本发明涉及一种新的吡唑稠环类衍生物及其可药用的盐或含有其的药物组合物、及其制备方法。本发明还涉及所述类衍生物及其可药用的盐或含有其的药物组合物在制备治疗剂，特别是bruton酪氨酸激酶抑制剂，和在制备治疗和/或预防肿瘤与炎症等疾病的药物中的用途。
背景技术：
：bruton酪氨酸激酶(btk)是tec酪氨酸激酶家族中的重要一员，存在于浆细胞，包括b细胞、肥大细胞和巨噬细胞中，在b细胞受体(bcr)介导的信号通路中起了决定性的作用。当btk被上游的src家族激酶激活后，可以磷酸化下游的磷脂酶c(plc)，从而激活pi3和dag信号通路。这一信号通路可以促进细胞的增殖、粘附和存活，在b细胞淋巴瘤的发展过程中起重要的作用。btk抑制剂通过抑制btk的活性，可以抑制b淋巴瘤细胞的增殖，破坏瘤细胞的粘附，促进瘤细胞的凋亡，使btk在与b细胞有关的癌症中成为令人注目的药物靶点，尤其对b细胞淋巴瘤和白血病，比如非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkin'slymphoma，nhl)、慢性淋巴细胞白血病(chroniclymphocyticleukemia，cll)和抗复发性或难治性套细胞淋巴瘤(mantlecelllymphoma，mcl)等。目前市场上唯一的具有btk特异性抑制的药物是pharmacyclics/jnj的ibrutinib。ibrutinib是一种非可逆的小分子btk抑制剂，对治疗mcl、cll、wm有非常明显的疗效，而且安全。其它进入临床针对细胞淋巴瘤的btk抑制剂还有celgene公司的cc-292、acerta公司的acp-196、ono公司的ono-4059、beigene公司的bgb-3111等等。btk抑制剂除了可以抗b细胞淋巴瘤和白血病，还可以抑制b细胞自身抗体和细胞因子的产生。btk的突变会导致一种罕见的遗传疾病-性联无丙种球蛋白血症(xla)，因为在这种疾病中，btk的功能被抑制，从而导致了b细胞的产生或成熟受阻，循环抗体很少，容易出现严重甚至致命的感染。临床前的动物模型研究显示短少btk基因的小鼠可以抵抗胶原诱导的关节炎，而且临床结果也发现rituxan，一种清除b细胞的抗体药物，对治疗免疫性疾病有很好的效果。因此，btk抑制剂也可以用于治疗和自身免疫相关的疾病，比如类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis，ra)、系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus，sle)、过敏性疾病(例如食道炎、eosoniphilicesophagitis)等。当前市场上还没有用于免疫性疾病的btk特异抑制剂，但有几个正处于临床阶段，比如celgene公司的cc-292、hanmi的hm-71224、principia的prn-1008和pharmacyclics的一个化合物。由于btk在多个信号通路中所起的重要作用，btk抑制剂的开发吸引了众多生物制药公司的关注,目前已公开了一系列的btk抑制剂的专利申请，其中包括wo2007087068、wo2010126960、wo2011019780、wo2011090760、wo2012135801、wo2012158764、wo2013060098、wo2013081016、wo2013010869、wo2013113097、cn103113375、wo2014068527、wo2014125410、wo2014173289、wo2013118986、wo2015017502和wo2015048689等，但仍需要开发新的具有更好药效的化合物。经过不断努力，本发明设计具有通式(i)所示的结构的化合物，并发现具有此类结构 的化合物表现出优异的效果和作用。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种通式(i)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐：其中：a1、a2和a3各自独立地选自cr1或n；b1独立地选自c3-8环基、3-8元杂环基、芳基或杂芳基，其中所述环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个g1所取代；b2独立地选自h、c3-8环基、3-8元杂环基、芳基或杂芳基，其中所述环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个g2所取代；l1独立地选自-c0-2烷基-、-cr5r6-、-c1-2烷基(r5)(oh)-、-c(o)-、-cr5r6o-、-ocr5r6-、-scr5r6-、-cr5r6s-、-nr5-、-nr5c(o)-、-c(o)nr5-、-nr5conr6-、-cf2-、-o-、-s-、-s(o)m-、-nr5s(o)2-或-s(o)2nr5-；l2独立地选自-c0-4烷基-、-c(o)-、-o-、-nr7-、-nr7c(o)-或-nr7s(o)2-；x独立地选自c0-4烷基、c3-8环基、3-8元杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个g3所取代；y独立地选自-c(o)-、-nr8c(o)-、-s(o)m-或-nr8s(o)m-；r1独立地选自h、d、c0-4烷基、卤素或氰基；键为双键或三键；当键为双键，r2、r3和r4各自独立地选自h、d、氰基、卤素、烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个g4所取代；当键为三键，r3和r4不存在，r2独立地选自h、d、氰基、卤素、烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个g4所取代；其中r3和r2或r3和r4可与其连接的碳原子共同形成一可含有杂原子的环；r5、r6、r7和r8各自独立地选自h、d、c0-8烷基、c3-8环基、3-8元杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个g5所取代；g1、g2、g3、g4和g5各自独立地选自h、d、卤素、氰基、烷基、烯基、炔基、环基、杂环基、芳基、杂芳基、-or9、-oc(o)nr9r10、-c(o)or10、-c(o)nr9r10、-c(o)r9、-nr9r10、-nr9c(o)r10、-nr9c(o)nr10r11、-s(o)mr10或-nr9s(o)mr10，其中所述烷基、烯基、炔基、环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个选自d、卤素、氰基、c1-8烷基、c3-8环烷基、3-8元杂环基、-or12、-oc(o)nr12r13、-c(o)or12、-c(o)nr12r13、-c(o)r12、-nr12r13、-nr12c(o)r13、-nr12c(o)nr13r14、-s(o)mr12、-nr12s(o)mr13的取代基所取代；r9、r10、r11、r12、r13和r14各自独立地选自h、c1-6烷基、c1-c6杂烷基、c3-8环烷基、3-8元单环杂环基、单环杂芳基或单环芳基；且m为1或2。