用于聚合酶链式反应系统的新颖化合物及其应用的制作方法

技术特征：

1.一种具有式I的化合物：

其中：

R¹为C₁₂烷基。在某些实施例中，R²和R⁴为H。在某些实施例中，R³与R⁵一起形成5-元环，并且每个n独立为任何正整数，其包括但不限于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29以及30。

2.一种化合物，其具有所述以下结构：

3.一种包含聚合酶和根据权利要求2所述的化合物的组合物。

4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述聚合酶是热稳定的。

5.根据权利要求3所述的组合物，其包含以下各者中的一者或多者：

a)至少一种核苷三磷酸

b)DTT

c)KCl

d)MgCl²

e)Kathon

f)EDTA

g)明胶

h)三羟甲基氨基甲烷

i)甘油

j)BSA

6.根据权利要求3所述的组合物，其另外包含聚合酶抑制剂。

7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述聚合酶抑制剂为至少一种寡核苷酸抑制剂。

8.根据权利要求6所述的组合物，其中所述聚合酶抑制剂为至少一种抗体抑制剂。

9.根据权利要求3所述的组合物，其中所述聚合酶稳定至少约一个月至约三年。

10.一种包含储存或反应组合物的试剂盒，所述组合物包含聚合酶和根据权利要求2所述的化合物。

11.根据权利要求10所述的试剂盒，其中所述聚合酶是热稳定的。

12.根据权利要求11所述的试剂盒，其中所述聚合酶为从水生栖热菌(Taq)聚合酶中分离的聚合酶。

13.根据权利要求11所述的试剂盒，其另外包含聚合酶抑制剂。

14.一种用于提高所述聚合酶效率的方法，所述方法包含以下步骤：

a)将目标核酸与至少一种聚合酶、至少一种引物、dNTP和根据权利要求2所述的化合物混合；以及，

b)扩增所述目标核酸。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述提高的效率与当在NP-40和/或的存在下所述聚合酶替代所述化合物时的所述效率相同。

16.根据权利要求14所述的方法，其中所述提高的效率大于当在NP-40和/或的存在下所述聚合酶替代所述化合物时的所述效率。

17.根据权利要求14所述的方法，其中所述化合物的所述有效浓度小于常规清洁剂所需要的有效浓度至少一倍至十倍。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述常规清洁剂为NP-40或

19.一种用于检测在样本中目标核酸的方法，所述方法包含以下步骤：

a)形成反应混合物，所述反应混合物包含至少一种聚合酶、至少一种引物、dNTP、根据权利要求2所述的化合物以及可检测标记；

b)扩增所述目标核酸；以及，

c)检测由所述可检测标记产生的信号，所述可检测标记指示在所述样本中所述目标核酸的存在和/或量。

20.一种用于在热循环过程中抑制聚合酶失活的方法，所述方法包含在所述热循环过程期间将所述聚合酶与根据权利要求2所述的化合物接触。

21.根据权利要求20所述的方法，其中聚合酶失活的所述抑制与当在NP-40和/或的存在下所述聚合酶替代所述化合物时的聚合酶失活的所述抑制相同。

22.根据权利要求20所述的方法，其中聚合酶失活的所述抑制大于当在NP-40或的所述存在下所述聚合酶替代所述化合物时的聚合酶灭活的所述抑制。

23.一种方法，所述方法包含在使得稳定所述酶的所述聚合酶活性的条件下，将具有聚合酶活性的酶和根据权利要求2所述的化合物混合以形成混合物。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述稳定性与当在NP-40和/或的存在下所述聚合酶替代所述化合物时的聚合酶活性的所述稳定性相同

