专利名称：含有2,4－亚甲基脯氨酸的血管紧张素转化酶抑制剂、合成及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一类新型的降压药物，即含有2，4-亚甲基脯氨酸的依那普利类似物。
高血压是危害现代人健康的多发病之一，它可以引起多种心血管疾病，治疗高血压是现代医学面临的巨大挑战之一。高血压是人体内血压调节失衡所引起的，肾素-血管紧张素系统(RAS)是人体血压调控的主要机制之一，它的调控机制如图一。
从图一我们可以看到，由肝脏合成并分泌的血管紧张素原在肾素作用下产生无活性的十肽，即血管紧张素I，血管紧张素I在血管紧张素转化酶(ACE)作用下，脱去羧端的组氨酰亮氨酸生成血管紧张素II。血管紧张素II作用于受体可引起多种生理活性，如强烈的血管收缩、醛甾酮分泌、肾的钠吸收，、伤口痊愈等等，因此血管紧张素II过多就可以导致血压升高，控制血管紧张素II的生成就可以达到治疗高血压的目的。由此可见RAS系统与高血压，特别是肾型高血压有着密切的联系。到目前为止抗肾型高血压的药物研究主要集中在以下三个方面(1)血管紧张素转化酶ACE抑制剂，(2)肾素抑制剂，(3)血管紧张素II受体拮抗剂。虽然肾素抑制剂和血管紧张素II的拮抗剂近些年研究取得了一些可喜的结果，但是一直没能取得突破性进展，仅仅处在研究阶段，还没有相应的药物上市。但是ACE抑制剂则不然，它已有多种药物上市用于高血压的治疗，市场调查表明，ACE抑制剂将是需求增长最快的一类药物，近十年来它一直是人们感兴趣的研究领域。ACE是一种二肽水解酶，它不仅能使血管紧张素I转化为具有收缩血管的血管紧张素II，而且还能催化水解血管舒缓素(brandykinin)降解神经肽和P物质。ACE广泛存在于多种组织中，如肺、肾脏、脑、血液、皮肤等等。它是一种糖蛋白，分子量为130,000到160,000D，这主要取决于来源的组织。
Squibb公司的Ondentti和Cushman认为ACE与含锌的羧肽酶A相似，提出了底物与酶相互作用模型(见图2)。从图2中我们可以发现在ACE中重要的活性部位包括S1、S′1、S′2，它们是酶对底物发生特异性作用的部位(11)。在ACE活性部位中重要的催化集团包括精氨酸、酪氨酸、赖氨酸、谷氨酸和螯合的Zn(II)等。
自从1965年Ferreia等从蛇毒中分到九肽替普罗肽(Teprotide)对ACE有特异性抑制作用，人们开始了对ACE抑制剂的研究。到目前为止，ACE抑制剂有两大类。(一)肽类抑制剂、(二)肽类似物ACE抑制剂，肽类似物抑制剂按肽链的长短又可以分为两类。1.二肽类似物抑制剂二肽类似物抑制剂的典型代表为Captopril，它与ACE活性部位的作用机制见Fig 3，从图中我们可以看到，Captopril不仅与酶的S1′、S2′活性部位相结合，而且巯基还可以强烈地与锌离子络合，从而表现出较好的抑制活性。其中一些抑制剂都是建立在对Captopril的改造上，基本上都是以巯基丙脯氨酸为模板，然后以一些脯氨酸类似物取代脯氨酸或者是用一些与锌离子配位的基团如-COOH、-CONOH、-PO3H2等取代巯基。
虽然二肽类似物抑制剂具有较高的活性，可以用于作为口服药物，但是它也具有显著的缺点，如口服量大，易引起味觉消失和皮疹等，因此人们逐渐转向不含巯基的三肽类似物抑制剂的研究。
从图2图3的对比，我们可以发现，卡托普利没有相应的取代基和ACE的活性部位S1相作用，然而从底物与ACE相互作用看，S1活性部位对于抑制剂的结合也起到十分重要作用。Patchett等人首先成功地引入与S1.活性场相结合的羧基基团。合成了一系列三肽类似物抑制剂，在这些抑制剂中效果最好的是化合物Enalaprilat和Lisinopril它们的活性要比卡托普利高十几倍，临床上已用于治疗高血压。其中Enalapril是Enalaprilat的药物前体，它具有更好的体内耐受性，因此在临床上得到了更广泛的应用。Enalaprilat类抑制剂之所以具有较好的活性，这是因为它不仅具有与锌离子配位的羧基，而且还有与S1活性场相结合的苯基侧链以及亚氨与酶所形成的氢键，见图4。不含羧基的三肽类似物抑制剂，它们虽然没有与锌离子强配位的基团，但是抑制活性却很高。这可能由于抑制剂上的羰基在酶上氨基酸的羧基负离子辅助下表现出较强的亲核配位能力，见图五。Fig.5 Proposed binding of the ketomethylene inhibitor 10c at the active siteof AC由此可见，三肽类似物抑制剂能更好地与ACE的活性中心相匹配，具有较高的抑制活性，而且依那普利是一类不含巯基的高效ACE抑制剂，没有卡托普利因含有巯基所带来的种种副作用，因此血管紧张素转化酶抑制剂的研究近些年来虽有了长足发展，并已有多种药物用于高血压治疗，但是这些药物都或多或少具有一些副作用，如咳嗽、血管性神经水肿等等，寻找副作用小但高效的ACE抑制剂一直是药学、化学工作者所追求的目标。而2，4-亚甲基脯氨酸是一种从Aleleia herbert smiltii pittier分离出的非正常氨基酸。Montelione等人利用核磁共振研究了含有2，4-亚甲基脯氨酸的二肽Ac-Tyr-2，4-MePro的溶液构象，证明反式构象占优(＞95％)。Talluri等人研究了Ac-2，4-MePro-NHCH3的衍生物晶体构象，也证明反式为优式构象。通过利用分子动力学和CNDO 2对含有2，4-亚甲基脯氨酸的二肽计算发现反式构象和顺式构象自由能差为5.9-8.8kal/mol，远远大于脯氨酸的2kal/mol。由此可见，2，4-亚甲基脯氨酸是很好的脯氨酸替代物，我们针对上述存在的问题和特点，将2，4-亚甲基脯氨酸首次用于ACE抑制剂，合成了一类以2，4-亚甲基脯氨酸替代脯氨酸的依那普利类似物，以寻求一类高抑制活性的ACE抑制剂。
本发明的目的就是提供一种含有2，4-亚甲基脯氨酸的血管紧张素转化酶抑制剂、合成及其用途。通过对肽骨架的修饰和改造，设计和合成了三肽类似物抑制剂-含有2，4-亚甲基脯氨酸的依那普利类似物，即以2，4-亚甲基脯氨酸替代脯氨酸以限制肽键的反式构象、增强亲脂性，从而提高了该ACE抑制剂的生物活性。
本发明所提供的含有2，4-亚甲基脯氨酸血管紧张素转化酶抑制剂具有如下分子通式
R2＝H，CnH2n+1，n＝14；R3＝HCH3；R4＝CnH2n+1，n＝1-3，NH2(CH2)m-，m＝1-4.其可以是1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸苄脂、1-(N-(1(R)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐、1-(N、N-甲基-(1(S)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐、1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐、1-(N-(1(R)-羧乙基-3-对甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐、1-(N-(1(S)-羧乙基-3-对甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐、1-(N-(1(R)-羧乙基-3-对氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐、1-(N-(1(S)-羧乙基-3-对氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐、1-(N-(1(R)-羧甲基-3-间氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐、1-(N-(1(R)-羧甲基-3-间氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐、1-(N-(1(S)-羧乙基-3-对氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐、1-(N-(1(S)-羧丁基-3-对氟苯乙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐、1-(N-(1(R)-羧丁基-3-苯乙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐、1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐、1-(N-(1(R)-羧基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸、1-(N-(1(S)-羧基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸、1-(N-(1(R)-羧乙基-3-苯乙基-N-甲基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸、1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯乙基-N-甲基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸、1-(N-(1(R)-羧基-3-苯丙基-N-甲基)-L-(γ-氨基)丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸、1-(N-(1(S)-羧基-3-苯丙基-N-甲基)-L-(γ-氨基)丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸、1-(N-(1(R)-羧基-3-对甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸、1-(N-(1(S)-羧基-3-对甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸、1-(N-(1(R)-羧基-3-间甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸、1-(N-(1(S)-羧基-3-间甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸、1-(N-(1(R)-羧基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸、1-(N-(1(S)-羧基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸、1-(N-(1(R)-羧基-3-邻甲基苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸、1-(N-(1(S)-羧基-3-邻甲基苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸。1-(N-(1(S)-羧基-3-苯甲基-N-甲基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸、1-(N-(1(R)-羧基-3-苯甲基-N-甲基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸、本发明还提供了该类含有2，4-亚甲基脯氨酸的血管紧张素转化酶抑制剂的合成方法。分下列步骤首先是合成2，4-亚甲基脯氨酸苄酯，即以叔丁氧基甲酰胺(t-Butyl Carbamate-Boc)保护的丝氨酸为起始原料，利用苄基保护羧基，再与对甲苯磺酰氯反应，在三乙胺的作用下发生消除反应，生成了保护的脱氢丙氨酸。脱氢丙氨酸与烯丙基溴反应。再进一步在高压汞灯照射下发生分子内[2+2]加成反应，生成了Boc保护的2，4-亚甲基脯氨酸苄酯，脱除Boc保护基后得化合物2，4-亚甲基脯氨酸苄酯。反应通式如下
Reagents and conditionsa.BzlBr，K2CO3，acetone，reflux；b.TsCl，pyridine，0℃；c.Et3N，ether，0℃→5℃；d.Allyl bromide，K2CO3，acetone，reflux；e.Hg lamp(high pressure)，acetophenone，benzene；f.3.9N HCl in AcOEt，R.T.
其次是合成酮酸酯以进一步合成含有手性的丙氨酸化合物，我们采用下面三种方法合成酮酸酯当苯环上无取代基时，酮酸酯可利用格氏试剂与草酸二乙酯一步反应制得，反应通式如下
Reagents and conditionsa.40％HBr，98％H2SO4；b.Mg，I2，THF；c.(COOEt)2，THF.
当苯环上取代基为甲氧基、烷基时，丙酮酸与对甲氧基苯甲醛缩合，然后乙酯化，再用钯碳选择性氢化双键生成酮酸酯，反应通式如下
Reagents and conditionsa.p-MeO PhCHO，2N NaOH，EtOH；b.DCC，EtOH，CHCl3；c.Pd/C，H2(leq.)，1atm.
当苯环上的取代基为氯或氟原子时，酮酸酯合成是先缩合、乙酯化，再硼氢化钾还原羰基，然后碱性条件下再加热煮沸使烯醇异构化，反应通式如下
Reagents and conditionsa.p-Cl PhCHO，2N NaOH，EtOH；b.KBH4，6NHCl，H2O；c.5％NaOH，boiling；d.DCC，EtOH，CHCl3.再次是含有手性的丙氨酸的合成酮酸酯与丙氨酸苄酯发生反应生成西佛碱，西
(R＝HCL MeO n＝2，3)Reagents and conditionsa.NaBH3CN，NMM，EtOH，R.T.b.Pd/C，H2，latm.佛碱被氰基取代的硼氢化钠还原得到还原胺化产
Reagents and conditionsa.DCC，HOBt，DMF；b.Pd/C，H2，HCl，THF；c.NaOH，EtOH，R.T.，Dowex 50×4 200-400 mesh；d.Mel，NaHCO3，DMF；e.Pd/C，THF.物，再催化氢化脱掉苄基即得含有手性的丙氨酸化合物，反应通式如上。
最后是含有2，4-亚甲基脯氨酸的血管紧张素转化酶抑制剂的合成，反应通式如上图。即由化合物2，4-亚甲基脯氨酸苄酯与含有手性的丙氨酸化合物在常规的二环己基碳二亚胺(Dicyclohexylcarbodimide-DCC)和1-羟基拚三唑(1-Hydrobenzotriazole-HOBt)溶剂中缩合反应，或胺烷基化后，再在甲醇溶剂中利用Pd/C作为催化剂催化，在氢化时加入乙酸乙酯、HCl溶液，以四氢呋喃作溶剂，脱掉苄基即得所需的最终产物A、B、C、E。
并对其中部分的含有2，4-亚甲基脯氨酸的血管紧张素抑制剂抑制活性进行了测定，结果如下表
表1的测定和比较结果证实了此类依那普利类似物的较高的生物活性，也决定了其用途是作为治疗高血压的降压药物。
综上所述，由于2，4-亚甲基脯氨酸替代脯氨酸，增加了肽键的反式构象的比例、增强亲脂性，因此其生物活性较已知药物高，其中化合物1-(N-(1(S)-羧基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸的IC50值为1.3nM，抑制活性约是Enalaprilat的两倍，是卡托普利的七倍。乙基保护化合物1-(N-(1(S)-乙氧基甲酰基-3-对氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐的抑制活性是药物前体Enalapril的五倍。由此可见，2，4-亚甲基脯氨酸是脯氨酸很好的替代物，是一个很有发展前途的抑制剂。
以下实施例将有助于理解本发明，但不限于本发明实施例一.2，4-亚甲基脯氨酸苄脂合成叔丁氧基甲酰胺BocSer(9.35g，45mmol)溶于110ml丙酮中，加入苄基溴(6.4ml，54mmol)、碳酸钾(13.7g，99mmol)，搅拌下加热回流3-8小时，过滤掉碳酸钾，减压浓缩，加入乙酸乙酯溶解，饱和氯化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝40∶1)得无色液体6.7g，产率50.5％。1H NMR(90MHz，CCl4)δ7.30(5H，s)，5.48(1H，br s)，5.15(2H，s)，4.26(1H，m)，3.82(2H，m)，1.43(9H，s).
