Bace1的肽抑制剂的制作方法
【专利摘要】本发明提供以非经典方式结合活性位点的BACE1的肽抑制剂，以及使用其的方法。
【专利说明】BACE1的肽抑制剂
[0001]序列表
[0002]本申请包含序列表，其已经通过EFS-Web以ASCII格式提交，并且通过引用完全结合在本文中。所述ASCII副本，于2012年9月27日生成，命名为GNE0394P.txt，大小为52，415 字节。
发明领域
[0003]本发明一般涉及作为BACEl拮抗剂的肽，例如，其抑制或减少BACEl活性，并且涉及包含所述肽的组合物。另外的实施方案包括治疗多种神经疾病或病症的方法，以及减少患者中的Aβ多肽的方法。
[0004]背景
[0005]淀粉状变性(Amyloidosis)不是一种单一的疾病实体,而是多样化组的进行性疾病过程，其特征在于称为淀粉状蛋白的蜡状、淀粉样蛋白的细胞外组织沉积，淀粉状蛋白积聚在一个或多个器官或机体系统中。随着淀粉状蛋白沉积的积聚，它们开始干扰所述器官或机体系统的正常的功能。存在至少15种不同类型的淀粉状变性。主要形式为没有已知前例的原发性淀粉状变性、伴随一些其他状况的继发性淀粉状变性和遗传性淀粉状变性。
[0006]多种衰老疾病是基 于淀粉状蛋白样蛋白或与淀粉状蛋白样蛋白相关，并且部分特征在于淀粉状蛋白或促进发病机制以及疾病进展的淀粉状蛋白样物质的细胞外沉积的积聚。这些疾病包括，但不限于，神经病症，诸如阿尔茨海默病(Alzheimer' s Disease,AD),雷维小体痴呆(Lewy body dementia);唐氏综合征(Down’ s syndrome);遗传性脑出血伴淀粉状变性(hereditary cerebral hemorrhage with amyloidosis)(荷兰型)；关岛帕金森-痴呆并发症(Guam Parkinson-Dementia complex)。基于或与淀粉状蛋白样蛋白相关的其他疾病是进展性核上性麻痹(progressive supranuclear palsy)、多发性硬化(multiple sclerosis)、克-雅病(Creutzfeld Jacob disease)、帕金森病、HIV 相关的痴呆(HIV-related dementia)、ALS (肌萎缩性脊髓侧索硬化症(amyotropic lateralsclerosis))、成年型糖尿病(Adult Onset Diabetes)、老年性心脏淀粉状变性(senilecardiac amyloidosis)、内分泌肿瘤以及其他,包括黄斑变性(macular degeneration)。
[0007]多肽β-淀粉状蛋白(Αβ)可能在阿尔茨海默病(AD)的发病机制中起重要作用。Vassar 等，J.Neurosc1.(神经科学杂志)29:12787-12794(2009)。Αβ 多肽在 CNS 中的积聚导致突触功能障碍、轴突变性和神经元死亡。AD患者的脑表现出显著的神经病理学损伤的特征性病理学，诸如神经原纤维缠结(NFTs)和富含淀粉状蛋白的老年斑。淀粉状蛋白斑的主要成分是Αβ。这些损伤与中枢神经系统(CNS)神经元群体的大量损失相关，并且其进展伴有与AD相关的临床痴呆。
[0008]Αβ是前体蛋白β淀粉状蛋白前体蛋白(β-APP或APP)的蛋白水解产物。APP是I型跨膜蛋白，其相继被两种蛋白酶，即和Y-分泌酶切割。β-分泌酶，被称为β-位淀粉状蛋白前体蛋白切割酶 I ( β-site amyloid precursor protein cleaving enzyme I,BACE1)，其首先切割APP以暴露Αβ的N-端，由此产生称为C99的膜结合的片段。Vassar等，J.Neurosc1.(神经科学杂志),29:12787-12794(2009)和 UniProtKB/Swiss-Prot EntryP56817(BACE1_HUMAN)。然后Y -分泌酶能够切割C99产生成熟的A β多肽。产生的Αβ具有长度为38个氨基酸至43个氨基酸范围内的异源C端。42个氨基酸形式的A β (Α β 42)是原纤维形式的A β，并且在患有唐氏综合症的患者中过量产生，并且已经提示其在AD的早期发病机制中起作用。Vassar等，J.Neurosc1.(神经科学杂志)29:12787-12794 (2009)。因此，由于对其的抑制可能抑制A β产生，BACEl已经成为治疗靶标。
[0009]事实上，BACEl敲除小鼠(BACE1+)不产生脑A β，这证实了 BACEl是负责脑中产生Αβ的主要的酶(如果不是唯一的酶)。Roberds等，Human Mol.Genetics (人分子遗传学)10:1317-1324(2001)。此外，AD模型中的BACEl敲除小鼠不形成淀粉状蛋白斑；认知缺陷和胆碱功能性功能障碍也得到恢复。McConlogue等，J.Biol.Chem.(生物化学杂志)282:26326-26334(2007) ;0hno 等，Neuron (神经元)41:27-33 (2004) JLaird 等，J.Neurosc1.(神经科学杂志)25:11693-11709 (2005)。另外，BACEl杂合敲除小鼠具有减少的斑形成，这表明斑减少不需要BACEl活性的完全抑制。McConlogue等，J.Biol.Chem.(生物化学杂志)282:26326-26334(2007)。
[0010]BACE-1 (Hussain, 1.等(1999)Mol Cell Neurosci (分子细胞神经科学)14:419-27 ;Sinha，S.等(1999)Nature (自然)402:537-40 ；Vassar, R.等(1999) Science (科学)286:735-41 ；Yan,R.等(1999)Nature (自然)402:533-7 ；Lin,X.等(2000)Proc NatlAcad Sci USA(美国国家科学院学报)97 =1456-60)及其与底物样拟肽抑制剂0M99-2的复合的结构(Hong, L.等(2000) Science (科学)290:150-3)的发现开启了制药研发的新时代，促进多种类型的BACEl抑制剂的研发。第一波抑制剂是小分子拟肽(Luo，X.等IntJ Clin Exp Pathol(临床实验病理学杂志)3:618-28)，其尚待显示临床成功性，部分是由于穿过血脑屏障(BBB)的挑战。随后，多种基于片段和非肽方法已经产生了更适于穿过BBB递送至中枢神经系统(CNS)的化合物(Silvestri，R.(2009)Med Res Rev(医药研究综述)29:295-338 ；Luo,X.等(20 10) Int J Clin Exp Pathol (国际临床实验病理学杂志)3 ；618-28) ο最近，已经出现了抗体的研发(Pul, R.等(2011)Expert Opin Biol Ther (生物治疗的专家观点)11:343-57)。第一类靶向A β并且将其从循环中清除，作用为调节CNS中Αβ水平的接收池(sink)。最新一类抗体通过结合在外部靶向BACEl本身并且作用为非竞争性抑制剂(Atwal, J.K.等(2011)Sci Transl Med3:84ra43 ；Zhou, L.等(2010) J.Biol.Chem.(生物化学杂志)286:8677-8687)。在小鼠和食蟹猴中，抗-BACEl不仅减少外周A β水平，而且还令人惊讶地减少在脑脊液(CSF)中的Αβ水平。进一步改造该抗体通过双特异性抗-BACEl抗-转铁蛋白抗体结合受体介导的穿过BBB的胞转作用已经导致CNS中A β更有效的药效学减少(Yu, Y.J.等(2011) Sci TranslMead3:84ra44)。
[0011]具有有效的BACEl治疗抑制剂减少患有神经疾病和病症如AD的患者中的Αβ产生将是有益的。本文提供的本发明涉及这样的抑制剂，包括其在多种方法中的应用。
[0012]本文引用的所有参考文献，包括专利申请和公布，通过引用完全结合在本文中。
[0013]发明概述
[0014]本发明提供BACEl的肽和多肽抑制剂以及使用其的方法。具体地，所述肽或多肽抑制或减少BACEl活性。
[0015]如下文所述，使用展示在噬菌体颗粒上的首次用于实验的肽文库首先选择结合剂，然后筛选抑制剂。这导致以非经典方式结合在活性位点的有效种类的肽抑制剂的发现。这些肽在两种酶测定和基于细胞的测定中抑制BACE1，导致Αβ肽的减少。该肽本身和与BA CE I复合的结构显示出一种之前在蛋白水解酶的活性位点中没有观察到的新型结合方式。
[0016]在一个实施方案中，本发明提供一种特异性结合BACEl的分离的多肽，其中所述多肽包含氨基酸序列 Xl-S-X2-Y-C-R-L-X3-X4-X5-X6-C-(X7)n(SEQ ID NO:6)，其中 Xl 是谷氨酸或天冬氨酸；其中X2是甲硫氨酸、亮氨酸、异亮氨酸或缬氨酸；其中X3是亮氨酸或甲硫氨酸；其中X4是甘氨酸、丝氨酸或丙氨酸；其中X5是亮氨酸、异亮氨酸或缬氨酸；其中X6是甘氨酸或丙氨酸；其中X7是甘氨酸、天冬氨酸或谷氨酸，并且其中η是O或I。
[0017]在不同实施方案中，N是O (SEQ ID NO:7)。在其他实施方案中，η是I (SEQ ID NO:8)。
[0018]在一个实施方案中，Χ3是亮氨酸(SEQ ID NO:9)。在另一个实施方案中，Χ4是甘氨酸(SEQ ID Ν0:10)。在另一个实施方案中，Χ5是异亮氨酸(SEQ ID Ν0:11)。在另一个实施方案中，Χ6是甘氨酸(SEQ ID NO: 12)。在另一个实施方案中，Χ7是甘氨酸(SEQ ID NO:13)。