在本发明的一个实施方案中，一种通式(i)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐，其为通式(ii)所述的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐：其中：a2和a3各自独立地选自ch或n；b1独立地选自c3-8环基、3-8元杂环基、芳基或杂芳基，其中所述环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个g1所取代；b2独立地选自h、c3-8环基、3-8元杂环基、芳基或杂芳基，其中所述环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个g2所取代；l1独立地选自-c0-2烷基-、-cr5r6-、-c1-2烷基(r5)(oh)-、-c(o)-、-cr5r6o-、-ocr5r6-、-scr5r6-、-cr5r6s-、-nr5-、-nr5c(o)-、-c(o)nr5-、-nr5conr6-、-cf2-、-o-、-s-、-s(o)m-、-nr5s(o)2-或-s(o)2nr5-；l2独立地选自-c0-4烷基-、-c(o)-、-o-、-nr7-、-nr7c(o)-或-nr7s(o)2-；x独立地选自c0-4烷基、c3-8环基、3-8元杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个g3所取代；y独立地选自-c(o)-、-nr8c(o)-、-s(o)m-或-nr8s(o)m-；键为双键或三键；当键为双键，r2、r3和r4各自独立地选自h、d、氰基、卤素、烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个g4所取代；当键为三键，r3和r4不存在，r2独立地选自h、d、氰基、卤素、烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个g4所取代；其中r3和r2或r3和r4可与其连接的碳原子共同形成一可含有杂原子的环；r5、r6、r7和r8各自独立地选自h、d、c0-8烷基、c3-8环基、3-8元杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个g5所取代；g1、g2、g3、g4和g5各自独立地选自h、d、卤素、氰基、烷基、烯基、炔基、环基、杂环基、芳基、杂芳基、-or9、-oc(o)nr9r10、-c(o)or10、-c(o)nr9r10、-c(o)r9、-nr9r10、-nr9c(o)r10、-nr9c(o)nr10r11、-s(o)mr10或-nr9s(o)mr10，其中所述烷基、烯基、炔基、环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个选自d、卤素、氰基、c1-8烷基、c3-8环烷基、3-8元杂环基、-or12、-oc(o)nr12r13、-c(o)or12、-c(o)nr12r13、-c(o)r12、-nr12r13、-nr12c(o)r13、-nr12c(o)nr13r14、-s(o)mr12、-nr12s(o)mr13的取代基所取代；r9、r10、r11、r12、r13和r14各自独立地选自h、c1-6烷基、c1-c6杂烷基、c3-8环烷基、3-8元单环杂环基、单环杂芳基或单环芳基；且m为1或2。在本发明的另一个实施方案中，一种通式(i)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐，其为通式(iii)所述的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐：其中：b1为苯环或六元杂芳环；a2、a3、b2、l1、l2、x、y、键r2、r3、r4和g1的定义如权利要求1-2中所述。在本发明的另一个实施方案中，一种通式(i)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐，其为通式(iv)所述的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐：其中：z1和z2各自独立地选自c(ra)或n；ra为h或烷基；n和p各自独立地选自0、1或2；a2、a3、b1、b2、l1、l2、y、键r2、r3、r4和g1的定义如权利要求1-3中所述。在本发明的另一个实施方案中，一种通式(i)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐，其为通式(v)所述的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐：其中：a2、a3、b1、b2、l1、y、键r2、r3、r4、g1、z1、z2、n和p的定义如权利要求1-4中所述。本发明的典型化合物包括，但并不限于：或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐。本发明进一步涉及一种药物组合物，其含有治疗有效量的通式(i)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐及药学上可接受的载体，稀释剂和赋形剂。本发明的另一方面涉及通式(i)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐，或包含其的药物组合物在制备bruton酪氨酸激酶抑制剂中的用途。