专利名称：促生长激素释放类肽的制作方法
技术领域：
本发明涉及促生长激素释放类肽，是新的肽衍生物，包括它们的组合物，以及它们在治疗由生长激素缺陷引起的疾病上的用途。属于肽类化合物。
生长激素是刺激组织生长的激素。已知生长激素对代谢过程具有许多作用(例如，刺激蛋白质合成和游离脂肪酸动员)和引起从碳水化合物至脂肪酸代谢的能量代谢转换。生长激素缺陷可以导致一些严重的疾病，例如，侏儒症。
生长激素从垂体释放，这一释放过程直接或间接地在一些激素与神经递质的严格控制下。生长激素释放可以受到生长激素释放激素(CHRH)刺激和生长激素释放抑制因子的抑制。在两种情况下，所述激素从下丘脑释放，但是它们的作用主要经由位于垂体的特异性受体介导。例如精氨酸、L-3、4-二羟基苯丙氨酸、胰高血糖素、后叶加压素、PACAP(垂体腺苷酰环化酶激活肽)、毒草硷受体兴奋剂和合成的六肽、GHRP(生长激素释放肽)通过直接作用在垂体上或通过影响GHRH和/或生长激素释放抑制因子从下丘脑的释放来释放内源性生长激素。
在需要生长激素增加水平的疾病或病态中，目前生长激素的蛋白质性质决定只能肠胃外施用。此外，其他直接作用的天然促分泌剂(例如GHRH和PACAP)是高分子量的多肽，因此也只能肠胃外施用。经检索96l94947.3专利申请为该类化合物最新技术，但其分子大、易分解，也只能肠胃外施用，而且必须用固相合成法，不仅工艺控制难，而且收率低，成本高。
本发明的目的是提供一种分子结构简单，易合成，成本低，口服时不易被酶或胃肠分解的小分子促生长激素释放类肽。
发明概述通式I给出了化合物结构式A-B-C IA是氢或R′-(CH2)q-Xr(CH2)sCO-，其中q是0或选自下组的整数1、2、3、4、5；r是0或1；S是0或选自下组的整组1、2、3、4、5；R′是氢、咪唑基、胍基、哌嗪基、吗啉代、哌啶子基或N(R2)-R3，其中R2和R3各自分别是氢或低级烷基(可被可不被一个或多个羟基、吡啶基或呋喃基取代的)；并且，当r是1时，X是-NH-、-CH2-、-CH＝CH-、-C(R4)(R5)-、-CH(N(R6)(R7))-、
或
其中R4、R5、R6和R7各自分别是氢或低级烷基；B是(G)t-(H)u，其中t和u各自分别是0或1；G和H是氨基酸残基，该残基选自由天然L-氨基酸或它们的相应的D-异构体或非天然氨基酸(例如1、4-二氨基丁酸、氨基异丁酸、1、3-二氨基丙酸、4-氨基苯丙氨酸、3-吡啶基丙氨酸、1、2、3、4-四氢异喹啉-3-羧酸、1、2、3、4-四氢降哈尔满(norharman)-3-羧酸、N-甲基邻氨基苯甲酸、邻氨基苯甲酸、N-苄基甘氨酸、3-氨甲基苯甲酸、3-氨基-3-甲基丁酸、肌氨酸、3-哌啶甲酸或异-3-哌啶甲酸)组成的；并且，当t和u都是1时，G和H之间的酰胺键可被可不被Y-NR8-替代，其中Y是-CO-或-CH2-，且R8是氢低级烷基或低级芳烷基；
C是-(CH2)K-R9；其中K是0、1、2、3、4或5；R9是-N(R10)(R11)、
或
并且以上所有环上可被可不被一个或多个低级烷基、低级烷氧基、卤素或羟基取代。其中R10和R11是低级烷基(可被可不被一个或多个卤素、羟基取代的。)在上述的结构式和本说明书全文中，下列术语具有所指出的含义以上所限定的低级烷基部分旨在包括那些指定长度(优选地具有1-6个碳原子)的线性、支链或环状构型的烷基部分，线性烷基的例子是甲基、乙基、正丙基、丁基、戊基和已基。支链烷基的例子是异丙基、仲丁基、叔丁基、异戊基或异已基。环状烷基的例子是环丙基、环丁基、环戊基和环已基。
