专利名称：咔啉羧酸-四肽偶联物及其合成方法和在医学中的应用的制作方法
技术领域：
本发明咔啉羧酸与肽的偶联物，尤其涉及3S-1，2，3，4-四氢-β -咔啉_3_羧酸与 四肽的偶联物，本发明还涉及该偶联物的合成方法以及它们作为抗血栓剂的应用，属于生 物医药领域。
背景技术：
血栓病在我国很常见，在临床治疗的各个领域都有发生，各脏器的动脉血栓形成 都是最危险的疾病之一，具有致命的危险。寻找抗血栓药物是新药研究的热点之一。发明 人注意到，3S-1，2，3，4-四氢-β -咔啉-3-羧酸是中药薤白中的一种成分，具有抗血小板 聚集活性(姚新生等，中国药物化学杂志，1995，5，134)。针对3S-1，2，3，4-四氢-β -咔 啉-3-羧酸在极性溶剂和非极性溶剂中溶解度都不好带来的生物利用度低的问题，本发明 人对此进行了改进。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种具有抗血栓活性的咔啉羧酸_四肽偶联物；本发明的目的之二是提供一种合成上述咔啉羧酸_四肽偶联物的方法；本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的具有抗血栓活性的咔啉羧酸_四肽偶联物，其结构式为式I所示其中，所述的AA选自丙氨酸残基、甘氨酸残基、脯氨酸残基、谷氨酰胺残基、亮氨 酸残基、苯丙氨酸残基、异亮氨酸残基、缬氨酸残基、酪氨酸残基、色氨酸残基、组氨酸残基、 天冬酰胺残基、天冬氨酸残基、谷氨酸残基、丝氨酸残基、苏氨酸残基、甲硫氨酸残基、赖氨 酸残基或精氨酸残基；本发明的另一个目的是提供一种合成上述咔啉羧酸-四肽偶联物的方法；一种合成上述咔啉羧酸_四肽偶联物的方法，包括以下步骤(1)制备AA-Tyr-Ser-Val四肽；其中，所述的AA选自丙氨酸残基、甘氨酸残基、脯
氨酸残基、谷氨酰胺残基、亮氨酸残基、苯丙氨酸残基、异亮氨酸残基、缬氨酸残基、酪氨酸 残基、色氨酸残基、组氨酸残基、天冬酰胺残基、天冬氨酸残基、谷氨酸残基、丝氨酸残基、苏 氨酸残基、甲硫氨酸残基、赖氨酸残基或精氨酸残基；(2)将保护的3S-1，2，3，4-四氢-β -咔啉_3_羧酸的3位羧基与保护的 AA-Tyr-Ser-Val四肽的氨端偶联，再脱去保护，即得。在大鼠血栓形成模型上的评价表明，本发明偶联物具有优秀的抗血栓活性，可作 为抗血栓剂应用。本发明能改善3S-1，2，3，4-四氢- β -咔啉-3-羧酸在极性溶剂和非极 性溶剂中溶解度低导致的低生物利用度缺陷。
图1本发明咔啉羧酸四肽偶联物的合成路线图；i) :DCC/H0Bt ；ii) :4NHC1_EA ； iii) :30%的甲醛和浓硫酸；iv) =(Boc)2O ；ν) :Pd/C，H2*4N HCl-EA ；其中 AA 为 19 种氨基
酸残基(丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、亮氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、酪氨酸、 色氨酸、组氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、精氨酸残 基)。
具体实施例方式为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它 们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。实施例1 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser-Val 的制备 (4a) 1) 3S-1，2，3，4-四氢-β -咔啉-3-羧酸的制备将400ml水置于500ml的圆底烧瓶中，缓慢加入0.2ml浓硫酸摇勻。再加入 5. Og (24. 5mmol)L-色氨酸，超声振荡至L-色氨酸完全溶解，往上述混合液中加入IOml浓 度为35%的甲醛，搅拌反应，TLC板显示L-色氨酸原料点消失，往反应液中缓慢递加氨水 至PH = 6.0，静置0.5小时，减压抽滤得白色固体，干燥称重5. Olg，产率95.0%，m. ρ 228-230°C, ESI-MS(m/z) :217[M+H] +2川-叔丁酰-35-1，2，3，4_四氢-β -咔啉_3_羧酸的制备冰浴条件下，将LOg(I63mmol)3s-L2i3i4-四氢-β-咔啉-3-羧酸悬浮于 15mlDMF中，再加入1. 2g (Boc)2O到上述溶液中，然后用三乙胺调PH = 8 9，搅拌反应，随 着反应的进行，混悬溶液逐渐变为澄清，反应液呈黄色，TLC板显示(氯仿甲醇=10 1， Rf = 0.21)原料点消失，停止反应，回收溶剂，乙酸乙酯将吹干后的残留物溶解，5%的 KHSO4洗涤3次，饱和NaCl洗涤3次，无水NaSO4干燥，过滤，减压旋干溶剂，得黄色固体，氯 仿洗涤后得目标化合物958mg，无色固体，产率68. 5%, m. ρ 241 2430C0 ESI-MS(m/z) 318[M+H]+3) Boc-Ser (Bzl)-Val-OBzl 的制备将1. Og(3. 39mmol)Boc-Ser (Bzl)用 15ml 无水 THF 溶解，冰浴下，再加入 0. 458g(3. 39mmol)N-羟基苯并三唑(HOBt)，以及 IOml 无水 THF 溶解的 0. 698g(3. 39mmol) 二环己基羰二亚胺(DCC)，搅拌反应30分钟，得相应的活泼酯溶液，待用。15ml 无水 THF将 1. 071g(2. 82mmol)Tos 'Val-OBzl 溶解，N-甲基吗啉调 PH = 8 9，然后与上述待用的活泼酯溶液反应，TLC板显示(氯仿甲醇=30 l，Rf = 0.22)原 料点消失，滤去二环己基脲(D⑶)，减压浓缩至干，残留物用40ml乙酸乙酯溶解，依次用5% NaHCO3、饱和NaCl、5% KHSO4和饱和NaCl各洗涤三次至中性，无水NaSO4干燥，过滤，减压旋 干溶剂，得标题化合物1. 314g,淡黄色固体，产率96. l%,m.p 69. 5 70. 2°C。ESI-MS(m/ ζ) 495[M+H]+4) Ser (Bzl)-Val-OBzl 的制备将1. 314g(2. 71mmol)Boc-Ser (Bzl)-Val-OBzl 和 6. Oml 氯化氢-乙酸乙酯(4N) 冰浴下混合搅拌反应，TLC板显示(氯仿甲醇=5 1，Rf = 0. 26)原料点消失，加入无
4水乙醚，减压抽干溶液，重复三次。残留物用无水乙醚浸泡磨洗，倾去无水乙醚，重复三次， 得标题化合物1.024g，无色固体，产率98. 2%。ESI-MS(m/z) :385[M+H] +5) Boc-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl 的制备20ml无水THF将 1. 024g(3. 19mmol)Boc-Tyr溶解，冰浴下，加入0. 431g(3. 19mmol) N-羟基苯并三唑(HOBt)，以及IOml无水THF溶解的0. 657g(3. 19mmol) 二环己基羰二亚胺 (DCC)，搅拌反应30分钟，得相应的活泼酯溶液，待用。15ml 无水 THF 将 1. 024g Ser (BZl) -Val-OBzl 溶解，N-甲基吗啉调 PH = 8 9， 然后与上述待用的活泼酯溶液反应，TLC板显示(氯仿甲醇=30 1, Rf = O. 24)原料 点消失，滤去二环己基脲(D⑶)，减压浓缩至干，残留物用40ml乙酸乙酯溶解，依次用5% NaHCO3、饱和NaCl、5 % KHSO4和饱和NaCl各洗涤三次至中性，无水NaSO4干燥，过滤，减压 旋干溶剂，残余物经硅胶柱层析纯化得标题化合物1. 289g，无色固体，产率74. 8%，TLC(氯 仿:甲醇=30 l，Rf = 0.28)m.p:79.8 80.5°C，[afD0=7.857(C=0.7，甲醇)。ESI—MS(m/ ζ) 649 [M+H]+.6) Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl 的制备用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 289g(l. 99mmol) Boc-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl和7. Oml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物1. 079g,无 色固体，产率 98. 99%。ESI-MS (m/z) :[M+H]+548. 87) Boc-Val-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl 的制备(la)用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 287g(2. 35mmol) Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 禾Π 0. 613g(2. 82mmol)Boc-Val,制得标题化合物 1. 341g 无 色固体，产率 76. 39 %, TLC(氯仿甲醇=30 1, Rf = 0. 25)m. ρ 85. 8 87. 1 "C, [afD0=-23.778 (00.6，甲醇)。ESI-MS (m/z) 748 [M+H]+.8) Val-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl 的制备(2a)用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 328g(l. 78mmol) Boc-Val-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl和5. 3ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物 1. 146g，黄色油状物，产率 99. 65%。ESI_MS(m/z) 648[M+H]+.9)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Val-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (3a) 的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以从 1. 142g (1. 77mmol) Val-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl 和 0. 675g(2. 12mmol) Boc-3S_l，2，3，4-四S - β -咔啉羧酸， 制得标题化合物1. 225g，无色固体，产率73. 27%，TLC(氯仿甲醇=30 l,Rf = 0. 20) m. ρ 113. 8 115. 2°C, [afD°= 0.818(C=1.1,甲醇)。ESI-MS (m/z) :970[M+Na]+.10) 3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser-Val (4a)的制备先^ 0. 4 5 8 g Boc-3S_l，2，3，4-四氧咔啉 _3_ 酰 基-Val-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 溶于 30ml 无水 MeOH，往得到的溶液中加入 0. 137gPd/C。 室温下往该悬浮溶液中通入H25天，TLC板显示(氯仿甲醇=30 1，Rf = 0.20)原料点消 失，滤去Pd/C，减压浓缩至干，残留物用无水乙醚浸泡磨洗，倾去无水乙醚，重复三次，得淡 黄色固体，将此淡黄色固体和3. Oml氯化氢-乙酸乙酯(4N)冰浴下混合搅拌反应，TLC板显示(氯仿甲醇=5 l，Rf = 0. 20)原料点消失，加入无水乙醚，减压抽干溶液，重复三次。 残留物用无水乙醚浸泡磨洗，倾去无水乙醚，重复三次，得标题化合物0. 302g，黄色固体，产 率 93. 79%。TLC(正丁醇水冰醋酸=4 1 0. 5，Rf = 0. 22)m. ρ :187· 2 188. 6°C，2D°=-34.300(C=1.0,甲醇)。HPLC 纯度98· 31 % (甲醇水=70 30)。ESI-MS(m/z) 666 [M-H]-.实施例2 3S-1，2，3，4-四S - β -咔啉 _3_ 酰基-Tyr-Tyr-Ser-Val (4b)的制备1) Boc-Tyr-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (lb)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 238g (2. 26mmol) Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl 和 0. 762g(2. 71mmol) Boc-Tyr,制得标题化合物 1. 166g,无 色固体，产率 63.63 %，TLC(氯仿甲醇=20 1，Rf = 0. 26)m. ρ :86· 9 88. 5 °C， [a]2D°=-16.19(C=0.7,甲醇)。ESI-MS (m/z) :812[M+H]+.2) Tyr-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (2b)的制备用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 098g(l. 35mmol) Boc-Tyr-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl和5. 5ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物 0. 960g，黄色油状物，产率 99. 79%。ESI_MS(m/z) :712[M+H] +3)Boc-3S_l，2，3，4-四氢- β _ 咔啉 _3_ 酰基-Tyr-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl 的制 备(3b)用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 0. 960g(1. 35mmol) Tyr-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl 和 0. 516g(l. 62mmol)Boc-3S_l，2，3,4-四氢-β -咔啉-3-羧 酸，制得标题化合物1.022g，无色固体，产率74. 82%，TLC(氯仿甲醇=30 1, Rf = 0. 23)m. ρ :111.3 112. 8°C，[afD°二 28.222(C=0.6’ 甲醇)。ESI—MS(m/z) :1010[Μ_Η]+.4) 3S-1，2，3,4-四氢-β -咔啉-3-酰基-Tyr-Tyr-Ser-Val (4b)的制备用制备3S-1，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Val-Tyr-Ser-Val 的方法，以 0. 468g(0. 46mmol)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉-3-酰 基-Tyr-Tyr-Ser (OBzl) -Val-OBzl 和 0. 140g Pd/C,制得标题化合物 0. 329g,绿色固体，产 率 97. 34%，TLC(正丁醇水冰醋酸=4 1 0. 5，Rf = 0. 24)m. ρ :164· 5 165. 8°C，-.实施例3 3S-1，2，3，4-四S - β -咔啉 _3_ 酰基-Ala-Tyr-Ser-Val (4c)的制备1) Boc-Ala-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (Ic)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 260g (2. 30mmol) Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl 和 0. 522g(2. 76mmol) Boc-Ala,制得标题化合物 1. 169g,无 色固体，产率 70. 69 %，TLC(氯仿甲醇=30 1，Rf = 0. 27)m. ρ :78. 9 80. 9 °C， [afD°= -23.091(C=1.1,甲醇)。ESI-MS (m/z) :720[M+H]+.2) Ala-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (2c)的制备用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 0. 929g(l. 29mmol) Boc-Ala-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl和3. 7ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物 0. 7988g，黄色油状物，产率 99. 75%。ESI_MS(m/z) :620[M+H] +
3)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Ala-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (3c) 的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 0. 798g(1. 29mmol) Ala-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl 和 0. 493g(l. 55mmol)Boc-3S_l,2,3,4-四氢-β -咔啉-3-羧 酸，制得标题化合物0.812g，无色固体，产率68. 52%，TLC(氯仿甲醇=30 1, Rf =
0.20)m. ρ :112· 5 113. 8°C，[afD0= -18.406(C=1.15,甲醇)。ESI-MS (m/z) :919[M]+.4) 3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Ala-Tyr-Ser-Val (4c)的制备用制备3S-1，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Val-Tyr-Ser-Val 的方法，以 0. 488g(0. 53mmol)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉-3-酰 基-Ala-Tyr-Ser (OBzl) -Val-OBzl 和 0. 146g Pd/C,制得标题化合物 0. 323g,黄色固体，产 率 95. 28%，TLC(正丁醇水冰醋酸=4 1 0. 5，Rf = 0. 25)m. ρ :170· 2 171. 8°C，2D0=-59.579(C=0.95，甲醇)。HPLC 纯度94·76% (甲醇水=68 32)。ESI-MS(m/z) 637 [M-H]-.实施例4 3S-1，2，3，4-四S - β -咔啉 _3_ 酰基-Asn-Tyr-Ser-Val (4d)的制备1) Boc-Asn-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (Id)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 210g(2. 21mmol) Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl 和 0. 616g(2. 65mmol)Boc-Asn,制得标题化合物 1. 257g,无色 固体，产率 74. 68 %，TLC(氯仿甲醇=20 1，Rf = 0. 22)m. ρ :167· 2 168. 7 °C， [α]，-29.567(01.0，甲醇)ESI-MS (m/z) :762[Μ+Η]+·2) Asn-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (2d)的制备用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 222g(l. 60mmol) Boc-Asn-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl和6. 4ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物
