丹参酮ⅡA的新型衍生物及其制备方法和应用与流程

本发明涉及丹参酮ⅡA的新型衍生物及其制备方法和应用，属于生物化学领域。

背景技术：

化疗是恶性肿瘤综合治疗策略中的关键一环，其药物治疗反应性明确影响患者预后。研发新型抗肿瘤药物，就成为肿瘤治疗研究的重要方向。高迁移率族蛋白-1(HMGB1)在肿瘤发生发展的各个核心环节均发挥重要作用。多种恶性肿瘤存在HMGB1基因过表达，且与恶性肿瘤的预后相关。此外，已有研究发现HMGB1是脓毒症中重要的炎症因子。HMGB1作为一种重要的炎症介质和致炎细胞因子，是启动和维持炎症瀑布式反应的中心分子，与多种炎症性疾病和自身免疫性疾病的发病机制关系密切。因此，研发新型HMGB1作用抑制剂，不仅对于炎症相关治疗具有重要作用，尤其是作为抗肿瘤药物，将为提高恶性肿瘤药物化疗以及综合治疗效果提供新的选择。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供丹参酮ⅡA的新型衍生物及其制备方法和应用，其中，该新型衍生物不仅能够有效抑制肿瘤细胞增殖，而且对多种肿瘤细胞均有抑制作用，并且对正常细胞没有明显影响作用，制备该新型衍生物的方法简便、快捷，所得到的化合物纯度高、不含其它杂质，且经过反复验证，可得到高纯度、性质稳定的化合物。

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

丹参酮ⅡA的新型衍生物，其特征在于，分子式：C₁₈H₂₀O₄，Mass：300.14，结构式：

制备前述的丹参酮ⅡA的新型衍生物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、合成

(1)将前体Angene 024-021-75与BBr₃在CH₂Cl₂中反应4h，反应温度为-78℃至常温，生成产物TSA518，其中，

前体Angene 024-021-75的分子式：C₁₃H₁₈O，Mass：190.14，结构式：

产物TSA518的分子式：C₁₂H₁₆O，Mass：176.12，结构式：

(2)在丙二酸和85％P₂O₅存在的情况下，将产物TSA518与多聚磷酸混合，在75℃条件下反应3h，生成产物TSA519，其中，

产物TSA519的分子式：C₁₅H₁₆O₃，Mass：244.11，结构式：

(3)在甲苯/乙醇存在的情况下，将产物TSA519与氯丙酮、乙酸/醋酸铵混合，回流24h，通过串联烷基化/分子内醛醇缩合反应，生成产物TSA520，其中，

产物TSA520的分子式：C₁₈H₁₈O₃，Mass：282.13，结构式：

(4)向产物TSA520中加入含有5％KOH的乙醇溶液，回流3h，产物TSA520被KOH水解，生成开放环的复合物TSA521，其中，

产物TSA521的分子式：C₁₈H₂₀O₄，Mass：300.14，结构式：

步骤二、纯化

采用反相-HPLC法，将生成的产物过C18柱，过柱纯化，以含有0.05％三氟乙酸的水为流动相，通过含有0.05％三氟乙酸的水：含有0.05％三氟乙酸的甲醇，配比从70：30至30：70线性洗脱至少30min，，流速1.0mL/min，洗脱至28min左右即可分离得到产物TSA521。

本发明的有益之处在于：

(一)新型衍生物

高迁移率族蛋白-1(HMGB1)在肿瘤发生发展的各个核心环节均发挥重要作用。多种恶性肿瘤存在HMGB1基因过表达，且与恶性肿瘤的预后相关，本发明制备得到的新型衍生物能够直接靶向HMGB1，有效抑制多种肿瘤细胞增殖，而且对于正常细胞没有明显影响，这对于研发新型抗肿瘤药物，为提高恶性肿瘤药物化疗以及综合治疗效果提供了新的选择。