本发明的另一方面涉及通式(i)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐，或包含其的药物组合物在制备治疗和/或预防肿瘤与炎症等疾病的药物中的用途。本发明还涉及一种治疗和/或预防肿瘤与炎症等疾病的方法，该方法包括给予需要治疗的患者治疗有效量的通式(i)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外 消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐，或包含其的药物组合物。本发明的另一方面涉及作为治疗和/或预防肿瘤与炎症等疾病的药物的通式(i)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐。发明的详细说明除非有相反陈述，否则下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。在本文中使用的表示方式“cx-y”表示碳原子数的范围，其中x和y均为整数，例如c3-8环基表示具有3-8个碳原子的环基，-c0-2烷基表示具有0-2个碳原子的烷基，其中-c0烷基是指化学单键。“烷基”指饱和的脂族烃基团，包括1至20个碳原子的直链和支链基团，例如可以是1至18个碳原子、1至12个碳原子、1至8个碳原子、1至6个碳原子或1至4个碳原子的直链和支链基团。在本文中“烷基”可以是一价的、二价的或三价基团。非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、及其各种支链异构体等。非限制性实施例还包括亚甲基、次甲基、亚乙基、次乙基、亚丙基、次丙基、亚丁基、次丁基及其各种支链异构体。烷基可以是任选取代的或未取代的。“环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包括3至12个环原子，例如可以是3至12个、3至10个或3至6个环原子，或者可以是3、4、5、6元环。单环环基的非限制性实施例包含环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等。环基可以是任选取代的或未取代的。“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包括3至20个环原子，例如可以是3至16个、3至12个、3至10个或3至6个环原子，其中一个或多个环原子选自氮、氧或s(o)m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-o-o-、-o-s-或-s-s-的环部分，其余环原子为碳。优选包括3至12个环原子，其中1～4个是杂原子，更优选杂环烷基环包含3至10个环原子，最优选5元环或6元环，其中1～4个是杂原子，更优选1～3个是杂原子，最优选1～2个是杂原子。单环杂环基的非限制性实施例包含吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。“螺杂环基”指5至20元，单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子选自氮、氧或s(o)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共扼的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺环烷基和双螺环烷基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺环烷基。螺环烷基的非限制性实施例包含“稠杂环基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对 原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共扼的π电子系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或s(o)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。稠杂环基的非限制性实施例包含所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，非限制性实施例包含:等。杂环基可以是任选取代的或未取代的。“芳基”指6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，具有共扼的π电子体系的多环(即其带有相邻对碳原子的环)基团，优选为6至10元，例如苯基和萘基，最优选苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，非限制性实施例包含:芳基可以是取代的或未取代的。“杂芳基”指包含1至4个杂原子，5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子包括氧、硫和氮。优选为5至10元。更优选杂芳基是5元或6元，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、n-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基等，所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，非限制性实施例包含:杂芳基可以是任选取代的或未取代的。“卤素”指氟、氯、溴或碘。“氰基”指-cn。“任选”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。实施例本发明通式(i)所述的化合物或其可药用的盐的制备，可通过以下实施例中所述的示例性方法以及本领域技术人员所用的相关公开文献操作完成，但这些实施例并非限制着本发明的范围。化合物的结构是通过核磁共振(nmr)或质谱(ms)来确定的。nmr的测定是用brukeravance-400或varianoxford-300核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(dmso-d6)，氘代氯仿(cdc13)，氘代甲醇(cd3od)，内标为四甲基硅烷(tms)，化学位移是以10-6(ppm)作为单位给出。ms的测定用agilentsqd(esi)质谱仪(生产商：agilent，型号：6110)或shimadzusqd(esi)质谱仪(生产商：shimadzu，型号：2020)。