重组嗜酸乳杆菌S层蛋白在大肠杆菌中的高效表达及其应用的制作方法

文档序号:12346379阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种引物对,其特征在于,所述引物对的序列如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示。

2.一种嗜酸乳杆菌ATCC 4356 S 层蛋白基因,其特征在于,所述S 层蛋白基因通过权利要求1所述的引物对扩增得到。

3.一种重组质粒pGEXS,其特征在于,所述重组质粒pGEXS含有权利要求2所述的嗜酸乳杆菌ATCC 4356 S层蛋白基因。

4.根据权利要求3所述的一种重组质粒pGEXS,其特征在于,所述重组质粒pGEXS含有GST标签。

5.一种重组菌株,其特征在于,所述重组菌株含有权利要求3或权利要求4所述的重组质粒pGEXS。

6.一种重组蛋白,其特征在于,所述重组蛋白是通过权利要求5所述的重组菌株表达得到。

7.权利要求3所述的重组质粒pGEXS的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)嗜酸乳杆菌ATCC 4356 S 层蛋白基因的克隆:以嗜酸乳杆菌ATCC 4356提取的基因组DNA为模板,用权利要求1所述的引物对PCR扩增得到表达 S 层蛋白的目的基因序列;

2)重组质粒pGEXS的构建:用限制性内切酶XhoI和BamHI将pGEX-4t-2质粒线性化,将线性化的pGEX-4t-2质粒与步骤1)PCR扩增得到的基因序列进行连接,得到pGEXS质粒。

8.权利要求6所述的重组蛋白的提取纯化方法,其特征在于,包括以下步骤:将权利要求5所述的重组质粒pGEXS导入大肠杆菌Rosetta-gami2中,然后诱导表达得到菌体,将菌体加入PBS重悬离心,重悬液进行超声破碎,破碎后的得到的菌液离心,收集上清和沉淀进行SDS-PAGE验证,将收集的上清过GST柱子,纯化提取得到S层蛋白。

9.权利要求3所述的重组质粒pGEXS、权利要求5所述的重组菌株,权利要求6所述的重组蛋白在拮抗H9N2禽流感病毒侵袭树突状细胞中的应用。

10.一种试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求3所述的重组质粒pGEXS、权利要求5所述的重组菌株,权利要求6所述的重组蛋白。

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