本发明涉及作为磷酸二酯酶4(PDE4)的酶抑制剂和毒蕈碱M3受体拮抗剂的新化合物。更具体地，本发明涉及如下所述的式(I)的化合物、制备这样的化合物的方法、含有它们的组合物及其治疗用途。
背景技术：
慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种呼吸障碍(respiratory disorder)，其特征在于与对有害颗粒或气体的异常肺炎症应答相关的进行性的、不完全可逆的、气流限制。
由于该原因，支气管松弛和炎症应答抑制代表治疗COPD的一种机理性方案，其可能改善症状诸如呼吸困难、哮鸣、胸部紧迫感、咳嗽和粘液分泌，改善健康状况和减轻恶化。
目前，用于COPD的药物疗法选择分成2个总类：支气管扩张剂(β2-肾上腺素受体激动剂、抗毒蕈碱剂和甲基黄嘌呤)和抗炎剂(糖皮质类固醇和选择性磷酸二酯酶-4(PDE4)抑制剂)。
支气管扩张药物是用于症状缓解的治疗的当前主要依据。
作为抗胆碱能支气管扩张剂，毒蕈碱M3拮抗剂的效力是基于如下事实：COPD患者中气流变窄的主要可逆要素是在一些病理学状况中由支气管神经节后迷走神经传出释放至气道平滑肌的乙酰胆碱(ACh)的增加。因此，拮抗ACh在毒蕈碱受体处的作用的化合物能够抵抗支气管收缩且因而改善这些患者的肺功能。
毒蕈碱拮抗剂会阻断ACh在毒蕈碱受体处的作用。
目前，存在5种已知的毒蕈碱受体亚型(M1-M5)；人气道平滑肌含有M1、M2和M3受体。M1受体促进通过副交感神经节的神经传递，且在人气道中的粘膜下腺上微弱地表达。M2受体位于平滑肌纤维上。一些研究已经提示介导气道平滑肌松弛(由化合物诸如β激动剂引起的腺苷酸环化酶活化造成)的抑制的M2的小作用。另外，在延伸至气道平滑肌和粘液产生细胞的神经节后副交感神经上发现了突触前M2受体。
这些突触前M2自体受体提供负反馈机制，其当受到刺激时会抑制ACh的进一步释放。已知突触后M3受体介导呼吸道中平滑肌的收缩和粘液分泌，从而使得它们成为COPD的症状缓解的一个主要目标。因此，在气道中，毒蕈碱拮抗剂的主要作用是支气管扩张和通过阻断ACh-诱导的在副交感神经系统中的作用而减少粘液分泌。
鉴于毒蕈碱受体的分布，结合在呼吸道以外的毒蕈碱受体的全身可利用的活性剂具有产生不希望的副作用(诸如心动过速、口干、尿潴留和便秘)的可能性。作为M1和M3受体的全身阻断的结果，口干是与抗毒蕈碱拮抗剂的应用相关的最常见的全身抗胆碱能副作用，而最可能的严重全身效应是由心脏M2受体的阻断导致的心动过速。
被批准用于治疗COPD的吸入抗胆碱能抗毒蕈碱药物包括异丙托溴铵氧托溴铵和噻托溴铵异丙托铵(ipratropium)和氧托品(oxitropium)是短效剂。相反，噻托溴铵是目前销售用于COPD的唯一长效抗毒蕈碱剂(LAMA)，其被证实适合于作为干粉每日一次施用。几种其它较新的LAMA新近被注册用于治疗COPD，包括阿地溴铵和格隆溴铵，或目前处于III期开发中，包括芜地溴铵(umeclidinium)。
尽管支气管扩张剂会十分有效地改善症状，但是它们无法解决潜在的慢性炎症或气道结构的改变。
使用糖皮质类固醇作为抗炎剂的标准治疗已经表现出有限的效力。但是，在目前开发的抗炎剂中，PDE4抑制剂被证实通过它们的升高cAMP水平的能力有效地减弱各种炎症细胞的应答。
PDE4是在嗜中性粒细胞和T细胞中表达的主要PDE，从而提示，PDE4抑制剂有效地控制COPD中的炎症。炎症细胞中PDE4的抑制会影响多种特异性应答，诸如诸如促炎症介质(包括细胞因子和活性氧类别)的产生和/或释放，其中在模拟哮喘和COPD、以及炎性肠病、特应性皮炎、银屑病和类风湿性关节炎的一些方面的动物模型中充分证明了效力。
选择性PDE4抑制剂罗氟司特是经批准的用于治疗与慢性支气管炎和恶化史相关的COPD的磷酸二酯酶-4抑制剂。罗氟司特会抑制小鼠中的COPD的吸烟模型中的肺部炎症和肺气肿。在COPD患者中，在4周内施用的口服罗氟司特显著地减少痰中的嗜中性粒细胞的数目(减少了36％)和CXCL8浓度。在临床试验中，在12个月内施用的罗氟司特(500mg每天1次)将COPD患者的肺功能改善至小程度，但是在减轻恶化或改善生活质量方面几乎没有作用。更近来，已经证实罗氟司特在具有存在频繁恶化和粘液分泌过多的严重疾病的患者中显著地改善FEV 1(改善了大约50mL)和减轻恶化(减轻了约15％)。罗氟司特当添加到沙美特罗或噻托溴铵中时提供临床益处，且所以可以用作具有严重疾病的患者中的额外治疗。
但是，迄今为止PDE4抑制剂的临床应用因机理相关副作用的发生而受阻，所述副作用包括头痛、恶心和呕吐，它们经常限制最大耐受剂量。该问题可以通过吸入递送和设计具有潜在的更有利治疗窗的化合物来克服。
由于支气管松弛和炎症应答抑制代表治疗COPD的机理性方案，所以毒蕈碱M3拮抗作用与选择性PDE4抑制作用的组合可以产生一类新的药物，其将支气管扩张和抗炎性能组合在一种分子中，这可能在COPD的处置中打开新的视角。
我们的共同未决的申请号PCT/EP2013/075526、PCT/EP2013/075520和本发明通过提供本发明的化合物满足了上述需要。
技术实现要素：
本发明涉及同时作为磷酸二酯酶4(PDE4)的酶抑制剂和毒蕈碱M3受体拮抗剂起作用的化合物、制备所述化合物的方法、含有它们的组合物及其治疗用途。
具体地，本发明涉及式(I)的化合物、其氘代衍生物和药学上可接受的盐或溶剂化物，
其中
每个R1是氢或独立地选自：卤素、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷基、羟基、-SO2NRIRII、-CN、-NRISO2RIII、-NRIRII、-(CO)NRIRII和-NRI(CO)RIII，且其中所述(C1-C4)烷基任选地被一个或多个选自(C3-C7)环烷基、羟基和-NRIRII的基团取代，且其中所述(C1-C4)烷氧基任选地被一个或多个卤素或基团(C3-C7)环烷基取代，其中，
RI是氢或(C1-C6)烷基；
RII是氢或(C1-C6)烷基；
RIII是氢或(C1-C6)烷基；
n是1-3的整数；
每个R2是氢或独立地选自：卤素、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷基、羟基、-SO2NRIRII、-CN、-NRISO2RIII、-NRIRII、-(CO)NRIRII和-NRI(CO)RIII，且其中所述(C1-C4)烷基任选地被一个或多个选自(C3-C7)环烷基、羟基和-NRIRII的基团取代，且其中所述(C1-C4)烷氧基任选地被一个或多个卤素或基团(C3-C7)环烷基取代，
RI是氢或(C1-C6)烷基；
RII是氢或(C1-C6)烷基；
RIII是氢或(C1-C6)烷基；
m是1-3的整数；
R3和R4是不同的或相同的，且独立地选自：H、(C3-C7)环烷基羰基、任选地被一个或多个选自(C3-C7)环烷基和(C5-C7)环烯基的取代基取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C3-C7)环烷基、(C5-C7)环烯基、(C2-C6)烯基和(C2-C6)炔基；或R3和R4与互连原子一起形成式(r)的2,2-二氟-1,3-二氧戊环的环，所述环与带有基团-OR3和-OR4的苯基部分稠合，其中星号指示与这样的苯环共有的碳原子：
每个R5选自：CN、NO2、CF3和卤素原子；
k是0或在1-3范围内的整数；
x’是0或1；
L1选自键和-(CH2)p-，其中p是在1-4的范围内的整数；
W1选自二价亚芳基、亚杂芳基和饱和单环亚杂环烷基；
L2是选自以下的基团：键、-(CH2)q-(其中q是1或2)、[1]-(CO)-[X]-(CH2)t-[2]和[1]-(SO2)-[X]-(CH2)t-[2]，其中[1]和[2]分别代表基团L2与环W1和与链氮原子的连接点，且其中
[X]是键或被取代的或未被取代的亚芳基；
t是在1-4的范围内的整数；
W2选自芳基和杂芳基；
L是键或-(CH2)-基团；
R6选自(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷基和-CN，其中所述(C1-C4)烷基任选地被一个或多个选自(C3-C7)环烷基、(C1-C4)烷氧基和羟基的基团取代，或者，替代性地，当R6是(C1-C4)烷基时，W2是苯环，R1中的一个是相对于L处于邻位的烷基，R1和R6可以连接以与W2形成稠合环残基，所述稠合环残基至少选自1H-环丙苯(cyclopropabenzene)-1,1-二基、茚满-1,1-二基(也称作2,3-二氢-1H-茚-1,1-二基)、茚满-2,2-二基(也称作2,3-二氢-1H-茚-2,2-二基)、1,2,3,4-四氢萘-1,1-二基和1,2,3,4-四氢萘-2,2-二基；
R7选自氢和任选地被羟基或-NR11R12取代的(C1-C4)烷基，且其中R11和R12独立地选自氢、(C1-C4)烷基，或者，与它们所连接的氮原子一起可以形成具有选自O、S和NH的另外杂原子的饱和杂环烷基；
A是含氮基团，其可以选自：
-基团(a)，其为-(CH2)s-NR8R9，其中s是在1-4的范围内的整数，且R8和R9独立地是氢或(C1-C4)烷基；和
-基团(b)，其为任选地被一个或两个基团R10取代的饱和单环、二环或三环杂环环系，所述基团R10在每次出现时独立地选自(C1-C4)烷基和苄基。
本发明还涉及由式(IA)表示的式(I)的化合物(其中x’是1)，其中负电荷可以存在于氧原子中且对应的正电荷是在相邻的氮原子上。
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、L、L1、W1、L2、W2、A、m、n和k如上所述。
本发明还涉及式(I)的化合物的相应氘代衍生物，其中至少一个氢原子被相应的氘原子替代。
本发明还包括其药学上可接受的盐和/或溶剂化物。
术语“药学上可接受的盐”表示式(I)的化合物的衍生物，其中如下适当地修饰母体化合物：用常规地认为药学上可接受的任意碱或酸，将可能存在的任意游离酸性或碱性基团转化成对应的加成盐。
所述盐的合适例子因而可以包括碱性残基(诸如氨基)的无机酸或有机酸加成盐，以及无机酸或有机酸残基诸如羧基。
可以适当地用于制备本发明中的盐的无机碱的阳离子包含碱金属或碱土金属(诸如钾、钠、钙或镁)的离子。
通过使作为碱起作用的主要化合物与无机酸或有机酸反应以形成盐而得到的那些盐包括，例如，盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、乙酸盐、甲磺酸盐、樟脑磺酸盐、草酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐和柠檬酸盐。
技术人员会明白，许多有机化合物可以与它们在其中反应或它们从其中沉淀或结晶的溶剂形成复合物。这些复合物被称为“溶剂化物”。本发明的化合物的药学上可接受的溶剂化物是在本发明范围内。
在本发明范围内还包括式(I)的化合物的多晶型物和晶型、或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在下文中，在本发明的任何方面(除了在化学方法中描述的中间体化合物以外)定义的式(I)、(IA)、(IB)、(IC)、(ID)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)和(I)’的化合物、其对映异构体、非对映异构体、它们的药学上可接受的盐和溶剂化物、及其多晶型物或晶型称作“本发明的化合物”。
本发明另外包括用于制备本发明的化合物的方法。
本发明还提供了与一种或多种药学上可接受的载体混合的、单独的或组合的本发明化合物的药物组合物。
在另一个方面，本发明提供了本发明的化合物作为药物的用途。
在一个方面，本发明提供了本发明的化合物在制备药物中的用途。
具体地，本发明提供了本发明的化合物用于预防和/或治疗其中需要抑制PDE4活性以及毒蕈碱M3受体拮抗作用的任意疾病的用途。
具体地，可以施用单独的或与其它活性成分组合的本发明的化合物，用于预防和/或治疗以气道阻塞为特征的呼吸道疾病，例如哮喘和COPD。在一个实施方案中，可以为预防和/或治疗COPD而施用本发明的化合物。
在另一个方面，本发明提供了本发明的化合物用于制备药物的用途，所述药物用于预防和/或治疗其中需要抑制PDE4活性以及毒蕈碱M3受体拮抗作用的任意疾病。
此外，本发明提供了一种用于预防和/或治疗其中需要抑制PDE4活性以及毒蕈碱M3受体拮抗作用的任意疾病的方法，所述方法包括：给需要这种治疗的患者施用治疗有效量的本发明的化合物。
本发明的另一个方面提供了合适的吸入装置，其包含本发明的化合物的药物组合物，所述装置可以各自选自单次剂量或多次剂量干粉吸入器、增压定量吸入器或喷雾器，特别是软雾(soft mist)型雾化器。
本发明的另一个方面提供了一种试剂盒，其包含单独的或与一种或多种活性成分组合的本发明化合物的药物组合物和装置，所述装置可以是单次剂量或多次剂量干粉吸入器、定量吸入器或喷雾器。
定义
术语“卤素原子”包括氟、氯、溴和碘，优选氯。
术语“(C1-Cx)烷基”，其中x是大于1的整数，表示直链和支链烷基，其中组分碳原子的数目是在1-x的范围内。具体的烷基是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。
通过类推，术语“(C1-Cx)亚烷基”表示二价(C1-Cx)烷基残基，其中(C1-Cx)烷基如上定义。
术语“(C1-Cx)烷氧基”或“(C1-Cx)烷氧基”，其中x是大于1的整数，表示直链和支链烷氧基，其中组分碳原子的数目是在1-x的范围内。具体的烷氧基是甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、异丁氧基和叔丁氧基。