[0019]在一个实施方案中，本发明提供包含选自由下列各项组成的组的氨基酸序列的分离的多肽:KEESIYCRLMGLGCG (SEQ ID NO:14) (BACEO18)，NELSPYCRLMGLGCD (SEQ ID NO:15)(BACEO19)，NEESMYCRLLGIGCG(SEQ ID NO:16) (BACE20)和 PEESLYCRLLALGCG(SEQ ID NO:17) (BACE021)。在一个实施方案中，所述多肽包含NEESMYCRLLGIGCG (SEQ ID NO:16)的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述多肽包含KEESIYCRLMGLGCG (SEQ ID NO: 14)的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述多肽包含NELSPYCRLMGLGCD (SEQ ID NO: 15)的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述多肽包含PEESLYCRLLALGCG (SEQ ID NO: 17)的氨基酸序列。
[0020]在一个实施方案中，本发明提供基本上由选自由下列各项组成的氨基酸序列组成或由选自由下列各项组成的氨基酸序列组成的分离的多肽:KEESIYCRLMGLGCG(SEQID NO:14)，NELSPYCRLMGLGCD(SEQ ID NO: 15)，NEESMYCRLLGIGCG(SEQ ID NO:
16)和PEESLYCRLLALGCG(SEQ ID NO: 17)。在一个实施方案中，所述多肽基本上由NEESMYCRLLGIGCG (SEQ ID NO:16)的氨基酸序列组成或者由其组成。在另一个实施方案中，所述多肽基本上由KEESIYCRLMGLGCG (SEQ ID NO:14)的氨基酸序列组成或者由其组成。在另一个实施方案中，所述多肽基本上由NELSPYCRLMGLGCD (SEQ ID NO:15)的氨基酸序列组成或者由其组成。在另一个实施方案中，所述多肽基本上由PEESLYCRLLALGCG (SEQ ID NO:
17)的氨基酸序列组成或者由其组成。
[0021]在一个实施方案中，本发明提供特异性结合BACEl的分离的多肽，其中所述多肽包含氨基酸序列SMYCRLLGIGCG (SEQ ID NO:18) (BACE31)。在一个实施方案中，所述多肽包含氨基酸序列ESMYCRLLGIGCG (SEQ ID NO:19) (BACE030)。在另一个实施方案中，所述多肽基本上由氨基酸序列ESMYCRLLGIGCG (SEQ ID NO:19)组成或由其组成。
[0022]在一个实施方案中，本发明提供特异性结合BACEl的分离的多肽，其中所述多肽包含在相对于C端的位置-1和-8具有半胱氨酸、在相对于C端位置-7具有精氨酸或精氨酸类似物并且在相对于C端的位置-6具有亮氨酸的序列。[0023]在一个实施方案中，在相对于C端的位置-7的氨基酸是精氨酸。
[0024]在一个实施方案中,所述多肽在相对于C端的位置O, -2和-4包含小氨基酸。在另一个实施方案中，在相对于C端的位置0，-2和-4的氨基酸为甘氨酸。
[0025]在一个实施方案中，所述多肽在相对于C端的位置-3包含疏水残基。
[0026]在一个实施方案中，所述多肽在相对于C端的位置-5包含亮氨酸。
[0027]在一个实施方案中，所述多肽在相对于C端的位置-9包含酪氨酸或苯丙氨酸。在另一个实施方案中，在相对于C端的位置-9的氨基酸是酪氨酸。 [0028]在一个实施方案中,所述多肽在相对于C端的位置-10包含大体积疏水残基。
[0029]在一个实施方案中，所述多肽在相对于C端的位置-11包含丝氨酸。
[0030]在一个实施方案中，所述多肽在相对于C端的位置-12包含酸性残基。在另一个实施方案中，在相对于C端的位置-12的氨基酸是谷氨酸。
[0031]在一个实施方案中，在位置0，-2和-4的氨基酸是小氨基酸；其中在位置-3的氨基酸是疏水残基；其中在位置-5的氨基酸是亮氨酸或甲硫氨酸；其中在位置-7的氨基酸是精氨酸；其中在位置-9的氨基酸是酪氨酸或苯丙氨酸；其中在位置-10的氨基酸是大体积疏水残基；其中在位置-11的氨基酸是丝氨酸；并且其中在位置-12的氨基酸是酸性氨基酸。
[0032]在另一个实施方案中，在位置0，-2和-4的氨基酸是甘氨酸；其中在位置-3的氨基酸是疏水残基；其中在位置-5的氨基酸是亮氨酸；其中在位置-7的氨基酸是精氨酸；其中在位置-9的氨基酸是酪氨酸；其中在位置-10的氨基酸是大体积疏水残基；其中在位置-11的氨基酸是丝氨酸；并且其中在位置-12的氨基酸是谷氨酸。
[0033]在不同的实施方案中，所述多肽包含选自表2和图2中列出的BACE结合肽的序列的序列。
[0034]在一个实施方案中，所述多肽直接与至少一个特定的BACEl残基相互作用。在一个实施方案中，在位置-7的精氨酸与BACEl的天冬氨酸32和天冬氨酸228形成盐桥。在另一个实施方案中，在位置-9的酪氨酸结合BACEl的Y环。在另一个实施方案中，在位置-12的谷氨酸与BACEl的精氨酸235形成盐桥。
[0035]在一个实施方案中，所述多肽结合BACEl在P侧的底物沟。在另一个实施方案中，所述多肽结合BACEl在P侧的底物沟，其肽键朝向与底物方向相反的方向。
[0036]在一个实施方案中，本发明提供一种分离的多肽，所述多肽特异性结合BACEl并且包含含有选自表2和图2中列出的氨基酸序列的肽的氨基酸序列的C端、N端或中间氨基酸序列。在一些实施方案中，所述C端氨基酸序列选自KEESIYCRLMGLGCG(SEQID NO:14)，NELSPYCRLMGLGCD(SEQ ID NO: 15)，ESMYCRLLGIGCG(SEQ ID NO:19)和PEESLYCRLLALGCG(SEQ ID NO:17)。
[0037]在一个实施方案中，本发明提供任一种上述多肽，其中所述多肽与细胞毒性剂或增强细胞进入的氨基酸序列标签缀合或融合。在不同实施方案中，所述细胞毒性剂是化疗剂或化疗药、生长抑制剂、毒素(例如，蛋白毒素，细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素，或其片段)或放射性同位素。在一个实施方案中，所述增强细胞进入的氨基酸序列标签是细胞穿透肽。在一个实施方案中，所述融合蛋白包括BACEl结合肽与通常进行通过血脑屏障的吸收介导的胞转作用或受体介导的胞转作用的蛋白的氨基酸序列的融合体。[0038]在一个实施方案中，本发明提供与任一种上述多肽竞争与BACEl结合的氨基酸序列。
[0039]在一个实施方案中，本发明提供任一种上述多肽，其中所述多肽抑制内源性BACEl蛋白水解活性。
[0040]在一个实施方案中，本发明提供特异性结合本发明的多肽的抗体或其片段。
[0041]在一个实施方案中，本发明提供包含本发明的多肽的试剂盒。
[0042]在一个实施方案中，提供包含本发明的多肽和药用载体的药物制剂。
[0043]在另外的实施方案中，提供编码本发明的多肽的分离的核酸，以及包含编码本发明的多肽的核酸的载体。在另一个方面中，提供包含编码本发明的多肽的核酸的宿主细胞以及用于产生本发明的多肽的方法，所述方法包括在适于产生所述多肽的条件下培养包含编码本发明的多肽的核酸的宿主细胞。
[0044]在另一个实施方案中，提供治疗患有神经疾病或病症的个体的方法，所述方法包括给所述个体施用有效量的本发明的多肽。
[0045]在另Iv实施方案中，提供减少患有或有风险患上神经疾病或病症的患者中的淀粉状蛋白斑或抑制淀粉状蛋白斑形成的方法，所述方法包括给个体施用有效量的本发明的多肽。
[0046]在一个实施方案中，提供减少患者中的Αβ的方法,所述方法包括给所述患者施用有效量的本发明的多肽。在一个实施方案中，所述患者患有或有风险患上神经疾病或病症。
[0047]在另一个实施方案中，提供抑制患者中的轴突变性的方法，所述方法包括给所述患者施用有效量的本发明的多肽。
[0048] 在本发明方法的一个实施方案中，所述患者是哺乳动物。在另一个方面中，所述患者是人。在另一个实施方案中，所述神经疾病或病症选自由下列各项组成的组:阿尔茨海默病(AD),外伤性脑损伤(traumatic brain injury),卒中(stroke),青光眼(glaucoma),痴呆(dementia)，肌营养不良(muscular dystrophy, MD),多发性硬化(MS),肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis, ALS),囊性纤维化(cystic fibrosis),安吉尔曼综合征(Angelman，s syndrome),利德尔综合征(Liddlesyndrome),佩吉特病(Paget’ s disease),外伤性脑损伤，雷维小体病(Lewy bodydisease),脊髓灰质炎后综合征(postpoliomyelitis syndrome),夏伊-德雷格综合征(Shy-Draeger syndrome),撤揽体脑桥小脑萎缩(olivopontocerebellar atrophy),帕金森病，多系统萎缩(multiple system atrophy),纹状体黑质变性(striatonigraldegeneration),核上性麻痹(supranuclear palsy),牛海绵状脑病(bovine spongiformencephalopathy),库病(scrapie),克-雅综合征(Creutzfeldt-Jakob syndrome),库鲁病(kuru),格-施-沙综合征(Gerstmann-Straussler-Scheinker disease),慢性消耗性疾病(chronic wasting disease),家族致命性失眠症(fatal familial insomnia),延髓性麻痹(bulbar palsy),运动神经元病(motor neuron disease),卡纳范病(Canavan disease),亨廷顿病(Huntington' s disease),神经元腊样质脂褐质沉积病(neuronal ceroid-lipofuscinosis,亚历山大病(Alexander ' s disease),图雷特综合征(Tourette1 s syndrome),门克斯扭结发综合征(Menkes kinky hair syndrome),科凯恩综合征(Cockayne syndrome),哈勒沃登-施帕茨综合征(Halervorden-Spatzsyndrome),拉福拉病(lafora disease),雷特综合征(Rett syndrome),肝豆状核变性(hepatolenticular degeneration),莱施-奈恩综合征(Lesch-Nyhan syndrome),和翁-隆综合征(Unverricht-Lundborg syndrome),痴呆(dementia)(包括,但不限于,皮克病(Pick' s disease)和脊髓小脑性共济失调(spinocerebellar ataxia))。在一个实施方案中，所述神经疾病或病症是阿尔茨海默病。
