一种通过固体发酵微生物Clonostachysrogersoniana产生抗生素TMC‑154的方法与流程

技术特征：

1.一种通过微生物Clonostachys rogersoniana发酵产生抗生素TMC-154的方法，其特征在于按如下步骤进行固体发酵：

(1)将拟用微生物Clonostachys rogersoniana 828H2首先进行活化，即将C.rogersoniana 828H2接种到经过120℃高温灭菌处理的PDA斜面培养基后，于恒温培养箱中培养3-7d后，置于4℃冰箱中备用；

(2)将活化的菌种接到PDB种子培养基中，于恒温摇床中培养3-7d；

(3)取洗净的土豆切成丁后，取适量置于组织培养瓶中，加入阿拉伯糖(以质量百分比计所述发酵培养基成分：25g马铃薯，0.5g阿拉伯糖)；将装有培养基的组织培养瓶加盖包装后置于120℃高温灭菌箱中灭菌30min，取出后将组织培养瓶冷却；

(4)将步骤(2)的种子培养基在无菌环境下接种到经过步骤(3)前处理的培养基上，加盖后置于培养箱中28℃下培养30d后取出；

(5)经微生物C.rogersoniana 828H2发酵后的培养基经过甲醇超声提取、过滤和浓缩得到粗提物；分离粗提物得到的TMC-154的结构式如下：

(6)经TLC薄层层析法检测，然后经过硅胶柱进行分离，分离过程采用梯度洗脱，洗脱剂为氯仿：甲醇(10:1—3:1)，然后经分离得到的化合物上凝胶柱(甲醇)纯化，通过1D/2D NMR以及HR-ESIMS鉴定得到TMC-154结构。

(7)采用HPLC测定TMC-154的产量为3.78g/kg。

2.根据权利要求1所述通过C.rogersoniana 828H2发酵产生抗生素TMC-154的方法，其特征在于保藏编号为CGMCC No.12073。

3.根据权利要求1所述通过C.rogersoniana 828H2发酵产生抗生素TMC-154的方法，其特征在于产生了抗生素TMC-154，化学结构为：

4.根据权利要求1所述通过C.rogersoniana 828H2发酵产生抗生素TMC-154的方法，其特征在于所述发酵方法为固态发酵。

5.根据权利要求1所述通过C.rogersoniana 828H2发酵产生抗生素TMC-154的方法，其特征在于以质量百分比计所述发酵培养基成分：25g马铃薯，0.5g阿拉伯糖。

6.根据权利要求1所述通过C.rogersoniana 828H2发酵产生抗生素TMC-154的方法，其特征在于所述发酵时间为30d。

7.根据权利要求1所述通过C.rogersoniana 828H2发酵产生抗生素TMC-154的方法，其特征在于所述发酵温度为28℃。

8.根据权利要求1所述通过C.rogersoniana 828H2发酵产生抗生素TMC-154的方法，其特征在于按如下HPLC条件进行含量测定，产量为3.78g/kg。

(1)色谱柱：ZORBAX SB-C18(4.6×250mm,5μm)；

(2)梯度洗脱程序：0–10min，20–40％乙腈；10–20min，40-60％乙腈；20–45min，60％乙腈；

(3)检测波长：235nm；

(4)流速：1.0mL/min；

(5)柱温：20℃。