专利名称：一种生长抑制激素肽衍生物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种抗肿瘤药物，尤其是指一种生长抑制激素肽的衍生物及其 制备方法。
自从生长抑制激素上世纪被发现以来，生长抑制激素五种亚型受体和许多 肿瘤的关系也逐渐被发现。其中，生长抑制激素第二、第三及第五亚型受体的 过度表达和多种肿瘤有密切的关联。世界上许多制药厂都投入了相当的力量研 发以生长抑制激素衍生物为基础的抗肿瘤药物。
在2007年的秋季，FDA批准了第二代以生长抑制激素肽衍生物为基础的抗 癌药物，来自于法国 Ipsen 公司的兰瑞肽 {Lanreotide, H—DNal (2， )一c[Cys-Tyr-DTrp—Lys—Val-Cys]-Thr—NH2, Murphy,
WA, VA Lance， S Moreau， et al. "Inhibition of Rat Prostate Tumor—Growth
by an Octap印tide Analog of Somatostatin. 〃 Life Sci. 40:2515—2522， 1987.
该药物对生长抑制激素第二及第五亚型受体的亲和力有选择性。
由于兰瑞肽难以区分这两种亚型受体的亲和力，靶向性不明显，导致了不 少毒副作用，使得该药的临床应用受到限制。
本发明的目的在于提供一种在氨基酸侧链引入甲基，以此增加生长抑制激 素第二或第五亚型受体的亲和力，提高新药靶向性的生长抑制激素肽衍生物。
本发明的另一个目的在于提供一种在氨基酸侧链引入甲基，以此增加生长 抑制激素第二或第五亚型受体的亲和力，提高新药靶向性的生长抑制激素肽衍 生物的制备方法。
本发明的构思是这样的 本发明的通用结构式如下图示
背景技术：
发明内容<formula>formula see original document page 5</formula>其中，8位的R为羧基(C00H)、酰胺基(C0NH2)或羟甲基(CH20H)中的一种;
4位的B-甲基色氨酸可以有以下四种立体异构
(2S, 3R) (2R, 3S)
本发明一种生长抑制激素肽衍生物的制备方法如下所述
所述的生长抑制激素肽衍生物可以通过多肽固相法合成，也就是首先把C-端的苏氨酸或苏氨醇接到固相载体即树脂上，然后按照多肽合成的通用方法从
C-端向N-端把其余的七个氨基酸用肽键连接起来(见下图，R = C00H)，所合成 的直链八肽从树脂上被切下来，然后第2位的半胱氨酸和第7位半胱氨酸在碘 的氧化下通过二硫键关环成环状多肽，最后除去所有氨基酸支链保护基团，粗 品经过纯化即得到所设计的药物分子；<formula>formula see original document page 6</formula>另外，也可采用下述的方法合成直链八肽在树脂上合组装完后，可以直 接把所有氨基酸支链保护基团除去，然后在稀溶液中第2位的半胱氨酸和第7 位半胱氨酸在氧化剂(如氧气，铁(III)氰酸钾)的存在下通过二硫键关环成环
状多肽(见下图，R=C00H)。
本发明的优点如下
由于色氨酸的侧链引入甲基，适当增加空间张力，有利于药物分子和生长 抑制激素第二或第五亚型受体的结合产生更有效的肿瘤抑制作用，减少药物分 子和其它亚型受体的结合，因此可同时降低毒副作用，增加疗效。<formula>formula see original document page 7</formula>
具体实施例方式
本发明所述的一种生长抑制激素肽衍生物，其化合物的通用结构式如下:
其中，8位的R可以是羧基(C00H)、酰胺基(C0NH2)或羟甲基(CH20H)中的任 意一种；且其中的4位的B-甲基色氨酸也可是以下四种立体异构的任意一种， 即
<formula>formula see original document page 7</formula>(2S, 3R) (2R, 3S)
该生长抑制激素肽衍生物是在法国兰瑞肽的基础上特定的位置上适当
引入甲基，即在该类分子和受体结合关键部位之一的D或L-色氨酸(D/L-Trp)
支链的(3-位上引入甲基(S或R构型)。
上述的生长抑制激素肽衍生物的基本制备方法有以下两种方式 第一种方式为A)、合成氨基酸支链全部保护的线性多肽；B)、 2位半胱氨
酸和7位半胱氨酸通过二硫键关环成环状多肽；C)、最后除去所有氨基酸支链
保护基团。
第二种方式为A)、合成氨基酸支链全部保护的线性多肽；B)、最后除去 所有氨基酸支链保护基团；C)、 2位半胱氨酸和7位半胱氨酸通过二硫键关环 成环状多肽。
实施例一 (R=C00H，环状多肽合成方法A):
2-氯-三苯甲基树脂(1克，取代度0. 7mmo1每克)，加入二氯甲烷(20毫升)， 在氮气的保护下溶涨两个小时，过滤，用二氯甲烷再洗两次，然后加入 Fmoc-Thr(0tBu)-0H (2.1 mmol)，二异丙基乙胺(DIPEA， 8.4 mmol),反应两 小时后，过滤，用二氯甲烷再洗两次后，得到Fmoc-Thr(0tBu)-0-2-氯-三苯甲基树脂。接下去使用多肽合成步骤，如下