[0049]附图简述 [0050]本专利文件包含至少一幅彩色绘制的附图。请求并缴纳需要的费用后，局方将提供带有彩色附图的本专利或专利公布的副本。
[0051]图1A显示来源于噬菌体展示的线性肽和环肽文库的平板分选的针对BACEl的肽配体(按出现的顺序分别为SEQ ID N0S21，56-61，21，62，56，63-68和22-24)的序列比对。BMS1、BMS2和BMS4分别与之前所述的肽标识符1、2和4相同(Kornacker，M.G.等(2005)Biochemistry (生物化学)44:11567-73)。图1B显示与已知的BACEl抑制剂0M99-2 (标识为“0M99”)和抑制素相比，关于BACE010和BACE011 (在该图中分别标识为“BACE10”和“BACE11”)的HTRF酶活性测定的结果。图1C显示与BACEl结合的肽-展示噬菌体与合成肽BMSl的竞争。柱表示在不存在(灰色)或存在(黑色)70nM BMSl肽时的噬菌体ELISA信号。噬菌体肽ID如图1A中所示。
[0052]图2显示在存在BACE010作为竞争剂时来源于噬菌体展示的肽文库的溶液分选的针对BACEl的肽配体(按出现的顺序分别为SEQ ID N0S26,14，69-73，15，74-78，16，79-86，17和87-95)的序列。BACE017是在存在100 μ M BACE010时由针对首次用于实验的肽文库的BACEl溶液淘选(solution panning)获得的BACEl结合肽配体。BACE018-BACE021是来源于BACE017的亲和力成熟的针对BACEl结合肽的肽序列。列出噬菌体点ELISA数据表示针对单个克隆的相对结合亲和力。用ELISA标记的柱是针对BACEl的噬菌体结合信号，s/η比率表示信号/噪声比率，其中“信号”是在柱“ELISA”中所示的数据，并且噪声是作为背景非特异性结合的针对BSA的噬菌体结合信号。序列比对总结为logo表示(Crooks等，Genome Research(基因组研究)，14:1188-1190, (2004) ;Schneider和Stephens RM.1990.Nucleic Acids Res.(核酸研究)18:6097-6100 (1990))。选择用P印ID表示的肽进行肽合成。
[0053]图3A显示合成的BACEl肽配体在HTRF酶测定中的抑制性活性。BACEl结合肽BACE018-BACE021在针对BACEl的27_mer HTRF底物的分解中表现出浓度依赖性抑制作用。与BACE018-BACE021对应的肽，其中半胱氨酸残基被丝氨酸置换(BACE025-BACE028)，其抑制BACEl酶活性的能力有效性少得多。在该图中，BACE018-BAC021和BACE025-BACE028分别标识为BACE-18-BACE-21和BACE25-BACE-28。图3B是显示分别使用BACE020、和小分子和肽抑制剂0M99-2或BMSl的生物素酰化的BACE020竞争结合ELISA的结果的图表。
[0054]图4是显示在细胞测定中BACEl结合肽抑制A β产生的图表。与BACEl抑制性抗体(抗-BACEI)、BACEl的小分子抑制剂(0Μ99-2)、BACEl的肽抑制剂(BMSl)和BACEl的小分子抑制剂(GSK-8e，Charrier，等，J.Med.Chem.(医学化学杂志)51:3313-3317(2008))相比，BACEl结合肽BACE017-BACE021在293_hAPP细胞中表现出Αβ产生的浓度依赖性的减少。使用4-参数非线性回归曲线拟合程序确定IC5tl值。[0055]图5A显示通过同核NMR光谱确定的溶液中BACE020的结构。图5B显示同与BACE020复合的BACEl (红色)相比，未结合的BACEl (蓝色)的TROSY光谱的比较。右图突出显示包括活性位点残基Asp32和Asp228的特定的残基的光谱的变化。图5C显示在BACEl的活性位点沟(groove)和盖(flap)中的BACEl的结构；当结合BACE020时具有受扰共振的那些BACEl残基显示为红色。
[0056]图6显示与BACE030复合的BACEl的1.5 A解析度的晶体结构。图6A显示绘出在1 (棕色网状物)、与BACE的活性位点结合的BACE030肽的轮廓的电子密度图谱。图6B显示游离的BACEl (灰色)、与BACEl (蓝色)结合的BACE030 (绿色)和与BACEl (粉色)结合的0M99-2(小麦色)的晶体结构。活性位点天冬氨酸残基显示为棒状并且涂色为红色。图6C显示具有BACE030 (绿色)和0M99-2 (洋红色)的BACEl复合物的重叠。在催化位点的天冬氨酸残基显示为红色。图6D显示BACE030(绿色)与BACEl (橙色)的残基的结合相互作用。水分子显示为红色球体。氢键显示为红色虚线。图6E显示具有棒状的0M99-2(洋红色)和0M03-4 (青色)的BACEl复合物的重叠。在不再与BACE020结合的BACEl突变体的情形中，BACEl表面具有红色表面，并且对BACE030结合没有作用的BACEl突变体具有绿色表面。
[0057]图7A显示与BACE的活性位点结合的BACE030肽的1.5 A解析度的晶体结构的远视图。BACE030显示为黄色，BACEl包含催化的天冬氨酸残基的区域显示为红色，并且BACEl的盖区显示为骨架踪迹。图7B显示BACE030的“精氨酸指”(Arg6)与BACEl的催化天冬氨酸残基的相互作用。图7C显示BACE030的Tyr4与BACEl的Y-环的相互作用。图7C公开"Leu8 Gly9 LeulO Gly ll"作为 SEQ ID NO:96。
[0058]发明实施方案详述
[0059]定义
[0060]“分离的”当指分子时是指已经鉴定并且与其天然环境的成分分离和/或从中回收的分子。其天然环境的污染成分是干扰诊断或治疗应用的物质。
[0061]“活性”多肽或其片段保留所述活性多肽的天然或天然存在的副本的生物活性。生物活性是指由所述活性多肽的天然或天然存在的副本介导的功能。例如，结合或蛋白-蛋白相互作用组成生物活性。
[0062]术语“抗体”和“免疫球蛋白”在最广泛意义上可以互换使用，并且包括单克隆抗体(例如，全长或完整的单克隆抗体)、多克隆抗体、多价抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体，只要其展现出需要的生物活性)，并且还可以包括特定的抗体片段(如本文中更详细所述)。抗体可以是嵌合的、人的、人源化的和/或亲和力成熟的。
[0063]“抗体片段”仅包含完整抗体的一部分，其中该部分优选地保留当该部分存在于完成抗体时通常与其相关的功能中的至少一种、优选大部分或全部。
[0064]术语“单克隆抗体”用在本文中是指从一群基本上同质的抗体中获得的抗体，即除了可能以少量存在的可能的天然存在的突变之外，构成群体的各个抗体是相同的。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一的抗原。此外，与典型地包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，每个单克隆抗体针对抗原上的单个决定簇。
[0065]本文的单克隆抗体具体包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与来源于特定物种或属于特定抗体种类或亚类的抗体中相应的序列相同或同源，而该链的其余部分与来源于另一种物种或属于另一种抗体种类或亚类的抗体中相应的序列相同或同源，只要其表现出需要的生物活性(美国专利号4, 816, 567 ;和Morrison等,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA (美国国家科学院学报)81 =6851-6855 (1984))。
[0066]非人(例如鼠)抗体的“人源化”形式是最低限度包含来源于非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗体。在极大程度上，人源化抗体是这样的人免疫球蛋白(接受体抗体)，其中所述接受体的高变区的残基被具有需要的特异性、亲和力和能力的非人物种(供体抗体)诸如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物的高变区残基替换。在一些情况中，人免疫球蛋白的框架区(FR)残基被相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在接受体抗体或供体抗体中不存在的残基。进行这些修饰是为了进一步改进抗体的性能。一般而言，人源化抗体将包含基本上全部或至少一个、通常两个这样的可变结构域，其中所有或基本上所有的高变环对应于非人免疫球蛋白的高变环，且所有或基本上所有的FRs是人免疫球蛋白序列的FRs。人源化抗体任选还将包含至少部分免疫球蛋白恒定区(Fe)，典型地是人免疫球蛋白的恒定区。更多细节参见 Jones 等,Nature (自然)321:522-525(1986) ;Riechmann 等,Nature (自然)332 =323-329 (1988)；和 Presta, Curr.0p.Struct.Biol.(结构生物学新观点)2:593-596(1992)。还参见下述综述论文及其中引用的参考文献=Vaswani和Hamilton，Ann.Allergy, Asthma&Immunol.(过敏、哮喘和免疫学)1:105-115 (1998) ；Harris, Biochem.Soc.Transactions (生物化学学会学报)23:1035-1038 (1995) ；Hurle 和 Gross, Curr.0p.Biotech.(现代生物技术观点)5 =428-433 (1994)。