(二)制备方法

通过化学合成、反相-HPLC纯化制备该新型衍生物，方法稳定、简捷、易行。

经过反复验证，使用该方法所得到的化合物性质稳定，纯度高，能够有效抑制HMGB1活性，并具备进行产业化应用的潜力。

附图说明

图1是制备丹参酮ⅡA的新型衍生物的流程图；

图2是TSA521与HMGB1亲和力分析图；

图3(a)是TSA521在100μM剂量下，MCF-7细胞的增殖情况；

图3(b)是对照组MCF-7细胞的增殖情况；

图4(a)是TSA521在50μM剂量下，Hela细胞的增殖情况；

图4(b)是对照组Hela细胞的增殖情况；

图5(a)是TSA521在100μM剂量下，HepG2细胞的增殖情况；

图5(b)是对照组HepG2细胞的增殖情况；

图6(a)是TSA521在100μM剂量下，正常的人HuPBMCs的增殖情况；

图6(b)是对照组正常的人HuPBMCs的增殖情况。

具体实施方式

以下结合附图和具体实施例对本发明作具体的介绍。

一、丹参酮ⅡA的新型衍生物的结构

本发明提出的丹参酮ⅡA的新型衍生物，记为TSA521，其分子式：C₁₈H₂₀O₄，Mass：300.14，结构式：

二、制备方法

步骤一、合成

(1)将前体Angene 024-021-75与BBr₃在CH₂Cl₂中反应4h，反应温度为-78℃至常温，生成产物TSA518。其中，

前体Angene 024-021-75的分子式：C₁₃H₁₈O，Mass：190.14，结构式：

产物TSA518的分子式：C₁₂H₁₆O，Mass：176.12，结构式：

经计算，产物TSA518的得率为85％。

(2)在丙二酸和85％P₂O₅存在的情况下，将产物TSA518与多聚磷酸(PPA)混合，在75℃条件下反应3h，生成产物TSA519。其中，

产物TSA519的分子式：C₁₅H₁₆O₃，Mass：244.11，结构式：

经计算，产物TSA519的得率为30％。

(3)在甲苯(或乙醇)存在的情况下，将产物TSA519与氯丙酮、乙酸(或醋酸铵)混合，回流24h，通过串联烷基化反应(或者分子内醛醇缩合反应)，生成产物TSA520。其中，

产物TSA520的分子式：C₁₈H₁₈O₃，Mass：282.13，结构式：

经计算，产物TSA520的得率为80％。

(4)向产物TSA520中加入含有5％KOH的乙醇溶液，回流3h，产物TSA520被KOH水解，生成开放环的复合物TSA521。其中，

产物TSA521的分子式：C₁₈H₂₀O₄，Mass：300.14，结构式：

经计算，产物TSA521的得率为55％。

2、纯化

采用反相-HPLC法，将生成的产物过C18柱(phenomene×primesphers 5 C18 MC.11DA.250×45mm)，过柱纯化，以含有0.05％三氟乙酸的水为流动相，通过水(含有0.05％三氟乙酸)：甲醇(含有0.05％三氟乙酸)，配比从70：30至30：70线性洗脱至少30min，流速1.0mL/min，洗脱至28min左右即可分离得到产物TSA521。

经鉴定，产物TSA521的m/z＝300.14，在283.8nm处有最大光吸收值，对应的化学分子式为C₁₈H₂₀O₄，结构式为：

三、功能分析

1、TSA521HMGB1亲和力分析：

我们利用表面等离子体共振分析技术对TSA521与HMGB1的亲和能力进行了研究。

图2是TSA521与HMGB1亲和力分析图。

由图2可知：表面TSA521与HMGB1具有良好的亲和力。

2、抑瘤效应：

利用多种肿瘤细胞，我们对TSA521的肿瘤生物学效应进行了研究。

图3(a)是TSA521在100μM剂量下，MCF-7细胞的增殖情况。

图4(a)是TSA521在50μM剂量下，Hela细胞的增殖情况。

图5(a)是TSA521在100μM剂量下，HepG2细胞的增殖情况。

图6(a)是TSA521在100μM剂量下，正常的人HuPBMCs的增殖情况。

图3(b)、图4(b)、图5(b)和图6(b)是对照组的增殖情况。

由上述8幅图可知：在给予TSA521(剂量分别为50μM、100μM)的情况下，多种肿瘤细胞，包括MCF-7、Hela、HepG2等，其增殖受到明显的抑制；但对于正常的人外周血单个核细胞(HuPBMCs)，应用同等剂量的TSA521，细胞增殖并未受到明显影响。

初步的研究证实，TSA521对多种肿瘤细胞具有明确的抑制作用，但对正常细胞没有明显的影响。

结论：本发明的丹参酮ⅡA的新型衍生物(TSA521)可以应用在制备抑制胃癌、结肠癌、乳腺癌、肝癌、肺癌等肿瘤的药物中。

需要说明的是，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。