以上所限定的低级烷基部分旨在包括那些指定长度(优选地具有1-6个碳原子)的线性，支链或环状构型的边远氧基部分。线性烷基的例子是甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基和已氧基。支链烷基氧基的例子是异丙氧基、伸丁氧基、叔丁氧基、异戊氧基和异已氧基。环状烷基的例子是环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基和环已氧基。
术语″卤素″旨在包括F、CI、Br和I。
通用的三字母代码用于代表天然氨基酸，例如ALa用于代表丙氨酸。
发明详述在式I的化合物的优选实例中，A是Aib、(pentyl)Aib或(2-hydroxyethy)Aib；t和u是1，G是D phe、D_Trp、D_a_Nal；H是Ala、D_pro、D_Hpro、D_His、Gly、D_Arg；C是piperidine、3-Methyl piperidine、diisobutylamide或dipentyamideamide。
本发明还优选以下化合物或其药学上可接受的盐Aib-D_phe-D_pro-piperidineAib-D_Trp-D_pro-3 MethylpiperidineAib-D_Trp-D_pro-diiso butylamideAib-D_Trp-D_pro-dipentylamide amide(pentyl)-D_Trp-D_pro-diisobutylamide(2-hydroxy ethyl)Aib-D_Trp-D_pro-diissobutylamide。
本发明还包括多种药物组合物，该组合物包含作为活性成份的按照上述任一的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体或稀释剂的任意组合。
上述类肽的用途，用于刺激人的生长激素从垂体释放或治疗疾病时，可以上述一种化合物或其药学上可接受的盐单独用，也可以将上述所涉及的化合物或其药学上可接受的盐中的任意几种的组合物使用，其有效剂量为每天0.001-100mg/Kg体重。
上述用途，可通过口服、经皮、鼻、肺部或肠胃外施用，优选剂量是每天0.01-50mg/Kg体重。
上述类肽的用途，用于提高动物生长速度和程度，从而提高动物奶、毛产量或质量或治疗疾病时，包括将上述涉及的化合物或其药学上可接受的盐的每一种单独使用或其中任意几种的组合物使用均有效，其有效剂量是从0.0001-200mg/Kg体重。
本发明的优点是分子结构简单，可用液相合成法生产，工艺易控制，收率高，成本低，可口服，口服时不易被酶或胃肠道分解。
本发明的化合物的实施例举下述几种结构式1、Aib-D_phe-D_pro-pioperidine
2、Aib-D_Trp-D_pro-3 Methylpiperidine
3、Aib-D_Trp-D_pro-diiso butylamide
4、Aib-D_Trp-D_pro-dipentylamide amide
5、(pentyl)-D_Trp-D_Pro-diisobutylamide
6、(2 hydroxy ethy)Aib-D_Trp-D_pro-diisobutylamide
现以Aib-D_Trp-D_pro-3 MethylpiperidineA-氨基-异丁酰-D-色氨酰-D-脯氨酰-3-甲基哌啶为例叙述其制作方法将1mmol的DBP转入100ml圆底烧瓶中，加30ml无水CH2CL2，然后加入1mmolHOBT，同时在冰浴条件下，通氮搅拌。
将1.05mmolWSCHCL溶入10mlCH2CL2中，然后快速滴加至前述溶液。
将1.1mmol的MP溶于10ml无水CH2CL2溶液中，并滴加至前述混合溶液中，将反应混合物室温下搅拌18hr以上。
