本发明属于抗肿瘤药物领域，涉及一种具有抗肿瘤作用的化合物，特别涉及到5-硝基-4羟基间苯二酰胺类抗肿瘤化合物及其在制备抗肿瘤药物的用途。
背景技术：
癌症又称恶性肿瘤，是一种严重威胁人类健康和生命的重要疾病。根据《2014年世界癌症报告》显示，目前全球癌症发病率和死亡率正在以惊人的速度不断上升，全球平均每8个死亡病例中就有1人死于癌症，这比艾滋病、结核病和疟疾导致的死亡人数总和还要高。据统计，2012年，全球新增癌症病例达到1400多万例，其中，中国新增癌症病例约307万，占全球总数的21.8％，癌症死亡人数约220万，占到全球癌症死亡人数的26.9％。预计在将来，癌症给全球带来的压力将持续增加，征服癌症已成为全人类面临的一项迫不及待的任务。
近些年来，随着分子生物学和细胞生物学的快速发展，人们逐渐认识到细胞癌变的本质可能是细胞信号转导通路失调导致的细胞无限增殖。因此，抗肿瘤药物研究转向针对作用于肿瘤发生、发展中的多个关键靶点，如蛋白酪氨酸激酶抑制剂、组蛋白去乙酰化酶抑制剂。信号转导通路抑制剂成为抗肿瘤药物的研究热点。水杨酸又名邻羟基苯甲酸，是重要的精细有机合成中间体，广泛应用于医药、合成香料、植物保护等领域。
技术实现要素：
技术问题：本发明的目的是提供一种5-硝基-4-羟基间苯二酰胺类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，本发明设计的5-硝基-4-羟基间苯二酰胺类化合物是其衍生物，它存在两个羧基，为开发多靶点抗肿瘤药物提供了改进空间。基于现有药物结理论和应用基础之上，进行适当的结构改造，合成新型的羟基取代芳香酸衍生物。
技术方案：本发明的5-硝基-4-羟基间苯二酰胺类化合物结构式如式I所示：
式I中，R为氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、苯基中的一个或两个取代基。
所述的化合物包括以下式(I-1)～式(I-16)所示之一的5-硝基-4-羟基间苯二酰胺类化合物，
本发明的5-硝基-4-羟基间苯二酰胺类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用：
所述的5-硝基-4-羟基间苯二酰胺类化合物为式(I-1)、式(I-2)、式(I-3)、式(I-8)、式(I-10)、式(I-12)、式(I-13)或式(I-14)所示的化合物应用于MDA-MB-231细胞株导致的乳腺癌药物的制备。
所述的5-硝基-4-羟基间苯二酰胺类化合物为式(I-1)、式(I-2)、式(I-3)、式(I-5)、式(I-6)、式(I-9)、式(I-10)、式(I-13)或式(I-15)所示的化合物应用于MGC-803细胞株导致的胃癌药物的制备。
所述的5-硝基-4-羟基间苯二酰胺类化合物为式(I-1)、式(I-2)、式(I-3)、式(I-4)、式(I-9)、式(I-10)、式(I-11)、式(I-12)、式(I-14)或式(I-16)所示的化合物应用于SGC-7901细胞株导致的胃癌药物的制备。
有益效果：本发明所述的5-硝基-4-羟基间苯二酰胺类化合物应用的有益效果主要体现在：
(1)提供了一种新的有显著抗肿瘤活性的抗肿瘤药物，为新药的开发打下良好基础。
(2)式(I-1)、式(I-2)或式(I-12)所示的化合物具有显著的抗肿瘤活性，式(I-6)式(I-10)、式(I-13)具有较好的抗肿瘤活性，式(I-3)、式(I-9)、式(I-11)、式(I-14)或式(I-16)具有一定的抗肿瘤活性。
(3)所述的肿瘤为MDA-MB-231细胞株导致的乳腺癌时，式(I-1)、式(I-10)或式(I-12)所示的化合物具有较好的的抗肿瘤活性。
(4)所述的肿瘤为SGC-803细胞株导致的胃癌时，式(I-1)、式(I-2)、式(I-6)或式(I-13)所示的化合物具有较好的抗肿瘤活性。
(5)所述的肿瘤为MGC-7901细胞株导致的胃癌时，式(I-11)或(I-16)所示的化合物具有显著的抗肿瘤活性，式(I-1)、式(I-2)或式(I-12)所示的化合物具有较好的抗肿瘤活性。
具体实施方式
首先应指出的是，以下实施例用于对本发明的说明并非限制本发明。
发明人的研究中，制备了如式(I)所示的5-硝基-4-羟基间苯二酰胺类化合物。
式(I)中：R为氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、苯基中的一个或两个取代基。式(I)所示的化合物合成方法已在Macromolecules 2009，42，1541-1553中所述。
本发明公开了式(I)所示化合物的医药新用途，如式(I-1)～式(I-16)所示之一的5-硝基-4-羟基间苯二酰胺类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用；
本发明所述的5-硝基-4-羟基间苯二酰胺类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，所述的5-硝基-4-羟基间苯二酰胺类化合物优选为式(I-1)、式(I-2)、式(I-3)、式(I-6)、式(I-9)、式(I-10)、式(I-11)、式(I-12)、式(I-13)、式(I-14)或式(I-16)所示的化合物，更优选为式(I-1)、式(I-2)、式(I-6)、式(I-10)、式(I-12)或式(I-13)所示化合物，最优先为式(I-1)、式(I-2)或式(I-12)所示化合物。
较为具体的，经发明人实验证实，所述的肿瘤为MDA-MB-231细胞株导致的乳腺癌时，式(I-1)、式(I-10)或式(I-12)所示的化合物具有较好的抗肿瘤活性，式(I-2)、式(I-3)、式(I-8)、式(I-13)或式(I-14)所示的化合物具有一定的抗肿瘤活性。
所述的肿瘤为SGC-803细胞株导致的胃癌时，式(I-1)、式(I-2)、式(I-6)或式(I-13)所示的化合物具有较好的抗肿瘤活性，式(I-3)、式(I-5)、式(I-9)、式(I-10)或式(I-15)所示的化合物具有一定的抗肿瘤活性。
所述的肿瘤为MGC-7901细胞株导致的胃癌时，式(I-11)或(I-16)所示的化合物具有显著的抗肿瘤活性，式(I-1)、式(I-2)或式(I-12)所示的化合物具有较好的抗肿瘤活性，式(I-3)、式(I-4)、式(I-9)、式(I-10)或式(I-14)所示的化合物具有一定的抗肿瘤活性。
制备5-硝基-4-羟基间苯二酰胺类化合物：按照Macromolecules 2009，42，1541-1553中所述的制备方法制备式(I-1)～式(I-16)所示的化合物I-1～I-16.