表述“(C1-Cx)卤代烷基”表示上面定义的“(C1-Cx)烷基”基团，其中一个或多个氢原子被一个或多个卤素原子替代，所述卤素原子可以彼此相同或不同。所述(C1-C6)卤代烷基的例子因此可以包括卤代的烷基、多卤代的烷基和其中所有氢原子都被卤素原子替代的全卤代的烷基，例如三氟甲基或二氟甲基。
术语“(C3-Cy)环烷基”，其中y是大于或等于3的整数，表示含有3-y个环碳原子的饱和环状烃基。例子包括：环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
表述“(C3-Cy)环烷基羰基”表示(C3-Cy)环烷基CO-基团，其中基团“(C3-Cy)环烷基”具有上面定义的含义。
术语“(C2-C6)烯基”表示处于顺式或反式构型的、具有一个或多个双键的、直链或支链、共轭的或非共轭的碳链，其中原子的数目是在2-6的范围内。
术语“(C5-Cz)环烯基”，其中z是大于或等于5的整数，表示含有5-z个环碳原子和一个或多个双键的环状烃基。
术语“(C2-C6)炔基”表示具有一个或多个三键的直链或支链碳链，其中原子的数目是在2-6的范围内。
术语“亚芳基”表示具有6-10个环碳原子的二价单环或双环环系，其中至少一个环是芳族的。合适的亚芳基的例子包括，例如，在任意合适位置的亚苯二基、萘二基、四氢萘二基、茚满二基、茚二基残基等。
表述“亚杂芳基”表示具有5-6个环原子且其中至少一个环原子是杂原子(例如N、NH、S或O)的二价单环环系。合适的亚杂芳基系统的非限制性例子包括，例如，在任意合适位置的噻吩二基、呋喃二基、吡咯二基、吡唑二基、咪唑二基、三唑二基、四唑二基、异唑二基、唑二基、异噻唑二基、噻唑二基、吡啶二基残基等。
表述“杂环烷基”表示具有3-6个环原子的单环环烷基，其中至少一个环碳原子被杂原子(例如N、NH、S或O)替代。杂环烷基的非限制性例子以吡咯烷基、噻唑烷基、咪唑烷基、唑烷基、哌嗪基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基(thiomorpholinyl)、氮杂环丁基为代表。
表述“饱和单环亚杂环烷基”表示具有3-6个环原子的二价饱和单环环烷基，其中至少一个环碳原子被杂原子(例如N、NH、S或O)替代。“饱和单环亚杂环烷基”的非限制性例子以在任意合适位置的吡咯烷二基、噻唑烷二基、咪唑烷二基、唑烷二基、哌嗪二基、哌啶二基、吗啉二基、硫代吗啉二基、氮杂环丁烷二基残基等为代表。
术语“芳基”表示具有6-10个环碳原子的单环或双环环系，其中至少一个环是芳族的。
表述“杂芳基”表示具有5-11个环原子的单环或双环环系，其中至少一个环是芳族的且其中至少一个环原子是杂原子(例如N、NH、S或O)。
具有5-6个环原子的合适芳基或杂芳基单环环系的例子包括，例如，苯基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、异唑基、唑基、异噻唑基、噻唑基、吡啶基、呋喃基衍生出的残基等。
具有超过6个环原子的合适芳基或杂芳基二环环系的例子包括萘基、亚联苯基、四氢萘基、嘌呤基、喋啶基、苯并咪唑基、苯并三唑基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并唑基、二氢苯并二氧杂环己烯基、二氢苯并二氧杂环庚三烯基(dihydrobenzodioxepinyl)、苯并-嗪基残基等。
表述“杂环环系”表示任选地取代的单环、二环或三环环系，其可以是饱和的、部分不饱和的或不饱和的，诸如具有5-11个环原子的杂环烷基或杂芳基，其中至少一个环原子是杂原子(例如N、S或O)。“杂环环系”的例子以吡咯烷基、咪唑烷基、哌嗪基、哌啶基、奎宁环基、8-氮杂双环[3.2.1]辛烷基或脱羟基东莨菪醇残基为代表，其都任选地在氮原子上被氧、(C1-Cx)烷基或苄基取代。
如在本说明书中使用的，氧代部分由(O)表示，作为其它普通表示例如(＝O)的替代。因而，以通式的方式，羰基在本文中优选地表示为-C(O)-，作为其它普通表示诸如-CO-、-(CO)-或-C(＝O)-的替代。一般而言，加括号的基团是侧基，没有被包括在链中，且当认为有用时，使用括号来帮助区分直链化学式；例如磺酰基-SO2-也可能表示为-S(O)2-以相对于亚磺酰基(sulfinic group)-S(O)O-进行区分。
发明详述
本发明涉及一类同时作为磷酸二酯酶4(PDE4)的酶抑制剂和毒蕈碱M3受体拮抗剂起作用的化合物。
本发明涉及通式(I)的衍生物、其氘代衍生物和药学上可接受的盐或溶剂化物，
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、L1、W1、L2、W2、L、A、n、m、k和x’如上面所定义。
优选的式(I)的化合物是这样的化合物，其中“饱和杂环环系”A由式(i)、(ii)、(iii)或(iv)的基团表示：
其中
f＝1、2或3；
g＝1、2或3。
且星号(*)代表与式(I)的氧原子的连接点。
更优选地A由式(i)或(ii)的基团表示：
其中f是1，g是2，且星号(*)代表与式(I)的氧原子的连接点。
本领域技术人员显而易见，通式(I)的化合物至少含有一个立体中心，即由碳原子(1)表示，且因此作为光学立体异构体存在。
技术人员显而易见，根据本发明的化合物可以具有2个立体中心(例如在碳原子(1)和(2)处)，因而它们可以相应地作为4种非对映异构体存在。在根据本发明的化合物具有超过2个立体中心的情况下，它们作为2n种非对映异构体存在(其中n这里表示立体中心的数目)。应当理解，所有这样的异构体及其任意比例的混合物都被包括在本发明范围内。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及式(I)’的化合物，其为如上定义的式(I)的化合物，其中碳(1)的绝对构型是下文显示的绝对构型：
以基于基团优先性的Cahn-Ingold-Prelog命名法为基础指定碳(1)的绝对构型。
在一个优选的实施方案中，对于式(I)的化合物，在碳(1)处的绝对构型是(S)。
在一个实施方案中，当A是如前面定义的式(i)的基团时，式(I)的化合物(其中(2)是不对称中心)可以至少作为下文报告的四对非对映异构体(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)存在，它们被包括在本发明范围内。
技术人员显而易见，式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)的化合物也可以作为单一非对映异构体得到，其中在碳原子(2)的立体中心处的构型被定义为(R)或(S)。
在一个实施方案中，将式(Ia)的化合物如上面报告的那样或作为其单一非对映异构体提供。
应当理解，下文和上文关于式(I)的化合物描述的所有优选的基团或实施方案可以彼此组合，并且还在细节上做必要的修正后应用于式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)和(I)’的化合物。
在一个实施方案中，本发明提供了式(IA)的化合物，其为式(I)的化合物的吡啶环上的N-氧化物(其中x’是1)、其氘代衍生物和药学上可接受的盐和溶剂化物：
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、L、L1、W1、L2、W2、A、m、n和k如上所述。
在一个优选的实施方案中，k是2且R5是卤素原子。在另一个优选的实施方案中，这样的R5是在吡啶环的3和5位处的2个氯原子。
在一个优选的实施方案中，R4选自(C1-C6)烷基且R3选自(C3-C7)环烷基或(C1-C6)烷基，其任选地被(C3-C7)环烷基取代。
在另一个优选的实施方案中，R3和R4都是甲基。
一种优选的式(I)的化合物(其中W2是苯环，L是键，且R1中的一个(相对于L在邻位)和R6可以连接以形成环残基)是根据通式(IB)的化合物、其氘代衍生物和药学上可接受的盐和溶剂化物，
其中R1、R2、R3、R4、R5、R7、A、L1、W1、L2、m、k和x’如上面关于式(I)的化合物所定义。
在一种更优选的式(IB)的化合物中，L1是键，W1是选自噻吩-2,5-二基、噻吩-2,4-二基、亚苯(phenylene)-1,4-二基、亚苯-1,3-二基和亚苯-1,2-二基的二价基团，L2是-(CH2)-，R7是H，且R1、R2、R3、R4、R5、A、m和k如上面关于式(I)的化合物所定义；其氘代衍生物和药学上可接受的盐和溶剂化物。
另一种优选的式(I)的化合物(其中W2是苯环且L是键)是根据通式(IC)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，
其中R6选自甲基、乙基、羟基甲基、1-羟基乙基、2-羟基乙基、甲氧基甲基、三氟甲基和二氟甲基，且R1、R2、R3、R4、R5、R7、A、L1、W1、L2、m、n、k和x’如上面关于式(I)的化合物所定义。
在一种更优选的式(IC)的化合物中，L1是键，W1是选自噻吩-2,5-二基、噻吩-2,4-二基、亚苯-1,4-二基、亚苯-1,3-二基和亚苯-1,2-二基的二价基团，L2是-(CH2)-，R7是H或甲基，R6选自甲基、乙基、羟基甲基、1-羟基乙基、2-羟基乙基、甲氧基甲基、三氟甲基和二氟甲基，且R1、R2、R3、R4、R5、A、m、n、k和x’如上面关于式(I)的化合物所定义；及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
另一种优选的式(I)的化合物(其中L1是键，W1选自二价饱和单环亚杂环烷基)是由通式(ID)表示的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，
且其中
Y是S或CH2；
L2是选自-(CH2)q-(其中q是1或2)、[1]-(CO)-[X]-(CH2)t-[2]和[1]-(SO2)-[X]-(CH2)t-[2]的基团，其中[1]和[2]分别代表基团L2与饱和单环亚杂环烷基环(W1)和与链氮原子的连接点，且其中
[X]是键或被取代的或未被取代的选自亚苯-1,4-二基、亚苯-1,3-二基和亚苯-1,2-二基的亚芳基；
t是在1-4的范围内的整数；
且其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、A、W2、m、n、k和x’如上面关于式(I)的化合物所定义。
根据一个优选的实施方案，本发明提供了下面报告的化合物：
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥(oxido)-吡啶-1-(ium)-4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-甲基-2-氧代-1-苯基-2-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯甲酸盐
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]4-[[[1-甲基-2-氧代-1-苯基-2-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基-乙基]氨基]甲基]苯甲酸酯
[(3R)-奎宁环-3-基]1-[[4-[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙氧基]羰基苯基]甲基氨基]茚满-1-甲酸酯
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基羰基茚满-1-基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-甲基-2-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]-2-氧代-1-苯基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-苯基-1-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基羰基-丙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-甲基-2-氧代-1-苯基-2-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯的单一非对映异构体
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-甲基-2-氧代-1-苯基-2-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯的单一非对映异构体
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]4-[[[1-甲基-2-氧代-1-苯基-2-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基-乙基]氨基]甲基]苯甲酸酯的单一非对映异构体
[(3R)-奎宁环-3-基]1-[[4-[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙氧基]羰基苯基]甲基氨基]茚满-1-甲酸酯的单一非对映异构体
[(3R)-奎宁环-3-基]1-[[4-[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙氧基]羰基苯基]甲基氨基]茚满-1-甲酸酯的单一非对映异构体
