一种分子标记辅助选择定向改良烟草黑胫病抗性的育种方法与流程

文档序号:12109183阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种分子标记辅助选择定向改良烟草黑胫病抗性的育种方法,其特征是:具体包括以下步骤:

A、分子标记的获得:用全基因组序列数据开发的SSR标记对轮回亲本、供体亲本及其F1的叶片提取DNA进行分子标记筛选,选出在两亲本间有多态、且在F1中呈共显性的分子标记,再对F1与轮回亲本回交得到的BC1F1作图群体进行分子标记的基因型分析、构建遗传连锁图谱,以及对BC1F1进行黑胫病抗性鉴定,选出与抗黑胫病紧密连锁的分子标记作为前景标记,其他与抗黑胫病非连锁的分子标记作为背景标记;

B、分子标记辅助第一次选择:将步骤A中的BC1F1抗病单株自交得到BC1F2,对BC1F2进行黑胫病抗性鉴定,提取不发病单株叶片的DNA,利用步骤A中的前景标记对BC1F2辅助前景选择,再用步骤A中的背景标记辅助背景选择,选出含抗黑胫病基因、表型接近轮回亲本且背景回复率高的后代单株,再与轮回亲本回交,得到BC2F1

C、分子标记辅助第二次选择:对BC2F1的后代进行黑胫病抗性鉴定,提取不发病单株叶片的DNA,利用步骤A中的前景标记对BC2F1辅助前景选择,再用步骤A中的背景标记辅助背景选择,选出含抗黑胫病基因、表型接近轮回亲本且背景回复率高的后代单株,再与轮回亲本回交,得到BC3F1

D、分子标记辅助第三次选择:对BC3F1的后代进行黑胫病抗性鉴定,提取不发病单株叶片的DNA,利用步骤A中的前景标记对BC3F1辅助前景选择,再用步骤A中的背景标记辅助背景选择,选出含抗黑胫病基因、表型接近轮回亲本且背景回复率高的后代单株,再与轮回亲本回交,得到BC4F1

E、分子标记辅助第四次选择:在历年烟草黑胫病重病田块种植BC4F1,提取BC4F1单株叶片的DNA,利用步骤A中的前景标记对BC4F1辅助前景选择,再用步骤A中的背景标记辅助背景选择,选出含抗黑胫病基因、表型接近轮回亲本且背景回复率高的BC4F1单株,自交得到BC4F2

F、分子标记辅助第五次选择:提取BC4F2单株叶片的DNA,利用步骤A中的前景标记对BC4F2辅助前景选择,再用步骤A中的背景标记辅助背景选择,选出纯合、背景回复率高、渐渗片段相对较短的抗性单株作为定向改良新品系。

2.根据权利要求1所述的分子标记辅助选择定向改良烟草黑胫病抗性的育种方法,其特征是:所述的定向改良新品系有多个时,首先利用步骤A中的前景标记、背景标记分别对定向改良新品系进行辅助前景选择、辅助背景选择,选出含抗黑胫病基因且背景回复率保持稳定的品系,再进一步选出与轮回亲本的主要植物学性状、农艺性状最接近的品系为最优品系。

3.根据权利要求1所述的分子标记辅助选择定向改良烟草黑胫病抗性的育种方法,其特征是:所述的前景标记有4个,分别为Scf_30K、TM62、ST141和InDel0617。

4.根据权利要求1所述的分子标记辅助选择定向改良烟草黑胫病抗性的育种方法,其特征是:所述的背景标记有577个。

5.根据权利要求1或2所述的分子标记辅助选择定向改良烟草黑胫病抗性的育种方法,其特征是:所述的辅助背景选择为递进式两步法辅助背景选择,所述的递进式两步法辅助背景选择是先利用均匀分布于烟草全基因组24个连锁群上共120个背景标记辅助背景选择,再利用剩余的457个的全基因组范围的背景标记辅助背景选择。

6.根据权利要求1所述的分子标记辅助选择定向改良烟草黑胫病抗性的育种方法,其特征是:所述的BC3F1经分子标记辅助选择的单株的背景回复率大于96.5%。

7.根据权利要求1或2所述的分子标记辅助选择定向改良烟草黑胫病抗性的育种方法,其特征是:所述的定向改良新品系的背景回复率大于99%。

8.根据权利要求1所述的分子标记辅助选择定向改良烟草黑胫病抗性的育种方法,其特征是:所述的轮回亲本、供体亲本及其F1、BC1F1、BC1F2、BC2F1、BC3F1烟苗均在室内或温室培养。

9. 根据权利要求1所述的分子标记辅助选择定向改良烟草黑胫病抗性的育种方法,其特征是:所述的轮回亲本为红花大金元,所述的供体亲本为抗黑胫病基因来源于烟草野生种N.plumbaginifolia的育种中间材料RBST。

10.根据权利要求1所述的分子标记辅助选择定向改良烟草黑胫病抗性的育种方法,其特征是:所述的历年烟草黑胫病重病田块至少包括2地4点。

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