1.058g，黄色油状物，产率 99. 62%。ESI_MS(m/z) :663[M+H] +3)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Asn-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (3d) 的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 058g(1. 60mmol) Asn-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl 和 0. 61 Ig (1. 92mmol) Boc-3S_l，2，3,4-四氢-β -咔啉-3-羧 酸，制得标题化合物1.068g，无色固体，产率69. 22%，TLC(氯仿甲醇=20 1, Rf = 0. 21)m. ρ :114·8 116. 50C,[afD°= 10.952(C=1.05,甲醇)。ESI—MS(m/z) :985[M+Na]+.4) 3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Asn-Tyr-Ser-Val (4d)的制备用制备3S-1，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Val-Tyr-Ser-Val 的方法，以 0. 469g(0. 49mmol)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉-3-酰 基-Asn-Tyr-Ser (OBzl) -Val-OBzl 和 0. 141g Pd/C,制得标题化合物 0. 322g,绿色固体，产 率 96. 99%，TLC(正丁醇水冰醋酸=4 1 0. 5，Rf = 0. 25)m. ρ :177· 2 178. 9°C， [afD°= -67.053(C=0.95,甲醇)。HPLC 纯度97·82% (甲醇水=70 30)。ESI-MS (m/z) 680 [M-H]-.实施例5 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-His-Tyr-Ser-Val (4e)的制备1) Boc-His (Boc) -Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (Ie)的制备
用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 468g(2. 68mmol) Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl 和 1. 142g(3. 22mmol)Boc-His (Boc),制得标题化合物 0· 871g, 淡黄色固体，产率 37. 99%，TLC(氯仿甲醇=30 1，Rf = 0. 24)m. ρ :86. 1 87. 9°C， [afD°= -9.37(C=0.9,甲醇)。ESI-MS(m/z) :886[Μ+Η]+·2) His-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (2e)的制备用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 521g(l. 72mmol)Boc-His (Boc) -Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl和10. Oml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物1. 175g，黄色油状物， 产率 99. 83%。ESI-MS (m/z) :686[M+H]+.3)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-His-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (3e) 的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 175g(l. 72mmol) His-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl 和 0. 656g (2. 06mmol) Boc-13S_l，2，3，4-四氢-β -咔 啉-3-羧酸，制得标题化合物1.028g，淡黄色固体，产率60. 83%，TLC(氯仿甲醇= 30 1, Rf = 0. 20)m. ρ 139. 6 141.2 V，[a]2D°=16.905(C=0.7,甲醇)。ESI—MS(m/z) 985 [M]+.4) 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-His-Tyr-Ser-Val (4e)的制备用制备3S-1，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Val-Tyr-Ser-Val 的方法，以 0. 472g(0. 48mmol)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉-3-酰 基-His-Tyr-Ser (OBzl) -Val-OBzl 和 0. 142g Pd/C,制得标题化合物 0. 324g,黄色固体，产 率 95. 86%，TLC(正丁醇水冰醋酸=4 1 0. 5，Rf = 0. 28)m. ρ :193· 2 194. 8°C，==-21.159(01.15，甲醇)。HPLC 纯度95· 16% (甲醇水=65 35)。ESI_MS(m/z) 704 [M-H]-.实施例6 3S-1，2，3,4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Pro-Tyr-Ser-Val (4f)的制备1) Boc-Pro-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (If)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 160g(2. 12mmol) Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl 和 0. 547g(2. 54mmol) Boc-Pro,制得标题化合物 1. 040g,无 色固体，产率 65. 91 %, TLC(氯仿甲醇=30 1, Rf = 0. 31)m. ρ :69· 9 71. 6 "C, [α]-64.57(C=0.7,甲醇)。ESI-MS(m/z) :745[Μ+Η]+·2) Pro-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl 的制备(2f)用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 120g(l. 50mmol) Boc-Pro-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl和5. 6ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物 0. 949g，黄色固体，产率 95. 87%。ESI-MS (m/z) 646 [M+H]+.3)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Pro-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (3f) 的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 0. 949g(1. 47mmol) Pro-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl 和 0. 516g(l. 62mmol)Boc-3S_l，2，3,4-四氢-β -咔啉-3-羧 酸，制得标题化合物0.677g，无色固体，产率48. 67%，TLC(氯仿甲醇=30 1, Rf = 0. 24)m. ρ 104. 9 105. 2°C，-18.926(C=0.9,甲醇)。ESI-MS (m/z) 945 [M]+.