[0067]“人抗体”是具有与由人产生的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列的抗体和/或使用本文公开的任一种制备人抗体的技术制备的抗体。人抗体的这一定义特异性排除包含非人抗原结合残基的人源化的抗体。
[0068]“亲和力成熟的”抗体指这样的抗体，在该抗体的一个或多个互补决定区(⑶Rs)中具有一处或多处改变，导致该抗体对抗原的亲和力与没有这些改变的亲本抗体相比有提高。优选的亲和力成熟的抗体具有针对靶抗原的纳摩尔或甚至皮摩尔的亲和力。亲和力成熟的抗体由本领域已知的方法制备。Marks等，Bio/Technology (生物技术)10:779-783(1992)记述了通过VH和VL结构域改组进行的亲和力成熟。⑶R和/或构架残基的随机诱变记述在=Barbas等，Proc Nat.Acad.Sci USA(美国国家科学院学报)91:3809-3813(1994) ；Schier 等，Gene (基 @ ) 169:147-155(1995) ;Yelton 等 J.1mmunol.(免疫学杂志)155:1994-2004(1995) Jackson 等，J.1mmunol.(免疫学杂志)154(7):3310-9 (1995);和 Hawkins 等，J.Mol.Biol.(分子生物学杂志)226:889-896 (1992)。
[0069]“带表位标签的”多肽是指与“标签多肽”融合的嵌合多肽。所述标签提供这样的表位，可以制备针对所述表位的抗体或针对所述表位的抗体是可获得的，但是所述表位基本上不干扰多肽活性。为了减少抗-标签抗体与内源性表位的反应性，所述标签多肽通常是独特的。适宜的标签多肽通常具有至少六个氨基酸残基，通常约8-50个氨基酸残基，优选8-20个氨基酸残基。表位标签序列的实例包括来自甲型流感病毒(Influenza A virus)的 HA，⑶，和 c-myc，聚-His 和 FLAG。
[0070]“多核苷酸”或“核酸”在本文中可互换使用，是指任意长度的核苷酸的聚合物，并且包括，但不限于，DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修饰的核苷酸或碱基和/或其类似物、或可以通过DNA或RNA聚合酶或通过合成反应结合成聚合物的任意底物。多核苷酸可以包含修饰的核苷酸，诸如甲基化的核苷酸及其类似物。如果存在，可以在组装聚合物之前或之后进行核苷酸的修饰。核苷酸的序列可以被非核苷酸成分中断。多核苷酸可以在合成后进行进一步修饰，诸如通过缀合标记进行修饰。其他类型的修饰包括，例如，“帽”，用类似物置换一个或多个天然存在的核苷酸，中间核苷酸修饰，诸如例如具有不带电荷的键的那些(例如，磷酸甲酯、磷酸三酯、磷酰胺(phosphoamidates)、氨基甲酸酯(cabamates)等)和具有带电荷的键的那些(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)，含有悬垂结构部分的那些，所述悬垂结构部分诸如例如，蛋白(例如，核酸酶、毒素、抗体、信号肽、聚-L-赖氨酸等)，具有嵌入剂(例如，吖啶、补骨脂素等)的那些，含有螯合剂(例如，金属、放射性金属、硼、氧化金属等)的那些，含有烷化剂的那些，具有修饰的键的那些(例如，α异头核酸等)以及未修饰形式的多核苷酸。此外，在糖中通常存在的任一羟基可以被替换，例如，被磷酸酯基(phosphonate groups)、磷酸盐基(phosphate groups)替换,被标准的保护基保护，或被活化以产生针对另外的核苷酸的另外的键，或可以缀合到固体或半固体支持物上。Y和:V末端OH可以被磷酸化或被取代为1-20个碳原子的胺或有机加帽基团结构部分。其他羟基也可以被衍生为标准的保护基。多核苷酸还可以包含本领域通常已知的核糖或脱氧核糖的类似形式，包括，例如，2' -O-甲基-，2, -O-烯丙基，2'-氟-或2，-叠氮基-核糖，碳环糖类似物，α-异头糖，差向异构体糖诸如阿拉伯糖、木糖或来苏糖，吡喃糖，呋喃糖，景天庚酮糖，无环类似物和无碱基核苷类似物诸如甲基核苷。一个或多个磷酸二酯键可以被替换为备选的连接基团。这些备选的连接基团包括，但不限于，下述实施方案，其中磷酸酯被替换为P(O)S("硫代酯")，P(S)S(" 二硫代酯")，"(O)NR2("酰胺化物"),P(O)R, P(O)ORi，⑶或CH2("甲酰化物(formacetal)")，其中每个R或R'独立地是H或是任选地含有醚(一0—)键的取代的或未取代的烷基(1-20个C)，芳基，烯基，环烷基，环烯基或芳烷基(araldyl)。多核苷酸中的所有的键不需要是相同的。之前的描述适用于本文引用的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。
[0071]“寡核苷酸”用在本文中通常是指短的、一般是单链的、一般是合成的多核苷酸，其长度通常但不是必须地少 于约200个核苷酸。术语“寡核苷酸”和“多核苷酸”不互相排除。上文关于多核苷酸的描述同等且完全适用于寡核苷酸。
[0072]“控制序列”用在本文中是允许可操作连接的编码序列在特定宿主生物体中表达的DNA序列。原核控制序列包括启动子、操纵子序列和核糖体结合位点。真核孔子和序列包括启动子、多腺苷酸化信号和增强子。
[0073]若核酸与另一核酸序列处于功能性关系中，则该核酸是“可操作连接”的。例如，若启动子或增强子影响序列的转录，则其与该编码序列可操作连接；或者，若核糖体结合位点的位置促进翻译，则其与编码序列可操作连接。通常，“可操作连接"指被连接的DNA序列是相邻的，而且在分泌前导序列的情况中指相邻且处于相同阅读框中。然而，增强子不必相邻。
[0074]术语“载体”当在本文中使用时是指能够增殖与其相连的另一个核酸的核酸分子。该术语包括作为自我复制核酸结构的载体以及结合到已经引入其的宿主细胞的基因组中的载体。某些载体能够指导与其可操作相连的核酸的表达。这样的载体在本文中被称为"表达载体"。
[0075]术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换地使用并且是指其中引入外源核酸的细胞，包括所述细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化的细胞”，其包括原代转化的细胞和来源于其的后代，而不考虑传代的次数。后代在核酸含量上可能与亲本细胞不完全相同，而是可以包含突变。本文中包括与在最初转化的细胞中筛选或选择的具有相同功能或生物活性的突变体后代。
[0076]除非另外说明，术语“BACE1”当在本文中使用时是指来自任何脊椎动物来源(包括哺乳动物如灵长类动物(例如人)和啮齿类动物(例如，小鼠和大鼠))的任何天然β-分泌酶I (也被称为β-位淀粉状蛋白前体蛋白切割酶1，膜相关天冬氨酸蛋白酶2，memapsin2,天冬氨酰蛋白酶2或Asp2)。该术语包括“全长”未加工的BACEl以及由细胞内加工产生的任何形式的BACEl。该术语还包括天然存在的BACEl的变体，例如，剪接变体或等位变体。示例性BACEl多肽的氨基酸序列显示在以下SEQ ID NO:1中，并且有人BACEl、同种型A的序列，如在Vassar等，Science ( 科学)286 =735-741 (1999)中报道的，该文献通过引用完整地结合于本文中。
[0077]MAQALPWLLLWMGAGVLPAHGTQHGIRLPLRSGLGGAPLGLRLPRETDEEPEEPGRRGSFVEMVDNLRGKSGQGYYVEMTVGSPPQTLNILVDTGSSNFAVGAAPHPFLHRYYQRQLSSTYRDLRKGVYVPYTQGKWEGELGTDLVSIPHGPNVTVRANIAAITESDKFFINGSNWEGILGLAYAEIARPDDSLEPFFDSLVKQTHVPNLFSLQLCGAGFPLNQSEVLASVGGSMIIGGIDHSLYTGSLWYTPIRREWYYEVIIVRVEINGQDLKMDCKEYNYDKSIVDSGTTNLRLPKKVFEAAVKSIKAASSTEKFPDGFWLGEQLVCWQAGTTPWNIFPVISLYLMGEVTNQSFRITILPQQYLRPVEDVATSQDDCYKFAISQSSTGTVMGAVIMEGFYVVFDRARKRIGFAVSACHVHDEFRTAAVEGPFVTLDMEDCGYNIPQTDESTLMTIAYVMAAICALFMLPLCLMVCQWCCLRCLRQQHDDFADDISLLK(SEQ ID NO:1)
[0078]存在人BACEl的一些其他的同种型，包括同种型B，C和D，以下分别显示为SEQ IDNO:2, SEQ ID NO:3 和 SEQ ID NO:4。参见 UniProtKB/Swiss-Prot Entry P56817，其通过引用完整地结合于本文中。
