋白海绵使用梯度酒精处理进行交联剂残留去除。所用到的梯度酒精浓度分别为75% ,80%,90%，100% ;浸泡处理的时间均为4h。将最后一步得到的样品置于室温下挥发6天。
[0056](11)随后进行封装辐照灭菌(20KGy)所得的产品即为胶原蛋白海绵产品。
[0057]对比例1、制备胶原蛋白海绵(未添加羧甲基纤维素钠)
[0058](I)由专人从规范化管理的屠宰厂中收集刚完成屠宰的猪皮，尽量避免接触污染物，收集后立即冷冻储存。
[0059](2)将冷冻的原料解冻后对其进行充分清洗，同时除去不适合加工的部分(如采用剖层机除去皮下组织)。
[0060](3)使用2 m ο I / L的K O H水溶液浸泡处理原料I h (原料与碱的水溶液的质量比为1:
5)，溶液温度控制在10°C左右，目的是破坏细胞结构，除去原料中的非胶原类蛋白，随后使用纯化水清洗，清洗时间为30min，清洗次数为5次，终点检测pH为8.3。
[0061 ] (4)将原料清洗后使用0.6g/100mL的TrironX-1OO溶液浸泡处理48h(原料与TrironX-1OO溶液的质量比为1:10)，目的是进一步除去原料中的非胶原蛋白成分，随后使用纯化水清洗，清洗时间为30min，清洗次数为5次，终点检测pH为7.6，清洗后使用离心甩干机甩干。
[0062](5)使用压面机对原料进行裁剪，裁剪的宽度为l-2cm，长度为3-6cm0
[0063](6)对裁剪好的原料进行酸处理，所用的酸为盐酸，浓度为IWt%，处理时间为12h，浸泡比例即原料与酸的水溶液的质量比为1:15，随后随用纯化水清洗5次，每次浸泡清洗30min，终点检测pH为5.5，经过甩干后冷冻。
[0064](7)将冷冻后的原料与纯化水混合，比例为20:100(质量比)，经过均质机打碎混勾，混勾时间为5min。
[0065](8)向混合好的胶原蛋白溶液中加入交联剂I，4_丁二醇缩水甘油醚，使得I，4_丁二醇缩水甘油醚在混合液中的浓度为0.5wt%，置于均质机中搅拌均匀，(反应温度20°C，反应时间Ih)。
[0066](9)将制得的溶液置于冻干机中预冻8h，随后进行冻干，冻干时间为24h。
[0067](10)将制得的胶原蛋白海绵使用梯度酒精处理进行交联剂残留去除。所用到的梯度酒精浓度分别为75% ,80%,90%，100% ;浸泡处理的时间均为4h。将最后一步得到的样品置于室温下挥发6天。
[0068](11)随后进行封装辐照灭菌(20KGy)所得的产品即为胶原蛋白海绵产品。
[0069]对比例2、制备胶原蛋白海绵(未交联)
[0070](I)由专人从规范化管理的屠宰厂中收集刚完成屠宰的猪皮，尽量避免接触污染物，收集后立即冷冻储存。
[0071](2)将冷冻的原料解冻后对其进行充分清洗，同时除去不适合加工的部分(如采用剖层机除去皮下组织)。
[0072](3)使用2mo I /L的KOH水溶液浸泡处理原料Ih (原料与碱的水溶液的质量比为1:5)，溶液温度控制在10°C左右，目的是破坏细胞结构，除去原料中的非胶原类蛋白，随后使用纯化水清洗，清洗时间为30min，清洗次数为5次，终点检测pH为8.1。
[0073](4)将原料清洗后使用0.6g/100mL的TrironX-1OO溶液浸泡处理48h(原料与TrironX-1OO溶液的质量比为1:10)，目的是进一步除去原料中的非胶原蛋白成分，随后使用纯化水清洗，清洗时间为30min，清洗次数为5次，终点检测pH为7.9，清洗后使用离心甩干机甩干。
[0074](5)使用压面机对原料进行裁剪，裁剪的宽度为l-2cm，长度为3-6cm0
[0075](6)对裁剪好的原料进行酸处理，所用的酸为盐酸，浓度为IWt %，处理时间为12h，浸泡比例即原料与酸的水溶液的质量比为1:15，随后随用纯化水清洗5次，每次浸泡清洗30min，终点检测pH为5.5，经过甩干后冷冻。