反应毕，将反应混合物用20ml 20％柠檬酸水溶液、20ml NaHCO3饱和水溶液、20mlNaCL饱和水溶液分别洗涤。分离有机相，并用无水MgSO4干燥。
过滤、真空浓缩，所得化合物以硅胶柱纯化(用CHCL3∶MgOH＝95∶5为流动相)，得白色固体。
在通氮条件下，将以下固体溶于25ml CH2CL2中，在搅拌下加入10mlTFA，继续搅拌30min。真空蒸干所有挥发物质，并将所得固体溶入30mlCH2CL2中，用10ml饱和NaHCO3溶液洗涤；分离有机相。
将有机相用无水Na2SO4干燥、过滤、真空浓缩。用色谱柱(SiO2)纯化(CHCL3∶MeOH85∶15为流动相)，得0.73mmol(73％)化合成PMP。
将此化合物用TLC和质谱进行鉴定M+＝195.3将25ml无水CH2CL2转入100ml圆底烧瓶中，并加入0.70mmolDBT，然后加入0.70mmolHOBT，在冰浴下通N2搅拌。
将0.75mmolWSCHCL溶入15ml无水CH2CL2中，然后快速滴加至前述溶液中，将反应物在0℃下搅拌1hr。
将0.71mmolPMP溶入20mlCH2CL2中，然后加滴至前述混合溶液中，继续在室温下搅拌18hr以上。
将反应混合物分别用20ml 20％柠檬酸水溶液、20ml饱和NaHCO3水溶液、20mlNaCL饱和水溶液洗涤。分离有机相，并以无水MgSO4干燥。
过滤、真空浓缩。用色谱柱(CHCL3∶MeOH＝95∶5)进一步纯化，得白色固体。
在通氮条件下，将所得固体溶于25ml CH2CL2中，在搅拌条件下滴加10ml TFA，搅拌30min。真空抽干。所剩固体溶入30ml CH2CL2中，并用10ml饱和Na2HCO3溶液洗涤；分离有机相。
将有机相用无水NaHCO3干燥、过滤，将溶液真空抽干。用色谱柱(SiO2)纯化(CHCL3∶MeOH＝85∶15)，得0.55mmol化合物TPMP。
用TLC及质谱进行鉴定M+＝381.5将30ml无水CH2CL2转入100ml圆底烧瓶中，并将0.50mmol BA溶入其中。冰溶下搅拌通N2加入0.51mmol HOBT。
将0.55mmol WSCHCL溶入20ml无水CH2CL2中，并快速滴加入前述溶液中，0℃下搅拌1hr。
将0.51mmol TPMP溶入15ml CH2CL2中，滴加入前述混合溶液中，在温下搅拌18hrc h。
反应混合物分别用20ml20％柠檬酸水溶液、20ml饱和NaHCO3水溶液、20mlNaCL饱和水溶液洗涤。分离有机相，并以无水MgSO4干燥。
过滤、真空浓缩。用色谱柱(CHCL3∶MeOH＝95∶5)进一步纯化，得白色固体。
在通氮条件下，将所得固体溶于30ml CH2CL2中，在搅拌条件下滴加10mlTFA，搅拌30min。真空抽干。所剩固体溶入30ml CH2CL中，并用10ml饱和NaHCO3溶液洗涤；分离有机相。
将有机相用无水Na2SO4干燥、过滤，将溶液真空抽干。用色谱柱(SiO2)纯化(CHCL3∶MeOH＝85∶15)，得0.43mmol标题化合物。
用TLC及质谱进行鉴定M+＝467.15其他化合物的制作工艺基本与上述方法相同。
缩写DBP D-叔丁氧羰基-脯氨酸HOBT羟基苯并三唑WSCHCL 1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳化二亚胺盐酸盐MP 3-甲哌啶DBT D-叔丁氧羰基-色氨酸BA 叔丁氧羰基-a-氨基异丁酸。
权利要求
