一种从杭白芷提取香豆素的复合萃取方法

专利名称：一种从杭白芷提取香豆素的复合萃取方法
技术领域：
本发明属天然产物的提取与加工方法，主要涉及一种从中药杭白芷提取香豆素的 复合萃取方法。
背景技术：
杭白芷是浙江的地道药材之一，最早记载于《神农本草经》。杭白芷性温味辛，具有 散风除湿、通窍止痛、消肿排脓之功效，临床主要用于治疗感冒头痛、眉棱骨痛、鼻塞、牙痛、 白带和疮疡肿痛等。杭白芷的主要成分为挥发油和香豆素等物质。根据大量的药学试验，香 豆素类化合物是杭白芷的主要药效成分。近年来，香豆素作为自然界很重要的一大类天然 化合物，其抗HIV、抗癌、降压、抗心律失常、抗骨质疏松、镇痛、平喘及抗菌多方面生物学活 性已经引起药学界的高度重视。在国外，从天然植物中发现香豆素类化合物，完善香豆素类 化合物提取分离工艺，寻找有效的先导化合物，合成并筛选出高效低毒的香豆素类衍生物， 已成为药物研发工作的重要方向之一。 目前，工业应用的香豆素的提取方法仍然是传统的溶剂提取。专利 CN200510013353. 6公开了一种白芷油树脂的超临界萃取工艺方法，其优点是避免有机溶剂 残留。由于杭白芷药材中香豆素类化合物含量很低，仅为0. 左右，单一的提取方法往 往难以达到令人满意的分离效果，因此，各种复合技术越来越受重视。专利CN02114957. 7 开发了一种应用细胞膜色谱筛选和超临界提取从白芷获得香豆素有效部位的方法。专利 CN200710079571. 9公开另一种白芷香豆素提取方法，将白芷以乙醇回流提取，提取液经滤 过、浓缩、醇沉后，用石油醚和氯仿进行萃取。专利CN200710019809. 9采用溶剂提取和大孔 树脂结合工艺制备白芷的香豆素提取物。专利CN01138873. 0提出一种从白芷中提取欧前 胡素的方法，用乙醇提取白芷，然后用氯仿对提取液进行萃取，再通过硅胶柱层析和反相高 效液相色谱法在制备液相上制备欧前胡素。专利CN200810200253. 8公开了一种从甲醇提 取白芷，再用大孔树脂和高效制备液相色谱分离纯化其中的欧前胡素和白当归素。上述工 艺技术各有特长，但达到存在工艺复杂和过生产成本高的问题，难以工业化的应用。

发明内容
本发明的目的是为了克服单一的超临界萃取杭白芷的局限性，提出一种从杭白芷 提取香豆素的复合萃取方法。本发明以杭白芷为原料，通过超临界CO2萃取与液液溶剂萃 取相结合的方式，充分利用香豆素和杂质在不同溶剂中溶解特性的差异，获得纯度较高的 提取物浸膏，其中香豆素的含量在40%以上。该浸膏既可用于药品开发，也能通过进一步精 制工艺，获得各种单一香豆素类化合物。本发明的方法通过以下步骤实现1.将杭白芷粉碎成过30目筛的粉末后，放入超临界萃取设备的萃取器中，设定如 下工艺条件萃取釜压力为15 35MPa，其中以25 30MPa为较好；萃取温度为35 60°C， 其中以45 50°C为较好；分离压力为4 12MPa，分离温度为35 60°C，萃取时间根据药材投入量和萃取剂的流量而定，一般为2 4小时。萃取过程间歇地从分离釜中收集粗提 物；超临界所用的所用的提取剂是CO2，其中可以添加一些共溶剂，如乙醇或丙酮等，但以纯 CO2为较好；2.将所得粗提物溶解在溶剂石油醚中，粗提物与石油醚的重量体积比为1 10 30 (g/mL)，然后，用适量水对石油醚层进行溶剂萃取2 4次，萃取时间为0. 25 2. 5h，石 油醚与水的体积比为1 2. 5 5，弃去水层，用60%乙醇水溶液对石油醚层萃取3 5次， 萃取时间为1 1.5h，石油醚与60%乙醇水溶液的体积比为1 2 5;3.收集所得乙醇萃取液，经分离、减压浓缩后，可得纯度较高的香豆素浸膏。步骤(2)每克超临界粗提取物用10 30mL石油醚溶解。 本发明的特点在于，利用香豆素和杂质在所选择的溶剂中溶解度的差异，设计出 一条合理的提取与分离香豆素的工艺路线。超临界萃取将药材中高分子和极性组分留在萃 余物中；水溶剂萃取的目的是进一步除去一些极性化合物；乙醇溶液的萃取作用是分离其 中的非极性杂质。同时，新工艺的操作温度低，可以避免有效成分在提取过程中分解。与现 行的提取、分离香豆素的技术相比，本发明的技术优势是，操作过程简单，生产成本低廉，易 于工业化应用。