4) 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-Pro-Tyr-Ser-Val (4f)的制备用制备3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉 _3_ 酰基-Val-Tyr-Ser-Val 的 方法，以 0. 482g(0. 51mmol)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉-3-酰基-3-酰 基-Pro-Tyr-Ser (OBzl) -Val-OBzl 和 0. 153g Pd/C,制得标题化合物 0. 326g,绿色固体，产 率 96. 17%，TLC(正丁醇水冰醋酸=4 1 0. 5，Rf = 0. 27)m. ρ :165· 2 166. 8°C， [a]2D0=-29.901(C=1.35，甲醇)。HPLC 纯度95· 76% (甲醇水=66 34)。ESI_MS(m/z) 704[Μ+ΚΓ.实施例7 1，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Gly-Tyr-Ser-Val (4g)的制备1) Boc-Gly-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (Ig)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 249g(2. 28mmol) Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl 和 0. 479g(2. 74mmol) Boc-Gly,制得标题化合物 1. IOlg,无 色固体，产率 68. 52 %，TLC(氯仿甲醇=20 1，Rf = 0. 26)m. ρ :78· 5 79. 2 °C， [afD°= -3.31(C=1.4,甲醇)。ESI-MS (m/z) :706[M+H]+.2) Gly-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (2g)的制备用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1 · 1 32g (1 · 6 Immo 1) Boc-Gly-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl和5. 7ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物 0. 968g，黄色油状物，产率 99. 69%。ESI-MS (m/z) :605[M+H]+.3)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Gly-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (3g) 的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 0. 968g(1. 60mmol) Gly-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl 和 0. 612g(l. 92mmol)Boc-3S_l，2，3,4-四氢-β -咔啉-3-羧 酸，制得标题化合物1.026g，无色固体，产率70. 81%，TLC(氯仿甲醇=30 1, Rf = 0. 24)m. ρ :113. 9 114. 8°C，[α]== 28.07(00.95，甲醇)。ESI-MS(m/z) :928[M+Na]+.4) 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-Gly-Tyr-Ser-Val (4g)的制备用制备3S-1，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Val-Tyr-Ser-Val 的方法，以 0. 482g(0. 51mmol)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉-3-酰 基-Gly-Tyr-Ser (OBzl) -Val-OBzl 和 0. 153g Pd/C,制得标题化合物 0. 326g，绿色固体，产 率 96. 17%，TLC(正丁醇水冰醋酸=4 1 0. 5，Rf = 0. 27)m. ρ :165· 2 166. 8°C， [afD0=-29.901(C=1.35，甲醇)。HPLC 纯度95. 85% (甲醇水=70 30)。ESI-MS(m/z) 623 [M-H]-.实施例8 3S-1，2，3，4-四S - β -咔啉 _3_ 酰基-Gln-Tyr-Ser-Val (4h)的制备1) Boc-Gln-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (Ih)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 473g (2. 69mmol) Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl 和 0. 795g(3. 23mmol)Boc-Gln,制得标题化合物 0. 953g,无色 固体，产率 45. 68 %，TLC(氯仿甲醇=20: 1，Rf = 0. 26)m. ρ :131· 2 132. 9 °C， [afD0= 23.333(01.05，甲醇)。ESI-MS (m/z) :776[Μ+Η]+·2) Gln-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (2h)的制备用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 348g(l. 74mmol)
9Boc-Gln-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl和5. 4ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物 1. 169g，黄色油状物，产率 99. 57%。ESI_MS(m/z) :676[M+H]+.3) Boc-3S-l，2，3，4_ 四氢- β-咔啉 _3_ 酰基-Gln-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (3h 的 制备)用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 169g(l. 73mmol) Gln-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl 和 0. 661g(2. 08mmol)Boc-3S_l,2,3,4-四氢-β -咔啉-3-羧 酸，制得标题化合物1. 115g，无色固体，产率66. 02%，TLC(氯仿甲醇=20 1, Rf = 0. 22)m. ρ 114. 9 115. 6°C,[a]2D°= -84.205(C=0.65,甲醇)。ESI-MS(m/z) :1000[M+Na]+.4) 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-Gln-Tyr-Ser-Val (4h)的制备用制备3S-1，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Val-Tyr-Ser-Val 的方法，以 0. 426g(0. 44mmol)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉-3-酰 基-Gln-Tyr-Ser (OBzl) -Val-OBzl 和 0. 128g Pd/C,制得标题化合物 0. 295g,绿色固体，产 率 97. 04%，TLC(正丁醇水冰醋酸=4 1 0. 5，Rf = 0. 27)m. ρ :164· 5 165. 6°C， [a]2D0=-19.000(C=1.3，甲醇)。HPLC 纯度97·84% (甲醇水=70 30)。ESI_MS(m/z) 695 [M-H]-.实施例9 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-Ser-Tyr-Ser-Val (4i)的制备1)Boc-Ser (Bzl) -Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (Ii)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 199g(2. 19mmol) Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl 和 0. 777g(2. 63mmol)Boc-Ser (BzL),制得标题化合物 1. 024g， 无色固体，产率 56. 71 %，TLC(氯仿甲醇=30 1，Rf = 0. 30)m. ρ :84· 3 85. 6 °C， [a]2D°=-17.641(C=0.65,甲醇)。ESI-MS (m/z) :826[Μ+Η]+·2) Ser (Bzl)-Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl (2i)的制备用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 0. 864g(l. 05mmol)Boc-Ser (Bzl)-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl和4. 3ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物0. 751g，黄色油状物，产 率 98. 95%。ESI-MS (m/z) :725[M+H]+.3) Boc-3S-l，2，3，4_ 四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Ser (Bzl) -Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (3i)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 0. 751g(1. 04mmol) Ser (Bzl) -Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl 和 0. 396g (1. 24mmol) Boc-3S_l，2，3，4-四氢- β-咔 啉-3-羧酸，制得标题化合物0. 729g，无色固体，产率68. 77%，TLC(氯仿甲醇=30 1， Rf = 0. 24)m. ρ :97· 5 98. 8°C，[afD0二 18.912(C=0.95，甲醇)。ESI-MS (m/z) 1025 [M]+..4) 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-Ser-Tyr-Ser-Val (4i)的制备用制备3S-1，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Val-Tyr-Ser-Val 的方法，以 0. 467g(0. 46mmol)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉-3-酰 基-Ser-Tyr-Ser (OBzl) -Val-OBzl 和 0. 140g Pd/C,制得标题化合物 0. 283g,绿色固体，产 率 94. 98%，TLC(正丁醇水冰醋酸=4 1 0. 5，Rf = 0. 28)m. ρ :162· 5 163. 9°C，2D°=-35.125C=0.8,甲醇)。HPLC 纯度95· 46 % (甲醇水=70 30)。ESI-MS (m/z) 654 [M-H]-.