[0079]MAQALPWLLLWMGAGVLPAHGTQHGIRLPLRSGLGGAPLGLRLPRETDEEPEEPGRRGSFVEMVDNLRGKSGQGYYVEMTVGSPPQTLNILVDTGSSNFAVGAAPHPFLHRYYQRQLSSTYRDLRKGVYVPYTQGKWEGELGTDLVSIPHGPNVTVRANIAAITESDKFFINGSNWEGILGLAYAEIARLCGAGFPLNQSEVLASVGGSMIIGGIDHSLYTGSLWYTPIRREWYYEVIIVRVEINGQDLKMDCKEYNYDKSIVDSGTTNLRLPKKVFEAAVKSIKAASSTEKFPDGFffLGEQLVCffQAGTTPWNIFPVISLYLMGEVTNQSFRITILPQQYLRPVEDVATSQDDCYKFAISQSSTGTVMGAVIMEGFYVVFDRARKRIGFAVSACHVHDEFRTAAVEGPFVTLDMEDCGYNIPQTDESTLMTIAYVMAAICALFMLPLCLMVCQWCCLRCLRQQHDDFADDISLLK(SEQ ID NO:2)
[0080]MAQALPffLLLffMGAGVLPAHGTQHGIRLPLRSGLGGAPLGLRLPRETDEEPEEPGRRGSFVEMVDNLRGKSGQGYYVEMTVGSPPQTLNILVDTGSSNFAVGAAPHPFLHRYYQRQLSSTYRDLRKGVYVPYTQGKWEGELGTDLPDDSLEPFFDSLVKQTHVPNLFSLQLCGAGFPLNQSEVLASVGGSMIIGGIDHSLYTGSLWYTPIRREWYYEVIIVRVEINGQDLKMDCKEYNYDKSIVDSGTTNLRLPKKVFEAAVKSIKAASSTEKFPDGFWLGEQLVCWQAGTTPWNIFPVISLYLMGEVTNQSFRITILPQQYLRPVEDVATSQDDCYKFAISQSSTGTVMGAVIMEGFYVVFDRARKRIGFAVSACHVHDEFRTAAVEGPFVTLDMEDCGYNIPQTDESTLMTIAYVMAAICALFMLPLCLMVCQWCCLRCLRQQHDDFADDISLLK(SEQ ID NO:3)
[0081]MAQALPWLLLWMGAGVLPAHGTQHGIRLPLRSGLGGAPLGLRLPRETDEEPEEPGRRGSFVEMVDNLRGKSGQG YYVEMTVGSPPQTLNILVDTGSSNFAVGAAPHPFLHRYYQRQLSSTYRDLRKGVYVPYTQGKWEGELGTDLLCGAGFPLNQSEVLASVGGSMIIGGIDHSLYTGSLWYTPIRREWYYEVIIVRVEINGQDLKMDCKEYNYDKSIVDSGTTNLRLPKKVFEAAVKSIKAASSTEKFPDGFffLGEQLVCffQAGTTPWNIFPVISLYLMGEVTNQSFRITILPQQYLRPVEDVATSQDDCYKFAISQSSTGTVMGAVIMEGFYVVFDRARKRIGFAVSACHVHDEFRTAAVEGPFVTLDMEDCGYNIPQTDESTLMTIAYVMAAICALFMLPLCLMVCQWCCLRCLRQQHDDFADDISLLK(SEQ ID NO:4)
[0082]同种型B显示在SEQ ID NO:2中，并且与同种型A(SEQ ID NO:1)不同之处在于缺少氨基酸190-214( 即，缺失SEQ ID NO:1的氨基酸190-214)。同种型C显示在SEQ IDNO:3中，并且与同种型A(SEQ ID NO:1)不同之处在于缺少氨基酸146-189 (即，缺失SEQ IDNO:1的氨基酸146-189)。同种型D显示在SEQ ID NO:4中，并且与同种型A (SEQ ID NO:1)不同之处在于缺少氨基酸146-189和190-214(即，缺失SEQ ID NO:1的氨基酸146-189和 190-214)。
[0083]术语“肽”通常是指通过肽键连接的相邻的且相对短的氨基酸序列。典型地，但是不是必需的，肽具有约2-50个氨基酸、4-40个氨基酸或10-30个氨基酸的长度。尽管术语“多肽”通常是指较长形式的肽，但是这两个术语在本发明的一些情形中可以互换使用并且已经互换使用。
[0084]术语“氨基酸”和“残基”在本文中互换使用。多肽的“区域”是2个以上氨基酸的相邻序列。在其他实施方案中，区域是至少约任意3，5，10，15个相邻的氨基酸。
[0085]“C端区”、“C端序列”及其变化形式用在本文中是指位于或紧邻多肽的C端末端的氨基酸序列。通常，该序列包含具有游离羧基的氨基酸。在一个实施方案中，C端区或序列是指包含位于最接近多肽的C端的约1-15个残基的多肽区域。
[0086]“N端区”、“N端序列”及其变化形式用在本文中是指位于或紧邻多肽的N端末端的氨基酸序列。通常，该序列包含具有游离氨基的氨基酸。在一个实施方案中，N端区或序列是指包含位于最接近多肽的N端的约1-15个残基的多肽区域。
[0087]“中间区”、“中间序列”及其变化形式用在本文中是指位于多肽内并且在其N端和C端两端侧连不是该序列的一部分的一个或多个氨基酸的氨基酸序列。通常，该序列不包含具有游离的羧基或氨基的氨基酸。在一个实施方案中，中间区或序列是指包含位于多肽内的约1-15个残基的多肽区域，其中所述区域不包含C端或N端氨基酸。
[0088]“亲和力”指分子的单一结合位点与其结合配偶体之间全部非共价相互作用总和的强度。除非另有说明，在用于本文时，“结合亲和力”指反映结合对的成员之间1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可用解离常数(Kd)来表述。亲和力可通过本领域已知的常用方法来测量，包括本文中所描述的那些方法。下文记述了用于测量结合亲和力的具体举例说明的和示例性的实施方案。
[0089]“融合蛋白”是指具有共价连接在一起的两部分的多肽，其中每个部分来源于不同的蛋白。这两个部分可以通过单一肽键直接连接或通过包含一个或多个氨基酸残基的肽接头连接。通常，这两个部分和接头彼此处在一个阅读框中，并且使用重组技术产生。
[0090]“病症”或“病理病况”是能够受益于本发明的物质/分子或方法的任意病况。这包括慢性和急性病症或疾病，包括使哺乳动物易受讨论病症的影响的病理病况。本文中待治疗的病症的非限制性的实例包括神经病症。
[0091]术语“神经病症”或“神经疾病”是指或描述哺乳动物的中枢和/或周围神经系统的疾病或病症。神经病症的实例包括但不限于下述列表的疾病和病症。神经病病症是特征在于不适当的或不受控制的神经信号传导或缺乏神经信号传导的神经系统疾病或异常，并且包括但不限于，慢性疼痛，包括感受伤害的疼痛(由对身体组织的损伤引起的疼痛，包括癌相关的疼痛)，神经性疼痛(由神经、脊髓或脑中的异常引起的疼痛)，和精神性疼痛(完全或大部分相关于心理障碍)，头痛，偏头痛(migraine)，神经病，以及常常伴随这样的神经病病症的症状和综合征如眩晕或恶心。淀粉状变性是一组与在CNS中的细胞外蛋白质沉积相关的疾病和病症，其包括但不限于，继发性淀粉状变性，年龄相关性淀粉状变性，阿尔茨海默病(AD),轻度认知损伤(mild cognitive impairment, MCI),雷维小体痴呆，唐氏综合征，遗传性脑出血伴淀粉状变性(荷兰型)；关岛帕金森-痴呆并发症，脑淀粉状血管病，亨廷顿病，进行性核上性麻痹，多发性硬化；克-雅病，帕金森病，传染性海绵状脑病，HIV相关痴呆，肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)，包涵体肌炎(inclusion-bodymyositis, IBM)，和涉及β-淀粉状蛋白沉积的眼病(即，黄斑变性，玻璃疣相关视神经病变和白内障(cataract))。CNS的癌症特征在于一个或多个CNS细胞(即，神经细胞)的异常增殖，并且包括但不限于，胶质瘤(glioma),多形性胶质母细胞瘤(glioblastomamultiforme),脑膜瘤(meningioma)，星细胞瘤(astrocytoma),听神经瘤(acousticneuroma),软骨瘤(chondroma),少突神经胶质瘤(oligodendroglioma),成神经管细胞瘤(medulloblastomas),神经节神经胶质瘤(ganglioglioma),神经鞘瘤(Schwannoma),神经纤维瘤(neurofibroma),成神经细胞瘤(neuroblastoma)和硬膜外、髓内或硬膜内肿瘤。眼疾病或病症是眼睛的疾病或病症，为本文的目的，眼睛被视为受制于BBB的CNS器官。