将上述产物(10.1g，34.2mmol)溶于20ml吡啶中，0--25℃下加入对甲苯磺酰氯(7.2g，37.6mmol)，1-15℃搅拌2-15小时。加入200ml乙醚，冰浴冷却下加入盐酸中和至中性，分出醚层，水层再用乙醚提取两次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝4∶1、2∶1)得微黄色固体，m.p.78-80℃，产率68.0％。1H NMR(90MHz)δ7.80(2H，m)，7.30(7H，m)，5.30(1H，br s)，5.15(2H，s)，4.50(1H，m)，4.35(2H，m)，2.45(3H，s)，1.43(9H，s).
将上述固体(10.4g，23.15mmol)溶于50ml 1∶1的乙酸乙酯/乙醚混合溶剂中，加入三乙胺(4.5ml，32.41mmol)，室温搅拌2-8小时，过滤，滤液用5％柠檬酸溶液(2×10ml)、饱和碳酸氢钠溶液(2×10ml)、饱和氯化钠溶液(2×10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝20∶1)得到无色液体6.31g，产率98.4％。1H NMR(90MHz，CCl4)δ7.23(5H，s)，6.79(1H，br s)，6.10(1H，s)，5.60(1H，s)，5.14(2H，s)，1.40(9H，s).
将上述产物(3.9g，14.1mmol)溶于20ml丙酮，依次加入烯丙基溴(2.2ml，25.4mmol)、碳酸钾(3.51g，25.4mmol)，搅拌下加热回流2-30小时，过滤掉碳酸钾，减压浓缩，向残留物中加入75ml乙酸乙酯，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50∶1、20∶1)得无色油状物3.16g，产率70.6％。1H NMR(90MHz)δ7.30(5H，s)，5.98-5.55(1H，m)，5.80(1H，s)，5.34(1H，s)，5.14(2H，s)，5.00(1H，m)，4.00(2H，d，J＝9.0Hz)，1.43(9H，s).
将上述产物(2.0g，6.3mmol)溶于250ml苯，加入光敏剂苯乙酮(24mg，0.2mmol)，高压汞灯照射2-30小时，减压浓缩，快速柱层析得无色液体1.45g，产率72.6％。1H NMR(90MHz)δ7.32(5H，s)，5.12(2H，s)，3.44(2H，s)，2.72(1H，m)，2.23-2.02(2H，m)，1.70(2H，m)，1.42(9H，s).
将上述产物(2.3g，7.25mmol)放入25ml蛋形瓶中，加入10ml HCl-乙酸乙脂溶液，室温搅拌1-5小时，TLC表明原料全部消失，减压浓缩，真空干燥得微黄色固体2，4-亚甲基脯氨酸苄脂1.75g，m.p.139-140℃，产率95.2％。二、酮酸酯的合成1、苯环上无取代基按文献(L.M.Weinstock，R.B.Currie，and A.V.Lovell，synth，commun.，1981，11(2)，943.) 合成苯乙醇在酸性条件下溴化反应，在THF溶剂格氏化后与草酸二乙酯反应，得苯丙酮酸酯，减压蒸馏，收集109-113℃/0.3mmHg(lit74，105-110℃/0.2-0.3mmHg)馏分得无色液体苯丙酮酸酯，产率56.2％。1H NMR(60MHz，CCl4)δ7.20(5H，s)，4.20(2H，q，J＝6.9Hz)，2.90(4H，m)，1.35(3H，t，J＝7.0Hz).
苯丙醇同样步骤反应收集130-135℃/0.1-0.2mmHg(lit74，130℃/0.1mmHg)馏分得无色液体苯丁酮酸酯，产率60.2％。1H NMR(90MHz，CCl4)δ7.18(5H，s)，4.20(2H，q，J＝6.8Hz)，2.72(4H，m)，1.92(2H，m)，1.34(3H，t，J＝7.0Hz).2.当苯环上的取代基为氯Cl和氟F的合成丙酮酸(20.9ml，0.3mol)放入500ml三颈瓶中，冰水浴冷却下加入2N氢氧化钠(150ml，0.3mol)、10ml乙醇、对氯苯甲醛(42g，0.3mol)，电动搅拌下再滴加氢氧化钠(150ml，0.3mol)，搅拌1-6小时，过滤，所滤固体依次用蒸馏水、甲醇、乙醚洗涤，真空干燥得黄色固体50g，产率71.7％。
上述固体(50g，0.214mol)溶于700ml蒸馏水，加入94％硼氢化钾(7.0g，0.122mol)，搅拌至溶液黄色褪掉，室温搅拌1-10小时，放置过夜。冰浴冷却下用盐酸酸化，无色固体析出，过滤，真空干燥得20.2g，产率44.4％。m.p.138-140℃。1H NMR(90MHz)δ7.30(4H，m)，6.50-5.70(2H，br m)，3.30(1H，d，J＝6.8Hz)，3.0(1H，m).
上述固体(20g，0.094mol)放入500ml园底烧瓶中，加入230ml氢氧化钠溶液，水浴加热1-4小时，体系呈微黄色溶液。冰浴冷却，浓盐酸酸化至PH＝3，乙醚提取三次，无水硫酸镁干燥，减压浓缩得微黄色固体15.6g，产率78.0％。
上述产物(15.6g，73.4mmol)溶于100ml氯仿中，加入乙醇(8.5ml，146.8mmol)、DCC(15.1g，73.4mmol)，室温搅拌6-30小时，减压浓缩，加入乙酸乙酯白色固体析出，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液、饱和氯化钠溶液各洗两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，快速柱层析得淡黄色液体对氯苯丙酮酸酯11.8g，产率66.8％。1H NMR(60MHz，CCl4)δ7.19(4H，m)，4.18(2H，q，J＝7.2Hz)，2.95(4H，m)，1.37(3H，t，J＝7.0Hz).3.当苯环上的取代基为甲氧基Meo和烷基的合成丙酮酸(11.9ml，0.17mol)放入500ml三颈瓶中，冷却条件下搅拌加入氢氧化钠(85ml，0.17mol)、对甲氧基苯甲醛(20.8ml，0.17mol)，再滴加氢氧化钠(85ml，0.17mol)，室温搅拌1-6小时，酸化至pH＝3，乙酸乙酯提取三次，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得黄色固体30.0g，产率85.6％。
将上述黄色固体(6.5g，31.5mmol)溶于50ml氯仿中，加入乙醇(3.70ml，63.0mmol)、DCC(6.5g，31.5mmol)，搅拌24小时。蒸去溶剂，加入乙酸乙酯白色固体析出，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液、饱和氯化钠溶液各洗两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，快速柱层析得黄色固体6.78g，m.p.69-71℃，产率92.0％。1H NMR(90MHz)δ7.80(1H，d，J＝17Hz)，7.55(2H，d，J＝9.0Hz)，7.16(1H，d，J＝17Hz)，6.90(2H，d，J＝9.0Hz)，4.36(2H，q，J＝7.0Hz)，3.90(3H，s)，1.40(3H，J＝7.0Hz).