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基羰基茚满-1-基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯的单一非对映异构体
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基羰基茚满-1-基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯的单一非对映异构体
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-甲基-2-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]-2-氧代-1-苯基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯的单一非对映异构体
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-甲基-2-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]-2-氧代-1-苯基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯的单一非对映异构体
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-甲基-2-[(3R)-1-氧桥奎宁环-1--3-基]氧基-2-氧代-1-苯基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-(2-二甲基氨基乙基氧基羰基)茚满-1-基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基羰基]茚满-1-基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]-5-[[[1-(羟基甲基)-2-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]-2-氧代-1-苯基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-(羟基甲基)-2-氧代-1-苯基-2-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基-乙基]-甲基-氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]-5-[[[1-(羟基甲基)-2-氧代-1-苯基-2-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-(甲氧基甲基)-2-氧代-1-苯基-2-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-(2-二甲基氨基乙基氧基羰基)茚满-1-基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯的单一非对映异构体
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-(2-二甲基氨基乙基氧基羰基)茚满-1-基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯的单一非对映异构体
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基羰基]茚满-1-基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯的单一非对映异构体
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基羰基]茚满-1-基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯的单一非对映异构体
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-苯基-1-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基羰基-丙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯的单一非对映异构体
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-苯基-1-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基羰基-丙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯的单一非对映异构体
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-(羟基甲基)-2-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]-2-氧代-1-苯基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯的单一非对映异构体
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-(羟基甲基)-2-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]-2-氧代-1-苯基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯的单一非对映异构体
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-(羟基甲基)-2-氧代-1-苯基-2-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯的单一非对映异构体
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-(羟基甲基)-2-氧代-1-苯基-2-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯的单一非对映异构体
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-(羟基甲基)-2-氧代-1-苯基-2-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基-乙基]-甲基-氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯的单一非对映异构体
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-(羟基甲基)-2-氧代-1-苯基-2-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基-乙基]-甲基-氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯的单一非对映异构体
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-(甲氧基甲基)-2-氧代-1-苯基-2-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯的单一非对映异构体
及其药学上可接受的盐或溶剂化物。
表述“单一非对映异构体”报告在作为单一非对映异构体分离的每种式(I)的化合物的化学名称附近，其在R6所连接的立体性碳原子(2)处的绝对构型没有确定。
本发明还涉及用于制备本发明的化合物的方法。
根据下面报告的方案A和方案B的一般合成途径或遵循技术人员可以容易地应用的轻微修改的操作，可以得到式(I)的化合物。
在下述方案A和方案B中，从在共同未决的国际申请号PCT/EP2013/075520中描述的吡啶N-氧化物(III)开始，仅描述了与式(IA)的化合物对应的式(I)的化合物，其中x’是1。从未氧化的吡啶、在共同未决的国际申请号PCT/EP2013/075520中描述的化合物(V)的类似物开始，可以类似地得到任何对应的式(I)的化合物(其中x’是0)。
下面描述的和在下述方案A中报告的制备方法不应当视作限制可用于制备本发明的化合物的合成方法的范围。
在下述方案A和方案B中，对于式(IA)的化合物和对于式(II)至(XXI)的化合物，除非另有说明，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、L1、W1、L2、W2、L、A、n、m、k和x’如上面所定义，PG是保护基，且Y是选自键、-CH2-、[1]-(CO)-[X]-(CH2)t’-[2]和[1]-(SO2)-[X]-(CH2)t’-[2]的基团，其中[1]和[2]分别代表基团Y与环W1和与甲酰基的连接点，且其中[X]是键或被取代的或未被取代的亚芳基且t’是0或在1-3范围内的整数。
方案A
根据下面的方案1/(S1)，通过如下报告的式(II)的化合物与式(V)的化合物的反应，可以制备式(IA)的化合物。
方案1(S1)
典型反应条件包括，在有酸(诸如乙酸)和任选的碱(诸如三乙胺)和还原剂(诸如NaB(OAc)3H或NaBH3CN)存在下，在合适的溶剂(诸如乙腈、DCM或乙醇)中，在适当的温度，诸如室(或环境)温度或0℃或40℃，使式(II)的化合物与式(V)的化合物反应。
根据下面的方案2/(S2)，通过如下报告的式(IV)的化合物与式(III)的化合物的反应，可以制备式(II)的化合物。
方案2(S2)
典型反应条件包括，在有合适的偶联剂(诸如EDC/DMAP或HATU)存在下，在合适的溶剂(诸如DCM)中，在适当的温度，诸如室(或环境)温度，使式(IV)的化合物与式(III)的化合物反应。
如在共同未决的国际申请号PCT/EP2013/075520中所述，可以制备式(III)的化合物。
根据下面的方案3/(S3)，通过式(VI)的化合物的去保护，可以制备式(V)的化合物。
方案3(S3)
典型反应条件包括，在合适的溶剂(诸如EtOAc)中，在适当的温度，诸如室(或环境)温度，在合适的催化剂(诸如10％Pd/C)上使式(VI)的化合物与氢来源(诸如甲酸铵或气态氢)反应。
通过在有合适的酸(诸如盐酸)存在下，在适当的温度，诸如室(或环境)温度，使式(VI)的化合物在合适的溶剂(诸如1,4-二烷)中反应，也可以制备式(V)的化合物。
根据下面的方案4/(S4)，通过如下报告的式(VIII)的化合物与式(VII)的化合物的反应，可以制备式(VI)的化合物。
方案4(S4)
典型反应条件包括，在有合适的偶联剂(诸如DCC/HOBt或EDC/DMAP或HATU)存在下，在适当的温度，诸如室(或环境)温度或40℃，在合适的溶剂(诸如THF)中，使式(VIII)的化合物与式(VII)的化合物反应。
根据下面的方案5/(S5)，通过如下报告的式(IX)的化合物的反应，可以制备式(VIII)的化合物。
方案5(S5)
典型反应条件包括，在有合适的碱(诸如氢氧化钠)存在下，在适当的温度，诸如0℃或室(或环境)温度，在合适的溶剂(诸如THF/水或1,4-二烷/水)中使式(IX)的化合物与氯甲酸苄酯或二碳酸二叔丁酯反应。
根据下面的方案6/(S6)，通过如下报告的式(X)的化合物的反应，可以制备式(V)的化合物。
方案6(S6)
典型反应条件包括，在有合适的酸(诸如盐酸)存在下，在适当的温度，诸如室(或环境)温度，在合适的溶剂(诸如1,4-二烷)中使式(X)的化合物反应。
根据下面的方案7/(S7)，通过如下报告的式(XI)的化合物与式(VII)的化合物的反应，可以制备式(X)的化合物。
方案7(S7)
典型反应条件包括，在有合适的偶联剂(诸如DCC/HOBt或EDC/DMAP或HATU)存在下，在适当的温度，诸如室(或环境)温度或40℃，在合适的溶剂(诸如THF)中使式(XI)的化合物与式(VII)的化合物反应。
根据下面的方案8/(S8)，通过如下报告的式(XII)的化合物的反应，可以制备式(XI)的化合物。
方案8(S8)
典型反应条件包括，在适当的温度，诸如室(或环境)温度或50℃，在合适的溶剂(诸如MeOH)中，使式(XII)的化合物与合适的碱(诸如NaOH)反应。
根据下面的方案9/(S9)，通过如下报告的式(XIII)的化合物的反应，可以制备式(XII)的化合物。
方案9(S9)
典型反应条件包括，在合适的温度诸如在-78℃、0℃或室(或环境)温度，在合适的溶剂(诸如THF)或乙醚中，使式(XIII)的化合物与合适的格氏试剂(诸如甲基溴化镁或乙基溴化镁)反应。
根据下面的方案10/(S10)，通过如下报告的式(XIV)的化合物的反应，也可以制备式(V)的化合物。
方案10(S10)
典型反应条件包括，在有合适的酸(诸如盐酸)存在下，在适当的温度，诸如室(或环境)温度，在合适的溶剂(诸如THF或1,4-二烷)中使式(XIV)的化合物反应。
根据下面的方案11/(S11)，通过如下报告的式(XV)的化合物的反应，可以制备式(XIV)的化合物。
方案11(S11)
典型反应条件包括，在有合适的碱(诸如DBU或氢化钠)存在下，在适当的温度，诸如0℃或室(或环境)温度，在合适的溶剂(诸如THF或1,4-二烷)中，使式(XV)的化合物与烷化剂(诸如低聚甲醛或碘甲烷)反应。