hplc的测定使用安捷伦1200dad高压液相色谱仪(sunfircc18，150×4.6mm，5μm，色谱柱)和waters2695-2996高压液相色谱仪(giminic18150×4.6mm，5μm色谱柱)。薄层层析硅胶板使用青岛海洋gf254硅胶板，薄层色谱法(tlc)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm硅胶板。柱层析一般使用青岛海洋200～300目硅胶为载体。本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自abcrgmbh&co.kg，acrosorganics，aldrichchemicalcompany，韶远化学科技(accelachembioinc)、北京耦合化学品等公司。实施例中如无特殊说明，反应均在氩气氛或氮气氛下进行。氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1l容积的氩气或氮气气球。氢气氛是指反应瓶连接一个约1l容积的氢气气球。加压氢化反应使用北京佳维科创科技有限公司gcd-500g高纯氢气发生器和blt-2000中压氢化仪。氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。微波反应使用cemdiscover-sp型微波反应器。实施例中如无特殊说明，反应的温度为室温，温度范围是20℃-30℃。实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(tlc)，反应所使用的展开剂的体系有a：二氯甲烷和甲醇体系；b：石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节。纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂的体系包括a：二氯甲烷和甲醇体系；b：石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和酸性或碱性试剂等进行调节。实施例11-(3-(7-(4-(吗啉代甲基)苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮第一步叔-丁基5-氨基-4-甲基-5',6'-二氢-[2,3'-联吡啶]-1'(2'h)-羧酸酯将化合物6-氯-4-甲基吡啶-3-胺1a(568mg，4.0mmol)、叔-丁基3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2h)-羧酸酯(1.22g,4.0mmol)、碳酸铯(3.8g,12mmol)、[1,1'-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷加合物(146mg，0.2mmol)，1，4-二氧六环(30ml)和水(7ml)混合，除氧，氮气保护下加热回流16小时。冷却至室温，减压脱溶，残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝20/1到2/1)得到目标产物叔-丁基5-氨基-4-甲基-5',6'-二氢-[2,3'-联吡啶]-1'(2'h)-羧酸酯1b(401mg，黄色油状物)，产率：34％。msm/z(esi):290[m+1]第二步叔-丁基3-(5-氨基-4-甲基吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸酯将化合物叔-丁基5-氨基-4-甲基-5',6'-二氢-[2,3'-联吡啶]-1'(2'h)-羧酸酯1b(401mg，0.45mmol)、钯炭(106mg)和乙醇(100ml)混合，除氧，氢气气氛下室温搅拌16小时。减压脱溶得到目标产物叔-丁基3-(5-氨基-4-甲基吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸酯1c(400mg，黄色油状物)粗品，不经过其他纯化直接用于下一步反应。msm/z(esi):292[m+1]第三步叔-丁基3-(5-氨基-6-溴-4-甲基吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸酯将化合物叔-丁基3-(5-氨基-4-甲基吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸酯1c(400mg，粗品)、n-溴代丁二酰亚胺(244mg，1.4mmol)和二氯甲烷(5ml)在0℃混合后，0℃下搅拌1小时。加饱和碳酸氢钠(10ml)，用二氯甲烷(20ml×3)萃取。有机相合并后用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶，残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝6/1)，得到目标产物叔-丁基3-(5-氨基-6-溴-4-甲基吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸酯1d(290mg，棕色油状物)，产率：两步57％。msm/z(esi):370[m+1]第四步叔-丁基3-(5-氨基-4-甲基-6-(4-(吗啉代甲基)苯基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸酯将化合物叔-丁基3-(5-氨基-6-溴-4-甲基吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸酯1d(300mg，0.81mmol)、4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)苯甲基)吗啉(295mg,0.97mmol)、碳酸铯(792mg,2.4mmol)、[1,1'-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷加合物(50mg，0.2mmol)，1，4-二氧六环(15ml)和水(5ml)混合，除氧，氮气保护下加热回流16小时。