一种生长激素释放因子衍生物的合成方法
【专利摘要】本发明一种生长激素释放因子衍生物的合成方法涉及CJC-1295的固相合成法，所述方法以氨基树脂为载体，由Fmoc-Lys(Tfa)-树脂开始，逐一偶联氨基酸，并采用较便宜的试剂来脱除三氟乙酰基保护基，本发明的方法更适宜工业大规模操作，为CJC-1295的大规模生产提供了一种全新的思路。
【专利说明】一种生长激素释放因子衍生物的合成方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种多肽的合成方法，特别涉及一种生长激素释放因子类似物的合成方法，更具体而言，涉及CJC-1295的合成方法。
【背景技术】
[0002]生长激素释放因子(GRF)(也称为生长激素释放激素(GHRH))是由下丘脑的弓状核产生的一种含有44个氨基酸的肽激素，GRF刺激生长激素从脑垂体分泌。已发现GRF的活性部分为含有29个氨基酸的长肽，并将其命名为GRF(1_29)。
[0003]CJC-1295是由加拿大ConjuChem公司发明的一种长效GRF类似物，
【权利要求】
1.一种合成CJC-1295的方法，包括下述步骤: (1)以氨基树脂为载体与Fmoc-Lys(Tfa) -OH合成Fmoc-Lys (Tfa)-树脂，然后采用固相多肽合成方法将其从C端到N端逐一偶联上待偶联的氨基酸，得到肽树脂A:
Boc-Tyr (tBu) -dAla-Asp (OtBu) -Ala-1le-Phe-Thr (tBu) -Gln (Trt) -Ser (tBu) -Tyr (tBu)-Arg (Pbf)-Lys (Boc)-Val-Leu-Ala-Gln(Trt) -L eu-Ser (tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln (Trt) -Asp (Ot Bu) -1le-Leu-Ser (tBu) -Arg (Pbf) -Lys (Tfa)-树脂； (2)用氨水和DMF的混合物将步骤(1)中得到的肽树脂A上的Lys的保护基团去除，得到肽树脂B:
Boc-Tyr(tBu)-dAla-Asp (OtBu)-Ala-1Ie-Phe-Thr(tBu)-Gln (Trt)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Arg (Pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Ala-Gln(Trt) -L eu-Ser(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln (Trt) -Asp (Ot Bu) -1le-Leu-Ser (tBu) -Arg (Pbf) -Lys-树脂； (3)通过缩合剂将3-马来酰亚胺基丙酸与所述肽树脂B偶联，得到肽树脂C；
Boc-Tyr (tBu) -dAla-Asp (OtBu) -Ala-1le-Phe-Thr (tBu) -Gln (Trt) -Ser (tBu) -Tyr (tBu)-Arg (Pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Ala-Gln(Trt) -L eu-Ser(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln (Trt) -Asp (Ot Bu) -1le-Leu-Ser (tBu) -Arg (Pbf) -Lys (MPA)-树脂；(4)将肽树脂C裂解得到CJC-1295:
H-Tyr-dAla-Asp-Ala-1Ie-Phe-Thr-Gln-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Ala-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-1Ie-Leu-Ser-Arg-Lys(MPA)-NH20
2.权利要求1的方法，其中，步骤(1)中的氨基树脂为Rink-Amide-MBHA树脂、Rink-Amide树脂、Rink-Amide-AM树脂或Sieber酰胺树脂；所述氨基树脂的替代度为0.2mmol/g ~0.5mmol/g。
3.权利要求1的方法，其中，步骤(1)中Fmoc-Lys(Tfa)-树脂与待偶联的氨基酸的摩尔比为1: (2~5)，优选为1:3。
4.权利要求1的方法，其中，步骤(1)中的固相多肽合成方法在偶联剂的存在下进行，所用的偶联剂为 DIPCDI/HOBt、PyBOP/HOBt/DIPEA、TBTU/HOBt/DIPEA 或 HBTU/HOBt/DIPEA，优选HBTU、HOBt和DIPEA的组合物，其中各成分的比例以摩尔比计为HOBt:HBTU:DIPEA=l:l:l ~1.5，优选为 HOBt: HBTU: DIPEA=1:1: 1.5 ;且待偶联的氨基酸与HOBt的摩尔比为1: (I~2)。
5.权利要求1的方法，其中，在步骤(I冲待偶联的氨基酸与HOBt的摩尔比为1:(I~2)。
6.权利要求1的方法,其中，步骤(2)中所述混合物中氨水和DMF的体积比为1:5~20，优选为1:10。
7.权利要求1的方法，其中，步骤(3)中3-马来酰亚胺基丙酸与肽树脂B的摩尔比为1: (2 ~5)，优选 1:3。
8.权利要求1的方法，其中，步骤(3)在偶联剂的存在下进行，所用的偶联剂为HBTU、HOBt和DIPEA的组合物，且3-马来酰亚胺基丙酸、H0Bt、HBTU和DIPEA的摩尔比为1: (I~2): (I ~2): (I ~3)。
9.权利要求1的方法，其中，步骤(4)中所用的裂解液为三氟乙酸、苯甲硫醚、乙二硫醇和苯甲醚按(80~90): (5~10): (3~5): (2~5)的体积比混合的混合物,所述混合体积比优选为90:5:3:2。
10.权利要求1-9中任一项的方法，还包括CJC-1295的纯化步骤其中纯化步骤采用反相高压液相色谱法，包括:以反相十八烷基硅烷为固定相，以0.1%三氟乙酸/乙腈为流动相，收集目的峰馏 分，浓缩冻干。
【文档编号】C07K1/04GK103665147SQ201310613886
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年11月26日 优先权日:2013年11月26日
【发明者】陈永汉, 刘剑, 马亚平, 袁建成 申请人:深圳翰宇药业股份有限公司