一种酶法制备三磷酸腺苷的方法与流程

文档序号:11936892阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种酶法制备三磷酸腺苷的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:

1)制备ATP生产酶:

通过基因工程改造、发酵、纯化或直接提取方式获得ATP生产酶;所述ATP生产酶是以游离酶的形式制成酶液或干粉;或是固定于固定化载体上,制得固定化ATP生产酶;

2)反应液中ATP的制备:

添加腺苷进行酶促反应;

添加ATP生产酶;

添加少量用于启动反应的ATP、ADP和AMP中的一种或几种;

添加作为磷酸供体的多聚磷酸或其盐,进行ATP制备反应;

3)分离产物和ATP生产酶:

固定化的ATP生产酶在反应罐中直接分离,所述分离可通过过滤方式分离,也可在反应柱中直接分离;

或,游离的ATP生产酶通过滤器中超滤膜分离;经过滤器的截留液为回收的ATP生产酶液,滤出液为分离出酶之后含产物的反应液;

4)成品制备:

将步骤3)分离出酶的反应液通过离子交换层析、浓缩、结晶、干燥,制备成品ATP。

2.根据权利要求1所述的酶法制备三磷酸腺苷的方法,其特征在于,所述方法还包括以下步骤:

5)步骤3)分离回收的固定化或游离的ATP生产酶可重复利用于步骤2)。

3.根据权利要求1所述的酶法制备三磷酸腺苷的方法,其特征在于,所述ATP生产酶为腺苷激酶(AK),以及多聚磷酸激酶(Ppk)、腺苷酸激酶(Adk)和多聚磷酸-腺苷酸磷酸转移酶(Pap)的任意两种或三种组合;所述多聚磷酸激酶(Ppk)为Ppk1酶和/或Ppk2酶;当选择四种酶时,AK、Ppk、Adk、Pap酶的添加比例为(0.1-10):(0.1-10):(0.1-10):1。

4.根据权利要求1所述的酶法制备三磷酸腺苷的方法,其特征在于,所述步骤1)中的固定化载体选自于:高分子载体、无机载体和磁性高分子微球载体中的一种或多种;其中,高分子载体选自于:纤维素、葡萄糖凝胶、琼脂糖、聚丙烯酰胺、多聚氨基酸、聚苯乙烯、聚丙烯酸、海藻酸钠、壳聚糖、淀粉、聚乙烯醇、明胶、卡拉胶、尼龙或合成高聚物;无机载体选自于:多孔玻璃、氧化硅、硅胶、活性炭或硅藻土。

5.根据权利要求4所述的酶法制备三磷酸腺苷的方法,其特征在于,步骤1)中固定化ATP生产酶是通过下列方式固定于所述固定化载体:吸附、包埋、共价、结合、交联或其组合;其中,AK、Ppk、Adk、Pap四种酶可分别固定或按比例混合固定。

6.根据权利要求1所述的酶法制备三磷酸腺苷的方法,其特征在于,所述步骤2)的ATP生产反应条件如下:

反应温度为25-60℃;

反应pH为5-9.5;

酶促反应体系包括:

底物腺苷;

ATP或ADP或AMP中的一种或几种,用于启动反应;

多聚磷酸或其盐,镁离子和/或锰离子,铵离子、钾离子和钠离子的一种或几种,Tris或磷酸根离子;

所述酶促反应体系添加的底物、酶及各类盐可一次性加入反应体系,也可分批次补入。

7.根据权利要求6所述的酶法制备三磷酸腺苷的方法,其特征在于,腺苷与添加的ATP、ADP、AMP总量的摩尔浓度比例为(1-100):1。

8.根据权利要求6所述的酶法制备三磷酸腺苷的方法,其特征在于,腺苷浓度1-80g/L;多聚磷酸或其盐的摩尔浓度为反应添加的腺苷摩尔浓度的0.01-10倍;镁离子浓度为0.01-0.2M;锰离子浓度为0.01-0.15M;钾离子浓度为0.01-0.5M;钠离子浓度为0.01-0.5M;铵离子浓度为0.01-0.3M;Tris浓度为0.01-0.1M、磷酸盐浓度为0.01-0.1M。

9.根据权利要求6所述的酶法制备三磷酸腺苷的方法,其特征在于,多聚磷酸或其盐选自于:多聚磷酸钠,多聚磷酸钾,多聚磷酸铵,六偏磷酸,六偏磷酸钠,四聚磷酸,四聚磷酸钠,三聚磷酸和三聚磷酸钠中的一种或多种;镁离子选自于:氯化镁、硫酸镁、亚硫酸镁和硝酸镁中的一种或多种;锰离子选自于:氯化锰和硫酸锰中的一种或多种;钾离子选自于:氯化钾、硫酸钾、硝酸钾、氢氧化钾、亚硫酸钾、碳酸钾、碳酸氢钾、醋酸钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾和柠檬酸钾中的一种或多种;钠离子选自于:氯化钠、硫酸钠、硝酸钠、氢氧化钠、亚硫酸钠、碳酸钠、碳酸氢钠、醋酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和柠檬酸钠中的一种或多种;铵离子选自于:氯化铵、硫酸铵、硝酸铵、氨水、碳酸铵、碳酸氢铵、磷酸氢二铵、磷酸二氢铵和醋酸铵中的一种或多种。

10.根据权利要求1所述的酶法制备三磷酸腺苷的方法,其特征在于,所述步骤3)中采用的超滤膜选自于:醋酸纤维素膜、聚砜膜、聚丙烯腈膜、聚氯乙烯膜、聚偏氟乙烯膜、聚酰胺膜或陶瓷膜。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1