一种链霉菌属菌种及用途的制作方法

文档序号:11125943阅读:1398来源:国知局

本发明属于生物技术领域,具体来说涉及链霉菌属菌种,及该链霉菌属菌种在产酯类物质中的用途。



背景技术:

放线菌按照其生存环境的不同可分为土壤放线菌、海洋放线菌、植物内生放线菌和极端环境放线菌。目前,对放线菌的研究主要集中在菌株的分离、代谢成分分析、产酶分析、分子研究等方面。随着现代微生物技术的发展,对白酒酿造环境和酿造过程中各类微生物的研究在不断的深入。大曲是酿酒用的一种糖化剂和发酵剂,高温制曲是酱香型白酒生产的一大特色,高温大曲的最高制曲温度可达60℃以上,曲坯温度变化从低温培菌期,品温30℃~40℃,进入高温转化期,品温50℃~65℃,最后到后火排潮生香期,品温不低于45℃。这样的制曲温度的变化导致在大曲中就有耐高温微生物的存在,如耐高温的酵母及芽孢杆菌。在大曲中“菌系”中的放线菌在白酒酿造过程中相对于其他三大类微生物,还没被引起足够的重视。

嗜热放线菌主要以链霉菌属、高温放线菌属、小单孢菌属、高温单孢菌属的种群为主,在传统酒曲中已有关于放线菌及其产土味素的报道,但关于链霉菌属中嗜热放线菌及产酯类物质的相关研究报道未有。



技术实现要素:

本发明的目的在于提供的一种产酯类物质的链霉菌属菌种。

本发明的另一目的在于提供该链霉菌属菌种在产酯类物质中的用途。

本发明的一种链霉菌属菌种,其形态特征:该菌株在ISP2培养基上,45℃培养3d,菌落直径10~12mm,菌落形状圆形,基内菌丝棕黄色,气生菌丝灰白色,菌落平坦、干燥致密,无可溶性色素产生;扫描电镜观察菌丝细长,有直链状的孢子,孢子未分散,菌丝表面有附着物。该菌种于 2016年5月30日保藏在中国典型培养物保藏中心(地址:中国 武汉 武汉大学),保藏号:CCTCC M 2016295,名称为:Streptomyces bangladeshensis strain FBKL4.004

(一)Streptomyces bangladeshensisstrain FBKL4.004的分离步骤:

从贵州某酒厂酒曲中,称取保存曲粉样品10g,按照样品与CaCO3质量比为10:1的比例在无菌烧杯混合,添加2ml无菌水,空气湿度30%,在28℃富集培养1周;将富集后的大曲样品放入盛90ml无菌CMC水溶液(2.5g/L)并带有玻璃珠的三角烧瓶中,45℃、200r/min振荡30min;将大曲样品悬液在50℃水浴锅中热处理10min,取1ml样品悬液进行10倍梯度稀释分别由10-4、10-5、10-6和10-7稀释度的样品悬液中各取0.2ml涂布于分离培养基上,45℃静止培养3d,挑取单菌落进一步筛选,斜面培养基上保藏。

(二)培养

Streptomyces bangladeshensis strain FBKL4.004采用的培养基:

分离筛选培养基:

GTY培养基(g/L):葡萄糖10.0g、胰蛋白胨0.5g、酵母浸粉2.0g、CaCO3 1.0g、琼脂20.0g、蒸馏水1000ml、pH7.2-7.4,115℃灭菌20min,放置培养基冷却到50℃加入经0.22um的无菌滤膜过滤的新生霉素(30mg/L)和制霉菌素(20mg/L)混匀倒平板;

保藏培养基:

ISP2培养基(g/L):酵母膏4g、麦芽汁10.0g、葡萄糖4.0g、琼脂20.0g、蒸馏水1000ml、pH7.0-7.2。

固态发酵培养基:

高粱麦粒培养基:高粱与小麦质量比为1:1,小麦高粱的粉碎颗粒与整粒比为1:1,加90℃热水(加水量40%)搅拌均匀,润粮1d,200g/瓶装瓶,121℃灭菌20min。

(三)菌种的保种和传代:

1、菌种保藏培养基:

ISP2培养基(g/L):酵母膏4g、麦芽汁10.0g、葡萄糖4.0g、琼脂20.0g、蒸馏水1000ml、pH7.0-7.2。

2、保存方法有4种:

①传代培养放线菌菌种保存法:将放线菌接种于ISP2斜面培养基上,置恒温箱45℃培养3d后,将橡胶塞用灭菌固体石蜡熔封,移至4℃冰箱保存,一般放线菌在4℃冰箱内可以保存一个月,需定期移植。②砂土管放线菌菌种保存法:取清洁的海沙,用1mol/L的氢氧化钠溶液清洗,然后再用1mol/L的盐酸溶液清洗,在后用流水冲洗。分装试管,约2-3厘米深,干热灭菌,加入放线菌培养液1mL左右与砂土混匀,置真空干燥管内干燥,待完全干燥后熔封保存。

③真空冷冻干燥放线菌菌种保存法:将待保存的微生物细胞或者孢子悬浮在合适的保护剂中,预先将细胞冷冻,使水冻结,然后在真空条件下,使冰升华以除去大部分水,残留的一些不冻结的水分,再通过蒸发从细胞中除去。

④液体石蜡法:亦称矿物油保藏法,将放线菌菌种接种在适宜的斜面培养基上,最适条件下培养至待得到健壮的菌体后注入灭菌的液体石蜡,使其覆盖整个斜面,再直立放置于低温(4℃)干燥处进行保存的一种菌种保藏方法,是定期移植保藏法的辅助方法。

(四)菌种的生态特征:

该菌形成的菌落在ISP2培养基上,45℃培养3d,菌落直径12~14mm,菌落形状圆形,基内菌丝棕黄色,气生菌丝灰白色,菌落平坦、干燥致密,无可溶性色素产生;扫描电镜观察菌丝细长,有直链状的孢子,孢子未分散,菌丝表面有附着物。

(五)菌种的培养特性

(1)培养温度45℃~55℃,最适温度45℃~50℃;

(2)培养pH 6~8;最佳范围为7.2~7.4。

菌丝细长,有直链状的孢子,孢子未分散,菌丝表面有附着物。根据根据伯杰细菌鉴定手册描述,鉴定该菌株属于链霉菌属(Streptomyces bangladeshensis strain ),故命为Streptomyces bangladeshensis strain FBKL4.004。

本发明的一种链霉菌属菌种在产酯类物质中的用途。

本发明与现有技术相比,具有明显的有益效果,从以上技术方案可知:本发明的Streptomyces bangladeshensis strain FBKL4.004对温度、pH等自然环境条件的适应范围广,对不良环境的耐受力强,容易培养和保存及工业化生产,生产成本低,不污染环境,不破坏生态平衡。

具体实施方式

本发明的Streptomyces bangladeshensis strain FBKL4.004的分离方法,包括以下步骤:

从贵州某酒厂酒曲中,称取保存曲粉样品10g,按照样品与CaCO3质量比为10:1的比例在无菌烧杯混合,添加2ml无菌水,空气湿度30%,在28℃富集培养1周;将富集后的大曲样品放入盛90ml无菌CMC水溶液(2.5g/L)并带有玻璃珠的三角烧瓶中,45℃、200r/min振荡30min;将大曲样品悬液在50℃水浴锅中热处理10min,取1ml样品悬液进行10倍梯度稀释分别由10-4、10-5、10-6和10-7稀释度的样品悬液中各取0.2ml涂布于分离培养基上,45℃静止培养3d,挑取单菌落进一步筛选,斜面培养基上保藏。

该菌株在ISP2培养基上,45℃培养3d,菌落直径10~12mm,菌落形状圆形,基内菌丝棕黄色,气生菌丝灰白色,菌落平坦、干燥致密,无可溶性色素产生;扫描电镜观察菌丝细长,有直链状的孢子,孢子未分散,菌丝表面有附着物。

试验例:产香能力测定

将菌株接种于GTY液体培养基,45℃振荡培养3d,取10ml接种于盛有200g高粱麦粒培养基的三角瓶中,45℃恒温静置培养5d,进行感官评定,酯味较浓。

通过GC-MS对发酵产物的易挥发性物质进行分析,发酵试验后,实验组物质成分与对照组差距明显,产物增多,种类丰富,主要以酯类物质为主,占34.57%,主要包括肉豆蔻酸甲酯、十二酸甲酯、14-甲基 - 十五烷酸甲酯等;其次包括萜烯类、醇类物质,此外该菌还能代谢产生17.63%吡嗪类物质。该菌代谢产生的物质的风味比较丰富,主要包括酯味、酱味、花香味、果香味及酸味。

以上所述,仅是本发明的较佳实施例而已,并非对本发明作任何形式上的限制,任何未脱离本发明技术方案内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰,均仍属于本发明技术方案的范围内。

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