冷却至室温，减压脱溶，残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝20/1到1/1)得到目标产物叔-丁基3-(5-氨基-4-甲基-6-(4-(吗啉代甲基)苯基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸酯1e(300mg，黄色油状物)，产率：80％。msm/z(esi):467[m+1]第五步叔-丁基3-(5-乙酰氨基-4-甲基-6-(4-(吗啉代甲基)苯基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸酯将化合物叔-丁基3-(5-氨基-4-甲基-6-(4-(吗啉代甲基)苯基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸酯1e(300mg，0.64mmol)、乙酸酐(130mg,1.3mmol)和无水甲苯(20ml)混合，加热到100℃，搅拌14小时。冷却至室温，减压脱溶，得到目标产物叔-丁基3-(5-乙酰氨基-4-甲基-6-(4-(吗啉代甲基)苯基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸酯1f(350mg，黄色粘稠油状物)粗品，不经过其他纯化直接用于下一步反应。msm/z(esi):509[m+1]第六步叔-丁基3-(7-(4-(吗啉代甲基)苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)哌啶-1-羧酸酯将混合物叔-丁基3-(5-乙酰氨基-4-甲基-6-(4-(吗啉代甲基)苯基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸酯1f(350mg，粗品)、乙酸酐(208mg,2.0mmol)、乙酸钾(87mg,0.88mmol)和苯(20ml)加热到78℃，趁热加入亚硝酸异戊酯(117mg，1.0mmol)搅拌18小时。冷却至室温，减压脱溶，残余物溶于用水(5ml)和乙醇(15ml)的混合物，然后加入氢氧化锂一水合物(100mg)，常温搅拌2小时。减压脱溶，残余物分散于水(10ml)的混合物中，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取。有机相合并后用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶，残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1到1/2)，得到目标产物叔-丁基3-(7-(4-(吗啉代甲基)苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)哌啶-1-羧酸酯1g(130mg，黄色固体)，产率：两步40％。msm/z(esi):478[m+1]第七步4-(4-(5-(哌啶-3-基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-7-基)苯甲基)吗啉将化合物叔-丁基3-(7-(4-(吗啉代甲基)苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)哌啶-1-羧酸酯1g(130mg，0.27mmol)、三氟乙酸(3ml)和二氯甲烷(3ml)混合后，室温下搅拌14小时。加饱和碳酸氢钠(30ml)，用二氯甲烷(50ml×3)萃取。有机相合并后用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶，残余物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)，得到目标产物34-(4-(5-(哌啶-3-基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-7-基)苯甲基)吗啉1h(100mg，黄色粘稠油状物)，产率：98％。msm/z(esi):378[m+1]第八步1-(3-(7-(4-(吗啉代甲基)苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮将化合物4-(4-(5-(哌啶-3-基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-7-基)苯甲基)吗啉1h(0.15g，0.40mmol)、烯丙酰氯(91mg,0.56mmol)、固体碳酸氢钠(86mg,0.86mmol)、水(5ml)和四氢呋喃(15ml)混合，在常温下搅拌2小时。用乙酸乙酯(50ml×3)萃取，有机相合并后用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶，残余物用硅胶柱层析纯 化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)，得到目标产物1-(3-(7-(4-(吗啉代甲基)苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮1(20mg，白色固体)，产率：23％。msm/z(esi):432[m+1]1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.30-8.22(m,3h),7.77(dd,j＝8.3,2.3hz,2h),7.73(d,j＝10.0hz,1h),4.79(m,0.5h),4.52(m,2.5h),4.17(m,1h),4.01(m,2h),3.84(m,2h),3.53(dd,j＝13.3,11.0hz,1h),3.36(m,2h),3.29-2.98(m,3h),2.93-2.78(m,1h),2.19(s,3h),2.15(s,1h),2.08(s,1h),1.95(d,j＝3.3hz,1h),1.78-1.62(m,1h)。实施例21-(3-(7-(4-(噁丁环-3-氧基)苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮参照实施例1的操作步骤合成实施例2，但在第四步中用4,4,5,5-四甲基-2-(4-(噁丁环-3-氧基)苯基)-1,3,2-二噁硼戊环取代4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)苯甲基)吗啉。