实施例10 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-Thr-Tyr-Ser-Val (4 j)的制备1) Boc-Thr (Bzl) -Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (Ij)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 177g(2. 15mmol) Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl 和 0. 798g(2. 58mmol)Boc-Thr (Bzl)，制得标题化合物 0. 991g, 无色固体，产率 54. 94%，TLC(氯仿甲醇=30 1，Rf = 0. 23)m. ρ :76. 5 78. 9 °C， [a]2D°=-9.546(C=l.l,甲醇)。ESI-MS (m/z) 840 [M+H]+.2) Thr (Bzl) -Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (2 j)的制备用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 520g(l. 81mmol)Boc-Thr (Bzl)-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl和7. 6ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物1. 330g,黄色油状物，产 率 99. 33%。ESI-MS(m/z) 740[M+H]+.3) Boc-3S-l，2，3，4_ 四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Thr (Bzl) -Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (3j)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 330g(1. 80mmol) Thr (Bzl) -Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl 禾 Π 0. 688g(2. 16mmol) Boc-3S_l，2，3，4-四氢- β-咔 啉-3_羧酸，制得标题化合物1.1188，无色固体，产率59.95%，11((氯仿甲醇=30 1， Rf = 0. 25)m. ρ 98. 5 100. rC,[afD°= 18.778(C=1.2,甲醇)。ESI_MS(m/z) :1062[M+Na]+.4) 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-Thr-Tyr-Ser-Val (4 j)的制备用制备3S-1，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Val-Tyr-Ser-Val 的方法，以 0. 436g(0. 42mmol)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉-3-酰 基-Thr-Tyr-Ser (OBzl) -Val-OBzl 和 0. 131g Pd/C,制得标题化合物 0. 274g,绿色固体，产 率 95. 71%，TLC(正丁醇水冰醋酸=4 1 0. 5，Rf = 0. 29)m. ρ :162· 5 163. 9°C，》-23.97(01.1，甲醇)。HPLC 纯度96· 56 % (甲醇水=70 30)。ESI-MS (m/z)
692[M+Na+H]+.实施例11 1，2，3，4-四氢-β-Klss-3-酰基-Lys-Tyr-Ser-Val (4k)的制备1) Boc-Lys (Z) -Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (Ik)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 078g(1. 66mmol) Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl 和 0. 898g(2. 36mmol) Boc-Lys (Z)，制得标题化合物 1. OOlg, 无色固体，产率 55. 89%，TLC(氯仿甲醇=30 1，Rf = 0. 28)m. ρ :61· 9 63. 5 °C， [a]2D0= -17.259(C=0.9,甲醇)。ESI-MS (m/z) :911[M+H]+.2) Lys (Z)-Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl (2k)的制备用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 288g(l. 42mmol) Boc-Lys (Z) -Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl和6. 4ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物 1. 140g，黄色油状物，产率 99. 48%。ESI-MS(m/z) :810[M+H]+.3) Boc-3S-l，2，3，4_ 四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Lys (Z) -Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (3 k)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 140g(1. 41mmol) Lys (Z)-Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl 和 0. 538g(1. 69mmol)Boc-3S_l，2，3，4-四氢-β -咔 啉-3-羧酸，制得标题化合物0. 788g，无色固体，产率53. 75%，TLC(氯仿甲醇=30 1，Rf = 0. 26)m. ρ 95. 2 96. 8°C，[afD0= 18.242(01.1，甲醇)。ESI-MS(m/z) :1109[Μ_Η]+·4) 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-Lys-Tyr-Ser-Val (4k)的制备用制备3S-1，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Val-Tyr-Ser-Val 的方法，以 0. 456g(0. 41mmol)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉-3-酰 基-Lys-Tyr-Ser (OBzl) -Val-OBzl 和 0. 137g Pd/C,制得标题化合物 0. 278g,黄色固体，产 率 97. 29%，TLC(正丁醇水冰醋酸=4 1 0. 5，Rf = 0. 27)m. ρ :186· 3 187. 4°C， [a]2D°=-38.148(C=0.9,甲醇)。HPLC 纯度98· 99 % (甲醇水=72 28)。ESI-MS (m/z) 694[Μ-Η-ΗΓ.实施例123S-1，2，3，4_ 四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Trp-Tyr-Ser-Val (41)的制备1) Boc-Trp-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (11)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 144g(2. 09mmol) Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl 和 0. 763g(2. 51mmol)Boc-Trp,制得标题化合物 1. 088g，淡黄 色固体，产率 62. 47 %, TLC(氯仿甲醇=30 1, Rf = 0. 28)m. ρ 90. 5 91. 8 "C, [a]2D°=-15.68(C=1.2,甲醇)。ESI-MS(m/z) :835[M+H]+.2) Trp-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl 的制备(21)用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl · HCl 的方法，以 1. 498g (1. 80mmol) Boc-Trp-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl和7. 4ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物 1. 312g，黄色油状物，产率 99. 54%。ESI_MS(m/z) :735[M+H]+.3)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Trp-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (31) 的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 310g(1. 78mmol) Trp-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl 和 0. 682g (2. 14mmol) Boc-3S_l,2,3,4-四氢-β -咔啉-3-羧 酸，制得标题化合物0.905g，淡黄色固体，产率49. 02%，TLC(氯仿甲醇=30 1, Rf = 0. 26)m. ρ :113· 2 114. 6°C，[afD0= 8.633(01.0，甲醇)。ESI—MS(m/z) :1057[Μ+Η]+·4) 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-Trp-Tyr-Ser-Val (41)的制备用制备3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser-Val 的方法，以 0. 462 (0. 45mmol) Boc-3S_l，2，3，4-四氢-β -咔啉-3-酰基-Trp-Tyr-Ser (OBzl) -Val-OBzl 和0. 139g Pd/C，制得标题化合物0. 319g，紫色固体，产率94. 71%，TLC(正丁醇水冰醋 酸=4 1 0. 5，Rf = 0. 26)m.p :172· 5 173. 2°C，[afDO=-12.467(C=O.75^0)。HPL(^i6 度95· 52% (甲醇水=70 30)。ESI_MS(m/z) :755[Μ+ΗΓ·实施例13 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-Phe-Tyr-Ser-Val (4m)的制备1) Boc-Phe-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (Im)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 079g(1. 97mmol) Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl 和 0. 627g(2. 36mmol) Boc-Phe,制得标题化合物 1. 077g,产 率 68. 78 %, TLC(氯仿甲醇=30 1, Rf = 0. 27)m. ρ 171. 5 172. 8 "C, [α]2β0= -18.833(C=0.80,甲醇)。ESI-MS (m/z) :796[M+H]+.2) Phe-Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl (2m)的制备
