1.一种霍乱弧菌环介导等温扩增试剂盒,其特征在于,该试剂盒包括LAMP引物、2×反应缓冲液、Bst DNA聚合酶、荧光目视检测试剂、超纯水和霍乱弧菌DNA模板;所述的LAMP引物包括外引物F3与B3和内引物是FIP与BIP;其中以外引物F3和B3作为PCR诊断引物;
其中引物的序列分别为:
F3 CTGAAACCTTTGTTGCCGC
B3 GCCCATAGAAAGAGTCGCTG
FIP GGCAGGATGGTAACCCCTGAGTAAAGATCCAGGCCAAGTTCG
BIP TTACCGATGAAGAAGTCGCCGCTTGGCTTCAACCACTTCAGT;
所述的2×反应缓冲液包括Tris-HCL、KCL、MgSO4、(NH4)2SO4、Tween20、Betaine和dNTPs。
2.根据权利要求1所述的霍乱弧菌环介导等温扩增试剂盒,其特征在于,所述的霍乱弧菌DNA模板取自细菌基因组DNA提取试剂盒。
3.根据权利要求1所述的霍乱弧菌环介导等温扩增试剂盒,其特征在于,所述的荧光目视检测试剂采用钙黄绿素荧光试剂,荧光试剂在反应前加入。
4.根据权利要求1所述的霍乱弧菌环介导等温扩增试剂盒,其特征在于,所述的2×反应缓冲液包括Tris-HCL 35-55mM、KCL 18-32mM、MgSO4 15-25mM、(NH4)2SO4 22-28mM、Tween20 0.3-0.6℅、Betaine 1.5-3 M 和dNTPs3-4.5mM。
5.一种霍乱弧菌环介导等温扩增试剂盒的应用,其特征在于,具体操作步骤包括:
(1)LAMP引物的设计与合成
(2)霍乱弧菌DNA模板的提取
(3)LAMP反应体系建立
(4)LAMP检测方法。
6.根据权利要求5所述的霍乱弧菌环介导等温扩增试剂盒的应用,其特征在于,所述的LAMP反应体系建立LAMP反应体系以25μL计,
2×反应缓冲液 12.5 μL
Bst DNA聚合酶 1 μL
FIP 40 pmol
BIP 40 pmol
F3 5 pmol
B3 5 pmol
霍乱弧菌DNA 2 μL
超纯水 补足25 μL。
7.根据权利要求5所述的霍乱弧菌环介导等温扩增试剂盒的应用,其特征在于,所述的LAMP检测方法是采用特异性检测、敏感性检测和荧光可视化检测的方法。
8.根据权利要求5所述的霍乱弧菌环介导等温扩增试剂盒的应用,其特征在于,所述的LAMP检测方法采用实时浊度仪进行密闭全程监控。