msm/z(esi):405[m+1]1hnmr(400mhz,cdcl3)δ11.04(s,1h),8.15(d,j＝6.9hz,1h),8.00(d,j＝8.2hz,2h),7.45(d,j＝12.8hz,1h),6.98-6.82(m,2h),6.68(dd,j＝16.6,10.7hz,1h),6.31(t,j＝15.1hz,1h),5.69(dd,j＝27.8,10.4hz,1h),5.31(s,1h),5.09-4.98(m,2h),4.89-4.74(m,2.5h),4.70(d,j＝11.4hz,0.5h),4.29(d,j＝12.3hz,0.5h),4.05(d,j＝13.3hz,0.5h),3.51(t,j＝12.1hz,0.5h),3.20(dd,j＝29.8,16.8hz,2h),2.83(t,j＝12.3hz,0.5h),2.22(d,j＝11.2hz,1h),2.14-1.97(m,1h),1.89(s,1h),1.71(s,1h)。实施例31-(3-(7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮参照实施例1中第一步至第七步的操作步骤合成3a，但在第四步中用(4-苯氧基苯基)硼酸取代4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)苯甲基)吗啉。msm/z(esi):371[m+1]1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.35-8.28(m,1h),8.10(d,j＝8.7hz,2h),7.78(d,j＝12.2hz,1h),7.52-7.40(m,2h),7.23(dd,j＝7.8,4.2hz,3h),7.18-7.09(m,2h),3.68(d,j＝10.1hz,1h),3.47(d,j＝11.6hz,3h),3.22-3.09(m,1h),2.26(d,j＝12.9hz,1h),2.17-1.92(m,3h)。第一步将化合物7-(4-苯氧基苯基)-5-(哌啶-3-基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶3a(0.13g，0.40mmol)、烯丙酰氯(34mg,0.37mmol)、固体碳酸氢钠(63mg,0.75mmol)、水(5ml)和四氢呋喃(15ml)混合，在常温下搅拌2小时。用乙酸乙酯(50ml×3)萃取，有机相 合并后用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶，残余物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)，得到目标产物1-(3-(7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮3(120mg，白色固体)，产率：83％。msm/z(esi):425[m+1]1hnmr(400mhz,cdcl3)δ10.81(brs,1h),8.18(s,1h),8.02(d,j＝8.0hz,2h),7.49(s,1h),7.42(t,j＝7.8hz,2h),7.21(t,j＝6.9hz,3h),7.13(d,j＝7.9hz,2h),6.68(d,j＝7.0hz,1h),6.38-6.26(m,1h),5.69(dd,j＝25.2,10.5hz,1h),4.84(s,0.5h),4.71(d,j＝11.9hz,0.5h),4.30(d,j＝13.5hz,0.5h),4.05(d,j＝12.8hz,0.5h),3.57-3.48(m,0.5h),3.28-3.12(m,2h),2.84-2.74(m,0.5h),2.25-2.16(m,,1h),2.11-2.0(s,1h),1.95-1.85(m,1h),1.75-1.65(m,1h)。实施例4(e)-4-(二甲氨基)-1-(3-(7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)哌啶-1-基)丁-2-烯-1-酮将化合物7-(4-苯氧基苯基)-5-(哌啶-3-基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶3a(100mg，0.28mmol)、(e)-4-(二甲氨基)丁-2-烯酸(53mg,0.32mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(154mg,0.41mmol)、三乙胺(82mg,0.81mmol)和n，n-二甲基甲酰胺(15ml)混合，在常温下搅拌3小时。减压脱溶，残余物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝30/1到10/1)，得到目标产物(e)-4-(二甲氨基)-1-(3-(7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)哌啶-1-基)丁-2-烯-1-酮4(45mg,白色固体)，产率：33％。msm/z(esi):482[m+1]1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.55(brs,1h),8.26(s,3h),7.60(s,1h),7.47(t,j＝7.6hz,2h),7.31-7.06(m,5h),6.59(s,2h),4.48(s,1h),4.23(s,1h),3.13-2.97(m,5h),2.21(s,7h),2.08-1.96(m,1h),1.88(d,j＝13.2hz,1h),1.70-1.50(m,1h)。实施例57-(4-苯氧基苯基)-5-(1-(乙烯基磺酰)哌啶-3-基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶将化合物7-(4-苯氧基苯基)-5-(哌啶-3-基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶3a(100mg，0.27mmol)、2-氯乙磺酰氯(52mg,0.32mmol)、三乙胺(82mg，0.81mmol)和二氯甲烷(3ml)混合，在常温下搅拌1小时。减压脱溶，残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1到1：3)，得到目标产物7-(4-苯氧基苯基)-5-(1-(乙烯基磺酰)哌啶-3-基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶5(20mg，白色固体)，产率：16％。