本发明属于植物技术领域，特别涉及一种测定叶子花花粉活力的方法。
背景技术：
叶子花（Bougainvillea spectabilia Willa）系紫茉莉科叶子花属常绿攀援或披散灌木，原产巴西，又名宝巾花、三角梅，叶子花品种多样，适应性强，易栽培，能够花叶俱赏，且花色多、花期长，具有重要的园林绿化、环境保护和药用价值，市场前景广阔。全世界叶子花的原种、栽培种、变种、杂交种数量有300种之多。叶子花繁殖方式主要是扦插、嫁接等无性繁殖，新品种培育主要靠突变体筛选。由于叶子花花粉生活力低，胚败育现象明显，导致结实率低，有性繁殖难度增大，通过有性杂交技术培育新品种困难。
因为花粉活力的大小直接影响授粉、受精过程，与植物新品种的获得密切相关，通过花粉活力的测定，可了解花粉的可育性。目前，有关叶子花花粉活力测定的研究很少，虽有文献报道，但它重点研究的是蔗糖和硼酸对叶子花花粉活力的影响，并未涉及激素和其他营养元素对其活力的影响，并且用的培养基是固体培养基；用TTC法、碘-碘化钾法测定花粉活力虽然操作简单易行，但TTC法只能鉴定出花粉活力的强弱，能否萌发并不清楚；碘-碘化钾法对于不含淀粉的花粉并不适用；本发明在液体培养基里离体培养叶子花花粉，通过测定叶子花花粉活力，发现萌发率最高为25%，因此，可快速选择有活力的品种作为父母本进行杂交试验，不但可以减轻工作量，还可以缩短育种周期、提高育种效率。
技术实现要素：
基于以上现有技术的不足，本发明所解决的技术问题在于提供一种测定叶子花花粉活力的方法，利用离体萌发法测定不同品种叶子花的花粉活力，与TTC法、碘-碘化钾法相比，此种方法更加准确、可靠。
为了解决上述技术问题，本发明提供一种测定叶子花花粉活力的方法，包括如下步骤：
步骤一、配置液体培养基：配制蔗糖20-30g/L、硼酸15-25mg/L、Ca(NO3)220-40mg/L、GA32-4mg/L的水溶液液体培养基，将配好的培养基用灭菌后的瓶子装好放入4°C冰箱内保存；
步骤二、收集花粉：采摘整个叶子花的花朵，用解剖刀把叶子花的三个花药全部切下，铺在干净滤纸上；
步骤三、花粉培养：用胶头滴管吸入少量步骤一制得的液体培养基滴在载玻片的凹槽上，然后用解剖针将步骤二制得的花药剥开露出花粉，将露出花粉的花药在载玻片的凹槽上的液体培养基上蘸几下，使花粉落入液体培养基中，在培养皿中铺上两层滤纸，用蒸馏水把滤纸打湿，将放有花粉的载玻片置于培养皿中并放在打湿的滤纸上，然后置于恒温培养箱中暗培养3-5小时；
步骤四、观察计数：将步骤三处理后的放有花粉的载玻片取出，放在显微镜下用10倍物镜观察，各处理均重复3次，取其平均值，每个处理观察3个视野，每个视野统计花粉粒数不少于30粒；
步骤五、花粉萌发率计算：萌发率=已萌发的花粉粒数/花粉粒总数×100%。
作为上述技术方案的优选实施方式，本发明实施例提供的测定叶子花花粉活力的方法进一步包括下列技术特征的部分或全部：
作为上述技术方案的改进，在本发明的一个实施例中，步骤二中收集花粉的时间选取叶子花完全开放当天早上8点至9点。
作为上述技术方案的改进，在本发明的一个实施例中，步骤二中处理后的花药置于干燥器内于-5-5℃条件下储存。
作为上述技术方案的改进，在本发明的一个实施例中，步骤三中，恒温培养箱的培养温度为25-30°C。
作为上述技术方案的改进，在本发明的一个实施例中，步骤五中，花粉萌发标准为花粉管长度大于等于萌发孔的直径。
与现有技术相比，本发明的技术方案具有如下有益效果：
1. 用液体培养基对叶子花花粉进行离体萌发培养，可以更加直观、准确的观察花粉活力，获得的数据更加可靠。
2. 通过该方法发现，在测定花粉活力时，适当添加植物激素和营养元素更有利于花粉的萌发。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，而可依照说明书的内容予以实施，并且为了让本发明的上述和其他目的、特征和优点能够更明显易懂，以下结合优选实施例，详细说明如下。
具体实施方式
下面结合实施例详细说明本发明的具体实施方式，其作为本说明书的一部分，通过实施例说明本发明的原理，本发明的其他方面、特征及其优点通过该详细说明将会变得一目了然。
一种测定叶子花花粉活力的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、配置液体培养基：配制蔗糖20-30g/L、硼酸15-25mg/L、Ca(NO3)220-40mg/L、GA32-4mg/L的水溶液液体培养基，将配好的培养基用灭菌后的瓶子装好放入4°C冰箱内保存；
步骤二、收集花粉：采摘整个叶子花的花朵，用解剖刀把叶子花的三个花药全部切下，铺在干净滤纸上；