根据下面的方案12/(S12)，通过如下报告的式(XVI)的化合物的反应，可以制备式(XV)的化合物。
方案12(S12)
典型反应条件包括，在有任选的碱(诸如三乙胺)存在下，在适当的温度，诸如室(或环境)温度或0℃或40℃，在合适的溶剂(诸如乙腈、DCM或乙醇)中使式(XVI)的化合物与芳基甲醛(arylcarboxaldehyde)(诸如苯甲醛或4-甲氧基苯甲醛)反应。
根据下面的方案13/(S13)，通过如下报告的式(XVII)的化合物的反应，可以制备式(XVI)的化合物。
方案13(S13)
典型反应条件包括，在适当的温度，诸如室(或环境)温度，在合适的溶剂(诸如EtOAc)中，使式(XVII)的化合物与氢来源(诸如甲酸铵或气态氢)在合适的催化剂(诸如10％Pd/C)上反应。
通过在有合适的酸(诸如盐酸)存在下，在适当的温度，诸如室(或环境)温度，在合适的溶剂(诸如1,4-二烷)中使式(XVII)的化合物反应，也可以制备式(XVI)的化合物。
根据下面的方案14/(S14)，通过如下报告的式(XVIII)的化合物与式(VII)的化合物的反应，可以制备式(XVII)的化合物。
方案14(S14)
典型反应条件包括，在有合适的偶联剂(诸如DCC/HOBt或EDC/DMAP或HATU)存在下，在适当的温度，诸如室(或环境)温度或40℃，在合适的溶剂(诸如THF)中使式(XVIII)的化合物与式(VII)的化合物反应。
根据下面的方案15/(S15)，通过如下报告的式(XIX)的化合物的反应，可以制备式(XVIII)的化合物。
方案15(S15)
典型反应条件包括，在有合适的碱(诸如氢氧化钠)存在下，在适当的温度，诸如0℃或室(或环境)温度，在合适的溶剂(诸如THF/水或1,4-二烷/水)中，使式(XIX)的化合物与氯甲酸苄酯或二碳酸二叔丁酯反应。
方案B
根据下面的方案16/(S16)，通过如下报告的式(XX)的化合物的反应，可以制备式(IA)的化合物。
方案16(S16)
典型反应条件包括，在有任选的酸(诸如乙酸)和还原剂(诸如NaB(OAc)3H或NaBH3CN)存在下，在适当的温度，诸如室(或环境)温度或0℃或40℃，在合适的溶剂(诸如乙腈、DCM或乙醇)中使式(XX)的化合物反应。
根据下面的方案17/(S17)，通过如下报告的式(XXI)的化合物的反应，可以制备式(XX)的化合物。
方案17(S17)
典型反应条件包括，在有合适的碱(诸如DBU或氢化钠)存在下，在适当的温度，诸如0℃或室(或环境)温度，在合适的溶剂(诸如THF或1,4-二烷)中，使式(XXI)的化合物与烷化剂(诸如低聚甲醛)反应。
根据下面的方案18/(S18)，通过如下报告的式(II)的化合物与式(XVI)的化合物的反应，可以制备式(XXI)的化合物。
方案18(S18)
典型反应条件包括，在有酸(诸如乙酸)和任选的碱(诸如三乙胺)存在下，在适当的温度，诸如室(或环境)温度或0℃或40℃，在合适的溶剂(诸如乙腈、DCM或乙醇)中使式(II)的化合物与式(XVI)的化合物反应。
描述的方法是特别有利的，因为通过技术人员已知的任意适当变体易于适当地调控它们，从而得到任意期望的本发明化合物。这样的变体被包含在本发明范围内。
从所有上述内容，技术人员显而易见，任意所述基团可以原样存在或以任意适当地保护的形式存在。
具体地，在进行烷基化、酰化、偶联、氧化或磺酰化之前，需要适当地保护存在于式II至XIII的化合物中且会产生不希望的副反应和副产物的官能团。同样地，那些相同的被保护的基团的随后去保护可以发生在所述反应结束以后。
根据本发明，除非另有说明，否则术语“保护基”表示被改造以保留它所结合的基团的功能的保护性基团。通常，保护基用于保留氨基、羟基或羧基功能。因此，适当的保护基可以包括，例如，本领域技术人员众所周知的苄基、苄氧基羰基、叔丁氧基羰基、烷基或苄基酯等[关于一般参考，参见，T.W.Green；Protective Groups in Organic Synthesis(Wiley,N.Y.1999)]。
同样地，根据在有机合成化学中常用的非常熟知的方法，可以完成任意所述基团(例如包括羰基、羟基或氨基)的选择性保护和去保护。
通过将任意游离酸性基团或氨基适当地转化成对应的药学上可接受的盐，可以实现式(I)的化合物的任选成盐。也在该情况下，用于本发明的化合物的任选成盐的工作条件都是在技术人员的普通知识内。
从所有上述内容，技术人员显而易见，可以方便地修改上面的方法、用于制备本发明的合适化合物的其广泛任意变体，从而使反应条件适应具体需要，例如通过选择适当的缩合剂、溶剂和保护基，视情况而定。
本发明也提供了与一种或多种药学上可接受的载体混合的本发明化合物的药物组合物，所述载体例如在Remington’s Pharmaceutical Sciences Handbook,XVII Ed.,Mack Pub.,N.Y.,U.S.A.中描述的那些。
本发明的化合物的给药可以根据患者需要来进行，例如，口服给药、经鼻给药、胃肠外给药(皮下、静脉内、肌肉内、胸骨内和通过输注)、吸入给药、直肠给药、阴道给药、表面给药、局部给药、透皮给药和眼给药。可以将各种固体口服剂型用于施用本发明的化合物，包括诸如片剂、囊形片、胶囊、囊片、颗粒、锭剂和散装粉末等固体形式。可以将本发明的化合物单独施用，或与本领域已知的各种药学上可接受的载体、稀释剂(诸如蔗糖、甘露醇、乳糖、淀粉)和赋形剂组合施用，所述赋形剂包括、但不限于悬浮剂、增溶剂、缓冲剂、粘合剂、崩解剂、防腐剂、着色剂、调味剂、润滑剂等。定时释放胶囊、片剂和凝胶剂对于本发明化合物的给药也是有利的。
还可以将各种液体口服剂型用于施用本发明的化合物，包括水性和非水性溶液、乳剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。这些剂型还可以含有本领域已知的适宜的惰性稀释剂(如水)以及本领域已知的适宜的赋形剂(如防腐剂、润湿剂、甜味剂、调味剂)以及用于乳化和/或悬浮本发明的化合物的试剂。例如，可以以等渗无菌溶液的形式静脉内注射本发明的化合物。其它制剂也是可能的。
通过将化合物与合适的赋形剂诸如可可脂、水杨酸盐和聚乙二醇混合，可以制备用于本发明化合物的直肠给药的栓剂。
用于阴道给药的制剂可以为乳膏剂、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾剂形式，其除了活性成分之外还含有本领域已知的合适的载体。
对于局部给药，药物组合物可以为适合施用至皮肤、眼、耳或鼻的乳膏剂、软膏剂、搽剂、洗剂、乳剂、混悬剂、凝胶、溶液、糊剂、粉剂、喷雾剂和滴剂的形式。局部给药还可以包括通过诸如透皮贴剂等方式进行的透皮给药。
对于治疗呼吸道疾病，根据本发明的化合物优选地通过吸入来施用。
可吸入的制剂包括可吸入的散剂、含有推进剂的定量气雾剂或不含推进剂的可吸入制剂，且可以通过合适的吸入装置来施用，所述吸入装置可以各自选自干粉吸入器、增压的定量吸入器或喷雾器。
对于作为干粉给药，可以使用根据现有技术已知的单或多剂量吸入器。在该情况下，该粉末可以填充在明胶、塑料或其它胶囊、药筒或泡罩包装中或在贮库中。
可以将通常无毒且对本发明化合物是化学惰性的稀释剂或载体(例如乳糖)或适于改善可吸收分数(respirable fraction)的任意其它添加剂加入到粉末化的本发明的化合物中。
包含推进气体(如氢氟烷烃)的吸入气雾剂可以包含溶液或分散形式的本发明的化合物。推进剂驱动的制剂还可以包含其它成分，例如共溶剂、稳定剂或任选的其它赋形剂。
包含本发明化合物的不含推进剂的可吸入制剂可以是在水性、醇性或水醇性介质中的溶液或混悬剂形式，且它们可以通过从现有技术已知的喷射或超声喷雾器或通过软薄雾喷雾器诸如Respimat来递送。
本发明的化合物可以作为唯一活性剂来施用，或与其它药物活性成分的组合产品(combination)来施用，所述其它药物活性成分包括目前用于治疗呼吸障碍的那些，例如β2-激动剂、抗毒蕈碱剂、皮质类固醇、促分裂原活化蛋白激酶(P38MAP激酶)抑制剂、核因子κ-B激酶亚基β(IKK2)抑制剂、人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)抑制剂、磷酸二酯酶4(PDE4)抑制剂、白三烯调节剂、非甾体类抗炎剂(NSAID)和粘液调节剂。
本发明也提供了本发明的化合物与β2-激动剂的组合产品，所述β2-激动剂选自：卡莫特罗、维兰特罗(GSK-642444)、茚达特罗、米维特罗、阿福特罗、福莫特罗、沙丁胺醇、左旋沙丁胺醇、特布他林、AZD-3199、奥达特罗(BI-1744-CL)、abediterol(LAS-100977)、班布特罗、异丙肾上腺素、丙卡特罗、克仑特罗、瑞普特罗、非诺特罗和ASF-1020及其盐。
本发明也提供了本发明的化合物与皮质类固醇的组合产品，所述皮质类固醇选自：丙酸氟替卡松、糠酸氟替卡松、糠酸莫米松、二丙酸倍氯米松、环索奈德、布地奈德、GSK 685698、GSK 870086。
本发明也提供了本发明的化合物与抗毒蕈碱剂的组合产品，所述抗毒蕈碱剂选自：阿地铵(aclidinium)、噻托铵(tiotropium)、异丙托铵、曲司铵(trospium)、格隆铵(glycopyrronium)和氧托品盐。
本发明也提供了本发明的化合物与PDE4抑制剂的组合产品，所述PDE4抑制剂选自：AN-2728、AN-2898、CBS-3595、阿普斯特(apremilast)、ELB-353、KF-66490、K-34、LAS-37779、IBFB-211913、AWD-12-281、西潘茶碱、西洛司特、罗氟司特、BAY19-8004和SCH-351591、AN-6415、indus-82010、TPI-PD3、ELB-353、CC-11050、GSK-256066、奥米司特、OX-914、替托司特、MEM-1414和RPL-554。
本发明也提供了本发明的化合物与P38MAP激酶抑制剂的组合产品，所述P38MAP激酶抑制剂选自：塞马莫德、他美莫德、吡非尼酮、PH-797804、GSK-725、minokine和洛吡莫德及其盐。
在一个优选的实施方案中，本发明提供了本发明的化合物与IKK2抑制剂的组合产品。
本发明还提供了本发明的化合物与HNE抑制剂的组合产品，所述HNE抑制剂选自：AAT、ADC-7828、Aeriva、TAPI、AE-3763、KRP-109、AX-9657、POL-6014、AER-002、AGTC-0106、respriva、AZD-9668、zemaira、AAT IV、PGX-100、弹力素(elafin)、SPHD-400、prolastin C和吸入的prolastin。
本发明还提供了本发明的化合物与白三烯调节剂的组合产品，所述白三烯调节剂选自：孟鲁司特、扎鲁司特和普仑司特。
本发明还提供了本发明的化合物与NSAID的组合产品，所述NSAID选自：布洛芬和酮洛芬。
本发明还提供了本发明的化合物与粘液调节剂的组合产品，所述粘液调节剂选自：INS-37217、地夸磷索、西贝那德、CS-003、他奈坦、DNK-333、MSI-1956和吉非替尼。
本发明的化合物的剂量取决于多种因素，包括要治疗的具体疾病、症状的严重性、给药途径、剂量间隔频率、使用的具体化合物、化合物的效能、毒理学特性和药代动力学特性。
有利地，可以在例如0.001至1000mg/天、优选0.1至500mg/天的剂量，施用本发明的化合物。
当通过吸入途径施用它们时，本发明的化合物的剂量有利地被包含在0.01至20mg/天之间，优选0.1至10mg/天之间。
优选地，可以施用单独的或与其它活性成分的组合产品的本发明化合物，用于预防和/或治疗任意阻塞性呼吸疾病诸如哮喘、慢性支气管炎和慢性阻塞性肺疾病(COPD)。
可以施用本发明的化合物用于预防和/或治疗其中需要PDE4抑制作用或M3拮抗作用的任何疾病。所述疾病包括：变态反应性疾病状态诸如特应性皮炎、荨麻疹、变应性鼻炎、变应性结膜炎、春季结膜炎、嗜酸性粒细胞性肉芽肿、银屑病、炎症性关节炎、类风湿性关节炎、脓毒性休克、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、心肌和脑的再灌注损伤、慢性肾小球肾炎、内毒素性休克、囊性纤维化、动脉再狭窄、动脉粥样硬化、角化病、类风湿性脊柱炎、骨关节炎、热病(pyresis)、糖尿病、尘肺病、毒性和变应性接触性湿疹、特应性湿疹、脂溢性湿疹、单纯苔藓、晒伤、肛门与生殖器区域的瘙痒、斑秃、肥大性疤痕、盘状红斑狼疮、系统性红斑狼疮、毛囊和广泛区域的脓皮病、内源性和外源性的痤疮、红斑痤疮、病(disease)、类过敏性紫癜肾炎、炎性肠病、白血病、多发性硬化、胃肠道疾病、自身免疫疾病等。
它们还包括神经病学和精神病学病症，诸如阿尔茨海默氏病、多发性硬化、肌侧索硬化(amylolaterosclerosis，ALS)、多系统萎缩(MSA)、精神分裂症、帕金森病、亨廷顿病、皮克病、抑郁症、中风和脊髓损伤。
现在将通过下述实施例进一步描述本发明。
实施例
缩写
DCC＝N,N'-二环己基碳二亚胺；HOBt＝羟基苯并三唑；HATU＝(二甲基氨基)-N,N-二甲基(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)甲亚胺六氟磷酸盐；EDC＝1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐；DBU＝1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯；DMAP＝4-二甲基氨基吡啶；DMF＝二甲基甲酰胺；DMSO＝二甲亚砜；EtOAc＝乙酸乙酯；RT＝室温；THF＝四氢呋喃；DCM＝二氯甲烷；MeOH＝甲醇；EtOH＝乙醇；LHMDS＝双(三甲基硅烷基)氨基锂；m-CPBA＝间氯过氧苯甲酸；TFA＝三氟乙酸；LC-MS＝液相色谱法/质谱法；NMR＝核磁共振；HPLC＝高压液相色谱法；MPLC＝中压液相色谱法；SFC＝超临界流体色谱法