[0076](7)将冷冻后的原料与纯化水混合，比例为20:100(质量比)，经过均质机打碎混勾，混勾时间为5min。
[0077](8)配置3的％羧甲基纤维素钠水溶液，将其与事先制备好的胶原蛋白溶液混合，两种溶液的质量混合比例为I: I。
[0078](9)将制得的溶液置于冻干机中预冻Sh，随后进行冻干，冻干时间为24h。
[0079](10)随后进行封装辐照灭菌(20KGy)所得的产品即为胶原蛋白海绵产品。
[0080]实施例2、制备胶原蛋白海绵
[0081]按照如下步骤制备胶原蛋白海绵:
[0082](I)由专人从规范化管理的屠宰厂中收集刚完成屠宰的牛皮，尽量避免接触污染物，收集后立即冷冻储存。
[0083](2)将冷冻的材料解冻后对其进行充分清洗，同时除去不适合加工的部分(如采用剖层机除去皮下组织)。
[0084](3)使用1.5mol/L的NaOH水溶液浸泡处理原料Ih(原料与碱的水溶液的质量比为1:6)，溶液温度控制在15°C左右，目的是破坏细胞结构，除去原料中的非胶原类蛋白，随后使用纯化水清洗，清洗时间为30min，清洗次数为5次，终点检测pH为8.0。
[0085](4)将原料清洗后使用lg/100mL的Tween-80溶液浸泡处理40h(原料与TrironX-100溶液的质量比为1:10)，目的是进一步除去原料中的非胶原蛋白成分，随后使用纯化水清洗，清洗时间为30min，清洗次数为5次，终点检测值为pH为7.8，清洗后使用离心甩干机甩干。
[0086](5)使用压面机对原料进行裁剪，裁剪的宽度为2-3cm，长度为6-8cm0
[0087](6)对裁剪好的原料进行酸处理，所用的酸为醋酸，浓度为3 %，处理时间为Sh，浸泡比例即原料与酸的水溶液的质量比为1: 20，随后随用纯化水清洗5次，每次浸泡清洗30min，终点检测pH为5.5，经过甩干后冷冻。
[0088](7)将冷冻后的原料与纯化水混合，比例为30:100(质量比)，经过均质机打碎混勾，混勾时间为15min。
[0089](8)配置4的％羧甲基纤维素钠水溶液(水化温度为50°C)，将其与事先制备好的胶原蛋白溶液混合，胶原蛋白溶液与羧甲基纤维素钠水溶液的质量混合比例为1.5:1，同时加入交联剂乙二醇二缩水甘油醚，使得乙二醇二缩水甘油醚在混合液中的浓度为0.3wt%，置于均质机中搅拌均匀(反应温度为25°C，反应时间为2h)。
[0090](9)将制得的溶液置于冻干机中预冻10h，随后进行冻干，冻干时间为32h。
[0091](10)将制得的胶原蛋白海绵使用梯度酒精处理进行交联剂残留去除。所用到的梯度酒精浓度分别为75% ,80%,90%，100% ;浸泡处理的时间均为5h。将最后一步得到的样品置于室温下挥发7天。
[0092](11)随后进行封装辐照灭菌(20KGy)所得的产品即为胶原蛋白海绵产品。
[0093 ]实施例3、胶原蛋白海绵的吸水性能
[0094]称取冻干后的海绵样品，精确至0.0Olg，将其置于蒸馏水中，使海绵完全充水，使用滤纸吸除多余的水分，称取重量。计算吸收水分的重量与样品重量之比，重复测量5次，求得平均值即可得到胶原蛋白海绵相对于自身重量的吸水率。
[0095]实施例1得到的胶原蛋白海绵的吸水率为(531±66)%，实施例2得到的胶原蛋白海绵的吸水率为(6 5 8 ± 71) %，对比例I得到的胶原蛋白海绵吸水后形状塌陷，吸水率为(265±28)%，对比例2得到的胶原蛋白海绵由于未交联，吸水后羧甲基纤维素溶出，胶原蛋白与羧甲基纤维素分离，不能保持固体形态。
[0096]实施例4、胶原蛋白海绵的兔耳动脉止血试验
