2Kg、巧樣 酸钢0. 7Kg、乙酸钢0. 5Kg、酵母膏0. 3Kg、反下締二酸0. 3Kg、蛋白腺0. 4Kg、麦精0. 2Kg、硫 酸儀0. 3Kg、憐酸氨二钟0. 2Kg、碳酸巧0. 2Kg、蒸馈水120Kg，混合均匀； 第2步、采用醋酸调节第1步所得的混合液的抑至5. 0~5. 5 ; 第3步、在第2步制备得到的液体再进行灭菌，灭菌的方法是将混合液在压力为 0. 17MPa的条件下115°C灭菌25分钟，即可。
[0020] 对照例2 与实施例3的区别在于：未加入反下締二酸。
[0021] 第1步、将黄豆粉12Kg、葡萄糖14Kg、径乙基甲基纤维素7Kg、维生素Bl2Kg、巧樣 酸钢0. 7Kg、乙酸钢0. 5Kg、酵母膏0. 3Kg、反下締二酸0. 3Kg、蛋白腺0. 4Kg、麦精0. 2Kg、干 酪素0. 3Kg、硫酸儀0. 3Kg、憐酸氨二钟0. 2Kg、碳酸巧0. 2Kg、蒸馈水120Kg，混合均匀； 第2步、采用醋酸调节第1步所得的混合液的抑至5. 0~5. 5 ; 第3步、在第2步制备得到的液体再进行灭菌，灭菌的方法是将混合液在压力为 0. 17MPa的条件下115°C灭菌25分钟，即可。
[0022] 采用如上实施例和对照例制备得到的培养液进行真姬茹的液体培育，方法如下： 将装有无水珍珠岩的塑料瓶加盖后，放入无菌锅内进行灭菌处理，取出后将塑料瓶置 入冷却室冷却至摄氏20~22°C;将100mL培养基加入塑料瓶中，随即进行接种，每瓶接种 2个Imm2菌块或接种液体菌种5ml，然后移至培养室进行培养，培养时间30天；再将塑料瓶 置于栽培室进行培养，经过20天开始采收，前1~5天光照强度为lOOLux，后6~20天光 照强度为400LUX。
[0023] 通过如下方法对真姬茹进行多糖的提取和含量的检测： 真姬茹中的多糖的提取方法如下： 准确称取适量真姬茹子实体样品，加入15倍量的蒸馈水，于恒溫水浴中浸提，浸提溫 度是90°C，浸提时间2小时，然后离屯、分离，重复2次，合并上清液，将上清液浓缩后，缓慢地 加入浓缩液3倍体积的无水乙醇，静置24h，离屯、分离后，将所得沉淀加80 %乙醇洗涂后再 加水定容，采用苯酪-硫酸法测定多糖含量后计算多糖得率。
[0024] 多糖得率的计算公式为：多糖得率=多糖提取量/子实体干重X100 %。
[00巧]苯酪-硫酸法测定多糖方法： 材料与方法 原理： 样品经微沸溶解乙醇醇析分离后，用苯酪-硫酸试剂可与游离的戊寡糖、多糖中的已 糖、糖醒酸（或甲苯衍生物）起显色反应，产生澄黄色，在490mm处测定光密度，其光密度与 糖含量呈线性关系，并测定其含量。
[002引仪器与试剂： 仪器：722型分光光密度计，离屯、机，电子分析天平，超声揽拌器。
[0027] 试剂：浓硫酸A.R级，80%苯酪：称取80.Og苯酪（A.R级）溶于水并加水至100mL; 6%苯酪：取6ml苯酪（A.R级）溶于水，加水至100ml，临用配制；葡萄糖标准溶液：称取经 105°C烘干化至恒重的A.R级葡萄糖0.lOOOg，加水溶解后，加入5ml盐酸，并加水稀释至 100ml，此溶液1.Oml相当于1.Omg,再吸取上述溶液IOml,加水稀释100mL配制成1.Oml相 当于100Jig葡萄糖， 实验方法 样品来源W上实施例和对照例培育得到的真姬茹。
[0028] 样品的提取准确称取经粉碎的固体样品3-15g定容到100ml，超声波溶解lOmin， 煮沸30min，离屯、（30(K)r/min)后，取2.Oml上清液，加8ml无水乙醇醇析2地，残留物重复 提取一次。