眼病或病症包括但不限于，巩膜、角膜、虹膜和睫状体的病症(即，巩膜炎(scleritis)、角膜炎(keratitis)、角膜溃瘍(corneal ulcer),角膜擦伤(corneal abrasion),雪盲(snow blindness),电光性眼炎(arc eye), Thygeson 浅层点状角膜病变(ThygesonJ ssuperficial punctate keratopathy)， 角膜新生血管化(corneal neovascularisation),富克斯营养不良(Fuchs ’ dystrophy),圆锥形角膜(keratoconus),干燥性角膜结膜炎(keratoconjunctivitis sicca),虹膜炎(iritis)和葡萄膜炎(uveitis)),晶状体的病症(即，白内障(cataract))，脉络膜和视网膜的病症(即，视网膜脱离(retinaldetachment),视网膜劈裂症(retinoschisis),高血压性视网膜病变(hypertensiveretinopathy),糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy),视网膜病(retinopathy),早产儿视网膜病，老年性黄斑变性(age-related macular degeneration),黄斑变性(macular degeneration)(湿性或干性)，视网膜外膜(epiretinal membrane),色素性视网膜炎(retinitis pigmentosa)和黄斑水肿(macular edema)),青光眼(glaucoma),悬浮物(floaters)，视神经和视觉通路的病症(即，莱伯遗传性视神经病(Leber’ shereditary optic neuropathy)和视觉盘玻璃抚(optic disc drusen)),眼肌 / 双眼移动调节/折射的病症(即，斜视(strabismus),眼肌瘫痪(ophthalmoparesis),进行性外部眼肌麻痹(progressive external opthalmoplegia),内斜视(esotropia),外斜视(exotropia)，远视(hypermetropia)，近视(myopia)，散光(astigmatism)，屈光不正(anisometropia),老花眼(presbyopia)和眼肌麻痹(ophthalmoplegia)),视觉障碍和失明(即，弱视(amblyopia),莱伯先天性黑朦(Lever’ s congenital amaurosis),暗点(scotoma),色盲(color blindness),全色盲(achromatopsia),夜盲症(nyctalopia),失明(blindness),河盲(river blindness)和微眼炎/缺损(micro-opthalmia/coloboma)),红眼，阿盖耳罗伯逊瞳孔(Argyll Robertson pupil),角膜真菌病(keratomycosis),干眼病(xerophthalmia)和无虹膜(aniridia)。CNS的病毒或微生物感染包括但不限于由以下引起的感染，病毒(即，流感，HIV，脊髓灰质炎病毒，风疹)，细菌(即，奈瑟氏球菌属物种(Neisseria sp.),链球菌属物种(Streptococcus sp.),假单胞菌属物种(Pseudomonassp.),变形菌属物种(Proteus sp.),大肠杆菌(E.coli),金黄色葡萄球菌(S.aureus),肺炎球菌属物种(Pneumococcus sp.),脑膜炎球菌属物种(Meningococcus sp.),嗜血杆菌属物种(Haemophilus sp.)和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis))和其他微生物如真菌(即，酵母，新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)),寄生虫(即，弓形虫(toxoplasma gondii))或变形虫(amoebas),其导致CNS病理生理学,包括但不限于,脑膜炎，脑炎，脊髓炎，血管炎和脓肿(abscess)，其可以是急性的或慢性的。CNS的炎症是这样的炎症，其由对CNS的损伤导致，所述损伤可以是物理损伤(即，由于事故，手术，脑创伤，脊髓损伤，脑震荡(concussion)所致的)或由于或相关于一种或多种CNS的其他疾病或病症(即，脓肿，癌症，病毒或微生物感染)的损伤。当用于本文中时，CNS的缺血是指一组这样的病症，其相关于脑部的异常血流或血管行为或其病因，并且包括但不限于，局部脑缺血(focal brain ischemia),全局脑缺血(global brain ischemia),卒中(即，蛛网膜下出血(subarachnoid hemorrhage)和脑内出血(intracerebral hemorrhage)),和动脉瘤(aneurysm)。神经退行性疾病是一组这样的疾病和病症，其与CNS中神经细胞丧失功能或死亡相关，并且包括但不限于 ，肾上腺脑白质营养不良(adrenoleukodystrophy),亚历山大病，阿尔珀斯病(Alper’ s disease)，肌萎缩性侧索硬化，运动失调性毛细血管扩张症(ataxia telangiectasia) , Batten 病(Batten disease),科凯恩综合征，基层皮质变性(corticobasal degeneration),由淀粉状变性引起或与其相关的变性,弗里德赖希共济失调症(Friedreich，s ataxia),额颞叶变性(frontotemporal lobar degeneration),肯尼迪病(Kennedy’s disease),多系统萎缩，多发性硬化,原发性侧索硬化,进行性核上性麻痹，脊髓性肌萎缩，横贯性脊髓炎，雷夫叙姆病(Refsum’ s disease)和脊髓小脑性共济失调。CNS的发作疾病和病症涉及CNS中的不适当和/或异常电导，并且包括但不限于，癫痫(epilepsy)(即，失神发作(absence seizures),失张力发作(atonicseizures),良性运动性癫痫(benign Rolandic epilepsy),儿童期失神(childhoodabsence)，阵挛发作(clonic seizures)，复杂部分发作(complex partial seizures),额叶性癫痫(frontal lobe epilepsy),发热性癫痫发作(febrile seizures),婴儿疫挛(infantile spasms)，少年肌阵挛性療痫(juvenile myoclonic epilepsy)，青少年期失神療痛(juvenile absence epilepsy),伦-格综合征(Lennox-Gastaut syndrome),兰-克综合征(Landau-Kleffner Syndrome), Dravet 综合征(Dravet，s syndrome),Otahara 综合征(Otahara syndrome)，West 综合征(West syndrome)，肌肉阵挛性发作(myoclonic seizures),线粒体病(mitochondrial disorders),进行性肌阵挛性療痛(progressive myoclonic epilepsies)，精神性发作(psychogenic seizures)，反身寸性療痫(reflex epilepsy), Rasmussen 综合征(Rasmussen ' s Syndrome),简单部分发作(simple partial seizures),继发性全身性療痫发作(secondarily generalizedseizures),颞叶療痫(temporal lobe epilepsy),阵挛性发作(toniclonic seizures),强直发作(tonic seizures),精神运动发作(psychomotor seizures),边缘叶癫痫(limbic epilepsy),部分性癫痫发作(partial-onset seizures),全身发作性癫痫发作(generalized-onset seizures)，痛痫持续状态(status epilepticus)，腹型痛痫(abdominal epilepsy)，失神型发作(akinetic seizures)，植物神经性发作(autonomicseizures)，大量双侧肌阵挛(massive bilateral myoclonus)，月经性痛痫(catamenialepilepsy)，跌倒发作(drop seizures)，情绪性发作(emotional seizures)，病灶性发作(focal seizures)，发笑发作(gelastic seizures)，贾克森扩布(Jacksonian March)，拉福拉病(Lafora Disease)，运动性发作(motor seizures)，多病灶性发作(multifocalseizures)，夜发作(nocturnal seizures)，光敏性发作(photosensitive seizure)，假性发作(pseudo seizures)，感觉性发作(sensory seizures)，微小发作(subtle seizures),sylvan 发作(sylvan seizures)，戒断发作(withdrawal seizures)和视反射发作(visualreflex seizures)) 0行为障碍是这样的CNS病症，其特征为就受折磨的受试者而言的异常行为，并且包括但不限于，睡眠障碍(sleep disorders)(即，失眠(insomnia)，深眠状态(parasomnias)，夜惊(night terrors)，昼夜节律睡眠障碍(circadian rhythmsleep disorders)，和发作性睡病(narcolepsy))，心境障碍(mood disorders)(即，抑郁(depression),自杀性抑郁(suicidal depression)，焦虑(anxiety)，慢性情感障碍(chronic affective disorders)，恐怖病(phobias)，惊恐发作(panic attacks)，强迫性障碍(obsessive-compulsive disorder)，注意力缺陷伴多动障碍(attention deficithyperactivity disorder，ADHD)，注意缺陷障碍(attention deficit disorder, ADD),慢性疲劳综合征(chronic fatigue syndrome)，广场恐怖症(agoraphobia)，创伤后应激障碍(post-traumatic stress disorder)，双相性精神障碍(bipolar disorder))，进食障碍(即，厌食症(anorexia)或贪食症(bulimia))，精神病(psychoses)，发育行为障碍(developmental behavioral disorders)(即，自闭症(autism)，雷特综合征(Rett’ ssyndrome), Aspberger 综合征(Aspberger’ s syndrome)),人格障碍和精神障碍(即，精神分裂症(schizophrenia)，妄想障碍(delusional disorder)等)。溶酶体积症(Lysosomal storage disorders)是代谢病症，在一些情况中其与CNS相关或具有CNS特异性症状；这样的病症包括 但不限于泰-萨克斯病(Tay-Sachs disease)，戈谢病(Gaucher’sdisease)，法布里病(Fabiy disease)，粘多糖贮积症(I，II，III，IV，V，VI 和 VII 型)，糖原积病(glycogen storage disease)，GMl 神经节苷脂DC积症(GMl-gangliosidosis)，异染性脑白质病变(metachromatic leukodystrophy)，Farber 病(Farber’s disease)，卡纳范脑白质营养不良(Canavan’ s leukodystrophy)和I型和2型神经元錯样脂褐素沉积症(neuronal ceroid lipofuscinoses)，尼曼-皮克病(Niemann-Pick disease)，Pompe病(Pompe disease)和克拉伯病(Krabbe，s disease)。
