一种重复性好的血管紧张素转化酶检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种血管紧张素转化酶检测试 剂盒。
【背景技术】
[0002] 血管紧张素转化酶（Angiotensin-Converting Enzyme, ACE, EC 3. 4. 15. 1， 系统命名为肽酰二肽水解酶，是一种哺乳动物组织中普遍存在的，含锌离子的膜结合 外肽酶(羧基端二肽)，催化血管紧张素 I水解生成具有血管收缩作用的血管紧张素 II 或水解具有血管收缩功能的缓激肽生成苯丙-精二肽，在食品和药品行业广泛使用。 自1898年发现肾素以来，有关肾素-血管紧张素系（renin-angiotensin system, RAS 或 renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS)和激肽释放酶-激肽系统 (Kallikrein-Kinin System, KKS)的研宄已进行了一百多年，这两个系统主要通过ACE 对血压、电解质、体液平衡和心血管系统发育等控制而间接发挥作用，为此，RAS和KKS在 心脏和肾脏疾病中起着至关重要的作用，它所显示的作用和功能已远远超出了人们的设 想。目前 ACEI (Angiotensin-Converting Enzyme inhibitors)已经成为急性心肌梗死 和心力衰竭治疗的一类标准药物(如：卡托普利captopril、依那普利enalapril、西拉普利 cilazapril、贝拉普利cilazapril、赖诺普利lisinopril、雷米普利ramipril)。然而长 期使用ACEI药物会出现咳嗽、肾功能减退、蛋白尿、高钾血症、低血压、肝功能异常、味觉 和肠胃功能紊乱、皮瘆、血管神经性水肿等不良反应。
[0003] 1954年，Leonard T. Skeggs博士从马血衆中首次发现ACE，并发现此酶能催化血 管紧张素 I水解去掉羧基端二肽（His-Leu)生成具有血管收缩作用的血管紧张素 II。Ng和 Vane发现体内的ACE催化循环系统（RAS和KKS)定位在肺中，此结果后来被很多研宄验 证。
[0004] 2000年，在研宄和寻找与心衰相关的新基因时，两个研宄小组各自采用不同的方 法从特发性扩张性心肌病病人的心脏标本和人淋巴瘤标本中克隆得到同1个新基因，并 分别命名为ACE2和ACEH，随后统一称为ACE2。它是迄今为止发现的ACE的第一个同类 酶。在来源分布上，ACE在人体广泛分布，而ACE2有一定的组织特异性，主要存在于心脏和 肾脏的动脉、小动脉和小静脉，肾小管内皮，及肾内动脉和冠状动脉的平滑肌细胞及胃肠系 统。Gembardt等报道ACE2在鼠的肺脏中也有存在。
[0005] ACE通常以三种形式存在，它们是一个基因的不同剪接产物。异构体I在组织 中普遍存在，称为体细胞ACE (somatic ACE, sACE)，含有1306个氨基酸残基。异构体 II和异构体III表达于睾丸组织和成熟的精子细胞中，称为睾丸ACE (testic ACE, tACE)， 分别含有732个氨基酸和739个氨基酸残基。ACE2由805个氨基酸组成，表观分子量 120X103Da，其中包括1个由17个氨基酸组成的N-末端信号肽区，1个位于274~378 位氨基酸的金属蛋白酶锌结合区HEXXH和1个锚定在细胞膜上的C-末端。ACE2与ACE 在金属蛋白酶的催化结构域约有42%的同源性。sACE由1306个氨基酸组成，表观分子量 149X103Da，其中包括N端信号肽30个氨基酸、两个同源的催化活性中心（N-catalytic domain)和（C-catalyticdomain)、亲脂跨膜区1257~1276位氨基酸和细胞内结构域组 成。tACE由732个氨基酸组成，只含1个催化活性中心，其中异构体II表观分子量为 80X103Da，异构体II表观分子量 83X103Da。异构体II除了信号肽和N端与sACE稍有差 异，从68个氨基酸残基开始，它们的序列完全相同。异构体III与异构体II的N完全相同，但 第657个氨基酸开始就有所差异。
