专利名称：一种检测马杜霉素的方法及其专用酶联免疫试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种检测马杜霉素的方法及其专用酶联免疫试剂盒。
背景技术：
马杜霉素(Melamine)，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，重要的氮杂环有机化 工原料。纯白色单斜棱晶体，无味。溶于热水，微溶于冷水，极微溶于热乙醇，不溶于醚、苯 和四氯化碳，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等。在一般情况下较稳定，但在 高温下可能会分解放出氰化物。由于马杜霉素的分子式中含氮量为66%左右，而蛋白质的平均含氮量为16%左 右，因此，常被一些不法商人用作食品添加剂，以提升食品检测中的蛋白质含量指标，因此 马杜霉素被俗称为“蛋白精”。虽然，目前广泛认为马杜霉素毒性比较低微，大鼠口服的半 数致死量大于3g/kg体重，但长期摄入仍不容忽视，会造成生殖、泌尿系统的损害，膀胱、肾 部结石，并可进一步诱发膀胱癌。1994年国际化学品安全规划署和欧洲联盟委员会合编的 《国际化学品安全手册》第三卷和国际化学品安全卡片说明长期或反复大量摄入马杜霉素 可能对肾与膀胱产生影响，导致产生结石。因此，需要灵敏、准确、快速的检测方法。目前检测马杜霉素含量的化学方法有高效液相色谱法和液相色谱-串联质谱法， 由于复杂的仪器设备和繁琐的过程，不适合现场监控和大量样本筛查。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种可用作马杜霉素半抗原的化合物。本发明所提供的马杜霉素半抗原化合物，其结构式如式I所示
权利要求
1.一种马杜霉素单克隆抗体，是由保藏编号为CGMCC No. 3391的马杜霉素单克隆抗体 杂交瘤细胞株MAD分泌产生的。
2.保藏编号为CGMCCNo. 3391的马杜霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株MAD。
3.一种化合物，其结构式如式I所示
4.权利要求3所示化合物与载体蛋白的偶联物；所述载体蛋白为鼠血清蛋白、甲状腺 蛋白、牛血清白蛋白、兔血清白蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白或血蓝蛋白。
5.权利要求3所述化合物和/或权利要求4所述化合物与载体蛋白的偶联物在制备马 杜霉素单克隆抗体中的应用。
6.权利要求3中所述化合物、权利要求4中所述偶联物和/或权利要求1中所述马杜 霉素单克隆抗体在制备检测马杜霉素的酶联免疫试剂盒中的应用。
7.—种检测马杜霉素的酶联免疫试剂盒，为下述1)、2)、；3)或4)中任一所述酶联免疫 试剂盒1)酶联免疫试剂盒中包括权利要求4中所述偶联物、权利要求1中所述马杜霉素单克 隆抗体和酶标记抗抗体；其中，所述偶联物作为包被原；2)酶联免疫试剂盒中包括权利要求3中所述化合物的酶标记物、权利要求1中所述马 杜霉素单克隆抗体和抗抗体；其中，所述抗抗体作为包被原；3)酶联免疫试剂盒中包括权利要求3中所述化合物的酶标记物、权利要求1中所述马 杜霉素单克隆抗体；其中，所述马杜霉素单克隆抗体作为包被原；4)酶联免疫试剂盒中包括权利要求4中所述偶联物、权利要求1中所述马杜霉素单克 隆抗体的酶标记物；其中，所述偶联物作为包被原。
8.一种检测样品中马杜霉素的方法，包括如下步骤1)将待测样品用提取剂进行提取，得到提取溶液，即为待测样本溶液；2)用权利要求7所述试剂盒对所述待测样本溶液进行检测；所述提取剂为甲醇与氯化钠的混合溶液；所述待测样品为动物肝脏或动物肌肉。
9.一种制备权利要求3中所述化合物的方法，包括如下步骤将每IOOmg马杜霉素胺， 溶解于ImL 二噁烷中；然后加入70 μ L无水三正丁胺，4°C冷却，并搅拌15min ；加入15 μ L 重蒸的氯甲酸异丁酯，4°C搅拌30min，得到溶液I ；称取30mg对氨基苯甲酸溶于水中，调pH 至9. 0，得到溶液II ；将溶液I逐滴加入到溶液II中，并于4°C搅拌4小时，得到权利要求3 中所述化合物。
10. 一种制备权利要求4中所述化合物与载体蛋白的偶联物的方法，包括如下步骤将 IOOmg马杜霉素胺，溶解于ImL 二噁烷中；然后加入70 μ L无水三正丁胺，4°C冷却，并搅拌 15min ；加入15 μ L重蒸的氯甲酸异丁酯，4°C搅拌30min，得到溶液I ；称取30mg对氨基苯甲 酸溶于水中，调PH至9. 0，得到溶液II ；将溶液I逐滴加入到溶液II中，得到溶液III ；称取50mg 1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和25mg N-羟基硫代琥珀酰 亚胺加入到所述溶液III中，搅拌混勻，25°C反应12小时，得到溶液IV ；称取载体蛋白50mg 溶解于3mL碳酸溶液中，逐滴加入到溶液IV中，25°C继续搅拌4h ；透析，得到权利要求4中 所述化合物与载体蛋白的偶联物。
全文摘要
本发明公开了一种检测马杜霉素的方法及其专用酶联免疫试剂盒。该酶联免疫试剂盒，包括马杜霉素单克隆抗体。该马杜霉素单克隆抗体，是由保藏编号为CGMCCNo.3391的马杜霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株MAD分泌产生的。本发明的酶联免疫试剂盒主要采用间接竞争ELISA方法定性或定量检测动物肌肉和肝脏中马杜霉素的含量。本发明试剂盒及检测方法对样品的前处理要求低，样品前处理过程简单，能同时快速检测大批量样品；采用高特异性的马杜霉素单克隆抗体，检验方法方便易行，具有特异性高、灵敏度高、精确度高、准确度高等特点。
文档编号C07K14/47GK102079789SQ20091024130
公开日2011年6月1日 申请日期2009年11月27日 优先权日2009年11月27日
发明者史为民, 吴小平, 徐飞, 朱奎, 江海洋, 潘净如, 王奇昌, 王战辉, 王进 申请人:北京维德维康生物技术有限公司