用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 493g(l. 88mmol) Boc-Phe-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl和7. 5ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物 1. 296g，黄色油状物，产率 99. 31%。ESI-MS (m/z) :696[M+H]+.3) Boc-3S-l，2，3，4_ 四氢- β-咔啉 _3_ 酰基-Phe-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (3m 的 制备)用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 296g(1. 87mmol) Phe-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl 和 0. 713g (2. 24mmol) Boc-3S_l,2,3,4-四氢-β -咔啉-3-羧 酸，制得标题化合物1.218g，淡黄色固体，产率65. 62%，TLC(氯仿甲醇=30 1, Rf =
0.26) m. ρ 110. 6 112. 2°C，[afD0= 22.083(C=0.8，甲醇)。ESI-MS (m/z) :995[Μ]+·4) 3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Phe-Tyr-Ser-Val (4m)的制备用制备3S-1，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Val-Tyr-Ser-Val 的方法，以 0. 440g(0. 44mmol)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉-3-酰 基-Phe-Tyr-Ser (OBzl) -Val-OBzl 和 0. 132g Pd/C,制得标题化合物 0. 294g,黄色固体，产 率 93. 01%，TLC(正丁醇水冰醋酸=4 1 0. 5，Rf = 0. 24)m. ρ :166· 2 167. 8°C， [afD0=-12.882(01.55,甲醇)。HPLC 纯度95. 61% (甲醇水=70 30)。ESI-MS(m/z) 713 [M-H]-.实施例14 1，2，3，4-四氢-β-Klss-3-酰基-Met-Tyr-Ser-Val (4n)的制备1) Boc-Met-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (In)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 122g(2. 05mmol) Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl 和 0. 613g(2. 46mmol)Boc-Met,制得标题化合物 1. 129g,无 色固体，产率 70. 75 %, TLC(氯仿甲醇=30 1，Rf = 0. 23)m. ρ -J2. 8 74. 2 "C, [afD0=-6.196(00.85，甲醇)。ESI-MS (m/z) :780[M+H]+.2) Met-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (2n)的制备用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 416g(l. 82mmol) Boc-Met-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl和7. Iml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物
1.230g，黄色油状物，产率 99. 68%。ESI-MS (m/z) :680[M+H]+.3) Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉-3-酰基-Met-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBz 1 (3η) 的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 228g(1. 84mmol) Met-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl 和 0. 702g (2. 20mmol) Boc-3S_l,2,3,4-四氢-β -咔啉-3-羧 酸，制得标题化合物1.458g，无色固体，产率82. 33%，TLC(氯仿甲醇=30 1, Rf = 0. 21)m. ρ 110. 8 111. 6°C，[a]2D0=8.364 (01.1，甲醇)。ESI-MS (m/z) :979[Μ]+·4) 3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Met-Tyr-Ser-Val (4η)的制备将0. 366g(0. 37mmol)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰 基-Met-Tyr-Ser (OBzl)-Val-OBzl先加入Iml苯甲醚润湿，冰浴条件下加入6ml三氟醋 酸(TFA)溶解化合物，再将3ml三氟甲磺酸(TFMSA)加入，冰浴反应1. 5小时。一次性加 入无水乙醚100ml，即析出大量絮状固体。静置，倾出上层清液，反复操作三次，过滤，滤饼 用s印hadex G-IO柱脱盐，流动相为5 %醋酸水溶液，茚三酮显色监测收集水溶液，冷冻
13干燥，制得标题化合物0. 176g，黄褐色固体，产率67. 55%, TLC(正丁醇水冰醋酸= 4:1: 0. 5，Rf = 0. 26)m.p :156· 2 157. 5°C，[a]2D0二-19.556(C=0.75,甲醇)。HPLC 纯度 94. 56% (甲醇水=70 30)。ESI_MS(m/z) :698[Μ_ΗΓ·实施例15 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-Leu-Tyr-Ser-Val (4ο)的制备1) Boc-Leu-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (Io)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 292g(2. 36mmol) Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl 和 0. 655g(2. 83mmol) Boc-Leu,制得标题化合物 1. 238g,无 色固体，产率 68.96 %，TLC(氯仿甲醇=45 1，Rf = 0. 29)m. ρ :76· 5 77. 2 °C， [afD°= -63.636(C=1.1,甲醇)。ESI-MS (m/z) :762[M+H]+.2) Leu-Ser (Bzl)-Val-OBzl (2o)的制备用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 325g(l. 74mmol) Boc-Leu-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl和6. 6ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物 1. 146g，无色油状物，产率 99. 65%。ESI_MS(m/z) :661[M+H]+.3)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Leu-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (3ο) 的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 146g(l. 74mmol) Leu-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl 和 0. 663g (2. 08mmol) Boc-3S_l,2,3,4-四氢-β -咔啉-3-羧 酸，制得标题化合物1.089g，无色固体，产率65. 29%，TLC(氯仿甲醇=30 1, Rf =