将上述产物(1.17g，5.0mmol)溶于20ml甲醇中，加入100mg Pd/C，通入氢气，滤去钯碳，减压浓缩，快速柱层析得无色液体对甲氧基丙酮酸酯800mg，产率67.8％。1H NMR(90MHz，CCl4)δ7.09(2H，d，J＝8.9Hz)，6.70(2H，d，J＝9.0Hz)，4.20(2H，q，J＝7.0Hz)，3.75(3H，s)，2.91(4H，m)，1.37(3H，t，J＝6.9Hz).三.手性丙氨酸的合成1、通用实验步骤在250ml蛋形瓶中放入上述酮酸酯(30mmol)、丙氨酸苄脂(20mmol)和45ml乙醇，加入NMM(20mmol)，室温搅拌1-6小时，然后滴入NaBH3CN(40mmol)的乙醇溶液，室温搅拌。减压浓缩，向残留物中加入50ml乙醚和50ml水，分出醚层，水相再用乙醚提取两次，合并有机相，无水硫酸镁干燥。减压浓缩，加入30ml 1.43N HCl乙酸乙酯溶液，再减压浓缩，加入无水乙醚微黄色粘稠物析出，倾掉乙醚，再用无水乙醚洗涤两次，然后加入饱和碳酸氢钠溶液使体系呈碱性，乙醚提取三次，合并有机相，无水硫酸镁干燥，减压浓缩，柱层析得到无色液体。
化合物a(R＝H，n＝2，S config.)。产率26.2％，[α]D25＝-19.1(c，1.36，CH2Cl2)。1H NMR(300MHz)δ7.40(5H，s)，7.35-7.18(5H，m)，5.20(2H，ABsystem)，4.20(2H，m)，3.50(1H，q，J＝6.9Hz)，3.40(1H，t，J＝6.5Hz)，2.77(2H，m)，2.22(1H，br s)，2.10-1.85(2H，m)，1.42(3H，d，J＝6.9Hz)，1.32(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z370(M++1)，296(M+-CO2Et)，234(M+-COOBn)，91(C6H5CH2+，base peak).Anal.Cald.for C22H27NO4C，71.91；H，7.40；N，3.81FoundC，71.33；H，7.39；N，4.16化合物b(R＝H，n＝2，R config.)产率43.1％，[α]D25＝-18.5(c，0.98，CH2Cl2)。1H NMR(300MHz)δ7.35(5H，s)，7.30-7.10(5H，m)，5.10(2H，ABsystem)，4.12(2H，m)，3.40(1H，q，J＝7.0Hz)，3.28(1H，t，J＝6.6Hz)，2.70(2H，t，J＝7.9Hz)，2.50(1H，br s)，2.05-1.85(2H，m)，1.45(3H，d，J＝7.0Hz)，1.35(3H，t，J＝7.2Hz).MS m/z370(M++1)，296(M+-CO2Et)，234(M+-COOBn)，91(C6H5CH2+，base peak).Anal.Cald.for C22H27NO4C，71.91；H，7.40；N，3.81FoundC，71.23；H，7.42；N，4.03化合物c(R＝H，n＝3，S config.)产率31.8％，[α]D25＝-22.93(c，1.08，CH2Cl2)。1H NMR(300MHz)δ7.42(5H，s)，7.40-7.20(5H，m)，5.20(2H，ABsystem)，4.22(2H，m)，3.45(1H，q，J＝7.0Hz)，3.39(1H，t，J＝6.0Hz)，2.67(2H，m)，2.40(1H，br s)，1.90-1.60(4H，m)，1.40(3H，d，J＝7.0Hz)，1.30(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z384(M++1，base peak)，310(M+-CO2Et)，248(M+-COOBn).Anal.Cald.for C23H29NO4C，72.03；H，7.62；N，3.65FoundC，71.69；H，7.73；N，3.92化合物d(R＝H，n＝3，R config.)产率41.0％，[α]D25＝-11.07(c，1.76，CH2Cl2)。1H NMR(300MHz)δ7.42(5H，s)，7.39-7.20(5H，m)，5.20(2H，ABsystem)，4.20(2H，m)，3.45(1H，q，J＝7.0Hz)，3.35(1H，m)，2.69(2H，m)，2.56(1H，br s)，1.76(4H，m)，1.40(3H，d，J＝7.0Hz)，1.32(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z384(M++1，base peak)，310(M+-CO2Et)，248(M+-COOBn).Anal.Cald.for C23H29NO4C，72.03；H，7.62；N，3.65
FoundC，71.87；H，7.65；N，3.91化合物e(R＝Cl，n＝2，S config.)产率18.2％，[α]D25＝-16.4(c，1.06，CH2Cl2)。1H NMR(300MHz)δ7.38(5H，s)，7.25(2H，d，J＝8.4Hz)，7.05(2H，d，J＝8.4Hz)，5.15(2H，AB system)，4.17(2H，dq，J＝14.0Hz，3.5Hz)，3.45(1H，q，J＝7.0Hz)，3.30(1H，t，J＝6.4Hz)，2.65(2H，m)，2.05-1.75(3H，m)，1.39(3H，d，J＝7.0Hz)，1.28(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z404(M++1)，330(M+-CO2Et)，268(M+-COOBn，base peak).Anal.Cald.for C22H26NO4ClC，65.42；H，6.48；N，3.48FoundC，65.07；H，6.64；N，3.75化合物f(R＝Cl，n＝2，R config.)产率26.5％，[α]D25＝-21.3(c，1.81，CH2Cl2)。1H NMR(300MHz)δ7.35(5H，s)，7.25(2H，d，J＝8.3Hz)，7.10(2H，d，J＝8.3Hz)，5.15(2H，AB system)，4.15(2H，dq，J＝14.0Hz，3.5Hz)，3.38(1H，q，J＝6.9Hz)，3.25(1H，t，J＝6.4Hz)，2.70(2H，t，J＝7.9Hz)，2.30(1H，br s)，2.05-1.80(2H，m)，1.35(3H，d，J＝7.0Hz)，1.29(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z404(M++1)，330(M+-CO2Et)，268(M+-COOBn，base peak).Anal.Cald.for C22H26NO4ClC，65.42；H，6.48；N，3.48FoundC，65.34；H，6.60；N，3.69化合物g(R＝MeO，n＝2，S config.)产率24.3％，[α]D25＝-16.8(c，0.96，CH2Cl2)。1H NMR(300MHz)δ7.36(5H，s)，7.09(2H，d，J＝8.6Hz)，6.81(2H，d，J＝8.6Hz)，5.16(2H，AB system)，4.18(2H，m)，3.77(3H，s)，3.45(1H，q，J＝7.0Hz)，3.15(1H，t，J＝6.5Hz)，2.78-2.55(2H，m)，2.00(1H，br s)，1.95(2H，m)，1.37(3H，d，J＝6.9Hz)，1.29(3H，t，J＝7.0Hz).MS m/z400(M++1)，326(M+-CO2Et，base peak)，264(M+-COOBn).Anal.Cald.for C23H29NO5C，69.16；H，7.31；N，3.50FoundC，69.12；H，7.32；N，3.41化合物h(R＝MeO，n＝2，R config.)产率34.0％，[α]D25＝-22.2(c，0.99，CH2Cl2)。1H NMR(300MHz)δ7.38(5H，s)，7.10(2H，d，J＝8.6Hz)，6.82(2H，d，J＝8.6Hz)，5.15(2H，AB system)，4.15(2H，m)，3.77(3H，s)，3.40(1H，q，J＝7.0Hz)，3.25(1H，t，J＝6.9Hz)，2.64(2H，t，J＝7.2Hz)，2.32(1H，br s)，1.90(2H，m)，1.33(3H，d，J＝7.3Hz)，1.28(3H，t，J＝7.0Hz).MS m/z400(M++1)，326(M+-CO2Et，base peak)，264(M+-COOBn).Anal.Cald.for C23H29NO5C，69.16；H，7.31；N，3.50FoundC，69.22；H，7.31；N，3.302、通用实验步骤将上述化合物(5mmol)溶于30ml乙醇中，加入200mg 10％Pd/C，60Mpa压力下氢化，有白色固体析出，加热使之溶解，趁热过滤，滤液浓缩析出无色固体，过滤，用无水乙醚洗涤，真空干燥。得到相对应的化合物手性丙氨酸2。