[0092]用于本文时，“治疗”指在尝试改变待治疗的个体或细胞的天然进程中的临床干预，并且可以为了预防或在临床病理学的进程中进行。治疗的理想效果包括但不限于防止疾病发生或复发，缓和症状，消除疾病的任何直接或间接病理学后果，防止转移，减少疾病进展速率，改善或减轻疾病状态，和症状缓解或改善的预后。在一些实施方案中，将本发明的调节性化合物用于延缓疾病或病症的发展。
[0093]“个体”或“受试者”是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于，家养动物(例如，牛，羊，猫，狗和马)，灵长类动物(例如，人和非人灵长类动物如猴)，兔以及啮齿类动物(例如，小鼠和大鼠)。在某些实施方案中，个体或受试者是人。[0094]"有效量"是指在需要的剂量和时间阶段有效获得所需的治疗或预防结果的量。本发明的物质/分子、激动剂或拮抗剂的“治疗有效量”可以按照诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重、以及所述物质/分子、激动剂或拮抗剂在所述个体中激发需要的反应的能力而变化。治疗有效量也是这样的量:其中治疗有益效果超过了所述物质/分子、激动剂或拮抗剂的任意毒性或有害的作用。“预防有效量”是指在需要的剂量和时间阶段有效获得需要的预防结果的量。典型地，但不是必需地，由于预防剂量是在疾病之前或在疾病的早期阶段用于受试者，因此，所述预防有效量将少于治疗有效量。
[0095]术语“药物制剂”指这样的制剂，其以允许包含在其中的活性成分的生物活性有效的形式存在，并且不包含对施用所述制剂的受试者具有不可接受的毒性的另外的成分。
[0096]“药用载体”是指药物制剂中除活性成分之外的成分，其对受试者是无毒的。药用载体包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
[0097]术语“包装说明书”用于指通常包括在治疗产品的商品包装中的使用说明，其包含关于适应证、用法、剂量、给药、组合疗法、禁忌症的信息和/或关于使用这样的治疗产品的
敬生
目口 ο
[0098]术语“细胞毒性剂”用在本发明中指抑制或防止细胞功能和/或引起细胞死亡或破坏的物质。细胞毒性剂包括但不限于:放射性同位素(例如，At211，I131，I125，Y90，Re186, Re188, Sm153, Bi212，P32，pb212和Lu的放射性同位素)；化疗剂或药物(例如，甲氨蝶呤(methotrexate),阿霉素(adriamicin),长春花生物喊(vinca alkaloids)(长春新碱(vincristine)，长春碱(vinblastine),依托泊苷(etoposide)),多柔比星(doxorubicin)，美法仑(melphalan),丝裂霉素 C (mitomycin C),苯丁酸氮芥(chlorambucil),柔红霉素(daunorubicin)或其它嵌入剂)；生长抑制剂；酶及其片段如核酸水解酶；抗生素；毒素如小分子毒素或细菌、真菌、植物或动物来源的酶促活性毒素，包括其片段和/或变体；和下面公开的各种抗肿瘤或抗癌剂。
[0099]发明的组合物和方法
[0100]A.本发明的肽和多肽
[0101]在一方面中，本发明部分基于结合BACEl并且降低和/或抑制BACEl活性的肽/多肽。在某些实施方案中，提供结合到BACEl的活性位点或外结合位点的抗体。
[0102]本发明的BACEl结合肽包括表2和图2中所述的那些。本发明还提供突变体或变体肽，其残基的任一个可以由这些肽的相对应的残基改变，同时仍然编码保留抑制活性的肽。在一个实施方案中，结合肽/多肽的变体与参比结合肽/多肽具有至少50%，60%，70%,80%,90%,95%,98%,99%的氨基酸序列同一性。通常，所述变体表现出与参比结合肽/多肽基本上相同的或更大的结合亲和力，例如，基于本领域接受的结合测定定量单位/计量，是参比结合肽/多肽的结合亲和力的至少0.75X，0.8X，0.9X，1.0X, 1.25X或1.5X。通常，本发明的变体包括这样的变体，其中序列中特定位置的残基被其他氨基酸置换，并且还包括在亲本肽/多肽的两个残基之间插入另外一个或多个残基的可能性以及从亲本序列删除一个或多个残基或向亲本序列中添加一个或多个残基的可能性。本发明包括任意的氨基酸置换、插入或缺失。在特定的情形中，所述置换是如本文所述的保守置换。
[0103]“百分比)氨基酸序列同一性”定义为比对两条序列时与参比(亲本)多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分数。为了确定％氨基酸同一性，比对序列，并且，如果需要，导入空位以获取最大％序列同一性；不将保守置换视为序列同一性的部分。确定百分比同一性的氨基酸序列比对方法是本领域技术人员已知的。通常使用公众可得到的计算机软件如BLAST、BLAST2、ALIGN2或Megalign(DNASTAR)软件来比对肽序列。本领域技术人员可以决定测量比对的适宜参数，包括对所比较的序列全长获得最大比对所需的任何算法。
[0104]当比对氨基酸序列时，给定的氨基酸序列A相对于、与或针对给定的氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(或者可以这样说:给定氨基酸序列A具有或含有相对于、与或针对给定氨基酸序列B的特定的％氨基酸序列同一性)可以如下计算:
[0105]%氨基酸序列同一性=X/V 100
[0106]其中X是用A和B的序列比对程序或算法比对中评分为相同匹配的氨基酸残基数，并且
[0107]Y是B中的氨基酸残基总数。如果当氨基酸序列A的长度与氨基酸序列B的长度不相等，则A相对于B的％氨基酸序列同一性将不等于B相对于A的％氨基酸序列同一性。
[0108]“分离的”或“纯化的”肽、多肽、蛋白或生物活性片段与其天然环境的成分分开和/或回收。污染成分包括通常会干扰该多肽的诊断或治疗用途的物质，可能包括酶、激素、和其它蛋白质性质或非蛋白质性质的物质。具有优选少于30干重％的不需要的污染物质(污染物)、优选少于20 %、10%且优选少于5%的污染物的制剂认为是基本上分离的。分离的、重组产生的肽/多 肽或其生物活性部分优选基本上不含培养基，即，培养基占优选少于20%、优选少于约10%且优选少于约5%的肽/多肽制剂的体积。污染物的实例包括细胞碎片、培养基和在体外合成所述肽/多肽过程中所用的和产生的物质。
[0109]肽/多肽的保守置换在表A中以“优选的置换”的标题显示。如果这样的置换导致生物活性改变，那么可以引入表A中命名为“示例性置换”的更多实质性变化，且如下文关于氨基酸种类进一步描述，并筛选产物。
[0110]表1
[0111]
【权利要求】
1.一种特异性结合BACEl的分离的多肽，其中所述多肽包含氨基酸序列X1-S-X2-Y-C-R-L-X3-X4-X5-X6-C-(X7)n(SEQ ID NO:6)，其中Xl是谷氨酸或天冬氨酸；其中X2是甲硫氨酸、亮氨酸、异亮氨酸或缬氨酸；其中X3是亮氨酸或甲硫氨酸；其中X4是甘氨酸、丝氨酸或丙氨酸；其中X5是亮氨酸、异亮氨酸或缬氨酸；其中X6是甘氨酸或丙氨酸；其中X7是甘氨酸、天冬氨酸或谷氨酸，并且其中η是O或I。
2.权利要求1的多肽，其中η是O。
3.权利要求1的多肽，其中η是I。
4.权利要求1的多肽，其中Χ3是亮氨酸。
5.权利要求1的多肽，其中Χ4是甘氨酸。
6.权利要求1的多肽，其中Χ5是异亮氨酸。
7.权利要求1的多肽，其中Χ6是甘氨酸。
8.权利要求1的多肽，其中Χ7是甘氨酸。
9.权利要求1的多肽，其中所述多肽包含选自由下述组成的组的氨基酸序列:KEESIYCRLMGLGCG(SEQ ID NO: 14)，NELSPYCRLMGLGCD(SEQ ID NO:15)，NEESMYCRLLGIGCG(SEQ ID NO:16)和 PEESLYCRLLALGCG(SEQ ID NO:17)。
10.权利要求9的多肽，其中所述多肽包含NEESMYCRLLGIGCG(SEQ ID NO:16)(BACE020)的氨基酸序列。
11.权利要求9的多肽，其中所述多肽包含KEESIYCRLMGLGCG(SEQID NO:14)(BACE018)的氨基酸序列。
12.权利要求9的多肽，其中所述多肽包含NELSPYCRLMGLGCD(SEQ ID NO: 15)(BACE019)的氨基酸序列。
13.权利要求9的多肽，其中所述多肽包含PEESLYCRLLALGCG(SEQ ID NO:17)(BACE021)的氨基酸序列。