图1是本发明通过超临界提取和液液萃取复合技术制备含香豆素的浸膏的工艺 流程图。图2是粗提物和最终浸膏的HPLC图，其中，峰1是欧前胡素，峰2是异欧前胡素。图3是粗提物和最终浸膏的HPLC图，其中，峰1是欧前胡素，峰2是异欧前胡素。
具体实施例方式本发明结合附图和实施例作进一步的说明。说明杭白芷香豆素含量分析方法本发明用欧前胡素和异欧前胡素的含量之和表示杭白芷药材及其提取物中香豆 素的含量。具体定量分析方法如下①仪器与试剂仪器=Agilent 1200高效液相色谱仪，Agilent色谱工作站。对照品欧前胡素(由中国药品生物制品检定所提供，生产批号110826-200712)； 异欧前胡素(由中国药品生物制品检定所提供，生产批号110827-200407)。②色谱条件本发明采用的是甲醇-水梯度洗脱。其梯度洗脱过程为0-5min:80%甲醇； 5-7min 80% -68% 乙醇；7_12min :68% 甲醇。检测波长为 249nm。③对照品溶液的制备精密称取欧前胡素对照品5. 43mg，异欧前胡素6. 09mg，分别置于25mL容量瓶中， 甲醇稀释至刻度，摇勻。再分别精确取2mL，置IOmL容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇勻，即得 欧前胡素43. 44μ g/mL，异欧前胡素48. 72 μ g/mL的混合对照品溶液。④标准曲线的制作
取上述混合对照品溶液，按色谱条件以不同体积5 μ L-30 μ L进样，以进样量 (UL)为横坐标，峰面积为纵坐标回归，其方程为欧前胡素y = 157. 29x-6. 3333 (r = 1)， 测定结果在0. 2172 μ g-1. 3032 μ g内线性关系良好；异欧前胡素y = 152. 52χ-30. 833 (r = 1)，测定结果在0. 2436 μ g-1. 4616 μ g内线性关系良好。⑤供试品溶液的制备取杭白芷药材或提取物约0. 5g，精密称定，置50mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度 摇勻，再精密移取1. OmL至25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇勻，即得。⑥样品测定取供试品溶液进行HPLC测定，进样量为10 μ L，测定欧前胡素和异欧前胡素的峰 面积，采用外标法计算样品中两者的含量。
实施例1 称取Ikg粉碎至30目，香豆素含量为0. 的杭白芷原料，放入5升超临界萃取器 中。设定萃取温度和压力分别为40°C和30MPa，分离温度和压力分别为35°C和5MPa，用CO2 萃取2小时后，得5. 142g提取物。按重量体积比1 10计，加入52mL石油醚(沸程60 90°C，下同)，使提取物完全溶解。然后用3倍石油醚体积的水萃取2次，弃去水层。石油醚 层再用与其体积比为1 2. 5的60%乙醇萃取3次，收集乙醇溶液，减压浓缩除去溶剂，得 产物0.232g。经液相色谱分析，所得产物含有39. 72%香豆素类有效成分。其中，欧前胡素 的含量为23. 89%，异欧前胡素的含量为15. 84%。