2a(R＝H，n＝2，S config.)，m.p.147-149℃。产率67.9％，[α]D25＝+29.8(c，1.33，MeOH)(lit77，[α]D25＝+28.6[c，1.07，MeOH])。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.25(5H，m)，4.10(2H，q，J＝6.9Hz)，3.27(1H，t，J＝6.5Hz)，3.20(1H，q，J＝6.9Hz)，2.63(2H，t，J＝7.8Hz)，1.85(2H，m)，1.35-1.10(6H，t over d).MS m/z280(M++1)，234(M-COOH)，206(M-CO2Et，base peak).Anal.Cald.for C15H21NO4C，64.50；H，7.57；N，5.06FoundC，64.69；H，7.62；N，5.162b(R＝H，n＝2，R config.)，m.p.138-140℃。产率61.0％，[α]D25＝-28.9(c，1.20，MeOH)(lit77，[α]D25＝-27.1[c，1.09，MeOH])。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.23(5H，m)，4.09(2H，m)，3.21(2H，tover q)，2.67(2H，t，J＝7.7Hz)，1.85(2H，m)，1.25-1.10(6H，t over d).MS m/z280(M++1)，234(M+-COOH)，206(M+-CO2Et，base peak).Anal.Cald.for C15H21NO4C，64.50；H，7.57；N，5.02FoundC，64.54；H，7.59；N，5.13
2c(R＝H，n＝3，S config.)产率77.0％，[α]D25＝+14.0(c，1.33，MeOH)，m.p.138-140℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.23(5H，m)，4.10(2H，q，J＝7.0Hz)，3.23(1H，t，J＝6.5Hz)，3.18(1H，q，J＝7.0Hz)，2.57(2H，t，J＝7.0Hz)，1.80-1.41(4H，m)，1.30-1.10(6H，t over d).MS m/z294(M++1)，248(M+-COOH)，220(M+-CO2Et，base peak).Anal.Cald.for C16H23NO4C，65.51；H，7.90；N，4.77FoundC，65.42；H，8.04；N，4.912d(R＝H，n＝3，R config.)产率80.2％，[α]D25＝-20.5(c，0.99，MeOH)，m.p.150-152℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.23(5H，m)，4.09(2H，m)，3.28(1H，t，J＝6.4Hz)，3.17(1H，q，J＝6.9Hz)，2.57(2H，t，J＝7.3Hz)，1.70-1.45(4H，m)，1.28-1.12(6H，t over d).MS m/z294(M++1)，248(M+-COOH)，220(M+-CO2Et，base peak).Anal.Cald.for C16H23NO4C，65.51；H，7.90；N，4.77FoundC，65.54；H，8.05；N，4.882e(R4＝Cl，n＝2，S config.)产率81.4％，[α]D25＝+25.1(c，1.91，MeOH)，m.p.176-177℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.37(5H，m)，4.26(2H，m)，4.18-4.08(2H，m)，2.83(1H，m)，2.77(1H，m)，2.23(2H，m)，1.52(3H，d，J＝7.1Hz)，1.28(3H，t，J＝7.0Hz).MS m/z296(MH+-H2O)，280(M++2-Cl)，234(MH+-Cl-COOH)，206(MH+-Cl-COOEt).Anal.Cald.for C15H20NO4ClC，57.42；H，6.42；N，4.46FoundC，57.85；H，7.13；N，4.512f(R＝Cl，n＝2，R config.)产率79.5％，[α]D25＝-32.3(c，1.04，MeOH)，m.p.188-190℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.30(5H，m)，4.27(2H，m)，4.15(1H，q，J＝7.2Hz)，4.08(1H，m)，2.75(2H，m)，2.25(2H，m)，1.52(3H，d，J＝7.1Hz)，1.30(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z296(MH+-H2O)，280(M++2-Cl)，234(MH+-Cl-COOH)，206(MH+-Cl-COOEt).Anal.Cald.for C15H20NO4ClC，57.42；H，6.42；N，4.46FoundC，57.53；H，6.94；N，4.412g(R＝MeO，n＝2，S config.)产率76.1％，[α]D25＝+29.2(c，1.16，MeOH)，m.p.142-144℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.12(2H，d，J＝8.6Hz)，6.87(2H，d，J＝8.6Hz)，4.10(2H，q，J＝7.0Hz)，3.71(3H，s)，3.27(1H，t，J＝6.5Hz)，3.20(1H，q，J＝6.9Hz)，2.58(2H，t，J＝7.5Hz)，1.80(2H，m)，1.30-1.10(6H，tover d).MS m/z310(M++1)，264(M+-COOH)，236(M+-COOEt)，121(CH2OC6H5CH2+，base peak).Anal.Cald.for C16H23NO5C，62.12；H，7.49；N，4.52FoundC，62.04；H，7.55；N，4.582h(R4＝MeO，n＝2，R config.)产率83.3％，[α]D25＝-28.3(c，1.90，MeOH)，m.p.135-137℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.11(2H，d，J＝8.5Hz)，6.87(2H，d，J＝8.6Hz)，4.09(2H，m)，3.76(3H，s)，3.25-3.15(2H，m)，2.58(2H，t，J＝7.5Hz)，1.80(2H，m)，1.30-1.10(6H，t over d).MS m/z310(M++1)，264(M+-COOH)，236(M+-COOEt)，121(CH2OC6H5CH2+，base peak).Anal.Cald.for C16H23NO5C，62.12；H，7.49；N，4.52FoundC，62.04；H，7.55；N，4.58四。2，4-亚甲基脯氨酸的血管紧张素抑制剂的合成1.通用实验步骤化合物2(1mmol)与化合物2，4-亚甲基脯氨酸苄脂(254mg，1mmol)、HOBt(153mg，1mmol)溶于20ml DMF，冰浴冷却下加入NMM(0.11ml，1mmol)、DCC(206mg，1mmol)，室温搅拌24小时。减压浓缩，加入乙酸乙酯，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液、饱和氯化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，快速柱层析得无色粘稠物，用HCl和乙酸乙酯处理得如下产物实施例1以2a为原料得产物1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸苄脂柱层析洗脱液石油醚/乙酸乙酯＝1∶1，产率62.7％。1H NMR(300MHz)δ7.50-7.08(10H，m)，5.27(2H，AB system)，4.15(2H，m)，3.55(2H，m)，3.47(1H，q，J＝6.8Hz)，3.30(1H，t，J＝6.6Hz)，2.72(1H，t，J＝3.0Hz)，2.65(2H，m)，2.20(1H，br s)，2.23-2.02(2H，m)，2.03-1.90(2H，m)，1.69(2H，m)，1.35-1.25(6H，t over d).MS m/z479(M++1)，405(M+-COOEt)，234(C6H5CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+，base peak)，91(C6H5CH2+).Anal.Cald.for C28H34N2O5·3/4H2OC，68.36；H，7.27；N，5.69FoundC，68.22；H，7.25；N，5.77实施例2以2b为原料得产物1-(N-(1(R)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸苄脂，柱层析洗脱液石油醚/乙酸乙酯＝3∶2，产率66.9％。1H NMR(300MHz)δ7.50-7.06(10H，m)，5.23(2H，AB system)，4.13(2H，m)，3.50(2H，m)，3.42(1H，q，J＝6.8Hz)，3.25(1H，t，J＝6.5Hz)，2.80(1H，t，J＝2.9Hz)，2.71(2H，t，J＝8.0Hz)，2.37(1H，br s)，2.10(2H，m)，2.09-1.85(2H，m)，1.67(2H，m)，1.27(3H，d，J＝7.2Hz)，1.23(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z479(M++1)，405(M+-COOEt)，234(C6H5CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+，base peak)，91(C6H5CH2+).Anal.Cald.for C28H34N2O5·3/4H2OC，68.36；H，7.27；N，5.69FoundC，68.45；H，7.23；N，5.84实施例3以2c为原料得产物1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸苄脂，柱层析洗脱液石油醚/乙酸乙酯＝1∶1，产率69.1％。