步骤三、花粉培养：用胶头滴管吸入少量步骤一制得的液体培养基滴在载玻片的凹槽上，然后用解剖针将步骤二制得的花药剥开露出花粉，将露出花粉的花药在载玻片的凹槽上的液体培养基上蘸几下，使花粉落入液体培养基中，在培养皿中铺上两层滤纸，用蒸馏水把滤纸打湿，将放有花粉的载玻片置于培养皿中并放在打湿的滤纸上，然后置于恒温培养箱中暗培养3-5小时；
步骤四、观察计数：将步骤三处理后的放有花粉的载玻片取出，放在显微镜下用10倍物镜观察，各处理均重复3次，取其平均值，每个处理观察3个视野，每个视野统计花粉粒数不少于30粒；
步骤五、花粉萌发率计算：萌发率=已萌发的花粉粒数/花粉粒总数×100%。
步骤二中收集花粉的时间选取叶子花完全开放当天早上8点至9点。
步骤二中处理后的花药置于干燥器内于-5-5℃条件下储存。
步骤三中，恒温培养箱的培养温度为25-30°C。
步骤五中，花粉萌发标准为花粉管长度大于等于萌发孔的直径。
实施例1
本发明所述的叶子花花粉活力测定方法，包括如下步骤：
步骤一、配置液体培养基，液体培养基包括以下组分：蔗糖20g/L，硼酸25mg/L，Ca(NO3)220mg/L，GA32mg/L，配好的培养基用瓶子装好放入4°C冰箱内保存。
步骤二、收集花粉：于叶子花完全开放当天早上8点采摘整个花朵，带入实验室，用解剖刀把每朵花的三个花药全部切下，铺在干净滤纸上。
步骤三、花粉培养：用胶头滴管吸入少量液体培养基滴在载玻片的凹槽上，然后用解剖针将花药剥开露出花粉，在培养基上蘸几下（叶子花花粉既少又难取出），使花粉落入液体培养基中，在培养皿中铺上两层滤纸，用蒸馏水把滤纸打湿，将放有花粉的载玻片放入打湿的滤纸上，然后置于恒温培养箱中暗培养，培养温度为25°C。
步骤四、观察计数：花粉培养3小时后取出，放在显微镜下用10倍物镜观察，各处理均重复3次，取其平均值，每个处理观察3个视野，每个视野统计花粉粒30粒。
步骤五、花粉萌发率计算：花粉萌发标准为花粉管长度大于等于萌发孔的直径，萌发率=已萌发的花粉粒数/花粉粒总数×100%。
实施例2
步骤一、配置液体培养基，液体培养基包括以下组分：蔗糖25g/L，硼酸20mg/L，Ca(NO3)230mg/L，GA33mg/L，配好的培养基用瓶子装好放入4°C冰箱内保存。
步骤二、收集花粉：于叶子花完全开放当天早上8点半采摘整个花朵，带入实验室，用解剖刀把每朵花的三个花药全部切下，铺在干净滤纸上。
步骤三、花粉培养：用胶头滴管吸入少量液体培养基滴在载玻片的凹槽上，然后用解剖针将花药剥开露出花粉，在培养基上蘸几下（叶子花花粉既少又难取出），使花粉落入液体培养基中，在培养皿中铺上两层滤纸，用蒸馏水把滤纸打湿，将放有花粉的载玻片放入打湿的滤纸上，然后置于恒温培养箱中暗培养，培养温度为28°C。
步骤四、观察计数：花粉培养4小时后取出，放在显微镜下用10倍物镜观察，各处理均重复3次，取其平均值，每个处理观察3个视野，每个视野统计花粉粒35粒。
步骤五、花粉萌发率计算：花粉萌发标准为花粉管长度大于等于萌发孔的直径，萌发率=已萌发的花粉粒数/花粉粒总数×100%。
实施例3
步骤一、配置液体培养基，液体培养基包括以下组分：蔗糖30g/L，硼酸15mg/L，Ca(NO3)240mg/L，GA34mg/L，配好的培养基用瓶子装好放入4°C冰箱内保存。
步骤二、收集花粉：于叶子花完全开放当天早上9点采摘整个花朵，带入实验室，用解剖刀把每朵花的三个花药全部切下，铺在干净滤纸上。
步骤三、花粉培养：用胶头滴管吸入少量液体培养基滴在载玻片的凹槽上，然后用解剖针将花药剥开露出花粉，在培养基上蘸几下（叶子花花粉既少又难取出），使花粉落入液体培养基中，在培养皿中铺上两层滤纸，用蒸馏水把滤纸打湿，将放有花粉的载玻片放入打湿的滤纸上，然后置于恒温培养箱中暗培养，培养温度为30°C。
步骤四、观察计数：花粉培养3-5小时后取出，放在显微镜下用10倍物镜观察，各处理均重复3次，取其平均值，每个处理观察3个视野，每个视野统计花粉粒40粒。
步骤五、花粉萌发率计算：花粉萌发标准为花粉管长度大于等于萌发孔的直径，萌发率=已萌发的花粉粒数/花粉粒总数×100%。
表一、实施例1-3叶子花的花粉萌发率
与现有技术相比，本发明的技术方案具有如下有益效果：
1. 用液体培养基对叶子花花粉进行离体萌发培养，可以更加直观、准确的观察花粉活力，获得的数据更加可靠。
2. 通过该方法发现，在测定花粉活力时，适当添加植物激素和营养元素更有利于花粉的萌发。
以上所述是本发明的优选实施方式而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和变动，这些改进和变动也视为本发明的保护范围。