实施例2 称取Ikg杭白芷原料粉碎至30目，放入5升萃取器中，萃取温度和压力分别为 50°C和25MPa，分离温度和压力分别为35°C和6MPa，萃取2小时后，得5. 156g提取产物。该 产物用52mL石油醚溶解，再用130mL水萃取3次，弃去水相。石油醚相用2. 5倍体积的60% 乙醇萃取4次。收集乙醇溶剂，减压浓缩至干，得产物0. 228g，香豆素总含量为40. 57%。其 中，欧前胡素的含量为24. 68%，异欧前胡素的含量为15. 89%实施例3 称取Ikg杭白芷原料，粉碎至30目，放入5升萃取器中，同时，加入乙醇300mL，萃 取温度和压力分别为50°C和25MPa，分离温度和压力分别为35°C和6MPa，萃取2小时后，收 集提取液，除去乙醇后得粗体物5. 117g。按重量体积比1 15加入77毫升石油醚溶解。用 与石油醚体积比为1 2. 5的水萃取2次，弃去水层，石油醚层再用与其体积比为1 2.5 的60%乙醇萃取4次，减压浓缩乙醇层至干，得产物0. 232g，纯度40. 0%。其中，欧前胡素 的含量为25. 6%，异欧前胡素的含量为14. 4%实施例4 称取Ikg杭白芷原料，粉碎至30目，放入5升萃取器中，萃取温度和压力分别为 50°C和25MPa，分离温度和压力分别为40°C和5MPa，萃取2小时后，得5. 845g粗体物。加 入88毫升石油醚溶解。用与石油醚体积比为1 2. 5的水萃取3次，弃去水层，石油醚层 再用与其体积比为1 2.5的60%乙醇萃取5次，减压浓缩乙醇层至干，得产物0.260g，香 豆素总含量为41. 68%。其中，欧前胡素的含量为27. 45%，异欧前胡素的含量为14. 23%。
权利要求
一种从杭白芷提取香豆素的复合萃取方法，通过以下步骤实现(1)将杭白芷粉碎成过30目筛的粉末后，放入超临界CO2萃取器中，萃取釜压力为15～35MPa，萃取温度为35～60℃，分离压力为4～12MPa，分离温度为35～60℃，萃取时间为2～4小时，萃取过程间歇地从分离釜中收集粗提物；(2)将所得粗提物溶解在石油醚溶剂中，粗提物与石油醚的重量体积比为1∶10～30，然后用水对石油醚层进行溶剂萃取2～4次，萃取时间为0.25～2.5小时，石油醚与水的体积比为1∶2.5～5，弃去水层，用60％乙醇水溶液对石油醚层萃取3～5次，萃取时间为1～1.5小时，得乙醇萃取液，石油醚与60％乙醇水溶液的体积比为1∶2～5；(3)收集乙醇萃取液，经分离、减压浓缩后，可得香豆素浸膏。
2.根据权利要求1所述的一种从杭白芷提取香豆素的复合萃取方法，其特征在于，步 骤(1)超临界所用的提取剂是C02，或添加乙醇或丙酮共溶剂。
3.根据权利要求1所述的一种从杭白芷提取香豆素的复合萃取方法，其特征在于，步 骤(1)萃取釜压力为25 30Mpa。
4.根据权利要求1所述的一种从杭白芷提取香豆素的复合萃取方法，其特征在于，步 骤⑴萃取温度为45 50°C。
全文摘要
本发明提供一种从杭白芷提取香豆素的复合萃取方法，以杭白芷为原料，通过超临界CO2萃取与液液溶剂萃取相结合的方式，充分利用香豆素和杂质在不同溶剂中溶解特性的差异，获得纯度较高的提取物浸膏，其中香豆素的含量在40％以上。本发明方法克服单一的超临界萃取杭白芷的局限性，操作温度低，可以避免有效成分在提取过程中分解。本发明操作过程简单，生产成本低廉，易于工业化应用。获得的浸膏既可用于药品开发，也能通过进一步精制工艺，获得各种单一香豆素类化合物。
文档编号C07D311/16GK101863896SQ20101020647
公开日2010年10月20日 申请日期2010年6月22日 优先权日2010年6月22日
发明者余立雁, 刘雪松, 梅彦红, 王龙虎, 陈勇 申请人:浙江大学