25.根据权利要求23所述的方法，其中所述稳定性更高于如当在NP-40和/或的存在下所述聚合酶替代所述化合物时聚合酶活性的所述稳定性。

26.根据权利要求19至25中任一项所述的方法，其中所述聚合酶是热稳定的。

27.一种核酸扩增反应混合物，其包含：

a)至少一种聚合酶；

b)dNTP；以及，

c)根据权利要求2所述的化合物。

28.根据权利要求27所述的核酸扩增反应混合物，其另外包含至少一种引物。

29.根据权利要求27或28所述的核酸扩增反应混合物，其中所述聚合酶是热稳定的。

30.根据权利要求27所述的核酸扩增反应混合物，其另外包含至少一种抗体。

31.根据权利要求27所述的核酸扩增反应混合物，其另外包含至少一种寡核苷酸聚合酶抑制剂。

32.一种用于聚合目标核酸的方法，其包含以下步骤：

a)将所述目标核酸与在反应混合物中的至少一种聚合酶和根据权利要求2所述的化合物合并；以及，

b)聚合所述目标核酸。

33.一种用于扩增目标核酸的方法，其包含以下步骤：

a)使所述目标核酸与作为反应混合物的部分的至少一种聚合酶和根据权利要求2所述的化合物合并；以及，

b)聚合所述目标核酸。

34.根据权利要求32或33所述的方法，其中所述反应混合物另外包含至少一种核酸引物和/或dNTP。

35.根据权利要求32至34中任一项所述的方法，其中检测所述目标核酸的聚合或扩增。

36.根据权利要求35中任一项所述的方法，其中使用可检测标记检测所述目标核酸的聚合或扩增。

37.根据权利要求36所述的方法，其中所述可检测标记为引物或探针的一部分。

38.根据权利要求35中任一项所述的方法，其中将所述目标核酸的所述聚合或扩增定量。

39.根据权利要求32至38种任一项所述的方法，其中所述聚合酶选自以下各者组成的群组：T7DNA聚合酶、真核线粒体DNA聚合酶γ、原核DNA聚合酶I、原核DNA聚合酶II、原核DNA聚合酶III、原核DNA聚合酶IV、原核DNA聚合酶V、真核聚合酶α、真核聚合酶β、真核聚合酶γ、真核聚合酶δ、真核聚合酶ε、真核聚合酶η、真核聚合酶ζ、真核聚合酶ι、真核聚合酶κ、大肠杆菌(E.coli)DNA聚合酶I、大肠杆菌DNA聚合酶IIIα亚基、大肠杆菌DNA聚合酶IIIε亚基、大肠杆菌聚合酶IV、大肠杆菌聚合酶V、水生栖热菌(T.aquaticus)DNA聚合酶I、嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophilus)DNA聚合酶I、广古菌(Euryarchaeota)聚合酶、末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)、酿酒酵母(S.cerevisiae)聚合酶4、跨损伤合成聚合酶、逆转录酶、热稳定聚合酶和端粒酶。

40.根据权利要求39所述的方法，其中所述热稳定聚合酶选自由以下各者组成的群组：Taq DNA聚合酶、Tfi DNA聚合酶、Tfl DNA聚合酶、PfuDNA聚合酶和Vent^TM DNA聚合酶、具有降低的3'到5'核酸外切酶活性的聚合酶、SuperScript^TM DNA聚合酶、经基因工程化的DNA聚合酶、具有活性位点突变F667Y的聚合酶、具有活性位点F667Y等效物的聚合酶、Tth聚合酶、ThermoSequenase^TM、Therminator I、Therminator II、Therminator III、Therminatorγ、其衍生物及其片段。

41.根据权利要求40所述的方法，其中所述热稳定聚合酶为Taq DNA聚合酶。

42.根据权利要求40所述的方法，其中所述热稳定聚合酶为Tfl DNA聚合酶。

43.一种用于检测在样本中的目标核酸的方法，所述方法包含：

a)形成反应混合物，其包含至少一种聚合酶、至少一种引物、dNTP和根据权利要求2所述的化合物以及可检测标记；

b)扩增所述目标核酸；以及，

c)检测由所述可检测标记产生的信号，所述可检测标记指示所述样本中所述目标核酸的所述存在。

44.根据权利要求14、19、20、23、32、33和43中任一项所述的方法，其中所述方法包含使用热启动技术。

45.根据权利要求44所述的方法，其中所述热启动技术选自由以下各者组成的群组：基于寡核苷酸的系统、基于抗体的系统、基于化学类型的系统以及双重热启动系统。

46.一种产生改性清洁剂的方法，其包含：

a)活化BrijL-23以产生BrijL-23-Mesolate；

b)由BrijL-23-Mesolate制备BrijL-23-碘化物；

c)由BrijL-23-碘化物制备BrijL-23-脯胺酸-叔丁酯；以及，

d)水解BrijL-23-脯胺酸-叔丁酯以产生BrijL-23-脯胺酸。

47.根据权利要求46所述的方法，其另外包含中和所述产物。

48.根据权利要求47所述的方法，其中使用中和所述产物。