一种甘草酸的制备方法
【专利摘要】本发明公开一种高纯度甘草酸的制备方法，采用甘草为原料，经超声波提取后，取上清液，用盐酸调节pH，离心取沉淀，沉淀用去离子水洗2-3次后置于真空干燥箱中干燥，得甘草酸粗品。称取一定量的甘草酸粗品，加水，用浓氨水调节至pH8-9，待完全溶解后，加入有机溶剂萃取，两相分层清晰后，取水层，再通过半制备型高效液相色谱仪进一步纯化后得到高纯度甘草酸。采用本发明制备甘草酸，操作简单，实验步骤少，污染小，成本低，周期短，纯度可达99.5%以上。
【专利说明】一种甘草酸的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物医药【技术领域】，具体涉及一种高纯度甘草酸的制备方法。
【背景技术】
[0002]甘草酸(glycyrrhizic acid, GA)又称甘草甜素,是常用中药甘草的主要有效成分，味极甜，具有抗胃及十二指肠溃疡、抗肝炎、降血脂等广泛的活性，近年来还发现甘草酸具有抗艾滋病毒和免疫促进等作用，在医学、食品、化工等行业均有用途。
[0003]我国甘草资源丰富，是甘草出口大国，然而目前多限于甘草原料及粗制品，价值较低，且很难打入国际市场，其药效也没有得到众多国家的承认。目前甘草酸作为甜味剂而被广泛应用。而高纯度的甘草酸价格十分昂贵。因此，找到一条适合工业生产的提取纯化甘草酸的途径很有现实意义。
[0004]目前，我国甘草酸工业生产大多仍沿用传统的提取和精制方法，例如:陕西慧科植物开发有限公司采用水提法得到甘草水提液，再用乙醇重结晶得到纯度为96%的甘草酸。而大孔吸附树脂和聚酞胺法等较先进的方法函待工业化。因此，寻找提取纯化甘草酸的最佳工艺条件，工艺流程成为甘草酸利用要解决的首要问题。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于针对目前在制备甘草酸过程中所存在的工艺复杂以及纯度不高的问题，提供一种制备高纯度甘草酸的新方法。
[0006]为实现上述目 的，本发明采取的技术方案为:
一种甘草酸的制备方法，以甘草为原料，采用半制备型高效液相色谱法制备高纯度甘草酸，它包括以下步骤:
(1)将甘草以体积比1:10与含0.5%氨水的70%乙醇水溶液混合后，超声波萃取f 2h后，离心取上清液；
(2)将上清液用盐酸调pH至3~4，酸沉过夜，离心取沉淀，用去离子水洗2-3次后，至于真空干燥箱中干燥，得甘草酸粗品；
(3)取甘草酸粗品粉末，加水溶解并用氨水调至pH8-9，待完全溶解后，加入等体积的有机溶剂萃取2-3次后，取水层；
(4)将水层pH调回至5，采用C18反相硅胶色谱柱，甲醇和水作为流动相，梯度洗脱，经过半制备型液相色谱仪进行最后一步的分离纯化后，收集到的甘草酸的纯度高于99.5%。
[0007]本发明的有益效果是可选用甘草或者甘草粗提物来制备甘草酸，过程简单、易控制，工艺技术简化，生产成本低，该半制备的色谱条件可同比放大，适用于工业级生物医药用液相制备色谱装置，以实现高纯度甘草酸的工业化生产。高效液相色谱测定中，总杂质峰小于0.45%，单一杂质峰不超过0.2%。此产品完全符合欧洲药典标准。
【专利附图】
【附图说明】[0008]图1是甘草酸粗品液相色谱法测定图谱，图2是高纯度甘草酸液相色谱法测定图谱。。
【具体实施方式】
[0009]实施例1
1.取Ikg已粉碎后的甘草粉末与10倍体积含0.5%氨水的70%乙醇水溶液混合后，超声波萃取Ih后，离心取上清液；
2.用浓盐酸调节上清液pH至3~4，酸沉过夜，离心取沉淀，用去离子水洗2-3次后，至于真空干燥箱中干燥，得甘草酸粗品； 3.称取甘早酸粗品0.5g,加入50ml水中，用氣水调pH至8后,待甘早Ife粗品完全溶解后，加入等体积的乙酸乙酯萃取三次，取水层；