一般实验细节
分析方法
液相色谱法-质谱法
方法1
在Waters 2795 Alliance HT HPLC(其具有与Micromass ZQ、单个四极质谱仪连接的Waters 2996二极管阵列检测器)上执行LC-MS，其中使用Phenomenex Luna C18(2)柱(5μm,100×4.6mm加保护柱(guard cartridge))，以在3.5分钟内的5-95％乙腈/水(在每个流动相中含有0.1％甲酸)的线性梯度，并在95％保持2.0分钟。
方法2
在Waters 2795 Alliance HT HPLC(其具有与Micromass ZQ、单个四极质谱仪连接的Waters 2996二极管阵列检测器)上执行LC-MS，其中使用Waters Xterra MS C18柱(5μm,100×4.6mm加保护柱)，所述柱最初在5％乙腈/水(在水性流动相中含有10mM碳酸氢铵)中保持0.5分钟，继之以在3.5分钟内的5-95％的线性梯度，然后在95％保持1.5分钟。
方法3
在与Waters SQD2单个四极质谱仪连接的Waters Acquity I-Class with Waters二极管阵列检测器上进行UPLC-MS，其中使用Waters HSS C18柱(1.8μm,100×2.1mm)，所述柱最初在5％乙腈/水(在每个流动相中含有0.1％甲酸)中保持1.2分钟，继之以在3.5分钟内的5-100％的线性梯度，然后在100％保持1.5分钟(F＝0.5mL/min)。
方法4
在Waters Acquity I-Class(其具有与Waters SQD2单个四极质谱仪连接的Waters二极管阵列检测器)上执行UPLC-MS，其中使用Waters BEH Shield RP18柱(1.7μm,100×2.1mm)，所述柱最初在5％乙腈/水(在每个流动相中含有10mM碳酸氢铵)中保持1.2分钟，继之以在3.5分钟内的5-100％的线性梯度，然后在100％保持1.5分钟(F＝0.5mL/min)。
超临界流体色谱法--质谱法分析条件
方法5
在具有Waters SQD的Waters/Thar SFC系统上执行SFC-MS，其中使用Chiralpak IA柱，以5mL/min等度(isocratic)运行55％异丙醇/CO2(含有0.1％二乙胺)，120巴背压，40℃柱温度。
方法6
在具有Waters SQD的Waters/Thar SFC系统上执行SFC-MS，其中使用Chiralpak IA柱，以5mL/min等度运行5％甲醇/CO2(含有0.1％二乙胺)，120巴背压，40℃柱温度。
方法7
在具有Waters SQD的Waters/Thar SFC系统上执行SFC-MS，其中使用YMC Amylose-C柱，以5mL/min等度运行55％异丙醇/CO2(含有0.1％二乙胺)，120巴背压，40℃柱温度。
方法8
在具有Waters SQD的Waters/Thar SFC系统上执行SFC-MS，其中使用YMC Amylose-C柱，以5mL/min等度运行50％异丙醇/CO2(含有0.1％二乙胺)，120巴背压，40℃柱温度。
方法9
在具有Waters SQD的Waters/Thar SFC系统上执行SFC-MS，其中使用YMC Amylose-C柱，以5mL/min等度运行40％乙醇/CO2(含有0.1％二乙胺)，120巴背压，40℃柱温度。
方法10
在具有Waters SQD的Waters/Thar SFC系统上执行SFC-MS，其中使用YMC Amylose-C柱，以5mL/min等度运行40％异丙醇/CO2(含有0.1％二乙胺)，120巴背压，40℃柱温度。
手性HPLC-分析条件
方法11
使用Chiralpak IA柱，用1mL/min的50％异丙醇/庚烷(含有0.1％二乙胺)，在Agilent 1200系列HPLC系统上执行手性HPLC。
方法12
使用YMC Cellulose-C柱，用1mL/min的50％异丙醇/庚烷(含有0.1％二乙胺)，在Agilent 1200系列HPLC系统上执行手性HPLC。
NMR
使用运行在400MHz的Bruker仪器，在约室温(除非另有说明)使用所述的溶剂进行1H核磁共振(NMR)光谱法。在所有情况中，NMR数据与提出的结构一致。使用用于命名主要峰的常规缩写以百万分率给出特征性化学位移(δ)：例如s，单峰；d，双峰；t，三重峰；q，四重峰；dd，双重双重峰；dt，双重三重峰；m，多重峰；br，宽峰。
制备型反相HPLC条件
通过反相HPLC执行制备型HPLC纯化，其中使用Waters Fractionlynx制备型HPLC系统(2525泵，2996/2998 UV/VIS检测器，2767液体处理器)或等同的HPLC系统诸如Gilson Trilution UV定向系统。Waters 2767液体处理器充当自动取样器和级分收集器。
用于化合物的制备型纯化的柱是Waters Sunfire OBD Phenomenex Luna Phenyl Hexyl或Waters Xbridge Phenyl(10μm 19×150mm)或Waters CSH Phenyl Hexyl(19×150,5μm)柱。
在酸性或碱性条件下基于乙腈和甲醇溶剂系统选择适当的聚焦的(focused)梯度。
在酸性/碱性条件下使用的调节剂分别是甲酸或三氟乙酸(0.1％V/V)和碳酸氢铵(10mM)。
如下用Waters Fractionlynx软件控制纯化：在210-400nm监测并且在260nm触发阈值采集值，以及，当使用Fractionlynx时，在APi条件下观察到靶分子离子的存在。通过LCMS(带有Waters SQD的Waters Acquity系统)分析采集的级分。
化合物制备
在没有描述起始原料的制备的情况下，这些是商购可得的、在文献中已知的或本领域技术人员使用标准操作可容易地得到。在阐明与早前实施例或中间体“类似地”或“相似地”制备化合物的情况下，技术人员会明白，对于每个特定反应可以改变反应时间、试剂的当量数和温度，且可能必须或需要采用不同的后处理或纯化技术。
快速色谱法表示硅胶色谱法，并且使用Isolera MPLC系统(由Biotage制造)、预填充的硅胶柱(由Biotage提供)或使用常规的玻璃柱色谱法进行。
在如下操作中，在每种起始原料后面，可能提供了化合物编号。这仅仅为了辅助熟练的化学家而提供。所述起始原料不一定已经从提及的批料制备。
下述实施例中所述的许多化合物已经从立体化学纯的起始原料(例如95％对映体过量(ee))制备。
在指出的情况下，实施例中的化合物的立体化学在以下假设上指定：贯穿任意随后的反应条件，维持在起始原料的拆分立体中心处的绝对构型。
分离为单一非对映异构体(其在通式(I)或(I’)中的立体中心(2)处的绝对构型未确定)的化合物在下文中被称作单一非对映异构体，在它们的化学名称中不提及未知立体中心的绝对构型。
手性分离方案
通过使用Gilson Trilution制备型HPLC系统(322泵，155UV/VIS，GX281液体处理器和级分收集器)的手性高效液相色谱法(HPLC)或通过使用Waters Thar Prep100制备型SFC系统(P200 CO2泵，2545调节泵，2998紫外/可见光检测器，具有堆叠的注射模块的2767液体处理器)的超临界流体色谱法(SFC)，实现化合物的非对映异构分离。Waters 2767液体处理器充当自动取样器和级分收集器。
用于化合物的制备型纯化的柱是Diacel Chiralpak IA/IB/IC、Phenomenex Lux Cellulose-4、YMC Amylose-C或YMC Cellulose-C(5μm 250×20-21.2mm ID)。
在未调节的条件或碱性条件下基于甲醇、乙醇或异丙醇溶剂系统选择适当等度方法。
使用的标准SFC方法是调节剂、CO2、100mL/min、120巴背压、40℃柱温度。使用的标准HPLC方法是调节剂、庚烷、5mL/min和室温。
在碱性条件下使用的调节剂是二乙胺(0.1％V/V)。在酸性条件下使用的调节剂是甲酸(0.1％V/V)或三氟乙酸(0.1％V/V)。
通过在210-400nm监测并且在阈值采集值(通常260nm)触发，用Waters Fractionlynx软件控制SFC纯化。通过SFC(具有Waters SQD的Waters/Thar SFC系统)分析采集的级分。将含有期望产物的级分通过真空离心进行浓缩。
由Gilson Trilution软件控制HPLC纯化，所述软件监测2个波长并且在阈值采集值(通常260nm)触发。通过HPLC(Agilent 1200系列HPLC系统)分析采集的级分。将含有期望产物的级分通过真空离心进行浓缩。
中间体1
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-甲酰基-噻吩-2-甲酸酯
向5-甲酰基-2-噻吩甲酸(400mg,2.56mmol)在二氯甲烷(20mL)中的搅拌溶液中加入(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙醇(在共同未决的国际申请号PCT/EP2013/075520中描述的化合物I-1/A)(881mg,2.56mmol)，随后加入4-(二甲基氨基)-吡啶(156mg,1.28mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(983mg,5.12mmol)。将得到的混合物在室温搅拌18h。将反应物在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。将有机层用盐水洗涤，穿过疏水玻璃料并在真空中除去溶剂。将粗制物质通过硅胶柱色谱法纯化，用0-100％的EtOAc在DCM中的溶液洗脱，得到作为黄色油的标题化合物(488mg,39％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.97(s,1H),8.15(s,2H),7.81(d,J＝3.6Hz,1H),7.72(d,J＝3.6Hz,1H),7.03-6.99(m,2H),6.87(d,J＝8.7Hz,1H),6.26(dd,J＝4.4,10.0Hz,1H),3.91(s,3H),3.88(s,3H),3.72(dd,J＝10.0,14.0Hz,1H),3.33(dd,J＝4.4,14.0Hz,1H)。
LCMS(方法2):[MH+]＝482在3.38min。
通过与中间体1类似的方法合成以下中间体：
中间体3
2-(苄氧基羰基氨基)-2-苯基-丙酸
在0℃向2-氨基-2-苯基丙酸(1.65g,10mmol)在THF和水的混合物(1:1,180mL)中的溶液中同时加入氯甲酸苄酯(1.42mL,10mmol)和NaOH(1N,10mL,10mmol)。将混合物在0℃搅拌1小时。除去冰浴，并将反应混合物在室温搅拌16小时。在真空中除去溶剂，并将水层用10％氢氧化钠水溶液碱化至pH≈13。将水相用EtOAc(2×50mL)反萃取。然后将水相用6N HCl酸化至pH≈3-2。加入EtOAc(200mL)，并将反应混合物在室温搅拌16小时。分离各层，并将水相用EtOAc(2×50mL)重萃取。将合并的有机级分经MgSO4干燥、过滤并在真空中除去溶剂以得到作为澄清油的标题化合物(1.34g,48％)。该油不经进一步纯化地用于下一步。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.46(d,J＝7.4Hz,2H),7.37-7.25(m,8H),6.86-6.54(m,1H),6.23-6.01(m,1H),)HH5.14-4.99(m,2H),2.02(s,3H)。)。
LCMS(方法1):[MH+]＝300在2.68min。
中间体4：
[(3R)-奎宁环-3-基]2-氨基-2-苯基-丙酸酯
将2-(苄氧基羰基氨基)-2-苯基-丙酸(1.34g,4.8mmol)和N,N′-二环己基碳二亚胺(1.2g,4.8mmol)在无水THF(24mL)中的溶液在室温搅拌1小时。随后加入1-羟基苯并三唑水合物(777mg,5.8mmol)和(R)-奎宁环-3-醇(1.03g,8.11mmol)，并将得到的浆料在室温搅拌3天。该时间以后，将反应混合物穿过垫过滤并在真空中除去溶剂。将残余物在EtOAc(100mL)和饱和Na2CO3水溶液(2×50mL)之间分配。将水性级分用EtOAc(2×50mL)反萃取。将合并的有机级分用盐水(30mL)洗涤，经MgSO4干燥、过滤并在真空中除去溶剂。将得到的固体残余物(844mg)不经进一步纯化地用于下一步。将该残余物溶解于EtOAc(15mL)中，并加入甲酸铵(750mg,11.91mmol)和10％Pd/C(550mg)。将混合物加热至60℃保持16小时。将浆料冷却至室温和穿过垫过滤以后，将固体用EtOAc(150mL)洗涤。
在真空中除去溶剂以得到作为2种非对映异构体的混合物的标题化合物(606mg，经两步为46％收率)。将白色固体不经进一步纯化地用于下一步。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.51-7.47(m,2H),7.37-7.31(m,2H),7.30-7.21(m,2H),7.19-7.10(m,1H),4.81-4.76(m,1H),3.24-3.10(m,1H),2.79-2.61*(m,4H),(m,4H),2.30-2.18(m,1H),2.02-1.96*(m,1H),(m,1H),(s,3H),1.72*(s,3H),1.70-1.58(m,1H),1.58-1.42(m,1H),1.42-1.20(m,1H),1.18-1.01(m,1H),和*表示不同的异构体(任意指定)。