1H NMR(300MHz)δ7.50-7.00(10H，m)，5.20(2H，AB system)，4.15(2H，m)，3.50(2H，m)，3.45(1H，q，J＝6.8Hz)，3.27(1H，t，J＝5.5Hz)，2.81(1H，s)，2.60(2H，m)，2.20(1H，br s)，2.15(2H，m)，1.70(2H，m)，1.61(4H，m)，1.40-1.15(6H，t over d).MS m/z493(M++1)，248(C6H5CH2CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+，base peak)，419(M+-COOEt)，91(C6H5CH2+).Anal.Cald.for C29H36N2O5.1/4H2OC，70.07；H，7.40；N，5.64FoundC，70.03；H，7.51；N，5.89实施例4以2d为原料得产物1-(N-(1(R)-羧乙基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸苄脂，柱层析洗脱液石油醚/乙酸乙酯＝3∶2，产率58.9％。1H NMR(300MHz)δ7.57-7.00(10H，m)，5.20(2H，AB system)，4.10(2H，m)，3.47(2H，m)，3.38(1H，q，J＝6.8Hz)，3.28(1H，t，J＝5.5Hz)，2.80(1H，s)，2.60(2H，m)，2.31(1H，br s)，2.10(2H，m)，1.72(2H，m)，1.65(4H，m)，1.37-1.08(6H，t over d).MS m/z493(M++1)，248(C6H5CH2CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+，base peak)，419(M+-COOEt)，91(C6H5CH2+).Anal.Cald.for C29H36N2O5·1/4H2OC，70.07；H，7.40；N，5.64FoundC，70.16；H，7.52；N，5.98实施例5以2e为原料得产物1-(N-(1(S)-羧乙基-3-对氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸苄脂，柱层析洗脱液石油醚/乙酸乙酯＝3∶2，产率41.0％。1H NMR(300MHz)δ7.50-7.10(9H，m)，5.19(2H，AB system)，4.25(2H，m)，4.10(1H，m)，3.48(1H，m)，2.88(2H，m)，2.70(1H，m)，2.47(2H，m)，2.12(2H，m)，1.88(2H，m)，1.77(2H，m)，1.60(3H，d，J＝7.0Hz)，1.29(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z479(MH+-HCl)，234(C6H5CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+，base peak)，405(M+-HCl-COOEt).Anal.Cald.for C28H33N2O5Cl·HCl·H2OC，59.26；H，6.40；N，4.94FoundC，59.20；H，7.00；N，5.12实施例6以2f为原料得产物1-(N-(1(R)-羧乙基-3-对氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸苄脂，柱层析洗脱液石油醚/乙酸乙酯＝2∶1，产率35.2％。1H NMR(300MHz)δ7.42-7.10(9H，m)，5.17(2H，AB system)，4.27(2H，m)，4.10(1H，m)，3.42(1H，m)，2.92(2H，m)，2.78(1H，m)，2.56(2H，m)，2.12(2H，m)，1.88-1.50(7H，m over d)，1.32(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z479(MH+-HCl)，234(C6H5CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+，base peak)，405(M-HCl-COOEt).Anal.Cald.for C28H33N2O5Cl·HCl·H2OC，59.26；H，6.40；N，4.94FoundC，59.82；H，6.92；N，5.20实施例7以2g为原料得产物1-(N-(1(S)-羧乙基-3-对甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸苄脂，柱层析洗脱液石油醚/乙酸乙酯＝2∶1，产率68.5％。1H NMR(300MHz)δ7.36(5H，m)，7.18(2H，m)，6.80(2H，m)，5.20(2H，AB system)，4.30(2H，m)，3.78(3H，s)，3.75(1H，m)，3.40(1H，m)，2.97(2H，m)，2.66(1H，m)，2.48(2H，m)，2.15(2H，m)，1.90(2H，m)，1.79(2H，m)，1.63(3H，d，J＝7.0Hz)，1.30(3H，t，J＝7.5Hz).MS m/z509(M++1)，264(MeOC6H5CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+，base peak)，435(M+-COOEt).Anal.Cald.for C29H36N2O6·HClC，63.90；H，6.84；N，5.14FoundC，64.01；H，7.03；N，4.93实施例8以2h为原料得产物1-(N-(1(R)-羧乙基-3-对甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸苄脂柱层析洗脱液石油醚/乙酸乙酯＝3∶1，产率68.2％。1H NMR(300MHz)δ7.36(5H，m)，7.17(2H，m)，6.80(2H，m)，5.15(2H，AB system)，4.29(2H，m)，3.78(1H，m)，3.75(3H，s)，3.41(1H，m)，2.85(2H，m)，2.78(1H，m)，2.50(2H，m)，2.10(2H，m)，1.90-1.55(7H，m over d)，1.32(3H，t，J＝7.2Hz).MS m/e509(M+1)，264(MeOC6H5CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3，base peak)，435(M-COOEt).Anal.Cald.for C29H36N2O6·HClC，63.90；H，6.84；N，5.14FoundC，63.89；H，7.00；N，4.882.通用实验步骤上一步产物(0.5mmol)溶于20ml四氢呋喃，加入1mlHcl与乙酸乙酯溶液和50mg 10％Pd/C，室温下氢化24小时。过滤，滤液浓缩得微黄色粘稠物，少量二氯甲烷溶解，加入无水乙醚固体析出，过滤，在装有氢氧化钾的干燥器中真空干燥24小时得如下产物实施例9以1-(N-(1(R)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸苄脂为反应原料，得到化合物1-(N-(1(R)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐，产率为45.4％1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.39-7.12(5H，m)，4.25(2H，m)，4.10(1H，m)，3.90(1H，m)，3.60(2H，m)，2.84(1H，m)，2.78(2H，m)，2.30(2H，m)，2.08(2H，m)，1.68(2H，m)，1.50(3H，d，J＝6.5Hz)，1.32(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z370(M+-H2O)，342(M+-H2O-CO)，266(MH+-H2O-C6H5CH2CH2，base peak)，234(C6H5CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+)，91(C6H5CH2+).Anal.Cald.for C21H28N2O5·1.85HClC，55.32；H，6.59；N，6.14FoundC，55.34；H，6.53；N，6.08