0.23)m. ρ :108· 6 109. 7°C，[a]== -6.444 (C=0.9，甲醇)。ESI-MS (m/z) 961[M]+.4) 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-Leu-Tyr-Ser-Val (4o)的制备用制备3S-1，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Val-Tyr-Ser-Val 的方法，以 0. 428g(0. 45mmol)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉-3-酰 基-Leu-Tyr-Ser (OBzl) -Val-OBzl 和 0. 128g Pd/C,制得标题化合物 0. 287g,紫色固体，产 率 94. 68%，TLC(正丁醇水冰醋酸=4 1 0. 5，Rf = 0. 23)m. ρ :177· 5 178. 9°C，2D°=-38.697(C=l.l,甲醇)。HPLC 纯度95· 95 % (甲醇水=72 28)。ESI-MS (m/z) 679 [M-H]-.实施例16 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-Ile-Tyr-Ser-Val (4p)的制备1) Boc-Ile-Tyr-Ser (Bz) -Val-OBzl (Ip)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 287g(2. 35mmol) Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl 和 0. 652g(2. 82mmol)Boc-Ile,制得标题化合物 1. 179g,无 色固体，产率 65. 91 %, TLC(氯仿甲醇=30 1, Rf = 0. 35)m. ρ 88. 9 90. 2 "C, [afD°= -6.210(C=1.0,甲醇)。ESI-MS (m/z) :762[M+H]+.2) Ile-Tyr-Ser (Bz) -Val-OBzl (2p)的制备用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 532g(2. Olmmol) Boc-Ile-Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl和7. 7ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物
1.328g，黄色油状物，产率 99. 85%。ESI_MS(m/z) :662[M+H]+.3)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Ile-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (3p) 的制备
用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 328g(2. Olmmol) Ile-Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl 和 0. 768g (2. 41mmol) Boc-3S_l,2,3,4-四氢-β -咔啉-3-羧 基，制得标题化合物1. 326g，淡绿色固体，产率68. 70%, TLC(氯仿甲醇=30 1, Rf = 0. 25)m. ρ 108. 6 109. 50C,[afD°= 9.50(C=0.8,甲醇)。ESI-MS(m/z) :984[M+Na]+.4) 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-Ile-Tyr-Ser-Val (4p)的制备用制备3S-1，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Val-Tyr-Ser-Val 的方法，以 0. 406g(0. 42mmol)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉-3-酰 基-Ile-Tyr-Ser(OBzl)-Val-OBzl 和 0. 122g Pd/C，制得标题化合物 0. 273g，绿色固体，产 率 94. 66%，TLC(正丁醇水冰醋酸=4 1 0. 5，Rf = 0. 23)m. ρ :172· 5 173. 6°C， [afD0=-29.053(01.9，甲醇)。HPLC 纯度95· 79 % (甲醇水=70 30)。ESI-MS (m/z) 681 [M-H]-.实施例17 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-Arg-Tyr-Ser-Val (4q)的制备l)Boc-Arg (NO2)-Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl (Iq)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 325g(2. 42mmol) Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl 和 0. 927g(2. 90mmol)Boc-Arg(NO2)，制得标题化合物 1. 169g,无 色固体，产率 56. 89%, TLC(氯仿甲醇=30 1, Rf = 0. 21)m. ρ :111· 5 112. 6°C， [α]==-25.233(01.0,甲醇)。ESI-MS (m/z) 849 [M+H]+.2) Arg (NO2)-Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl(2q)的制备用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以 1. 163g(l. 37mmol)Boc-Arg(NO2)-Tyr-Ser( BzD-Val-OBzl和5. 8ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物1. 023g，无色油状物，产 率 99. 71%。ESI-MS (m/z) :750[M+H] +3) BOC-3S-1，2，3，4_ 四氢- β-咔啉 _3_ 酰基-Arg (NO2) -Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl (3q)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 011g(l. 35mmol) Arg(NO2)-Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl 和 0. 516g(1. 62mmol)Boc-3S_l，2，3，4-四氢-β -咔 啉-3_羧酸，制得标题化合物1.0728，无色固体，产率75.65%，11((氯仿甲醇=20 1， Rf = 0. 25) m. ρ :119.8 121. 2°C，[afD0=-37.97(01.1，甲醇)。ESI—MS (m/z) 1049 [M]+.4) 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-Arg-Tyr-Ser-Val (4q)的制备
用制备3S-1，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Val-Tyr-Ser-Val 的方法，以 0. 425g(0. 40mmol)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉-3-酰 基-Arg-Tyr-Ser (OBzl) -Val-OBzl 和 0. 128g Pd/C,制得标题化合物 0. 283g,绿色固体，产 率 96. 60%，TLC(正丁醇水冰醋酸=4 1 0. 5，Rf = 0. 23)m. ρ :159· 6 160. 5°C，-.实施例18 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-Glu-(Tyr-Ser-Val) 2(4r)的 制备DBoc-Glu-[Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzll2 (Ir)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 566g(2. 86mmol)Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl 和 0. 321g(l. 30mmol)Boc-Glu,制得标题化合物 0. 851g,无色 固体，产率 50. 18 %，TLC(氯仿甲醇=20: 1，Rf = 0. 26)m. ρ :102· 8 103. 2 °C， [afD0二-14.528(01.2，甲醇)。ESI-MS(m/z) :1330[M+Na]+·2)Glu-[Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzll2 (2r)的制备用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. Olg (0. 77mmol) Boc-Glu-[Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzll2和5. 70ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物