LCMS(方法2):[MH+]＝275在2.70min。
中间体5：
[(3R)-奎宁环-3-基]1-(叔丁氧基羰基氨基)茚满-1-甲酸酯
将1-(叔丁氧基羰基氨基)茚满-1-甲酸(1.0g,3.6mmol)和N,N′-二环己基碳二亚胺(1.1g,4.3mmol)在THF(24mL)中的溶液在室温搅拌1小时。随后加入1-羟基苯并三唑水合物(577mg,4.3mmol)和(R)-奎宁环-3-醇(914mg,7.2mmol)，并将得到的浆料在室温搅拌3天。该时间以后，将反应混合物穿过垫过滤并在真空中除去溶剂。将残余物在EtOAc(100mL)和饱和Na2CO3水溶液(2×50mL)之间分配，并将得到的水性级分用EtOAc(2×50mL)重萃取。将合并的有机级分用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空中除去溶剂以得到白色泡沫(1.18g,85％收率)，将其不经进一步纯化地用于下一步。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.36-7.25(m,2H),7.25-7.18(m,2H),5.47-5.40(m,1H),4.79-4.74(m,1H),3.20-3.05(m,4H),2.81-2.63(m,4H),(d,J＝14.9Hz,1H),2.47-2.39*(m,1H),(m,1H),1.94-1.89*(m,1H),(m,1H),1.70-1.58(m,1H),1.55-1.46(m,2H),1.43(bs,9H),1.17-0.99*(m,1H),和*表示不同的异构体(任意指定)。LCMS(方法2):[MH+]＝287在3.08min。
通过类似的方法合成以下中间体：
中间体16
(1-甲基-4-哌啶基)-2-氨基-2-苯基-乙酸酯二盐酸盐
将(1-甲基-4-哌啶基)2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-苯基乙酸酯(2.60g,7.47mmol)在4N的HCl在二烷中的溶液(9.34mL,37.3mmol)中的溶液在室温搅拌18小时。通过在减压下蒸发除去溶剂，并与乙醚一起共蒸发，得到作为黄色胶质的标题化合物(2.80g，定量收率)。
LCMS(方法2):[MH+]＝249在1.93min。
通过类似的方法合成以下中间体：
中间体6
2-(叔丁基亚磺酰基氨基)-2-苯基-丙酸异丙酯
将2-叔丁基亚磺酰基亚氨基-2-苯基-乙酸异丙酯(0.71g,2.40mmol)在无水DCM(15mL)中的溶液在N2下搅拌并冷却至-78℃。将3.0M的甲基溴化镁在乙醚中的溶液(1.2mL,3.60mmol)历时10分钟逐滴加入，然后在-78℃搅拌1小时。将混合物通过逐滴加入饱和NaHCO3溶液(6mL)、随后加入水(10mL)进行猝灭，并用DCM(2x30mL)萃取。将有机萃取物合并，并用盐水(20mL)洗涤和穿过分相器过滤。在真空中除去溶剂，得到作为可流动的黄色油的标题化合物(0.68g,91％)。
LCMS(方法2):[MH+]＝312在2.87min。
通过类似的方法合成以下中间体：
中间体8
2-(叔丁基亚磺酰基氨基)-2-苯基-丙酸
将2-(叔丁基亚磺酰基氨基)-2-苯基-丙酸异丙酯(1.06g,3.41mmol)和NaOH水溶液(2M,5.1mL,10.2mmol)在甲醇(5mL)中的溶液在50℃加热3小时。冷却至室温以后，将混合物用EtOAc(30mL)稀释，并用水(2×20mL)萃取。将水相用1M HCl酸化至pH 5/6，并在真空中除去溶剂，得到作为浅棕色固体的标题化合物(0.54g)。将其不经进一步纯化地用于下一步。LCMS(方法2):[MH+]＝270在2.05和2.18min。
通过类似的方法合成以下中间体：
中间体10
(1-甲基-4-哌啶基)2-(叔丁基亚磺酰基氨基)-2-苯基-丙酸酯
将2-(叔丁基亚磺酰基氨基)-2-苯基-丙酸(0.27g,1.0mmol)、1-甲基哌啶-4-醇(0.23g,2.0mmol)、N,N′-二环己基碳二亚胺(0.41g,2.0mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(0.27g,2.0mmol)在THF(25mL)中的混合物在室温搅拌42小时。将混合物穿过床过滤，并在真空中除去溶剂。将残余物在EtOAc(25mL)和2M Na2CO3水溶液(2×50mL)之间分配，将有机相用盐水(20mL)洗涤，分离并穿过分相器过滤。在真空中除去溶剂以得到棕色固体(0.23g,62％收率)，将其不经进一步纯化地用于下一步。
LCMS(方法2):[MH+]＝367在2.67min。
通过类似的方法合成以下中间体：
实施例1
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-甲基-2-氧代-1-苯基-2-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯甲酸盐
向(R)-奎宁环-3-基2-氨基-2-苯基丙酸酯(160mg,0.58mmol)在CH3CN(5mL)中的悬浮液中加入[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-甲酰基噻吩-2-甲酸酯(234mg,0.49mmol)，随后加入乙酸(0.07mL,1.0mmol)和烘干的碎分子筛(200mg)。将得到的浆料在室温搅拌2天。一次性加入NaBH(OAc)3(513mg,2.23mmol)，并将反应混合物在室温搅拌另外3.5小时。将反应混合物在垫上过滤，并将固体用EtOAc(100mL)洗涤。然后将滤液在真空中浓缩，并将残余物通过制备型HPLC进行纯化，其中使用甲酸作为色谱溶剂的酸性调节剂，得到作为淡黄色固体的标题化合物(非对映异构体的1:1混合物)(128mg,35％收率)。
1H NMR(400MHz,CD3CN):δ8.27(s,1H),8.19(s,2H),7.69(dd,J＝3.8,1.8Hz,1H),7.59-7.54(m,2H),7.42(t,J＝7.5Hz,2H),7.38-7.30(m,1H),7.08-7.02(m,2H),6.98-6.93(m,2H),6.18(dd,J＝9.6,4.5Hz,1H),4.98-4.90(m,1H),3.94-3.86(m,2H),3.84(m,3H),3.84-3.79(m,4H),3.68(dd,J＝14.2,9.6Hz,1H),3.35(dd,J＝13.9,4.8Hz,3H),2.90-2.79(m,3H),2.80-2.60(m,2H),2.09-2.00(m,1H),1.86-1.70(m,2H),(s,3H),1.70*(s,3H),1.82-1.48(m,2H),1.55-1.33(m,1H),和*表示不同的异构体(任意指定)。LCMS(方法1):[MH+]＝740在2.67min。
通过相同方法合成以下化合物作为非对映异构体的混合物：
实施例3
[(3R)-奎宁环-3-基]1-[[4-[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙氧基]羰基苯基]甲基氨基]茚满-1-甲酸酯
在0℃向[(3R)-奎宁环-3-基]1-(叔丁氧基羰基氨基)茚满-1-甲酸酯(190mg,0.49mmol)在EtOAc(5mL)中的溶液中加入氯化氢在二烷中的溶液(4N,5mL,20mmol)。将得到的混合物在室温搅拌18小时。在真空中除去溶剂，并将粗残余物在EtOH(8mL)中稀释。加入[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]4-甲酰基苯甲酸酯(113mg,0.33mmol)、Et3N(0.19mL,1.33mmol)和乙酸(0.03mL,0.5mmol)，并将混合物在室温搅拌1小时。一次性加入NaBH3CN(42mg,0.66mmol)，并继续搅拌18小时。除去溶剂，并将残余物在EtOAc(20mL)和水(20mL)之间分配，并将水性级分用EtOAc(2×20mL)反萃取。将合并的有机级分用0.2N HCl(2×20mL)洗涤。将合并的水相用NaCl饱和，并用CHCl3(4×50mL)反萃取。将合并的有机相穿过疏水玻璃料并在真空中除去溶剂。然后将残余物通过制备型HPLC进行纯化以得到作为白色固体的标题化合物(149mg,经两步为61％)。
1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.56(s,2H),7.91(d,J＝7.8Hz,2H),7.50-7.43(m,3H),7.31-7.20(m,3H),7.06-6.99(m,2H),6.97(d,J＝8.3Hz,1H),6.21(dd,J＝4.2,9.7Hz,1H),4.70-4.64(m,1H),3.78(s,3H),3.75(s,3H),3.73-3.70(m,2H),3.62(dd,J＝9.7,14.1Hz,1H),3.32-3.22(m,2H),3.06-2.96(m,3H),2.68-2.55(m,4H),2.40(d,J＝14.6Hz,1H),2.31(d,J＝16.6Hz,1H),2.15(td,J＝8.5,13.0Hz,1H),(m,1H),1.81-1.76*(m,1H),1.59-1.50(m,1H),1.45-1.40(m,1H),1.27-1.14(m,1H)和*表示不同的异构体(任意指定)。LCMS(方法1):[MH+]＝746在2.46min。
通过相同方法合成以下化合物作为非对映异构体的混合物：
实施例5
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-甲基-2-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]-2-氧代-1-苯基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯
将(1-甲基-4-哌啶基)2-(叔丁基亚磺酰基氨基)-2-苯基-丙酸酯(0.30g,0.84mmol)在4N的氯化氢在二烷中的溶液(1.1mL,4.18mmol)中的溶液在室温搅拌2小时。在真空中除去溶剂，并将残余物与[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-甲酰基噻吩-2-甲酸酯(0.27g,0.56mmol)在DCM(20mL)中的溶液混合。加入Et3N(0.23mL,1.68mmol)，随后加入乙酸(0.048mL,0.84mmol)，并将混合物在室温搅拌24小时。加入NaBH(OAc)3(0.70g,3.36mmol)，并将反应混合物在室温搅拌另外5天。将混合物用DCM(10mL)稀释，用饱和NaHCO3溶液(2×15mL)和饱和NaCl(15mL)洗涤，穿过分相器过滤并在真空中除去溶剂。通过制备型HPLC进行纯化，得到作为淡黄色固体的标题化合物(0.16g,39％)。
1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.63(s,2H),8.62(s,2H),8.22(s,2H),7.73(d,J＝3.8Hz,1H),7.54-7.51(m,2H),7.43(dd,J＝7.6,7.6Hz,2H),7.34(dd,J＝7.2,7.2Hz,1H),7.09-7.03(m,4H),6.19(dd,J＝4.3,9.9Hz,1H),4.84(dd,J＝3.4,3.4Hz,1H),3.94-3.86(m,2H),3.84(s,3H),3.81(s,3H),3.68-3.60(m,1H),3.36(d,J＝18.4Hz,1H),2.49-2.36(m,2H),2.29(d,J＝47.3Hz,2H),2.19(s,3H),2.13(s,1H),1.81(d,J＝5.1Hz,2H),1.64(s,3H),1.62-1.57(m,2H)。
LCMS(方法1):[MH+]＝728在2.59min。
通过相同方法合成以下化合物作为非对映异构体的混合物：
实施例18
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基羰基]茚满-1-基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯
将(1-甲基-4-哌啶基)-1-(叔丁氧基羰基氨基)茚满-1-甲酸酯(0.25g,0.67mmol)在4N的HCl在二烷中的溶液(1.0mL,4.0mmol)中的溶液在室温搅拌18小时。在真空中除去溶剂以得到白色固体。将前面得到的固体溶解在乙腈(5mL)中，并加入[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-甲酰基噻吩-2-甲酸酯(322mg,0.67mmol)，随后加入乙酸(90μL,1.34mmol)。将得到的混合物在室温搅拌18小时。在真空中除去溶剂，并将残余物与甲苯共沸。将残余物溶解在乙腈(5mL)中，并加入三乙酰氧基硼氢化钠(457mg,2.07mmol)。将得到的混合物在室温搅拌18小时。加入另外的三乙酰氧基硼氢化钠(457mg,2.07mmol)，并在室温维持搅拌4小时。在真空中除去溶剂，并将残余物溶解于水(30mL)和乙酸乙酯(100mL)中。分离各层并将水相用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将合并的有机相穿过疏水玻璃料并在真空中除去溶剂。将粗制物质通过制备型HPLC进行纯化，得到作为白色固体的标题化合物(130mg,26％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):(s,2H),(s,2H),7.63(d,J＝3.8Hz,1H),7.30-7.27(m,3H),7.24-7.18(m,1H),7.00-6.95(m,2H),6.88(d,J＝3.8Hz,1H),6.84(d,J＝8.1Hz,1H),6.21(dd,J＝4.4,9.5Hz,1H),4.85-4.81(m,1H),(s,3H),(s,3H),3.87(s,3H),3.88-3.81(m,2H),3.65(dd,J＝10.0,13.8Hz,1H),3.30(dd,J＝4.5,13.9Hz,1H),3.11(dd,J＝7.2,7.2Hz,2H),2.76-2.68(m,1H),2.50-2.42(m,1H),3.35-2.14(m,3H),2.22(s,3H),1.92-1.85(m,1H),1.83-1.77(m,1H),1.75-1.68(m,1H),1.56-1.52(m,2H)。NH未看到，和*表示不同的异构体(任意指定)。LCMS(方法1):[MH+]＝740在2.59min。
实施例19
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]-5-[[[1-(羟基甲基)-2-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]-2-氧代-1-苯基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯
步骤1：(1-甲基-4-哌啶基)2-亚苄基氨基-2-苯基-乙酸酯的制备
向(1-甲基-4-哌啶基)2-氨基-2-苯基-乙酸酯二盐酸盐(650mg,2.02mmol)在无水DCM(10mL)中的溶液中加入Et3N(0.57mL,4.05mmol)，随后加入MgSO4。在室温搅拌1小时以后，加入苯甲醛(0.21mL,2.02mmol)，并将混合物在室温搅拌36小时。将混合物过滤，将固体用DCM洗涤，将水(50mL)加入滤液中，并将两相混合物穿过分相器过滤和在真空中除去溶剂，得到作为黄色油的标题化合物(586mg,86％)。LCMS(方法2):[MH+]＝337在3.25min。
步骤2：(1-甲基-4-哌啶基)2-氨基-3-羟基-2-苯基-丙酸酯二盐酸盐的制备
向(1-甲基-4-哌啶基)2-亚苄基氨基-2-苯基-乙酸酯(0.28g,0.83mmol)和低聚甲醛(50mg,1.67mmol)在无水二烷(10mL)中的混合物中加入DBU(0.15mL,1,0mmol)，并将混合物在室温搅拌3小时。通过蒸发除去溶剂，将残余物溶解在EtOAc(20mL)中，并用水(2×10mL)洗涤。将水相合并，用EtOAc(10mL)反萃取。将有机萃取物合并，穿过分相器玻璃料过滤并在减压下蒸发至干燥以得到黄色胶质。将得到的胶质用1N HCl(1mL)在THF(1mL)中的溶液处理并在室温搅拌18小时。在真空中除去溶剂，将残余物溶解于1N HCl(3mL)中，并用EtOAc(2×5mL)洗涤，将合并的有机相用1N HCl(3mL)反萃取。将合并的水性提取物在减压下蒸发至干燥，与CH3CN共蒸发得到作为灰白色固体的标题化合物(155mg,53％)。LCMS(方法2):[MH+]＝279在1.84min。
步骤3：[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-(羟基甲基)-2-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]-2-氧代-1-苯基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯的制备
在室温向[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-甲酰基噻吩-2-甲酸酯(0.21g,0.43mmol)和(1-甲基-4-哌啶基)2-氨基-3-羟基-2-苯基-丙酸酯二盐酸盐(0.15g,0.43mmol)在DCM(5mL)中的搅拌混合物中加入Et3N(0.12mL,0.85mmol)，随后加入AcOH(24μL,0.43mmol)。将得到的混合物在室温搅拌20小时。加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.27g,1.28mmol)并将混合物在室温搅拌24小时。加入另外的三乙酰氧基硼氢化钠(0.27g,1.28mmol)和AcOH(24μL,0.43mmol)，并将混合物在室温搅拌72小时。将反应混合物用DCM(10mL)稀释，并用饱和NaHCO3溶液(2×20mL)、盐水(10mL)洗涤，将有机相穿过分相器玻璃料过滤并在真空中除去溶剂。通过制备型HPLC进行纯化，得到作为灰白色固体的标题化合物(24.9mg,7.7％)。
1H NMR(400MHz,CD3CN):δ8.20(s,2H),7.68(d,J＝3.8Hz,1H),7.52-7.48(m,2H),7.40(dd,J＝7.3,7.3Hz,2H),7.34(dd,J＝7.2,7.2Hz,1H),7.08-7.02(m,2H),6.97-6.92(m,2H),6.18(dd,J＝4.7,9.7Hz,1H),4.91-4.87(m,1H),4.17(d,J＝11.1Hz,1H),3.95-3.94(m,2H),3.84(s,3H),3.82(s,3H),3.80-3.72(m,1H),3.68(dd,J＝9.6,14.1Hz,1H),3.39-3.32(m,1H),3.25-3.13(m,2H),2.51-2.31(m,2H),2.40-2.20(m,2H),2.15(s,3H),1.86-1.81(m,2H),1.69-1.60(m,2H)。
LCMS(方法1):[MH+]＝744在2.7min。
实施例20
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-(羟基甲基)-2-氧代-1-苯基-2-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基-乙基]-甲基-氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯
在室温向[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-甲酰基噻吩-2-甲酸酯(480mg,1.0mmol)和[(3R)-奎宁环-3-基]2-氨基-2-苯基-乙酸酯二盐酸盐(480mg,1.4mmol)在三氟乙醇(10mL)中的搅拌混合物中加入Et3N(0.4mL,2.9mmol)，随后加入AcOH(115μL,2.0mmol)，并将混合物在室温搅拌72小时。在真空中除去溶剂并将残余物与甲苯(3×10mL)共沸以得到黄色胶质。将其悬浮于二烷(10mL)中并加入低聚甲醛(300mg,10.0mmol)。将得到的悬浮液在室温搅拌并加入DBU(0.18mL,1.2mmol)，并将混合物在室温搅拌3小时。在真空中除去溶剂。将得到的残余物悬浮于无水MeCN(20mL)中并加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.05g,5.0mmol)。将得到的混合物在室温搅拌18小时。在真空中除去溶剂并将残余物在EtOAc(35mL)和1N HCl(30mL)之间分配。将水相再次用EtOAc(35mL)洗涤，然后用固体NaHCO3碱化，并用EtOAc(2×25mL)萃取。将合并的有机萃取物穿过分相器玻璃料过滤并在真空中除去溶剂。通过制备型HPLC进行纯化，得到作为灰白色固体的标题化合物(73mg,9.5％)。
1H NMR(400MHz,CD3CN):(s,2H),(s,2H),(d,J＝1.2Hz,1H),(d,J＝1.4Hz,1H),7.63-7.58(m,2H),7.45-7.39(m,2H),7.37-7.33(m,1H),7.10-7.04(m,2H),6.99-6.95(m,2H),6.19(ddd,J＝1.8,4.4,9.7Hz,1H),4.98-4.91(m,1H),4.29-4.16(m,2H),4.08-3.93(m,2H),3.86(s,3H),3.83(s,3H),3.70(dd,J＝9.7,14.0Hz,1H),3.40-3.33(m,1H),3.24-3.16(m,1H),3.10-2.89(m,1H),2.78-2.60(m,5H),(s,3H),(s,3H),2.14-2.11(m,1H),1.85-1.53(m,3H),1.42-1.29(m,1H)。和*表示不同的异构体(任意指定)。LCMS(方法4):[MH+]＝770在3.4min。
实施例21
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]-5-[[[1-(羟基甲基)-2-氧代-1-苯基-2-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯
在室温向[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-甲酰基噻吩-2-甲酸酯(480mg,1.0mmol)和[(3R)-奎宁环-3-基]2-氨基-2-苯基-乙酸酯二盐酸盐(480mg,1.4mmol)在三氟乙醇(10mL)中的搅拌混合物中加入Et3N(0.4mL,2.9mmol)，随后加入AcOH(115μL,2.0mmol)，并将混合物在室温搅拌72小时。在真空中除去溶剂并将残余物与甲苯(3×10mL)共沸以得到黄色胶质。将其悬浮于二烷(10mL)中并加入低聚甲醛(300mg,10.0mmol)。将得到的悬浮液在室温搅拌并加入DBU(0.18mL,1.2mmol)，并将混合物在室温搅拌3小时。在真空中除去溶剂并将残余物在EtOAc(25mL)和水(20mL)之间分配。将水相用EtOAc(3×20mL)和CHCl3(2×25mL)进一步萃取。将合并的有机萃取物穿过分相器玻璃料过滤并在真空中除去溶剂。将残余物溶解在无水CH3CN(10mL)中，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.63g,3.0mmol)，并将混合物在室温搅拌过夜。在真空中除去溶剂，将残余物在EtOAc(40mL)和1N HCl(35mL)之间分配。将水相用EtOAc(35mL)进一步洗涤，然后用固体NaHCO3碱化，并用EtOAc(20mL)和CHCl3(3×30mL)萃取。将合并的有机萃取物穿过分相器玻璃料过滤并在真空中除去溶剂。通过制备型HPLC进行纯化，得到作为浅棕色固体的标题化合物(150mg,20％)。
1H NMR(400MHz,CD3CN):(s,2H),(s,2H),(d,J＝2.0Hz,1H),(d,J＝2.0Hz,1H),7.55-7.50(m,2H),7.44-7.34(m,3H),7.09-7.02(m,2H),6.98-6.92(m,2H),6.18(dd,J＝4.5,9.9Hz,1H),4.88-4.83(m,1H),4.27-4.21(m,1H),3.99-3.90(m,2H),3.85(s,3H),3.83(s,3H),3.77(d,J＝13.9Hz,1H),3.69(dd,J＝10.9,14.7Hz,1H),3.39-3.32(m,1H),3.21-3.09(m,1H),2.75-2.45(m,5H),1.95-1.87(m,1H),1.71-1.63(m,2H),1.58-1.44(m,1H),1.38-1.28(m,1H)。和*表示不同的异构体(任意指定)OH和NH未看到。LCMS(方法4):[MH+]＝756在3.31min。
实施例22
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-(甲氧基甲基)-2-氧代-1-苯基-2-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯
步骤1：[(3R)-奎宁环-3-基]2-氨基-3-甲氧基-2-苯基-丙酸酯二盐酸盐的制备
将二碳酸二叔丁酯(1.12g,5.12mmol)加入2-氨基-3-甲氧基-2-苯基-丙酸(0.50g,2.56mmol)和2N氢氧化钠(3.85mL,7.70mmol)在2:1二烷:水(10mL)中的溶液中。将混合物搅拌18小时，然后在减压下除去溶剂。将残余物在冰/水浴中冷却，然后小心地加入1M KHSO4至pH 2。将混合物用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将合并的有机萃取物经MgSO4干燥，过滤，然后在减压下浓缩。将得到的残余物溶解在THF(15mL)和3-(R)-奎宁醇(0.36g,2.81mmol)中，加入羟基苯并三唑(0.38g,2.81mmol)和二环己基碳二亚胺(0.58g,2.81mmol)。将混合物搅拌8天，然后穿过过滤。将滤液在减压下浓缩，然后在乙酸乙酯(20mL)和饱和NaHCO3水溶液(20mL)之间分配。将合并的有机萃取物用水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，然后在减压下浓缩以得到灰白色泡沫，将其悬浮于4N的HCl在二烷中的溶液(10mL)中。将混合物搅拌20小时，然后在减压下浓缩以58％收率得到作为灰白色固体的粗产物(0.56g)。
