一种检测阴沟肠杆菌O20型的引物及方法与流程

文档序号:11061829阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种检测阴沟肠杆菌O20型的引物,其特征在于,所述引物为下述两组核苷酸序列之一,每组核苷酸序列由正向引物和反向引物组成:

第一组核苷酸序列:正向引物5’—AGAATCTTACACTGGCTTA—3’;反向引物5’—CTTAATACACCTGGCACA—3’;

第二组核苷酸序列:正向引物5’—TTTGGCTATGGCCGTATT—3’;反向引物5’—GTGCAGATGCCTGATGAA—3’。

2.一种检测阴沟肠杆菌O20型的方法,其特征在于,检测阴沟肠杆菌O20型的方法,首先提取待检测样品的DNA,并以样品DNA为模板,利用第一组核苷酸序列或者第二核苷酸序列作为引物进行PCR扩增,然后将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测,判断样品中是否含有阴沟肠杆菌O20型,采用第一组核苷酸序列作为引物时,若电泳结果在459bp位置出现单一条带,则说明样品中含有阴沟肠杆菌O20型;反之,则样品中不含阴沟肠杆菌O20型;采用第二组核苷酸序列作为引物时,若电泳结果在246bp位置出现单一条带,则说明样品中含有阴沟肠杆菌O20型;反之,则样品中不含阴沟肠杆菌O20型。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,进行PCR扩增的反应体系为30μL的反应体系,具体为:10×PCR Buffer(含Mg2+)2.5μL;2.5mmol/L的dNTP 1μL;Taq酶1.5-2.25U;10μmol/L的引物0.1-0.3μL,所述引物为第一组核苷酸序列代表的引物对或者第二组核苷酸序列代表的引物对;10-300ng/μL的样品DNA 1μL;最后用灭菌超纯水补至30μL。

4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,进行PCR扩增时,PCR反应程序为:95℃5min,1个循环;94℃30s,58℃-65℃45s,68℃1min,共35个循环;72℃7min,1个循环;4℃保存。

5.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,10μL PCR扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳检测,在检测时从PCR扩增产物中进行取样检测,即PCR扩增的反应体系为PCR检测体系。

6.如权利要求1所述的引物在检测阴沟肠杆菌O20型中的应用。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1