[0097]在兔子距耳尖部8cm处割断耳缘动脉，当创面有血涌现时，迅速将实施例1与2的胶原蛋白海绵材料按压于创面部位，同时开启秒表计时，观察止血材料表面及周围的渗血情况，并用已经精确称量的普通纱布每隔20s蘸取渗血，直至普通纱布无法蘸取到渗血时停止秒表，记录时间，每种材料测试5次，取平均值为止血时间。
[0098]实施例1得到的胶原蛋白海绵在兔耳处的止血时间为(90±6)s，实施例2得到的胶原蛋白海绵在兔耳处的止血时间为(123±9)s，对比例I得到的胶原蛋白海绵在兔耳处的止血时间为(236±15)s，对比例2由于吸血不能保持形态，未进行止血试验。
[0099]实施例5、胶原海绵的肝脏止血及体内埋植试验
[0100]无菌条件下剖开兔子腹腔暴露肝脏，用无菌手术刀在同一肝叶切除肝脏lcm*lcm组织两处，形成渗血创面，迅速将实施例1与2的胶原蛋白海绵材料按压于创面部位，同时开启秒表计时，观察止血材料表面及周围的渗血情况，并用已经精确称量的普通纱布每隔20s蘸取渗血，直至普通纱布无法蘸取到渗血时停止秒表，记录时间，每种材料测试5次，取平均值为止血时间。止血后在海绵的四个角与肝脏创面分别缝合实施例1与2的胶原蛋白样品，一个月后处死观察其吸收降解以及伤口恢复情况，分别于I个月、2个月、3个月与4个月观察。
[0101](I)止血时间
[0102]实施例1得到的胶原蛋白海绵的止血时间为(51±2)s，实施例2得到的胶原蛋白海绵的止血时间为(63 ± 3) s。对比例I得到的胶原蛋白海绵的止血时间为(135 ± 8) s。对比例2由于吸血不能保持形态，未进行止血试验。
[0103](2)吸收降解以及伤口恢复情况
[0104]实验观察到I个月与2个月时胶原蛋白海绵外观完整，未降解，表面有血管化现象。3个月时开始有小部分降解，外观变得不完整，肝组织边缘有少量纤维组织及多核巨细胞，细胞胞浆内有吞噬的透明物质，有少量的炎症反应。4个月时海绵大部分降解，崩解为碎片，炎症反应消失。5个月后观察海绵被完全吸收，肝组织愈合完全。
[0105]对比例I的状态变化I个月时靠近边缘部分小部分降解，在表面有血管化现象;3个月时大部分降解，海绵明显变薄，大部分形态透明，可观察到纤维组织及多核巨细胞，有少量炎症反应。4个月时海绵完全被吸收，组织愈合良好。
[0106]对比例2的状态变化由于吸血不能保持形态，未做此实验。
[0107]据此可以证明本发明制得的胶原蛋白海绵在具有良好的止血效果的同时弥补了单纯的胶原蛋白在吸血后结构塌陷与力学性能变差的缺点，在组织填充止血方面具有很大的优越性。
【主权项】
1.一种胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于:所述方法是以胶原蛋白和羧甲基纤维素钠为原料，制备得到以羧甲基纤维素钠为支撑结构的胶原蛋白和羧甲基纤维素钠的复合材料，即胶原蛋白海绵。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于:所述方法包括如下步骤:将胶原蛋白和羧甲基纤维素钠进行交联反应，得到胶原蛋白海绵。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于:所述方法包括如下步骤:在胶原蛋白和羧甲基纤维素钠的水溶液中加入交联剂，经反应后干燥即可得到所述胶原蛋白海绵。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于:所述胶原蛋白和羧甲基纤维素钠的水溶液由胶原蛋白水溶液和羧甲基纤维素钠水溶液混合得到，所述胶原蛋白水溶液和所述羧甲基纤维素钠水溶液的质量比为(0.1?10):1;所述胶原蛋白水溶液中，胶原蛋白与水的质量比为(20?60 ):100；所述羧甲基纤维素钠水溶液中，羧甲基纤维素钠的质量浓度为2 %?6% ο5.