LCMS(方法3):[MH+]＝304在1.02min。
步骤2：[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-(甲氧基甲基)-2-氧代-1-苯基-2-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯的制备
在室温将[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-甲酰基噻吩-2-甲酸酯(282mg,0.59mmol)和吡啶(0.066mL,0.82mmol)加入[(3R)-奎宁环-3-基]2-氨基-3-甲氧基-2-苯基-丙酸酯二盐酸盐(0.31g,0.82mmol)在乙醇(10mL)中的溶液中。将悬浮液加热至60℃，然后将得到的溶液搅拌10分钟。加入氰基硼氢化钠(0.052g,0.82mmol)，并将混合物搅拌4小时，然后在减压下浓缩。将残余物在乙酸乙酯(5mL)和2N盐酸(5mL)之间分配。将水相用乙酸乙酯(5mL)萃取，然后将合并的有机层用2N盐酸(5mL)洗涤。将合并的水层用饱和NaHCO3水溶液碱化，然后将混合物用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将合并的有机萃取物经MgSO4干燥，过滤，然后在减压下浓缩以得到粗产物，将其通过制备型HPLC进行纯化。这产生2个含有甲酸的不同纯度的级分。将2个级分分别用饱和NaHCO3水溶液碱化，然后用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将合并的有机萃取物用2N盐酸(5mL)洗涤。将合并的水层用饱和NaHCO3水溶液碱化，然后用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。确定2个级分仅含有期望产物，所以进行组合。将有机物经MgSO4干燥，过滤，然后在减压下浓缩以得到作为白色固体的期望产物(28mg,4％)。
1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.57(s,2H),7.67(dd,J＝3.2,3.2Hz,1H),7.52(dd,J＝8.0,8.0Hz,2H),7.44-7.33(m,3H),7.07-6.96(m,4H),6.19-6.13(m,1H),4.83-4.76(m,1H),4.03-3.97(m,1H),3.90(dt,J＝4.8,12.2Hz,2H),3.81(s,3H),3.78(s,3H),3.65-3.58(m,1H),(s,3H),(s,3H),3.14-3.05(m,1H),2.73-2.58(m,3H),(m,1H),(m,1H),(m,1H),1.63-1.58(m,2H),1.54-1.48(m,1H),1.35-1.19(m,2H)。和*表示不同的异构体(任意指定)。NH未看到。LCMS(方法3):[MH+]＝770在2.82min。
实施例7和实施例8
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-甲基-2-氧代-1-苯基-2-[(3R)-奎宁环-3-基]氧基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯的单一非对映异构体
(实施例7，非对映异构体1和实施例8，非对映异构体2)
通过手性制备型SFC纯化实施例1的1:1非对映异构体的混合物，得到单一非对映异构体。没有确定这些的绝对构型。
得到作为白色固体的标题化合物(实施例7，单一非对映异构体1)(15mg,31％)。
1H NMR(400MHz,CD3CN):δ8.20(s,2H),7.68(d,J＝3.8Hz,1H),7.59-7.52(m,2H),7.41(t,J＝7.6Hz,2H),7.33(t,J＝7.3Hz,1H),7.07(d,J＝2.0Hz,1H),7.04(dd,J＝8.2,2.1Hz,1H),6.97-6.92(m,2H),6.18(dd,J＝9.6,4.5Hz,1H),4.87-4.82(m,1H),3.88(s,2H),3.84(s,3H),3.82(s,3H),3.68(dd,J＝14.1,9.7Hz,1H),3.35(dd,J＝14.1,4.6Hz,1H),3.24-3.13(m,1H),3.05-2.85(m,1H),2.82-2.64(m,4H),2.60(d,J＝13.7Hz,1H),1.93-1.89(m,1H),1.71(s,3H),1.69-1.62(m,1H),1.70-1.44(m,2H),1.38-1.27(m,1H)。LCMS(方法1):[MH+]＝740在2.63min。
得到作为白色固体的标题化合物(实施例8，单一非对映异构体2)(14mg,30％)。
1H NMR(400MHz,CD3CN):δ8.20(s,2H),7.69(d,J＝3.8Hz,1H),7.59-7.54(m,2H),7.44-7.39(m,2H),7.37-7.30(m,1H),7.08-7.02(m,2H),7.00-6.94(m,2H),6.18(dd,J＝9.7,4.5Hz,1H),5.00-4.94(m,1H),3.91(dd,J＝20.8,15.3Hz,2H),3.84(s,3H),3.82(s,3H),3.73-3.63(m,1H),3.34(dd,J＝13.8,4.0Hz,1H),3.38-3.27(m,1H),3.05-2.80(m,4H),2.80-2.67(m,2H),2.12-2.07(m,1H),1.86-1.74(m,1H),1.84-1.55(m,2H),1.69(s,3H),1.53-1.42(m,1H)。LCMS(方法2):[MH+]＝740在3.94min。
根据在实施例7和8中描述的操作，通过手性制备型SFC或手性制备型HPLC得到作为单一非对映异构体的在下表中报告的化合物。
(续)
(续)
(续)
(续)
(续)
(续)
(续)
(续)
(续)
实施例16
[(1S)-2-(3,5-二氯-1-氧桥-吡啶-1--4-基)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]5-[[[1-甲基-2-[(3R)-1-氧桥奎宁环-1--3-基]氧基-2-氧代-1-苯基-乙基]氨基]甲基]噻吩-2-甲酸酯
在实施例7和实施例8的SFC纯化过程中，得到作为副产物的标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3CN):δ8.20(s,2H),7.68(d,J＝3.8Hz,1H),7.58-7.53(m,2H),7.44-7.39(m,2H),7.37-7.30(m,1H),7.07(d,J＝2.1Hz,1H),7.03(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),6.97-6.92(m,2H),6.18(dd,J＝9.6,4.5Hz,1H),5.15-5.09(m,1H),3.88(d,J＝7.5Hz,2H),3.83(s,3H),3.82(s,3H),3.67(dd,J＝14.3,10Hz,1H),3.69-3.61(m,1H),3.34(dd,J＝14.1,4.6Hz,1H),3.26-2.92(m,6H),2.14-2.09(m,1H),2.04-1.98(m,1H),1.89-1.84(m,1H),1.83-1.80(m,1H),1.80-1.75(m,1H),1.73(s,3H)。LCMS(方法2):[MH+]＝756在2.80min。
本发明化合物的药理学活性
PDE4抑制活性的体外测定
根据下文报道的方案之一可以确定本发明化合物的PDE4抑制活性的体外测定：
PDE4B2 HTRF测定：
使用得自Perkin Elmer的LANCE Ultra cAMP均匀时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)测定法，检测PDE4B2活性。所述测定法是基于铕(Eu)螯合物-标记的cAMP示踪剂与样品cAMP之间对用ULightTM染料标记的cAMP-特异性的单克隆抗体(mAb)上的结合位点的竞争。在384-孔低体积平板中以10μl的体积进行测定。将人重组PDE4B2(80pM)与3nM cAMP一起在含有1×HBSS、5mM HEPES、3mM MgCl2、0.1％BSA、pH 7.4(含有或不含试验化合物)的缓冲液中温育2h。通过添加存在于合并的停止/检测缓冲液中的500μM IBMX有效地停止酶反应，所述停止/检测缓冲液含有铕(Eu)螯合物-标记的cAMP示踪剂和用ULightTM染料标记的cAMP-特异性的单克隆抗体(mAb)。然后将样品进一步温育1h，然后用EnVision读数器在340nm激发以及665nm和615nm发射处读出平板。使用非线性的曲线拟合程序，从竞争曲线确定IC50值。
PDE4无细胞测定方案
在U937人单核细胞上清液细胞裂解物中测定PDE4活性。基本上如在Torphy TJ等人J.Pharmacol.Exp.Ther.1992；263:1195-1205中所述，培养、收获细胞和制备上清液级分。
在37℃、5％CO2下，在含有GlutaMAXTM-I培养基的RPMI 1640中培养U937细胞，所述GlutaMAXTM-I培养基补充了10％胎牛血清和100μg/mL Pen-strep(Gibco)。
将细胞收获，并通过在冷PBS中离心(150×g，8min)来洗涤2次。将洗涤过的细胞以20×106个细胞/mL的终浓度再悬浮于冷Krebs-Ringer-Henseleit缓冲液中，并超声处理。在15000×g离心20min以后，将上清液合并，分成等分试样，并在-80℃储存。
通过测定cAMP从温育混合物中的消失，确定细胞上清液中的PDE4活性。
试验化合物的浓度范围为10-12M至10-6M之间。通过酶热灭活(在100℃保持2.5分钟)来停止反应，并按照提供商的说明书使用得自PerkinElmer的‘LANCE cAMP Assay’确定残余的cAMP含量。
结果：表示为产生cAMP消失的50％抑制的试验化合物的摩尔浓度的平均值±标准差(IC50)。
假定在没有抑制剂存在下的cAMP消失为100％且在热灭活的样品中的cAMP消失为0％，计算PDE4活性的抑制百分比。
当在上面报道的方案之一中测试时，本发明的代表性化合物表现出低于100nM的IC50。
M3拮抗作用的体外测定
根据下文报道的方案之一可以确定本发明化合物的M3拮抗作用的体外测定：
M3受体放射性配体结合测定：
将得自Perkin Elmer的人M3受体膜(15μg/孔)与0.52nM东莨菪碱甲基氯(Scopolamine Methyl Chloride)[N-甲基-3H]与或不与试验化合物一起温育，或与饱和浓度的阿托品(5μM)一起温育，以测定非特异性结合。在96-孔聚丙烯平板中以250μl的体积进行测定。使用的测定缓冲液是50mM Tris-HCl,154mM NaCl(pH 7.4)。DMSO的最终测定浓度为0.5％(v/v)。将平板密封，在定轨摇床(慢速)上在室温温育2h。使用过滤器复合管(filter manifold)将膜收获在用0.5％聚乙烯亚胺(v/v)预处理过的96-孔单过滤器(unifilter)GF/C滤板上，用200μl测定缓冲液洗涤4次。将平板干燥，然后添加50μl microscint-0，然后在Trilux Microbeta闪烁计数器中读出。使用非线性的曲线拟合程序从竞争曲线确定IC50。用Cheng和Prusoff方程式从IC50值计算Ki值。
M3结合测定：
将表达人M3-受体的CHO-K1克隆细胞(Swissprot P20309)收获在不含Ca++/Mg++的磷酸盐缓冲盐水中，并且通过在1500rpm离心3min进行收集。将沉淀物再悬浮于冰冷的缓冲液A(15mM Tris-HCl pH 7.4,2mM MgCl2,0.3mM EDTA,1mM EGTA)中，并且用PBI politron(设定在5保持15s)均质化。通过在4℃在40000g 20min的2个连续离心步骤，收集粗膜级分，通过在缓冲液A中的洗涤步骤，进行分离。最后将得到的沉淀物再悬浮于缓冲液B(75mM Tris HCl pH 7.4,12.5mM MgCl2,0.3mM EDTA,1mM EGTA,250mM蔗糖)，并且将等分试样在-80℃储存。
在实验当天，将冷冻的膜再悬浮于缓冲液C(50mM Tris-HCl pH 7.4,2.5mM MgCl2,1mM EDTA)。将非选择性的毒蕈碱放射性配体[3H]-N-甲基东莨菪碱(Mol.Pharmacol.45:899-907)用于标记M3结合位点。在0.1-0.3nM的放射性配体浓度，在96孔平板中，一式两份地进行结合实验(10点浓度曲线)。在有冷N-甲基东莨菪碱(10μM)存在下测定非特异性结合。将样品(终体积0.75mL)在室温温育90min。通过穿过GF/B Unifilter平板快速过滤来终止反应，并使用Packard Filtermate Harvester用冷缓冲液C洗涤2次(0.75mL)。用微量培养板闪烁计数器TriCarb 2500(PerkinElmer)测量过滤器上的放射性。
当用上述报道的方案之一测定时，本发明的代表性化合物表现出低于100nM的IC50。
本发明的代表性化合物在PDE4无细胞和M3结合测定中均表现出低于100nM的IC50。