0.93g，黄色油状物，产率 99. 68%。ESI-MS (m/z) :1207[M+H]+.3) Boc-3S-l，2，3，4_ 四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Glu-[Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzll2 (3 r)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 0. 930g(0. 77mmol) Glu-[Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzll2 和 0. 295g(0. 93mmol)Boc-3S_l，2，3，4-四氢-β -咔 啉-3_羧酸，制得标题化合物0.5968，无色固体，产率51.29%，11((氯仿甲醇=15 1， Rf = O. 23)m. ρ :99· 3 100. 2°C，[α]== 3.206(01.05，甲醇)。ESI-MS(m/z) :1530[M+Na]+.4) 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-Glu-(Tyr-Ser-Val)2 (4r)的制备用制备3S-1，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Val-Tyr-Ser-Val 的方法，以 0. 520g(0. 35mmol)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉-3-酰 基-Glu-[Tyr-Ser (OBzl) -Val-OBzll2 和 0. 156g Pd/C,制得标题化合物 0. 345g,褐色固体， 产率95. 53%，TLC (正丁醇水冰醋酸=4 1 0. 5，Rf = 0. 23)m. ρ 167. 6 168. 5°C，-.实施例19 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-Asp-(Tyr-Ser-Val)2 (4s)的 制备l)Boc-Asp-[Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl]2 (Is)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 583g(2. 89mmol) Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzl 和 0. 306g(l. 31mmol)Boc-Asp,制得标题化合物 0. 827g,无色 固体，产率 48. 75 %，TLC(氯仿甲醇=20: 1，Rf = 0. 25)m. ρ :152· 5 153. 3 °C， [^^=-10.222(0=0.75,甲醇)。ESI-MS (m/z) :1315[M+Na]+·2) Asp-[Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBzl]2 (2s)的制备用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 142g(0. 88mmol) Boc-Asp-[Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzll2和5. 7ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物
1.045g，黄色油状物，产率 99. 15%。ESI-MS(m/z) :1294[M+H]+.3) Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Asp-[Tyr-Ser (Bzl) -Val-OBz 1 ]2 (3 s)的制备用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl 的方法，以 1. 045g(0. 88mmol) Asp-[Tyr-Ser (Bzl)-Val-OBzll2 和 0. 335g(1. 05mmol)Boc-3S_l，2，3，4_ 四氢-β -咔 啉-3-羧酸，制得标题化合物0.618g，无色固体，产率47. 25%，TLC(氯仿甲醇=20 1， Rf = 0. 24)m. ρ 117. 5 118. 2°C，[α]20= 6.190(01.4，甲醇)。ESI-MS(m/z) :1516[M+Na]+·
4) 3S-1，2，3，4_ 四氢-β-咔啉-3-酰基-Asp-(Tyr-Ser-Val)2 (4s)的制备用制备3S-1，2，3，4-四氢-β -咔啉 _3_ 酰基-Val-Tyr-Ser-Val 的方法，以 0. 556g(0. 60mmol)Boc-3S-l，2，3，4-四氢-β -咔啉-3-酰 基-Asp-[Tyr-Ser (OBzl)-Val-0Bzl]2 和 0. 167g Pd/C，制得标题化合物 0. 375g，绿色固体， 产率97. 61%，TLC (正丁醇水冰醋酸=4 1 0. 5，Rf = 0. 23)m. ρ 158. 6 159. 5°C， [α]==-25.628(00.75，甲醇)。HPLC 纯度95· 21% (甲醇水=73 27)。ESI_MS(m/z) 1033 [ΜΓ.试验例1本发明化合物口服给药的抗血栓试验1) 口服给药药品生理盐水(3ml/kg)、阿斯匹林(剂量为30mg/kg)的生理盐水溶液、本发明 的化合物(剂量为lOnmol/kg)的生理盐水溶液。2)大鼠手术与器械Wistar大鼠(雄性，190 220g)按UOOmg-kg—1剂量腹腔注射乌拉坦溶液进行麻 醉。麻醉大鼠仰卧位固定，分离右颈总动脉，于近心端夹动脉夹，近心端和远心端分别穿入 手术线，将远心端的手术线于皮毛用止血钳夹紧，准备在远心端插管。3)插管插管为硅烷化过的聚乙烯胶管，分三段，中段为聚乙烯胶管，长60. Omm,内径 3. 5mm ；两端为相同的聚乙烯管，管长100. Omm,内径1. Omm，外径2. Omm该管的一端拉成尖管 (用于插入大鼠颈动脉或静脉)，外径为1.0mm。将编好号的干净青霉素小瓶中分别装入6cm 长的黑色手术线，称重；然后取出丝线，按照编号放入准备好的插管的中段较粗的插管中。打开大鼠右侧动脉夹，用注射器通过尖管端将管中注满肝素生理盐水溶液 (50IU · kg—1)，然后将插管的动脉端插入大鼠右侧颈总动脉，将计算量的肝素缓缓注入大鼠 体内。夹闭大鼠右侧颈动脉夹，将插管的静脉端插入分离好的大鼠左侧颈静脉，打开动脉 夹，使血液开始循环。并同时开始计时。此过程中插管中央的粗管中的丝线上会因为血液 循环而产生血栓。4)血栓称重计时开始15分钟后，剪断动静脉插管，停止循环，用眼科镊小心取出丝线，在滤纸 上轻轻蘸掉血滴，放入事先称重好的青霉素小瓶中，精确称重并记录。计算出血栓的湿重。 每个药品重复10次给药。统计各组的血栓湿重(I 士SD)，并做t检验。5)结果经口服给药，本发明化合物都具有很好的抗血栓活性。结果见表1。表1化合物口服给药的体内抗血栓活性
17 η = 10 ；NS =生理盐水；a:与生理盐水相比，P < 0. 01 ；b 与母核1，2，3，4_四 氢-β-咔啉羧酸相比，P < 0. 05 ；C 与阳性药阿司匹林相比，P < 0. 05 ；试验例2本发明化合物1，2，3，4-四氢- β-咔啉_3_酰基-Asn-Tyr-Ser-Val (4d) 口服给药的量效关系1)给药溶液药品将4d 按 IOnmol · kg—1，Inmol · kg—1 和 0. Inmol · kg—1 剂量配置生理盐水溶 液，供口服给药。
2)大鼠手术与器械Wistar 大鼠(雄性，190 220g)按 IOnmol · kg-1, Inmol · kg-1 禾口 0. Inmol · kg-1 剂量口服，30min后按UOOmg-kg—1剂量腹腔注射乌拉坦溶液进行麻醉。麻醉大鼠仰卧位固 定，分离右颈总动脉，于近心端夹动脉夹，近心端和远心端分别穿入手术线，将远心端的手 术线于皮毛用止血钳夹紧，准备在远心端插管。3)插管插管为硅烷化过的聚乙烯胶管，分三段，中段为聚乙烯胶管，长60. Omm,内径 3. 5mm ；两端为相同的聚乙烯管，管长100. Omm,内径1. Omm，外径2. Omm该管的一端拉成尖管 (用于插入大鼠颈动脉或静脉)，外径为1. Omm0将编好号的干净青霉素小瓶中分别装入6cm 长的黑色手术线，称重；然后取出丝线，按照编号放入准备好的插管的中段较粗的插管中。打开大鼠右侧动脉夹，用注射器通过尖管端将管中注满肝素生理盐水溶液 (50IU · kg—1)，然后将插管的动脉端插入大鼠右侧颈总动脉，将计算量的肝素缓缓注入大鼠 体内。2)血栓称重计时开始15分钟后，剪断动静脉插管，停止循环，用眼科镊小心取出丝线，在滤纸 上轻轻蘸掉血滴，放入事先称重好的青霉素小瓶中，精确称重并记录。计算出血栓的湿重。 每个药品重复11次给药。统计各组的血栓湿重(X 土SD)，并做t检验。3)结果经口服给药，在 IOnmol · kg"1, Inmol · kg"1 和 0. Inmol · kg"1 剂量下，4d 剂量依赖 地发挥抗血栓作用。结果列入表2表2 口月艮4d的量效关系 η = 10 ；NS =生理盐水；a 与生理盐水相比，P < 0. 0510. Onmol 与 1. Onmol 相比，P < 0. 01。
权利要求
具有抗血栓活性的咔啉羧酸 四肽偶联物，其结构式为式I所示式I其中，所述的AA选自丙氨酸残基、甘氨酸残基、脯氨酸残基、谷氨酰胺残基、亮氨酸残基、苯丙氨酸残基、异亮氨酸残基、缬氨酸残基、酪氨酸残基、色氨酸残基、组氨酸残基、天冬酰胺残基、天冬氨酸残基、谷氨酸残基、丝氨酸残基、苏氨酸残基、甲硫氨酸残基、赖氨酸残基或精氨酸残基。F2009100851582C0000011.tif
2.一种合成权利要求1所述咔啉羧酸_四肽偶联物的方法，包括以下步骤(1)制备AA-Tyr-Ser-Val 四肽；(2)将保护的3S-1，2，3，4-四氢咔啉-3-羧酸的3位羧基与保护的 AA-Tyr-Ser-Val四肽的氨端偶联，再脱去保护，即得。
3.按照权利要求1所述的方法，其特征在于所述的AA选自丙氨酸残基、甘氨酸残基、 脯氨酸残基、谷氨酰胺残基、亮氨酸残基、苯丙氨酸残基、异亮氨酸残基、缬氨酸残基、酪氨 酸残基、色氨酸残基、组氨酸残基、天冬酰胺残基、天冬氨酸残基、谷氨酸残基、丝氨酸残基、 苏氨酸残基、甲硫氨酸残基、赖氨酸残基或精氨酸残基。
4.一种抗血栓的药物组合物，其特征在于，由治疗或预防上有效量的权利要求1所述 的咔啉羧酸_四肽偶联物和药学上可接受的载体或辅料所组成。
5.权利要求1所述的咔啉羧酸-四肽偶联物在制备抗血栓药物中的用途。
全文摘要
本发明公开了咔啉羧酸四肽偶联物及其合成方法和作为抗血栓剂的应用。本发明将具有抗血栓活性的3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸的3位羧基与AA-Tyr-Ser-Val四肽的氨端偶联，脱去保护，即得；其中，AA选自丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、亮氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、酪氨酸、色氨酸、组氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸或精氨酸残基。在大鼠血栓形成模型上的评价实验表明，本发明化合物具有优秀的抗血栓活性，可作为抗血栓剂应用。此外，本发明能改善3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸在极性溶剂和非极性溶剂中溶解度低所导致的低生物利用度缺陷。
文档编号C07K1/06GK101906142SQ200910085158
公开日2010年12月8日 申请日期2009年6月2日 优先权日2009年6月2日
发明者彭师奇, 赵明, 赵晔 申请人:首都医科大学