1.一种促生长激素释放类肽，包括通式I的化合物或其药学上可接受的盐及其组合物A-B-C IA是氢或R′-(CH2)q-Xr-(CH2)sCO-，其中q是0或选自下组的整数1、2、3、4、5；r是0或1；S是0或选自下组的整数1、2、3、4、5；R′是氨、咪唑基、胍基、哌嗪基、吗啉代、哌啶子基或N(R2)-R3，其中R2和R3各自分别是氢或低级烷基，可被可不被一个或多个羟基、吡啶基或呋喃基取代的；并且，当r是1时，X是-NH-、-CH2-、-CH＝CH-、-C(R4)(R5)-、-CH(N(R6)(R7))-、
或
其中R4、R5、R6和R7各自分别是氢或低级烷基；B是(G)t-(H)u，其中t和u各自分别是0或1；G和H是氨基酸残基，该残基选自由天然L-氨基酸或它们的相应的D-异构体或非天然氨基酸，例如1、4-二氨基丁酸、氨基异丁酸、1、3-二氨基丙酸、4-氨基苯丙氨酸、3-吡啶基氨酸、1、2、3、4-四氢异喹啉-3-羧酸、1、2、3、4-四氢降哈尔满(norharman)-3-羧酸、N-甲基邻氨基苯甲酸、邻氨基苯甲酸、N-苄基甘氨酸、3-氨甲基苯甲酸、3-氨基-3-甲基丁酸、肌氨酸、3-哌啶甲酸或异-3-哌啶甲酸组成；并且，当t和u都是1时，G和H之间的酰胺键可被可不被Y-NR8-替代，其中Y是-CO-或-CH2-，且R8是氢、低级烷基或低级芳烷基；C是-(CH2)K-R9；其中K是0、1、2、3、4或5；R9是-N(R10)(R11)、
或
并且以上所有环上可被可不被一个或多个低级烷基、低级烷氧基、卤素或羟基取代。其中R10和R11是低级烷基，可被可不被一个或多个卤素或羟基取代的。
2.按照权利要求1的类肽，其化合物通式中A是Aib、penty Aib或2-hydroxyethyl Aib。
3.按照权利要求1的类肽，其化合物通式中t和u都是1，G是D Phe、D Tyr、D Trp、D a Nal；H是Ala、D Pro、D Hpro、D HiS、Gly、D Arg。
4.按照权利要求1的类肽，其化合物通式中C是piperidine、3-Methylpiperidine、diisobutyl amide或dipentylamide amide。
5.按照权利要求1的类肽，优选以下化合物或其药学上可接受的盐Aib-D_phe-D_pro-piperidineAib-D_Trp-D_pro-3-MethylpiperidineAib-D_Trp-D_pro-dipentylaminde amide(penty)Aib-D_Trp-D_pro-diisobutylamide(2-hydroxy ethyl)Aib-D_Trp-D_pro-diisobutylamide
6.上述类肽的用途，用于刺激人的生长激素从垂体释放或治疗疾病时，可以每一种化合物或其药学上可接受的盐单独用，也可以将权利要求1-5所涉及的化合物或其药学上可接受的盐中的任意几种的组合物使用，其有效剂量从每天0.001-100mg/Kg体重。
7.按照权利要求6的用途，可通过口服，经皮、鼻、肺部或肠胃外施用，优选剂量是每天0.01-50mg/Kg体重。
8.上述类肽的用途，用于提高动物生长速度和程度，从而提高动物奶、毛产量或质量或治疗疾病时，包括将权利要求1-5所涉及的化合物或其药学上可接受的盐的每一种单独使用或其中任意几种的组合物使用均有效，其有效剂量是从0.0001-200mg/Kg体重。
全文摘要
本发明提供一种促生长激素释放类肽,包括通式中的化合物或其药学上可接受的盐及其组合物,通式为:A－B－C,A是氢或R′(CH
文档编号C07K5/065GK1269364SQ9911641
公开日2000年10月11日 申请日期1999年4月5日 优先权日1999年4月5日
发明者徐进 申请人:徐进