4.将水层pH调回至5，采用半制备型液相色谱仪进行最后一步的分离纯化，色谱柱尺寸为Φ10Χ250πιπι，C18反相硅胶填料为江苏汉邦科技有限公司产品，粒径为10um，上样量10mg，流动相为纯甲醇-水溶液，梯度度洗脱条件为，(T25min，甲醇65%~80% ;25~50min，甲醇80%~80%，流速4ml/min，柱温为20°C，紫外检测波长为230nm，收集保留时间在15~18min的馏分。经HPLC分析纯度≥99.6%。
[0010]实施例2
1.取Ikg已粉碎后的甘草粉末与10倍体积含0.5%氨水的70%乙醇水溶液混合后，超声波萃取1.5h后，离心取上清液；
2.用浓盐酸调节上清液pH至3~4，酸沉过夜，离心取沉淀，用去离子水洗2-3次后，至于真空干燥箱中干燥，得甘草酸粗品；
3.称取甘早酸粗品0.5g,加入50ml水中，用氣水调pH至9后,待甘早Ife粗品完全溶解后，加入等体积的丙酮萃取三次，取水层；
4.将水层pH调回至5，采用半制备型液相色谱仪进行最后一步的分离纯化，色谱柱尺寸为Φ10Χ250πιπι，C18反相硅胶填料为江苏汉邦科技有限公司产品，粒径为5um，上样量20mg，流动相为纯甲醇-水溶液，梯度度洗脱条件为，(T20min，甲醇60%~75% ;2(T35min，甲醇75%~85%，流速4ml/min，柱温为25 °C，紫外检测波长为230nm，收集保留时间在18~23.5min的馏分。经HPLC分析纯度≥99.5%。
[0011]实施例3
1.称取甘草粗提物0.5g，加入50ml水中，用氨水调pH至8后，若有未溶解物，离心，取
上清液；
2.加入等体积的氯仿于上清液中，萃取三次，取水层；
4.将水层pH调回至5，采用半制备型液相色谱仪进行最后一步的分离纯化，色谱柱尺寸为Φ10Χ250πιπι，C18反相硅胶填料为江苏汉邦科技有限公司产品，粒径为10um，上样量15mg，流动相为纯甲醇-水溶液，梯度度洗脱条件为，(T25min，甲醇65%~80% ;25~50min，甲醇80%~80%，流速4ml/min，柱温为30°C，紫外检测波长为230nm，收集保留时间在14.5~19min的馏分，经HPLC分析纯度≥99.5%。
【权利要求】
1.一种甘草酸的制备方法，其特征在于包括以下步骤: (1)将甘草和含0.5%氨水的70%乙醇水溶液混合后，超声波萃取l~2h，离心取上清液； (2)将上清液用盐酸调pH至3~4，酸沉过夜，离心取沉淀，用去离子水洗2-3次后，置于真空干燥箱中干燥，得甘草酸粗品； (3)将甘草酸粗品用水溶解并用氨水调pH至8-9，经有机溶剂萃取2-3次后，取水层； (4)将水层pH调回至5，采用甲醇和水做流动相，使用半制备型高效液相色谱仪制备得到高纯度甘草酸。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是:所述步骤(3)中所述的有机溶剂优选乙酸乙酯、丙酮或氯仿。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征是:所述步骤(4)中半制备型高效液相色谱仪采用固定相为C18的反相硅胶填料，色谱柱规格:内径l(T30mm、长度15(T300mm，填料粒径为5~10 μ m，流动相以梯度洗脱的方式洗脱甘草酸样品。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征是:流动相甲醇与水的体积比(V/V)为3:2~4:1，柱温 20~35 °C，流速 4~30ml/min。
【文档编号】C07H15/256GK103588831SQ201210286476
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2012年8月14日 优先权日:2012年8月14日
【发明者】居延娟, 李枝玲, 王冰冰, 刘大伟, 刘根水 申请人:江苏汉邦科技有限公司