msm/z(esi):461[m+1]1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.21(s,1h),8.01(d,j＝8.3hz,2h),7.59(s,1h),7.43(dd,j＝8.4,7.5hz,2h),7.22(dd,j＝7.9,6.4hz,3h),7.17-7.09(m,2h),6.51(dd,j＝16.7,9.9hz,1h),6.27(d,j＝16.6hz,1h),6.05(d,j＝9.9hz,1h),3.95-3.86(m,1h),3.75-3.79(m,1h),3.20-3.10(m,2h),2.90-2.75(m,1h),2.20-2.09(m,1h),1.99-1.85(m,3h),1.65-1.50(m,2h)。实施例61-(3-(7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)吡咯烷-1-基)丙-2-烯-1-酮第一步6-氯-2-碘-4-甲基吡啶-3-胺将化合物6-氯-4-甲基吡啶-3-胺6a(6.75g，47.3mmol)、n-碘代丁二酰亚胺(12.95g，57.6mmol)和n,n-二甲基甲酰胺(100ml)在0℃混合后，室温下搅拌15小时。加水(100ml)，用乙酸乙酯(150ml×3)萃取。有机相合并后用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶，残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得到目标产物6-氯-2-碘-4-甲基吡啶-3-胺6b(6.5g，黄色固体)，产率：47％。msm/z(esi):269[m+1]第二步6-氯-4-甲基-2-(4-苯氧基苯基)吡啶-3-胺利用6-氯-2-碘-4-甲基吡啶-3-胺6b(3.0g，11.2mmol)为原料，参照实施例1中1e的合成方法合成，得到目标产物6-氯-4-甲基-2-(4-苯氧基苯基)吡啶-3-胺6c(3.5g，黄色固体)，产率：100％。msm/z(esi):311[m+1]第三步n-(6-氯-4-甲基-2-(4-苯氧基苯基)吡啶-3-基)乙酰胺利用6-氯-4-甲基-2-(4-苯氧基苯基)吡啶-3-胺6c(3.5g，11.2mmol)为原料，参照实施例1中1f的合成方法合成，得到目标产物n-(6-氯-4-甲基-2-(4-苯氧基苯基)吡啶-3-基)乙酰胺6d(4.0g，黄色固体)，产率：100％。msm/z(esi):353[m+1]第四步5-氯-7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶利用n-(6-氯-4-甲基-2-(4-苯氧基苯基)吡啶-3-基)乙酰胺6d(3.4g，9.6mmol)为原料，参照实施例1中1g的合成方法合成，得到目标产物5-氯-7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶6e(1.5g，黄色固体)，产率：40％。msm/z(esi):322[m+1]第五步叔-丁基3-(7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)-2,5-二氢-1h-吡咯-1-羧酸酯利用5-氯-7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶6e(850mg，2.64mmol)和叔-丁基3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)-2,5-二氢-1h-吡咯-1-羧酸酯(1.95g，6.6mmol)为原料，参照实施例1中1b的合成方法合成，得到目标产物叔-丁基3-(7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)-2,5-二氢-1h-吡咯-1-羧酸酯6f(700mg，黄色固体)，产率：58％。msm/z(esi):455[m+1]第六步叔-丁基3-(7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)吡咯烷-1-羧酸酯利用叔-丁基3-(7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)-2,5-二氢-1h-吡咯-1-羧酸酯6f(700mg，1.54mmol)为原料，参照实施例1中1c的合成方法合成，得到目标产物叔-丁基3-(7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)吡咯烷-1-羧酸酯6g(270mg，黄色固体)，产率：39％。msm/z(esi):457[m+1]第七步7-(4-苯氧基苯基)-5-(吡咯烷-3-基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶利用叔-丁基3-(7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)吡咯烷-1-羧酸酯6g(250mg，0.327mmol)为原料，参照实施例1中1h的合成方法合成，得到目标产物叔-丁基7-(4-苯氧基苯基)-5-(吡咯烷-3-基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶6h(95mg，黄色固体)，产率：82％。msm/z(esi):357[m+1]第八步1-(3-(7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)吡咯烷-1-基)丙-2-烯-1-酮利用7-(4-苯氧基苯基)-5-(吡咯烷-3-基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶6h(95mg，0.267mmol)为原料，参照实施例1中1的合成方法合成，得到目标产物1-(3-(7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)吡咯烷-1-基)丙-2-烯-1-酮6(45mg，黄色固体)，产率：82％。