实施例1-～16：抗MDA-MB-231乳腺癌活性测试
测试方法：体外抗肿瘤活性测试方法。
1.原理：细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT(噻唑兰)还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
2.细胞：MDA-MB-231，乳腺癌细胞株
3.实验步骤
(1)样品的准备：取化合物I-1～I-16，配制为浓度为100mmol/L的溶液，溶剂为DMSO，再用培养液连续稀释至使用浓度，依次为50mmol/L、25mmol/L、12.5mmol/L、6.25mmol/L、3.125mmol/L。
(2)细胞的培养
培养基的配制：每100mL培养基中含10ml灭活胎牛血清、1ml盘尼西林、90ml1640不完全培养基。
细胞的培养：将肿瘤细胞接种于培养基中，置37℃、5％CO2培养箱中培养，1-2d传代。
(3)测定样品对肿瘤细胞生长的抑制作用
将细胞用EDTA-胰酶消化液消化，并用培养基稀释到5000/ml，加到96孔细胞培养板中，每孔100μL，置37℃、5％CO2培养箱中培养。接种24h后。倒掉培养基，加入培养基稀释的样品，每孔100μL，每个浓度加3孔，浓度梯度为100μmol/L、50μmol/L、25μmol/L、12..5μmol/L、6.25μmol/L、3.125μmol/L，置37℃、5％CO2培养箱中培养24h。将完全培养基和MTT按5∶1的比例配置，每孔加入100μl完全培养基，20μlMTT。置37℃、5％CO2培养箱中培养4h，4h后倒掉培养基，每孔加入150μLDMSO，用振荡器振荡，使甲瓒完全溶解，用酶标仪在490nm波长下比色，以同样条件用不含样品、含同样浓度DMSO的培养基培养的细胞作为对照，计算样品对肿瘤细胞生长的半数抑制浓度(IC50)，结果见表1。
对比例1：使用的样品是顺铂药品，按照实施例1-16的体外抗肿瘤活性测试方法进行测试，结果见表1
抗肿瘤活性测试结果：
表1：各化合物对MDA-MB-231的IC50(μmol/L)
按照抗肿瘤活性的评价标准，化合物I-1、I-10、I-12具有较好的抗MDA-MB-231乳腺癌细胞活性，化合物I-2、I-3、I-8、I-13、I-14具有一定的抗MDA-MB-231乳腺癌细胞活性。
实施例17-32：抗SGC-803胃癌活性测试
测试方法：体外抗肿瘤活性测试方法。
按照实施例1～16的体外抗肿瘤活性测试方法进行测试，所不同的是，使用的是SGC-803，人胃癌细胞株。结果见表2。
对比例2：按照对比例1的体外抗肿瘤活性测试方法进行测试，使用的细胞株是SGC-803，人胃癌细胞株。结果见表2。
抗肿瘤活性测试结果：
表2：各化合物对SGC-803的IC50(μmol/L)
按照抗肿瘤活性的评价标准，化合物I-1、I-2、I-6或I-13具有较好的抗SGC-803胃癌细胞活性，化合物I-3、I-5、I-9、I-10和I-15具有一定的抗SGC-803胃癌细胞活性。
实施例33-48：抗MGC-7901胃癌活性测试
测试方法：体外抗肿瘤活性测试方法。
按照实施例1～16的体外抗肿瘤活性测试方法进行测试，所不同的是，使用的是MGC-7901，人胃癌细胞株。结果见表3。
对比例3：按照对比例1的体外抗肿瘤活性测试方法进行测试，使用的细胞株是MGC-7901，人胃癌细胞株。结果见表3。
抗肿瘤活性测试结果：
表3：各化合物对MGC-7901的IC50(μmol/L)
按照抗肿瘤活性的评价标准，化合物I-11和I-16具有显著的抗MGC-7901胃癌细胞活性，化合物I-1、I-2、I-12具有较好的抗MGC-7901胃癌细胞活性，化合物I-3、I-4、I-9、I-10和I-14具有一定的抗MGC-7901胃癌细胞活性。