基于罗丹明的GSH水溶性荧光探针的制备方法和应用与流程

技术特征：

1.一种基于罗丹明的GSH水溶性荧光探针的制备方法和应用，其结构式如下：

。

2.根据权利要求1所述的一种基于罗丹明的GSH水溶性荧光探针的制备方法，其特征在于它的具体制备步骤为：

1）在将1, 2, 4-偏苯三酸酐和3-二乙氨基苯酚加入到含有N,N-二甲基甲酰胺的圆底烧瓶中，在氮气保护下，磁力搅拌回流6小时，停止反应；反应混合物冷却至室温后，加入二次蒸馏水，充分搅拌后，用二氯甲烷进行萃取，合并有机层并减压蒸馏除去溶剂；粗产品用二氯甲烷/甲醇为6:1（体积比）的洗脱剂柱层析分离得红色固体（化合物Rh1）；

2）将化合物 Rh1溶解在无水甲醇中，搅拌下滴加水合肼；在氮气保护下，磁力搅拌回流反应混合物搅拌下回流24小时；减压蒸馏除去溶剂；粗产品用二氯甲烷/甲醇为10:1（体积比）的洗脱剂柱层析分离得白色固体（化合物Rh2）；

3）将化合物 Rh2和乙二醛溶解在无水甲醇中搅拌；在室温下，磁力搅拌反应混合物12小时；减压蒸馏除去溶剂；粗产品用二氯甲烷/水为12:1（体积比）的洗脱剂柱层析分离得淡黄色固体，得目标产物。

3.根据权利要求1所述的一种基于罗丹明的GSH水溶性荧光探针，其特征在于：该探针GSH与发生加成-水解反应，产生强烈的红色荧光，当加入GSH时，荧光强度增强69倍，检测范围为0.08 to 25 µM，检测限为27 nM，表现出很高的灵敏度。

4.根据权利要求1所述的一种基于罗丹明的GSH水溶性荧光探针，其特征在于：该探针能完全溶解在100%纯水溶液中。

5.根据权利要求1所述的一种基于罗丹明的GSH水溶性荧光探针，其特征在于：该探针的检测环境为生理范围内的pH=6-8。

6.根据权利要求1所述的一种基于罗丹明的GSH水溶性荧光探针，其特征在于：该荧光探针与GSH作用迅速，响应时间在90秒以内。

7.根据权利要求1所述的一种基于罗丹明的GSH水溶性荧光探针，其特征在于：该荧光探针对GSH表现出很好的选择性，不受其它生物硫醇（Cys, Hcy）及其它氨基酸（Ala, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Trp, Val, Asn, Gln, Gly, Ser, Thr, Tyr, Arg, His, Lys, Asp, Glu）的影响。

8.根据权利要求1所述的一种基于罗丹明的GSH水溶性荧光探针，其特征在于：所述荧光探针应用于活细胞内GSH含量的检测。