实施例10以1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸苄脂为反应原料，得到化合物1-(N-甲基-(1(S)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐，产率为60.5％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.40-7.10(5H，m)，4.30(2H，m)，4.18(1H，m)，3.92(1H，m)，3.72(2H，m)，2.86(1H，m)，2.78(2H，m)，2.30(2H，m)，2.18(2H，m)，1.70(2H，m)，1.57(3H，d，J＝6.9Hz)，1.39(3H，t，J＝6.9Hz).MS m/z370(M+-H2O)，342(M+-H2O-CO)，266(MH+-H2O-C6H5CH2CH2，base peak)，234(C6H5CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+).Anal.Cald.for C21H28N2O5.2.6HClC，52.19；H，6.38；N，5.79FoundC，52.11；H，6.33；N，5.43实施例11以1-(N-(1(R)-羧乙基-3-对甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸苄脂为反应原料，得到化合物1-(N-(1(R)-羧乙基-3-对甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐，产率为68.6％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.15(2H，m)，6.88(2H，m)，4.25(2H，m)，4.06(1H，m)，3.79(1H，m)，3.75(3H，s)，3.55(2H，m)，2.85(1H，m)，2.65(2H，m)，2.29(2H，m)，2.10(2H，m)，1.65(2H，m)，1.48(3H，d，J＝6.6Hz)，1.36(3H，t，J＝7.0Hz).MS m/e373(M+-EtO)，264(MeOC6H5CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+)，121(MeOC6H5CH2+，base peak).Anal.Cald.for C22H30N2O6·2.5HCl
C，51.84；H，6.42；N，5.49FoundC，52.04；H，6.40；N，5.28实施例12以1-(N-(1(S)-羧乙基-3-对甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸苄脂为反应原料，得到化合物1-(N-(1(S)-羧乙基-3-对甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐(产率60.5％)1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.14(2H，m)，6.86(2H，m)，4.25(2H，m)，4.10(1H，m)，3.82(1H，m)，3.75(3H，s)，3.60(2H，m)，2.82(1H，m)，2.65(2H，m)，2.28(2H，m)，2.12(2H，m)，1.65(2H，m)，1.47(3H，d，J＝6.5Hz)，1.34(3H，t，J＝7.0Hz).MS m/e373(M+-EtO)，264(MeOC6H5CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+)，121(MeOC6H5CH2+，base peak).Anal.Cald.for C22H30N2O6·2.5HClC，51.84；H，6.42；N，5.49FoundC，51.90；H，6.22；N，5.28实施例13以1-(N-(1(R)-羧乙基-3-对氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸苄脂为反应原料，得到化合物1-(N-(1(R)-羧乙基-3-对氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐，产率为62.7％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.40-7.15(4H，m)，4.28(2H，m)，4.06(1H，m)，3.93(1H，m)，3.60(2H，m)，2.85(1H，m)，2.60(2H，m)，2.30(2H，m)，2.10(2H，m)，1.67(2H，m)，1.54(3H，d，J＝6.7Hz)，1.29(3H，t，J＝7.0Hz).MS m/z371(MH+-HCl-H2O)，266(MH+-H2O-ClC6H5CH2CH2，basepeak).
实施例14以1-(N-(1(S)-羧乙基-3-对氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸苄脂为反应原料，得到化合物1-(N-(1(S)-羧乙基-3-对氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐，产率为80.0％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.42-7.10(4H，m)，4.24(2H，m)，4.07(1H，m)，3.95(1H，m)，3.65(2H，m)，2.85(1H，m)，2.66(2H，m)，2.27(2H，m)，2.12(2H，m)，1.66(2H，m)，1.50(3H，d，J＝6.9Hz)，1.29(3H，t，J＝6.9Hz).MS m/z371(MH+-HCl-H2O)，266(MH+-H2O-ClC6H5CH2CH2，basepeak).
实施例15以1-(N-(1(R)-羧乙基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸苄脂为反应原料，得到化合物1-(N-(1(R)-羧乙基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐，产率为80.1％。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.38-7.12(5H，m)，4.25(2H，m)，4.12(1H，m)，3.98(1H，m)，3.58(2H，m)，2.85(1H，m)，2.65(2H，m)，2.09(2H，m)，1.90(2H，m)，1.65(2H，m)，1.56(2H，m)，1.48(3H，d，J＝6.8Hz)，1.35(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z384(M+-H2O)，356(M+-H2O-CO)，131(CH2(CO2Et)NHCH2CH3+，base peak)，248(C6H5CH2CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+).Anal.Cald.for C22H30N2O5·2.1HClC，55.15；H，6.73；N，5.84FoundC，55.05；H，6.85；N，5.68实施例16以1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸苄脂为反应原料，得到化合物1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐，产率为81.2％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.36-7.12(5H，m)，4.23(2H，m)，4.09(1H，m)，3.90(1H，m)，3.59(2H，m)，2.83(1H，m)，2.62(2H，m)，2.10(2H，m)，1.88(2H，m)，1.67(2H，m)，1.57(2H，m)，1.47(3H，d，J＝6.9Hz)，1.25(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z384(M+-H2O)，356(M+-H2O-CO)，131(CH2(CO2Et)NHCH2CH3+，base peak)，248(C6H5CH2CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+).Anal.Cald.for C22H30N2O5·1.5HClC，57.80；H，6.94；N，6.13FoundC，57.47；H，7.07；N，6.593.通用实验步骤上一步反应产物(0.2mmol)放入蛋形瓶中，加入5mlNaOH、甲醇，室温搅拌10小时。浓缩溶液，加入盐酸酸化至pH＝1，然后利用Dowex 50×4(200-400 mesh)进行分离，先用双蒸水洗至中性，再用吡啶水溶液淋洗，蒸掉溶剂得到下列无色固体产物
实施例17以化合物1-(N-(1(R)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐为原料，得到的产物1-(N-(1(R)-羧基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸，产率为47.0％。m.p.182-184℃，1H NMR(300MHz，D2O)δ7.40-7.10(5H，m)，4.43(1H，m)，4.0(1H，q，J＝7.0Hz)，3.49(2H，s)，2.90(1H，t，J＝3.0Hz)，2.75(1H，m)，2.58(1H，m)，2.40(3H，m)，2.10(1H，m)，1.68(2H，m)，1.32(3H，d，J＝7.0Hz).MS m/z255(M+-C6H5CH2CH2)，179(C6H5CH2CH2CH(CO2H)NH2+)，91(C6H5CH2+).