[0006] 目前测定血清ACE的方法有放射性核素法、分光光度法、荧光法、毛细管胶束电动 色谱法。放射性核素法易受放射性核素的污染，不适于医院常规应用。分光光度法操作繁 琐，无法用于临床日常测定。荧光法、毛细管胶束电动色谱法由于受到设备限制，无法广 泛应用。用高效液相色谱法测定组织ACE酶活性，敏感性和特异性大大高于常用的紫外 分光光度法。但是由于受设备限制，推广难度较大。
[0007] 血管紧张素转化酶检测试剂盒（比色法）检测原理为在ACE催化下，血管紧张素 I 转化为血管紧张素 II，并使合成底物裂解为氨基酸和二肽。340nm检测裂解反应，可见吸光 度相应减低。
[0008] 血管紧张素转化酶检测试剂盒（比色法）是一种无需预处理样本，技术和设备要 求不高，而精密度和特异性更高的分析方法，由于该方法不需要昂贵的设备，可以实现自动 化，且可测定大量标本，因此受到临床广泛推广。但是普通的血管紧张素转化酶检测试剂由 于重复性不好，会使该试剂的准确性受到影响，不利于对检测结果的判断，从而造成误诊的 后果。
【发明内容】
[0009] 针对于常规的血管紧张素转化酶检测试剂盒存在的问题，本发明提供了一种重复 性好的血管紧张素转化酶检测试剂盒（比色法)，该试剂盒与常规的血管紧张素转化酶检测 试剂盒相比，重复性比常规的检测试剂盒要好，但稳定性和准确度不受影响，有利于提高试 剂的重复性。
[0010] 本发明是通过以下措施实现的： 一种重复性好的血管紧张素转化酶检测试剂盒（比色法)，包括组分R，组分原料含量如 下： 组分R : FAPGG ( N-[3-(2-呋喃基）丙烯酰]-L-苯丙氨酰-甘氨酰-甘氨酸） 0· 5mmol/L 氯化钠 300 mmol/L 硼酸盐缓冲液（PH 8. 2) 80mM AE0-9 0. 1%-1°/〇 本发明的有益效果： 本发明提供的重复性好的血管紧张素转化酶检测试剂盒（比色法)，通过在组分中加入 AE0-9,通过分子中不同部分分别对于两相的亲和，使两相均将其看作本相的成分，分子排 列在两相之间，使两相的表面相当于转入分子内部。从而降低表面张力。由于两相都将其 看作本相的一个组分，就相当于两个相与表面活性剂分子都没有形成界面，就相当于通过 这种方式部分的消灭了两个相的界面，就降低了表面张力和表面自由能，从而解决了试剂 重复性不好这一难题，却不会对试剂的稳定性和准确度产生影响，有利于该试剂在市场中 进一步的推广。
【附图说明】
[0011] 图1为实施例2检测结果与实施例1检测结果相关性； 图2为实施例3检测结果与实施例1检测结果相关性； 图3为实施例4检测结果与实施例1检测结果相关性。
【具体实施方式】
[0012] 为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步说明。
[0013] 实施例1 组分R : FAPGG 0.5mmol/L 氯化钠 300 mmol/L 硼酸盐缓冲液（PH 8. 2) 80mM 本实施例描述的血管紧张素转化酶检测试剂盒（比色法)，在使用时，其测定方法是采 用自动生化分析仪，如东芝120自动分析仪，操作如图：
【主权项】
1. 一种重复性好的血管紧张素转化酶检测试剂盒，包括以下含量的组分： FAPGG 0. 5mmol/L 氯化钠 300mmol/L 硼酸盐缓冲液，PH8. 2 80mM AE0-9 0. 1%-1°/〇 。
【专利摘要】本发明提供了一种重复性好的血管紧张素转化酶检测试剂盒，包括以下含量的组分：FAPGG， 0.5mmol/L ；氯化钠，300 mmol/L；硼酸盐缓冲液，PH 8.2，80mM；AEO-9；0.1%-1% ；采用本发明提供的试剂盒检测血管紧张素转化酶克服了现有技术中重复性差的缺陷。
【IPC分类】G01N21-78
【公开号】CN104792779
【申请号】CN201510169134
【发明人】谭柏清, 董雯, 甘宜梧, 王绮, 包兴艳, 肖慧
【申请人】山东博科生物产业有限公司
【公开日】2015年7月22日
【申请日】2015年4月10日