[0029] 标准曲线制备的测定准确吸取IOOyg/ml葡萄糖标准溶液0,0.25,0.50,1.00， 1. 50, 2.OOml(相当于0, 25, 50,100,150, 200yg葡萄糖），分别置于IOml具塞刻度试管，加 入苯酪液1.Oml,混匀且快速加入5.Oml浓硫酸，在沸水浴中放置15min，采用流水冷却后于 490nm处比色测吸光度。
[0030] 多糖含量的测定取样品提取液1.Oml于具塞刻度试管中，加水至10.Oml测定光密 度，计算其含量。
[0031] 计算公式如下： X= (CXV)/(MX1000)X100% X-样品多糖含量g/lOOg M-样品质量Jig C-标准葡萄糖浓度μg/ml V-样品体积ml W上实施例和对照例中制备得到的培养液在进行真姬茹培养后，培养效率和多糖含量 如下表所示：
从表中可W看出，实施例3相对于对照例I来说，通过在培养液中加入干酪素可W有效 地提高真姬茹的多糖的含量，实施例3相对于对照例2可W看出，通过加入反下締二酸可W 有效地提高真姬茹的产量，提高生物学效率。
【主权项】
1. 一种用于液体培养真姬菇的培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 第1步、按重量份计，将黄豆粉8~16份、葡萄糖10~20份、纤维素6~12份、维生 素1~3份、柠檬酸钠0. 5~1份、乙酸钠0. 3~0. 6份、酵母膏0. 2~0. 4份、反丁烯二酸 0. 2~0. 4份、蛋白胨0. 3~0. 6份、麦精0. 2~0. 3份、干酪素0. 2~0. 4份、硫酸镁0. 2~ 〇. 3份、磷酸氢二钾0. 1~0. 3份、碳酸|丐0. 1~0. 3份、蒸馏水100~140份，混合均勾； 第2步、调节第1步所得的混合液的pH; 第3步、在第2步制备得到的液体再进行灭菌，即可。2. 根据权利要求1所述的用于液体培养真姬菇的培养基的制备方法，其特征在于：所 述的纤维素选自羟乙基甲基纤维素（HEMC)或者甲基纤维素（MC)中的一种或者两种的混合 物。3. 根据权利要求1所述的用于液体培养真姬菇的培养基的制备方法，其特征在于：所 述的维生素选自维生素B1、维生素B6或者维生素B12中的一种或者几种的混合物。4. 根据权利要求1所述的用于液体培养真姬菇的培养基的制备方法，其特征在于：所 述的第2步中，采用醋酸对混合液的pH进行调节。5. 根据权利要求1所述的用于液体培养真姬菇的培养基的制备方法，其特征在于：所 述的pH的范围是5.0~5. 5。6. 根据权利要求1所述的用于液体培养真姬菇的培养基的制备方法，其特征在于：所 述的第3步中，灭菌的方法是将混合液在压力为0. 15~0. 2MPa的条件下110~120°C灭菌 20~30分钟。
【专利摘要】本发明公开一种用于液体培养真姬菇的培养基的制备方法，属于菌菇培养基技术领域。步骤：将黄豆粉、葡萄糖、纤维素、维生素、柠檬酸钠、乙酸钠、酵母膏、反丁烯二酸、蛋白胨、麦精、干酪素、硫酸镁、磷酸氢二钾、碳酸钙、蒸馏水，混合均匀；调节混合液的pH；再进行灭菌，即可。本发明提供的真姬菇培养基，能够有效地促进真姬菇的生长，通过加入干酪素和反丁烯二酸的协同作用，能够同时促进真姬菇的生长以及菌体内多糖的含量。
【IPC分类】C05G3/00
【公开号】CN105272542
【申请号】CN201510636011
【发明人】周元科, 刘霞, 刘群涛, 陈永民
【申请人】山东晨阳菌业有限公司
【公开日】2016年1月27日
【申请日】2015年9月30日