实施例18以化合物1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐为原料，得到的产物化合物1-(N-(1(S)-羧基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸(产率50.2％)，m.p.178-180℃。1H NMR(300MHz，D2O)δ7.41-7.15(5H，m)，3.58(1H，m)，3.55(2H，s)，3.40(1H，m)，2.82(1H，m)，2.69(2H，m)，2.20-1.90(4H，m)，1.60(2H，m)，1.35(3H，d，J＝7.0Hz).MS(ESI)m/z399(M++39)，361(M++1)，99(CH2CHNH2CHCH3CO+，base peak).
实施例19以化合物1-(N-(1(R)-羧乙基-3-对甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐为原料，得到的产物化合物1-(N-(1(R)-羧基-3-对甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸，产率为65.4％。m.p.147-149℃。1H NMR(300MHz，D2O)δ7.18(2H，m)，6.90(2H，m)，4.47(1H，m)，4.08(1H，m)，3.78(3H，s)，3.52(2H，s)，2.90(1H，m)，2.70(2H，m)，2.62-2.02(4H，m)，1.70(2H，m)，1.30(3H，d，J＝6.5Hz).MS m/z238(MeOC6H5CH2CH2(COOH)NHCHCH3+，base peak)，121(MeOC6H5CH2+)，329(MH+-CO2-H2O)，372(M+-H2O).Anal.Cald.for C20H26N2O6·H2OC，58.82；H，6.90；N，6.85FoundC，58.97；H，6.26；N，6.88实施例20以化合物1-(N-(1(S)-羧乙基-3-对甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐为原料，得到的产物化合物1-(N-(1(S)-羧基-3-对甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸，产率为62.8％。m.p.151-153℃。1H NMR(300MHz，D2O)δ7.18(2H，m)，6.90(2H，m)，3.80(2H，s)，3.78(3H，s)，3.55(1H，m)，3.40(1H，m)，2.86(1H，m)，2.69(2H，m)，2.62-2.10(4H，m)，1.65(2H，m)，1.30(3H，d，J＝6.5Hz).MS(ESI)m/z391(M++1)，373(MH+-H2O，base peak)，219(M+-C6H8O2N-CO2H).
实施例21以化合物1-(N-(1(R)-羧乙基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐为原料，得到的产物1-(N-(1(R)-羧基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸，产率为78.2％。m.p.149-151℃。1H NMR(300MHz，D2O)δ7.40-7.29(4H，m)，4.36(1H，m)，4.15(1H，m)，3.60(2H，m)，2.96(1H，m)，2.69(2H，m)，2.46(2H，m)，1.80-1.55(6H，m)，1.45(3H，d，J＝6.8Hz).MS m/z356(M+-H2O)，328(M+-CO2)，313(MH+-CO2-H2O)，91(C6H5CH2+，base peak)，131(CH2(CO2H)NH2CHCH3CO+).Anal.Cald.for C20H26N2O5C，64.16；H，6.99；N，7.42FoundC，63.59；H，6.42；N，7.28实施例22以化合物1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐为原料，得到的产物化合物1-(N-(1(S)-羧基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸，产率为76.2％。m.p.154-155℃。MS m/z356(M+-H2O)，328(M+-CO2)，313(MH+-CO2-H2O)，91(C6H5CH2+)，131(CH2(CO2H)NH2CHCH3CO+，base peak).Anal.Cald.for C20H26N2O5·2/3H2OC，62.16；H，7.12；N，7.25FoundC，61.81；H，6.73；N，7.37实施例23以1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸苄脂(300mg，0.628mmol)、1.0ml碘甲烷、2.0g碳酸氢钠混合于DMF中，加热至60-90℃，搅拌10-30分钟，冷至0℃，加入20ml水，乙醚提取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，快速柱层析，得无色液体200mg，取此无色液体(180mg，0.366mmol)溶于四氢呋喃中，加入10％Pd/C，常温常压下氢化24小时。过滤，滤液浓缩，快速柱层析(氯仿/甲醇＝10∶1)得无色粘稠物110mg，即化合物1-(N，N-甲基-(1(S)-羧乙基-3 苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亚甲基脯氨酸·盐酸盐，产率为74.8％。1H NMR(300MHz)δ7.32-7.08(5H，m)，4.15(2H，m)，3.90(1H，m)，3.70(1H，q，J＝6.5Hz)，3.50(1H，m)，3.29(1H，t)，2.80(1H，m)，2.61(2H，m)，2.52(3H，s)，2.48(2H，m)，2.20-1.90(2H，m)，1.80(2H，m)，1.36-1.10(6H，t over d).MS m/z403(M++1)，329(M+-COOEt)，248(C6H5CH2CH2CH(CO2Et)NCH3CHCH3+，base peak)，91(C6H5CH2+).
权利要求
1.一种含有2，4-亚甲基脯氨酸的血管紧张素转化酶抑制剂，其特征在于是依那普利类似物，分子通式如下
R2＝H，CnH2n+1，n＝14；R3＝HCH3；R4＝CnH2n+1，n＝1-3，NH2(CH2)m-，m＝1-4
2.如权利要求1所述的含有2，4-亚甲基脯氨酸的 血管紧张素转化酶抑制剂的合成方法，其特征在于是由2，4-亚甲基脯氨酸苄酯与含有手性的丙氨酸经缩合、或胺烷基化、脱苄反应制得。
3.如权利要求2所述的含有2，4-亚甲基脯氨酸的血管紧张素转化酶抑制剂的合成方法，其特征在于含有手性的丙氨酸是由酮酸酯与丙氨酸苄酯经缩合、氢化、脱苄反应制得。
4.如权利要求1所述的含有2，4-亚甲基脯氨酸的血管紧张素转化酶抑制剂的用途，其特征在于是用于治疗高血压的降压药物。
全文摘要
本发明是一种含有2,4－亚甲基脯氨酸的血管紧张素转化酶抑制剂、合成及其用途,该化合物是依那普利类似物,其是通过2,4－亚甲基脯氨酸替代脯氨酸以限制肽键的反式构象、增强亲脂性,从而提高了该ACE抑制剂的生物活性;其是2,4－亚甲基脯氨酸苄酯与含有手性的丙氨酸经缩合、或胺烷基化、脱苄反应制得,其中含有手性的丙氨酸是酮酸酯与丙氨酸苄酯反应的产物;其可发展成治疗高血压的降压药物。
文档编号C07D209/00GK1178788SQ97106230
公开日1998年4月15日 申请日期1997年1月15日 优先权日1997年1月15日
发明者刘世峰, 徐杰诚 申请人:中国科学院上海有机化学研究所