14.一种分离的多肽，其基本上由选自由下列组成的组的氨基酸序列组成:KEESIYCRLMGLGCG (SEQ ID NO:14), NELSPYCRLMGLGCD(SEQ ID NO:15),NEESMYCRLLGIGCG(SEQ ID NO:16)和 PEESLYCRLLALGCG(SEQ ID NO:17)。
15.权利要求14的多肽，其中所述多肽基本上由NEESMYCRLLGIGCG(SEQID NO:16)(BACE020)的氨基酸序列组成。
16.权利要求14的多肽，其中所述多肽基本上由KEESIYCRLMGLGCG(SEQID NO:14)(BACE018)的氨基酸序列组成。
17.权利要求14的多肽，其中所述多肽基本上由NELSPYCRLMGLGCD(SEQID NO:15)(BACE019)的氨基酸序列组成。
18.权利要求14的多肽，其中所述多肽基本上由PEESLYCRLLALGCG(SEQID NO:17)(BACE021)的氨基酸序列组成。
19.一种特异性结合BACEl的分离的多肽，其中所述多肽包含氨基酸序列SMYCRLLGIGCG(SEQ ID NO: 18) (BACE031)。
20.权利要求19的多肽，其中所述多肽包含氨基酸序列ESMYCRLLGIGCG(SEQID NO:19)(BACE030)。
21.权利要求20的多肽，其中所述多肽基本上由氨基酸序列ESMYCRLLGIGCG(SEQIDNO:19) (BACE030)组成。
22.—种特异性结合BACEl的分离的多肽，其中所述多肽包含在相对于C端的位置-1和-8具有半胱氨酸，在相对于C端位置-7具有精氨酸或精氨酸类似物和在相对于C端的位置-6具有亮氨酸的序列。
23.权利要求22的多肽，其中在相对于C端的位置-7的氨基酸是精氨酸。
24.权利要求22的多肽，其中所述多肽进一步在相对于C端的位置O，-2和-4包含小氨基酸。
25.权利要求24的多肽，其中在相对于C端的位置O，-2和-4的氨基酸为甘氨酸。
26.权利要求22的多肽，其中所述多肽进一步在相对于C端的位置-3包含疏水残基。
27.权利要求22的多肽，其中所述多肽进一步在-5包含亮氨酸。
28.权利要求22的多肽，其中所述多肽进一步在相对于C端的位置-9包含酪氨酸或苯丙氨酸。
29.权利要求28的多肽，其中在相对于C端的位置-9的氨基酸是酪氨酸。
30.权利要求22的多肽，其中所述多肽进一步在相对于C端的位置-10包含大体积疏水残基。
31.权利要求22的多肽，其中所述多肽进一步在相对于C端的位置-11包含丝氨酸。
32.权利要求22的多肽，其中所述多肽进一步在相对于C端的位置-12包含酸性残基。
33.权利要求32的多肽，其中在相对于C端的位置-12的氨基酸是谷氨酸。
34.权利要求22的多肽，其中在位置0，-2和-4的氨基酸是小氨基酸；其中在位置-3的氨基酸是疏水残基；其中在位置-5的氨基酸是亮氨酸或甲硫氨酸；其中在位置-7的氨基酸是精氨酸；其中在位置-9的氨基酸是酪氨酸或苯丙氨酸；其中在位置-10的氨基酸是大体积疏水残基；其中在位置-11的氨基酸是丝氨酸；并且其中在位置-12的氨基酸是酸性氨基酸。
35.权利要求34的多肽，其中在位置0，-2和-4的氨基酸是甘氨酸；其中在位置-3的氨基酸是疏水残基；其中在位置-5的氨基酸是亮氨酸；其中在位置-7的氨基酸是精氨酸；其中在位置-9的氨基酸是酪氨酸；其中在位置-10的氨基酸是大体积疏水残基；其中在位置-11的氨基酸是丝氨酸；并且其中在位置-12的氨基酸是谷氨酸。
36.权利要求22的分离的多肽，其中所述多肽包含选自表2和图2中列出的BACE结合肽序列的序列。
37.权利要求22的分离的多肽，其中所述多肽直接与至少一个特定的BACEl残基相互作用。
38.权利要求23的多肽，其中在位置-7的精氨酸与BACEl的天冬氨酸32和天冬氨酸228形成盐桥。
39.权利要求29的多肽，其中在位置-9的酪氨酸结合BACEl的Y环。
40.权利要求33的多肽，其中在位置-12的谷氨酸与BACEl的精氨酸235形成盐桥。
41.权利要求22的多肽，其中所述多肽结合BACEl在P侧的底物沟。
42.权利要求41的多肽，其中所述多肽结合BACEl在P侧的底物沟，其最接近BACEl的催化天冬氨酸残基的肽键朝向与底物或底物拟肽OM99-2方向相反的方向。
43.一种分离的多肽，其特异性结合BACE1，并且包含C端、N端或中间氨基酸序列，所述C端、N端或中间氨基酸序列包含选自表2和图2中列出的氨基酸序列的肽的氨基酸序列。
44.权利要求27的多肽，其中C端氨基酸序列选自KEESIYCRLMGLGCG(SEQ IDNO:14)，NELSPYCRLMGLGCD (SEQ ID NO: 15)，ESMYCRLLGIGCG(SEQ ID NO:19)和PEESLYCRLLALGCG(SEQ ID NO:17)。
45.一种分离的多肽，其包含与权利要求1-43中任一项的多肽竞争结合BACEl的氨基酸序列。
46.权利要求1-45中任一项的分离的多肽，其中所述多肽与细胞毒性剂、增强细胞进入的氨基酸序列标记或通常经历通过血脑屏障的吸收介导的胞转作用或受体介导的胞转作用的蛋白的氨基酸序列缀合或融合。
47.权利要求1-46中任一项的分离的多肽，其中所述多肽抑制内源性BACEI蛋白水解活性。
48.编码权利要求1-47中任一项的多肽的分离的多核苷酸或其互补序列。
49.包含权利要求48的多核苷酸的载体。
50.包含权利要求49的载体的宿主细胞。
51.—种制备多肽的方法,所述方法包括在多核苷酸表达的条件下培养权利要求48的宿主细胞。
52.特异性结合权利要求1-47中任一项的多肽的抗体或其片段。
53.包含权利要求1-47中任一项的多肽的试剂盒。
54.包含权利要求1-47中任一项的多肽和药用载体的药物制剂。
55.一种治疗患有神经疾病或病症的个体的方法，所述方法包括给所述个体施用有效量的权利要求1-47中任一项的多肽。
56.一种减少患有或有风险患上神经疾病或病症的患者中的淀粉状蛋白斑的方法，所述方法包括给个体施用有效量的权利要求1-47中任一项的多肽。
57.一种抑制患有或有风险发生神经疾病或病症的患者中的淀粉状蛋白斑形成的方法，所述方法包括给个体施用有效量的权利要求1-47中任一项的多肽。
58.权利要求55-57中任一项的方法，其中所述神经性学疾病或病症选自由下列组成的组:阿尔茨海默病(AD)，外伤性脑损伤，卒中，青光眼，痴呆，肌营养不良(MD)，多发性硬化(MS)，肌萎缩侧索硬化(ALS)，囊性纤维化，安吉尔曼综合征，利德尔综合征，佩吉特病，外伤性脑损伤，雷维小体病，脊髓灰质炎后综合征，夏伊-德雷格综合征，橄榄体脑桥小脑萎缩，帕金森病，多系统萎缩，纹状体黑质变性，核上性麻痹，牛海绵状脑病，痒病，克-雅综合征，库鲁病，格-施-沙病，慢性消耗性疾病，家族致命性失眠症，延髓性麻痹，运动神经元病，卡纳范病，亨廷顿病，神经元蜡样质脂褐质沉积病，亚历山大病，图雷特综合征，门克斯扭结发综合征，科凯恩综合征，哈勒沃登-施帕茨综合征，拉福拉病，雷特综合征，肝豆状核变性，莱施-奈恩综合征和翁-隆综合征，皮克病和脊髓小脑性共济失调。
59.权利要求58的方法，其中所述神经疾病或病症选自由阿尔茨海默病、卒中、外伤性脑损伤和青光眼组成的组。
60.一种 减少患者中淀粉状蛋白_β (Αβ)蛋白的方法，所述方法包括给所述患者施用有效量的权利要求1-47中任一项的多肽。
61.权利要求60的方法，其中所述患者患有或有风险患上神经疾病或病症。
62.权利要求61的方法，其中所述神经疾病或病症选自由下述组成的组:阿尔茨海默病，卒中，外伤性脑损伤和青光眼。
63.权利要求1-47中任一项的多肽，其用作药物。
64.权利要求1-47中任一项的多肽，其用于治疗选自由下述组成的组的神经病症:阿尔茨海默病(AD)，外伤性脑损伤，卒中，青光眼，痴呆，肌营养不良(MD)，多发性硬化(MS)，肌萎缩侧索硬化(ALS)，囊性纤维化，安吉尔曼综合征，利德尔综合征，佩吉特病，外伤性脑损伤，雷维小体病，脊髓灰质炎后综合征，夏伊-德雷格综合征，橄榄体脑桥小脑萎缩，帕金森病，多系统萎缩，纹状体黑质变性，核上性麻痹，牛海绵状脑病，痒病，克-雅综合征，库鲁病，格-施-沙病，慢性消耗性疾病，家族致命性失眠症，延髓性麻痹，运动神经元病，卡纳范病，亨廷顿病，神经元蜡样质脂褐质沉积病，亚历山大病，图雷特综合征，门克斯扭结发综合征，科凯恩综合征，哈勒沃登-施帕茨综合征，拉福拉病，雷特综合征，肝豆状核变性，莱施-奈恩综合征和翁-隆综合征，皮克病和脊髓小脑性共济失调。
65.权利要求1-47中任一项的多肽，其用于减少和/或抑制淀粉状蛋白β-(Αβ)蛋白的产生。
66.权利要求1-47中任一项的多肽在制备药物中的应用。
67.权利要求66的应用，其中所述药物用于治疗选自由下列各项组成的组的神经病症:阿尔茨海默病(AD)，外伤性脑损伤，卒中，青光眼，痴呆，肌营养不良(MD)，多发性硬化(MS)，肌萎缩侧索硬 化(ALS)，囊性纤维化，安吉尔曼综合征，利德尔综合征，佩吉特病，外伤性脑损伤，雷维小体病，脊髓灰质炎后综合征，夏伊-德雷格综合征，橄榄体脑桥小脑萎缩，帕金森病，多系统萎缩，纹状体黑质变性，核上性麻痹，牛海绵状脑病，痒病，克-雅综合征，库鲁病，格-施-沙病，慢性消耗性疾病，家族致命性失眠症，延髓性麻痹，运动神经元病，卡纳范病，亨廷顿病，神经元蜡样质脂褐质沉积病，亚历山大病，图雷特综合征，门克斯扭结发综合征，科凯恩综合征，哈勒沃登-施帕茨综合征，拉福拉病，雷特综合征，肝豆状核变性，莱施-奈恩综合征和翁-隆综合征，皮克病和脊髓小脑性共济失调。
68.权利要求66的应用，其中所述药物用于减少和/或抑制淀粉状蛋白-β(Αβ)蛋白的产生。
【文档编号】C07K7/04GK103974709SQ201280050484
【公开日】2014年8月6日 申请日期:2012年10月12日 优先权日:2011年10月14日
【发明者】罗伯特·A·拉扎勒斯, 张映楠, 王伟茹 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司