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于:在所述胶原蛋白和羧甲基纤维素钠的水溶液中加入交联剂得到的混合液中，所述交联剂的质量浓度为0.05%?5% ;所述交联剂为戊二醛、京尼平或环氧化合物，所述环氧化合物为I，4-丁二醇缩水甘油醚、丙三醇缩水甘油醚或乙二醇二缩水甘油醚。6.根据权利要求3-5中任一项所述的制备方法，其特征在于:所述反应的温度为10?30°C，时间为0.5?24h;和/或，所述干燥为冻干，所述冻干的时间为12?36h。7.根据权利要求1-6中任一项所述的制备方法，其特征在于:所述胶原蛋白的制备方法如下: 1)选取哺乳动物皮为原料，除去皮下组织； 2)将经步骤I)处理的原料进行碱处理后水洗； 3)将经过步骤2)处理的原料进行表面活性剂处理后水洗、甩干； 4)裁剪经过步骤3)处理的原料； 5)将经过步骤4)处理的原料料进行酸处理后水洗，即可得到所述胶原蛋白。8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于: 步骤2)中:所述碱处理为将经步骤I)处理的原料浸泡至碱的水溶液中；所述碱的水溶液中碱的摩尔浓度为0.5?4mol/L;所述浸泡时，原料与碱的水溶液的质量比为1: (I?20)，浸泡时间为I?3小时，碱的水溶液的温度控制在4?25°C ；和/或， 步骤3)中:所述表面活性剂处理为将经步骤2)处理的原料浸泡至表面活性剂水溶液中，所述表面活性剂水溶液中表面活性剂的浓度为0.5?3g/100mL，所述表面活性剂为聚乙二醇辛基苯基醚、聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯或聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯;所述浸泡时，原料与表面活性剂溶液的质量比为1:(10?40)，浸泡时间为10?72h;和/或， 步骤4)中:所述裁剪后的宽度为O?3cm，但不为O;和/或， 步骤5)中:所述酸处理为将经步骤4)处理后的原料浸泡至酸的水溶液中，所述酸的水溶液中酸的质量浓度为0.5%?4% ;所述浸泡时，原料与酸的水溶液的质量比为1: (10?40)，浸泡时间为6?7211;和/或， 步骤2)中:所述水洗为水浸泡，原料与水的质量比为1: (I?20)，浸泡时间为30?60min，浸泡次数为3?5次，终点pH值为8.0?9.5 ；和/或， 步骤3)中:所述水洗为水浸泡，原料与水的质量比为1: (1?4 O)，浸泡时间为3 O?60min，浸泡次数为3?5次，终点pH值为7.0?8.0 ；和/或， 步骤5)中:所述水洗为水浸泡，原料与水的质量比为1:(1?4 O )，浸泡时间为3 O?60min，浸泡次数为3?5次，终点pH值为5?6 ；和/或， 所述方法在所述干燥之后还包括去除所述胶原蛋白海绵中残留的交联剂的步骤，操作如下:将所述胶原蛋白海绵依次浸泡在体积浓度为75%、80%、90%和100%的乙醇水溶液或乙醇中，每次浸泡的时间为3?8h;和/或， 所述方法在除去所述胶原蛋白中残留的交联剂中的步骤后还包括辐照灭菌的步骤，所述辐照的剂量为15?30KGy。9.权利要求1-8中任一项所述的制备方法制备得到的胶原蛋白海绵。10.权利要求9所述的胶原蛋白海绵在下述1)-4)中的至少一种中的应用: 1)作为组织填充材料； 2)作为止血材料； 3)作为脏器切除手术填充材料； 4)作为脏器切除手术止血材料。
【文档编号】C08J3/24GK106075576SQ201610548610
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年7月13日
【发明人】闫玉芳, 董佳桓, 孙先昌, 赵庆凯, 郭松, 王彬
【申请人】烟台正海生物科技股份有限公司