用哌啶(25。/。的N,N-二甲基甲酰胺溶液)脱去Fmoc保护基(20分钟)；所得 到的H-Thr(0tBu)-0-2-氯-三苯甲基树脂用二氯甲垸和N，N-二甲基甲酰胺各洗 涤两次，每次两分钟；然后加入Fmoc保护的氨基酸[此处是第7位的 Fmoc-Cys (Trt) -0H， 2. 1 mmol] ;H0Bt (2.1 mmol) ; HBTU (2.1 mmol) ; 二异丙基 乙胺(DIPEA， 4.2mmo1)以及N，N-二甲基甲酰胺(15毫升)，反应30分钟后， 过滤。所得到的Fmoc-Cys(Trt)-Thr(0tBu)-0-2-氯-三苯甲基树脂用二氯甲烷和 N,N-二甲基甲酰胺各洗涤两次(每次两分钟)。
然后，重复上段的第一步，直到设计的多肽序列全部组装完毕。 接下来，用三氟乙酸把多肽从所得到的固体树脂上切割下来。减压出去溶 剂，所得到的固体残留物中加入碘溶液(1.0醒ol，20毫升)，两小时后，除去 未反应的碘。除去溶剂后，所得到的残渣用三氟乙酸脱去环状多肽分子上所有 的保护基团，用时2小时，在此溶液中加入乙醚(200毫升)，白色沉淀用乙醚 再洗两次(100毫升每次)。所得到的白色固体用高效液相色谱(HPLC)分离， 得到纯的产物为白色粉末，重量536毫克{分子式C55H7。RA&;计算分子量 1111.33;实测分子量1134.40 [C55H7()Nu)0nS2Na， ESI， (M + Na)+]}。 实施例二 (R二 COOH，环状多肽合成方法B):
朋2-三苯甲基树脂(1克，取代度0. 7腿ol每克)，加入二氯甲垸(20毫升)，在 氮气的保护下溶涨两个小时，过滤，用二氯甲垸再洗两次，然后加入 Fmoc-Thr (0tBu) -0H (2.1 mmol) ; HOBt (2.1 ramol) ; HBTU (2.1 mmol);二异丙 基乙胺(DIPEA， 8.4 ramol)，反应两小时后，过滤，用二氯甲院再洗两次后，得到Fmoc-Thr(OtBu)-NH-三苯甲基树脂。接下去使用多肽合成步骤，如下
用哌啶(25。/。的N，N-二甲基甲酰胺溶液)脱去Fmoc保护基(20分钟)；所得 到的H-Thr(OtBu)-NH-三苯甲基树脂用二氯甲烷和N, N-二甲基甲酰胺各洗涤两 次，每次两分钟；然后加入Fmoc保护的氨基酸[此处是第7位的 Fmoc-Cys (Trt) -0H， 2. 1 ramol] ; HOBt (2.1 mmol) ; HBTU (2.1 ramol) ; 二异丙 基乙胺(DIPEA， 4.2 mmol)以及N，N-二甲基甲酰胺(15毫升)，反应30分钟 后，过滤。所得到的Fmoc-Cys(Trt)-Thr(OtBu)-NH-三苯甲基树脂用二氯甲烷和 N, N-二甲基甲酰胺各洗涤两次(每次两分钟)。
然后，重复上段的第一步，直到设计的多肽序列全部组装完毕。 接下来，用三氟乙酸脱去多肽分子固体树脂上所有的保护基团同时把多肽 切割下来，用时2小时，在此溶液中加入乙醚(200毫升)，白色沉淀用乙醚再 洗两次(100毫升每次)。所得到的白色固体残渣溶解于甲醇(10毫升)，缓慢 加入到铁(III)氰酸钾的溶液中(10 mraol， 200毫升)，5小时后，除去溶剂。 残留物进行高效液相色谱(HPLC)分离，得到纯的产物为白色粉末，重量410 毫克{分子式C5晶凡A&;计算分子量1110.35;实测分子量1133.36 [C5;;H71Nn010S2Na， ESI， (M + Na)+]}。
权利要求
1、一种生长抑制激素肽衍生物，其特征在于该化合物的通用结构式如下。其中8位的R可以是羧基(COOH)、酰胺基(CONH2)或羟甲基(CH2OH)中的任意一种。
2、如权利要求1所述的一种生长抑制激素肽衍生物。其特征在于4位的 13-甲基色氨酸可以是可以是以下四种立体异构的任意一种，四种结构分别如下
3、 一种生长抑制激素肽衍生物的制备方法，包括以下步骤A)、合成氨基 酸支链全部保护的线性多肽；B)、 2位半胱氨酸和7位半胱氨酸通过二硫键关环 成环状多肽；C)、最后除去所有氨基酸支链保护基团。
4、 如权利要求l所述的一种生长抑制激素肽衍生物的制备方法，包括以下 步骤A)、合成氨基酸支链全部保护的线性多肽；B)、最后除去所有氨基酸支链保护基团；C)、 2位半胱氨酸和7位半胱氨酸通过二硫键关环成环状多肽。
全文摘要
本发明公开了一种生长抑制激素肽衍生物及其制备方法，该化合物的通用结构式如右，该化合物可作为抗肿瘤药物的主要组分，有利于药物分子和生长抑制激素第二或第五亚型受体的结合产生更有效的肿瘤抑制作用，减少药物分子和其它亚型受体的结合，因此可同时降低毒副作用，增加疗效。
文档编号C07K1/14GK101298472SQ20081012416
公开日2008年11月5日 申请日期2008年6月25日 优先权日2008年6月25日
发明者韩国霞 申请人:韩国霞