msm/z(esi):411[m+1]1hnmr(400mhz,cdcl3)δ10.86(brs,1h),8.18(s,1h),7.99(t,j＝9.3hz,2h),7.50(d,j＝8.2hz,1h),7.45-7.38(m,2h),7.20(dd,j＝11.5,8.7hz,3h),7.15-7.09(m,2h),6.58-6.36(m,2h),5.71(ddd,j＝14.7,10.0,2.3hz,1h),4.20-4.07(m,1h),4.00-3.60(m,4h),2.58-2.30(m,2h)。实施例71-(4-(7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮参照实施例6的操作步骤合成实施例7，但在第五步中用叔-丁基4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2h)-羧酸酯取代叔-丁基3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)-2,5-二氢-1h-吡咯-1-羧酸酯msm/z(esi):371[m+1]1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.65(s,1h),8.23(s,1h),8.09-8.08(m,2h),7.57-7.44(m,3h),7.23-7.11(m,5h),6.90-6.84(m,1h),6.13(d,j＝12.8hz,1h),5.68(d, j＝10.4hz,1h),4.62-4.59(m,1h),4.23-4.19(m,1h),3.02-3.12(m,2h),2.83-2.77(m,1h),2.02-1.99(m,2h),1.76-1.70(m,2h)。实施例8n-(3-(7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)苯基)丙烯酰基酰胺第一步3-(7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)苯胺利用5-氯-7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶(100mg，0.34mmol)和(3-氨基苯基)硼酸6e(51mg，0.37mmol)为原料，参照实施例1中1b的合成方法合成，得到目标产物3-(7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)苯胺8b(80mg，灰色固体)，产率：68％。msm/z(esi):379[m+1]第二步n-(3-(7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)苯基)丙烯酰基酰胺利用3-(7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)苯胺8b(80mg，0.21mmol)为原料，参照实施例1中1的合成方法合成，得到n-(3-(7-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)苯基)丙烯酰基酰胺8(13mg，黄色固体)，产率：15％。msm/z(esi):433[m+1]1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.82(s,1h),10.28(s,1h),8.46(s,1h),8.37(s,1h),8.23-8.19(m,3h),7.89-7.79(m,2h),7.49-7.43(m,3h),7.25-7.15(m,5h),6.50-6.46(m,1h),6.31-6.27(m,1h),5.79-5.77(m,1h)。btk的活性抑制测试使用体外激酶检测实验评估本发明的化合物对bruton酪氨酸激酶(btk)活性的影响实验方法概述如下：使用promega公司的adp-glotm激酶检测试剂盒，通过检测激酶反应中所产生的adp水平来测定btk的体外活性。在激酶检测实验中，激酶消耗atp将底物磷酸化，同时产成adp。adp-glo试剂将终止激酶反应并且将剩余的atp完全消耗，最后加入激酶检测试剂，将adp转化为新的atp。检测试剂中的萤光素酶在atp和o2参与下能够催化荧光素，产生氧化型的荧光素、amp并且产生光量子，从而将化学信号转为光信号(luminecence)。光信号的强度与激酶反应中adp产生量呈正相关，从而能够定量检测激酶btk的活性。所有检测实验均在23℃恒温进行，使用corning3674白色384孔检测板，激酶btk(全长his-tag)由公司内部表达纯化，激酶底物为多肽(4:1glu,tyr)(购自signalchem)和atp(sigma)，使用酶标仪envision(perkinelmer)读取光信号。检测缓冲液包括40mmtris-hcl(ph7.5)、10mmmgcl2(sigma)、2mmmncl2(sigma)、0.05mmdtt(sigma)和0.01％bsa(sigma)；将激酶btk使用检测缓冲液配制为 1.6ng/ul浓度的激酶反应溶液；底物反应溶液包括0.2mg/ml多肽底物和50umatp。化合物ic50由10个浓度点通过以下公式计算。先将化合物在100％dmso中溶解稀释至1mm，然后用dmso进行3倍的系列稀释至最低浓度为0.05um，每个浓度点再使用检测缓冲液稀释40倍。向384孔检测板中先添加1ul系列浓度的化合物溶液和2ul激酶反应溶液，混合均匀后室温避光孵育30分钟；随后加入2ul底物反应溶液，反应总体积为5ul，将反应混合物在室温避光反应60分钟；随后加入与反应等体积的5uladp-glotm试剂终止反应，混合均匀后室温放置40分钟；最后加入10ul激酶检测试剂，室温避光放置30分钟，然后在envision上读取数值。抑制百分率基于以下公式计算：抑制％＝[1-(rlu化合物-rlumin)/(rlumax-rlumin)]x100其中rlu化合物为给定化合物浓度下的冷光读数，rlumin为不加入激酶的情况下的冷光读数，rlumax为不加入化合物的情况下的冷光读数。通过使用excel中xlfit程序来计算化合物的ic50。化合物编号ic50(nm)化合物编号ic50(nm)1.a2.b3.a4.a5.a6.a7.a8.aa﹤100nm；b＝100至500nm；c﹥500nm结论：本发明的化合物对bruton酪氨酸激酶(btk)的活性具有明显的抑制效应。当前第1页12